低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用及其机制

目的　探讨全身低温对缺氧缺血性脑损伤的保护作用及其机理。方法　结扎 7日龄Wistar大鼠左侧颈总动脉后吸入 7 7%氧气 6 0min制成脑缺氧缺血 (HI)模型 ,随机分成低温组(30℃ ,n =18)和常温组 (36℃ ,n =18)给予维持恒定目标温度 10h。在HI后 2 4h ,每组 8只取脑进行匀浆用于半胱天冬酶 2 ,3(caspase 2 ,3)活性测定和Western蛋白印迹检查 ,其余每组 10只在HI后 72h处死 ,取脑进行石蜡包埋 ,冠状切片 10 μm用于活性caspase 3,凋亡诱导因子 (AIF) ,发夹寡核苷酸探针原位杂交 (HPP)检测凋亡及相关因子 ,微管相关蛋白 2 (MAP 2 )免疫组化染色用于计算脑梗塞体积和海马CA1神经元丢失 ,HE染色计算脑损伤积分。结果　常温组在HI后 2 4h损伤侧大脑半球caspase 2 ,3的活性 [(2 7 7± 14 7)、(94 9± 5 3 1) pmol/(min·mg蛋白 ) ]均明显高于正常对照组 [(7 6± 0 7)、(12 9± 0 5 ) pmol/(min·mg蛋白 ) ]和低温干预组 [(7 9± 3 4 )、(2 1 1± 18 7)pmol/(min·mg蛋白 ) ],P <0 0 1;而低温组与正常对照组相比无明显差异。Western蛋白印迹结果显示低温组caspase 3的激活受到明显抑制。免疫组化显示常温组活性caspase 3及AIF的阳性细胞数(中位数 14 8 5 ;2 2 /视野 )明显高于低温组 (中位数 4 8 5 ;9/视     

外周应用神经生长因子对新生鼠缺氧脑损伤的保护作用

目的探讨外周应用神经生长因子（NGF）能否透过缺氧脑损伤新生鼠血脑脊液屏障及其对脑的保护作用。方法制备缺氧脑损伤新生大鼠模型后,静脉注射^125Ⅰ标记NGF,5μg/kg。给药30min后取脑组织,12h内测定^125Ⅰ放射度,计算NGF水平。同时取血检测其NGF水平。dUTP缺口末端标记法（TUNEL法）观察NGF治疗后新生缺氧大鼠额叶、海马区细胞凋亡情况。结果外周应用125I-NGF后,各组大鼠脑内均可检测出^125Ⅰ-NGF,新生鼠脑组织^125Ⅰ-NGF水平及其与血液中水平的比值显著高于成年鼠（Pa〈0.05）,新生缺氧鼠脑组织^125Ⅰ-NGF及其与血液中水平比值显著高于正常新生鼠（Pa〈0.05）。应用NGF治疗后,NGF治疗组额皮质和海马CA1区凋亡阳性细胞比值低于非NGF治疗组（Pa〈0.05）。结论外周应用NGF可通过新生大鼠HIBD血脑脊液屏障,具有一定脑保护作用。     

川芎嗪对新生儿鼠缺氧缺血脑损伤的保护作用

目的 研究川芎嗪对新生鼠缺氧缺血脑损伤（HIBD）的保护作用及其机制的探讨。方法 建立HIBD模型，采用ELISA方法检测新鲜心脏血中神经元特异性烯醇化酶（NSE）的含量，采用氢清除法测定脑定皮质的血流量变化。结果 HIBD组NSE含量明显高于对照组（P＜0．01），而川芎嗪干预组明显低于模型组（P＜0．05）。HIBD组的非结构扎侧脑皮质血流量轻度降低，而结扎侧略有回升，川芎嗪干预组结扎侧与非结扎侧与非结扎侧脑皮质血流均有回升。结论 川芎嗪能降低NSE含量，增加脑皮质血流量，从而对新生鼠HIDBD具有保护作用。     

褪黑素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的保护作用

目的 探讨褪黑素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用及其机制.方法 7日龄Wistar大鼠54只结扎左侧颈总动脉,吸入氧氮混合气体55 min制作HIBD模型,随机分成正常对照组、HIBD组和褪黑素治疗组,每组18只.正常对照组既不结扎亦不缺氧,褪黑素治疗组在缺氧缺血前30 min予褪黑素15 mg·kg-1 腹腔注射.在缺氧缺血24 h,取每组6只脑组织匀浆用于半胱天冬酶-2、半胱天冬酶-3活性测定,其余每组6只在缺氧缺血72 h取其脑进行石蜡包埋,并进行半胱天冬酶-3、凋亡诱导因子(AIF)及微管相关蛋白-2(MAP-2)的免疫组织化学染色,上述指标用于计算脑梗死体积和海马CA1神经元的丢失,HE染色用于计算脑损伤积分.结果 缺氧缺血24 h,HIBD组新生大鼠脑组织半胱天冬酶-2、半胱天冬酶-3活性均明显高于正常对照组(Pa<0.05),给予褪黑素治疗后,半胱天冬酶-2、半胱天冬酶-3活性均明显下降(Pa<0.05);72 h时褪黑素治疗组半胱天冬酶-3和AIF的阳性细胞计数均明显下降(Pa<0.05);褪黑素治疗组脑损伤积分、脑梗死体积、CA1神经元丢失均显著下降(Pa<0.05).结论 褪黑素对HIBD有保护作用,其机制与抑制神经细胞凋亡有关.     

内皮素抗血清对低氧缺血脑损伤新生鼠的保护作用

目的 探讨内皮素抗血清对低氧缺血脑损伤新生鼠可能的保护作用。方法 应用放射免疫法、硫代巴比妥法及氨基酸自动分析法观察：（１）正常鼠（ｎ＝７）及低氧缺血新生鼠（ｎ＝８）不同脑组织内皮素（ＥＴ）的变化。（２）低氧缺血后不同时间（即刻、６０及１２０ｍｉｎ,ｎ分别为９,８,８）新生鼠脑内ＥＴ的变化及与脑水肿的关系。（３）低氧缺血新生鼠（ｎ＝１１）脑内ＥＴ、丙二醛及兴奋性氨基酸的变化及应用ＥＴ抗血清（ｎ＝１     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程

为确定新生大鼠缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡时程、采用HE染色及TUNEL研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡情况。结果显示,新生大鼠缺氧缺血后3周时,左脑仍有少量凋亡细胞存在,与对照组比较有显著性差异,P<0.05;于4周时左脑凋亡细胞数与对照组比较无显著性差异,P>0.05。结果提示新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后种经细胞凋亡持续至损伤后4周。     

褪黑素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的实验研究

褪黑素（melatonin,MT）是松果体腺分泌的一种吲哚胺类激素,近年研究发现它的强大氧自由基清除作用对脑缺血损伤、癫癎发作、外周神经损伤等多种神经系统疾病有保护作用,但在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的作用还少见报道.2004年3月至12月我们进行了MT对新生动物缺氧缺血性脑损伤保护作用的研究,报道如下.     

细菌内毒素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的增敏作用

新生儿缺氧缺血性脑损伤是引起新生儿死亡和儿童致残的重要原因,已为人们所重视。近年来,宫内感染导致的新生儿脑损伤日益受到关注。本研究欲探讨细菌内毒素脂多糖(1ipopolysaccaharide,LPS)联合脑缺氧缺血(HI)对新生大鼠脑损伤的作用,为临床HI合并感染导致新生儿脑损伤的防治提供理论依据。     

己酮可可碱对新生大鼠缺血缺氧脑损伤时脑组织细胞凋亡的影响

缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）是严重威胁新生儿健康的常见病因，发病机制复杂。存活患儿中部分留有脑性瘫痪、癫痫、智力低下等不同程度中枢神经系统后遗症。由于高危妊娠及新生儿抢救存活率的提高，该病发病率仍很高，这也激发人们在不断探索治疗该病的新方法和新的有效药物。我们以往的研究表明，己酮可可碱（pentoxifylline，PTX）对新生大鼠脑缺血缺氧损伤有一定治疗作用，现就其对该损伤时脑组织细胞凋亡的影响报道如下。     

早期高压氧治疗对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的远期保护作用

目的：高压氧(hyperbaricoxygen,HBO)在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemicbraindamage,HIBD)中的应用及疗效仍存在争议。至目前为止,HBO在新生动物HIBD中的实验研究不多,这些实验注重近期病理和生化结果的评价,缺乏远期功能评价指标。该实验评价早期HBO治疗对HIBD新生大鼠远期脑病理和行为的影响。方法：7日龄大鼠随机分为对照组(n=18)、HIBD组(n=17)和HBO组(n=17,HIBD后0.5~1h开始2个绝对大气压HBO治疗,稳压30min/次,每日1次,共2d),以大鼠37~41日龄的学习记忆功能(Morris水迷宫实验)和42日龄的脑形态组织学(脑重量、海马CA1区存活神经元数、AchE纤维面积和NOS神经元数)来判断干预效果。结果：HIBD组学习记忆功能严重不良伴有脑形态组织学的明显缺损,与对照组比较水迷宫实验的平均逃逸潜伏期(EL)延长(56.35±22.37svs23.07±16.28s);搜索时间和搜索距离缩短(29.29±6.06svs51.21±4.59s)和(548±92cmvs989±101cm),左脑重量减轻(0.601±0.59gvs0.984±0.18g);CA1区存活神经元数减少(100±27个/mmvs183±8个/mm);AchE纤维面积减少(18.50±2.24)%vs(27.50±2.18)%,NOS神经元数减少(19.25±4.33个/mm2vs33.75±5.57个/mm2)以上两组比较均P<0.05。HBO组学习记忆功能不良改善,脑形态组织学缺损减轻,与对照组比较差异有显著性,EL为39.17±21.20s;搜索时间为36.84±4.36s;搜索距离686±76cm;脑重量0.768±0.85g;存活神经元数133±25个/mm;AchE纤维面积(21.94±2.73)%(均P<0.05)。结论：早期HBO治疗在一定程度上改善了HIBD所引起的学习记忆功能不良并减轻了HIBD所导致的远期脑形态组织学缺损。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤药物干预的研究

目的　探讨神经生长因子 (NGF)和丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑病 (HIE)的防治作用。方法　选用 7日龄新生大鼠 ,在制成HIE模型前后给予NGF和丹参腹腔注射 ,HIE后分期处死大鼠分别测定谷氨酸 (Glu) ,天门冬氨硫 (Asp) ,一氧化氮合酶 (NOS)和做病理检查。 结果　HIE组 (30min)Glu ,Asp和 (48h)NOS较正常对照组明显升高。Glu :(887.0± 145 .2 ) μg/g ,vs.(776 .5± 10 3.0 ) μg/g ,(P <0 .0 5 ) ;Asp :(2 78.6± 48.2 ) μg/g ,vs.(2 2 4.8± 2 7.0 ) μg/g ,(P <0 .0 1) ;NOS :(3.34 6± 0 .745 )U/ml,vs.(2 .195± 0 .6 15 )U/ml,(P <0 .0 1)。NGF和丹参可以抑制HIE后的Glu ,Asp和NOS升高 ,并可减轻脑组织病理改变。Glu :(6 94.9± 83.9) μg/g ,vs .(887.0± 145 .2 ) μg/g ,(P <0 .0 1) ;Asp :(2 0 6 .1± 2 5 .4) μg/g ,vs.(2 78.6± 48.2 ) μg/g ,(P <0 .0 1) ;NOS :(2 .0 41± 0 .35 7)U/ml,vs.(3.34 6± 0 .745 )U/ml,(P <0 .0 1)。结论　NGF和丹参对HIE有防治作用。     

线粒体自噬对新生大鼠缺氧缺血脑损伤的影响

目的了解缺氧缺血脑损伤的动物模型中线粒体自噬情况,探讨其在缺氧缺血脑损伤中的作用。方法将120只新生7日龄Sprague-Dawley大鼠分为假手术组、缺氧缺血脑损伤(HIBD)组、自噬抑制剂干预组(3MA组)。HIBD组行右侧颈总动脉结扎后置于低氧仓(8%氧气和92%氮气)2.5 h,3MA组腹腔注射2μL 3MA 30 min后再进行结扎和低氧处理,假手术组不予结扎和低氧处理。在造模后提取各组单细胞悬液,用Mitotracker标记线粒体、Lysotracker标记自噬小体、LC3标记自噬进行免疫荧光共定位观察线粒体自噬情况;荧光探针JC-1染色后,采用流式细胞仪检测线粒体膜电位。TTC染色法检测脑梗死灶大小。提取皮质神经元中的细胞浆蛋白,Western blot法检测线粒体自噬相关蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,HIBD组线粒体膜电位明显降低(P0.05),线粒体自噬增加(P0.05),线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1的表达升高,线粒体外膜蛋白受体Tom20与内膜蛋白受体Tim23的表达降低(P0.05);3MA组膜电位比HIBD组降低更为明显(P0.05),但线粒体自噬程度明显减少(P0.05)。3MA组大鼠脑组织梗死程度较HIBD组明显增加(P0.05)。结论 HIBD能够增加线粒体自噬的发生,抑制线粒体自噬会加重新生大鼠HIBD的损伤程度。     

雌激素对缺氧缺血新生大鼠脑细胞的影响

目前,雌激素中的活性成分雌二醇对脑缺血损伤的保护作用已被肯定,但尚未见与缺氧缺血性脑病(HIE)有关的研究报道。本实验将雌激素用于HIE动物模型上,并与目前公认的对HIE有效的药物丹参进行对比。     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经元特异性烯醇化酶的影响

目的 研究神经生长因子（NGF）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）的作用。方法 应用新生7日龄SD大鼠制备HIBD模型,于缺氧缺血（HI）后即刻腹腔注射NGF 100U／只或等量生理盐水,用放射免疫法测定缺氧缺血后24、48h血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平,用免疫组化法检测脑组织NSE蛋白表达变化。结果 NGF可降低血清NSE,增加左侧（缺血侧）脑组织中NSE蛋白水平表达。结论 腹腔注射NGF对HIBD具有保护作用。     

Memantine对新生大鼠脑缺氧缺血损伤的脑保护效果

围产期窒息所致脑缺氧缺血损伤(HI)为新生儿期危害最大的常见病,常导致新生儿死亡和幸存者严重后遗症。迄今为止,对脑缺氧缺血损伤尚无根本性防治措施。近来报道非竞争性NMDA受体拮抗剂Memantine对脑缺氧缺血损伤具有脑保护作用。本文对一组脑缺氧缺血损伤新生大鼠模型对照应用Memantine,通过比较左右脑半球重量减少百分值,观察Memantine的脑保护效果,现报告如下。     

丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤远期智能的影响

目的 探讨丹参对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后远期智能的影响。方法 建立新生大鼠HIBD模型,给予丹参注射液150mg/10g腹腔内注射,采用迷宫实验观察远期学习记忆能力的改变。结果 丹参组学习记忆能力明显好于HIBD组,表现在达标所需反映次数明显低于HIBD组(P<0.05),而正确率却明显高于HIBD组(P<0.05)。丹参组大鼠脑部改变仅见轻微的脑皮层萎缩,HIBD大鼠脑部可见皮层萎缩、液化及空洞形成,病理组织学可见筛状软化灶形成、胶质结节和钙化灶形成等。结论 丹参可预防和治疗新生大鼠HIBD所致的智能障碍。     

神经生长因子减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的研究

目的：探讨神经生长因子(NGF)减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的作用及其机制。方法：将NGF以0.1 μg/kg和0.3 μg/kg两个剂量组用于新生大鼠HIBD模型,采用干湿比重法、原子吸收光谱法和高效液相色谱电化学法检测缺氧缺血后脑组织含水量、脑组织钙含量和单胺类神经递质含量变化。结果：新生大鼠缺氧缺血组结扎侧脑组织平均含水量、组织钙含量及单胺类神经递质(除DOPAC外)含量较结扎对侧和/或正常对照组明显增高,含水量：(91.14±2.21)% vs (82.99±6.53)% (P<0.05),(91.44±2.21)% vs (87.22±1.13)%(P<0.05),钙含量：(255.24±122.6) μmol/g干重 vs (44.12±13.54) μmol/g干重(P<0.01),(255.24±122.6) μmol/g干重 vs (42.68±4.35) μmol/g干重(P<0.05),NGF干预后,结扎侧脑组织含水量、组织钙含量及单胺类神经递质(除DOPAC)外含量均明显下降,与HIBD组结扎侧相比有显著性差异,与正常对照组相比无显著性差异。0.1 μg NGF组,含水量：(86.86±0.86)% vs (91.14±2.21)% (P<0.05),钙含量：(44.34±3.10) μmol/g干重 vs (255.24±122.6) μmol/g干重(P<0.01)。0.3 μg NGF组,含水量：(87.45±0.37)% vs (91.14±2.21)% (P<0.05),钙含量：(42.03±14.99) μmol/g干重 vs (255.24±122.6) μmol/g干重(P<0.01)。结论：NGF可以降低钙超载,减轻脑水肿,减弱或抑制单胺类神经递质等从而有可能减轻HIBD。     

IGF-Ⅰ治疗新生大鼠缺氧缺血脑损伤对BDNF基因表达的影响

为了解新生大鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)后脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA水平的变化以及IGF-I治疗后对BDNF的影响,制作新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型,用原位杂交方法观察HIBD后各时间点海马和大脑皮层BDNF基因表达的动态变化,并比较IGF-I治疗组与对照组HIBD后12h、72h BDNF mRNA的表达水平,用病理图像分析软件作半定量分析。结果显示HIBD后12h海马的BDNF mRNA开始上升,72～96h达高峰,120h下降;皮层BDNF mRNA在HIBD后72h才显著升高,且持续时间短,仅48h;给予外源性IGF-I治疗后10hBDNF mRNA开始上升,70h仍维持在较高水平,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。提示IGF-I可能诱导BDNF的转录,两者协同发挥神经保护作用。     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的：研究神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用。方法：将新生7日龄SD大鼠40只随机分为NGF治疗组(n=16),对照组(n=16)和假手术组(n=8),缺氧缺血(HI)后即刻腹腔注射100 U NGF或等量生理盐水(假手术组不注射),然后观察NGF对HIBD模型鼠的体重增长、脑组织病理及超微结构改变的影响,并用TUNEL法原位标记DNA片段,观察NGF对HIBD后脑细胞凋亡的影响。结果：NGF治疗组体重增长(4.16±0.24) g明显高于对照组(2.86±0.17) g,(P<0.01);TUNEL检测结果,HIBD后24 h治疗组左侧海马和皮质凋亡细胞数(分别为199.75±19.61,182.75±19.12)明显低于对照组(分别为285.50±32.67,271.00±28.36)(P<0.01);HIBD后48 h治疗组左侧海马、皮质凋亡细胞数(分别为77.75±15.76,82.50±19.15)亦明显低于对照组(分别为106.50±16.96,122.75±16.56)(P<0.01)。结论：外源性NGF对HIBD后脑细胞凋亡可能具有一定的保护作用。     

氯氨酮对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的研究

氯氨酮是一种非竞争性N甲基D天门冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂,它能通过血脑屏障与NMDA型受体离子通道结合,阻断钙离子通道,在临床上是一种常用的诱导麻醉剂。竞争性或非竞争性NMDA型受体阻断剂能减轻缺氧缺血(hypoxia-ischemia,HI)所诱导的脑损伤。离体实验显示,氯氨酮对新生动物缺氧缺血性神经元损伤具有保护作用。2002年7月～2003年5月,我们对7日龄新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(1iypoxic-ischemic brain damage,HIBD)的动物模型腹腔注射氯氨酮,观察其在HIBD后的神经保护作用,报告如下。