草栽与段木栽培的灵芝活性成分的分离与鉴定 Ⅰ.多糖肽成分的提取、纯化及性质

目的　研究草栽和段木栽培灵芝的多糖性质和含量 ;考察以草代木栽培灵芝的可行性的研究。方法　提取、分离、逆相透析方法研究二者子实体多糖。应用气相色谱、凝胶渗透色谱法测定多糖的组成、摩尔比和相对分子质量。 IR,1 H- NMR和 1 3C- NMR等光谱确定多糖肽化合物结构。结果　草栽灵芝多糖肽 ( GL PG )和段木多糖肽( GL PW)的重均相对分子质量 ( Mw)分别为 5 .13× 10 5和 5 .85× 10 5;黏均相对分子质量 ( Mη)分别为 6 .2 1× 10 5和6 .96× 10 5,二者具有相同的相对分子质量分布及光谱数据。从光谱分析中看出各单糖间的苷键构型相似 ,均以β-苷键为主 ;糖肽部分均含有相同的 16种氨基酸 ,糖的组份为鼠李糖、木糖、果糖、半乳糖、葡萄糖等 ,GL PW还含有微量甘露糖。结论　草栽灵芝与段木灵芝多糖肽的主要理化特性相似 ,其提取率比段木灵芝约高 2 .8倍 ,为草栽灵芝的综合开发与药用提供了科学依据。     

灵草口服液中灵芝多糖含量测定

目的　建立灵草口服液中灵芝药材有效成分的含量测定方法 ,为今后制定灵草口服液的质量标准提供有益参考。方法　采用分光光度法、苯酚 -硫酸显色法测定了灵草口服液中药材灵芝的灵芝多糖的含量。结果　灵草口服液中药材灵芝的灵芝多糖含量为 1.4 86 %。结论　该方法实验操作简便 ,准确可靠 ,可用于灵草口服液的质量控制     

高效凝胶渗透色谱法测定双灵固本散中多糖肽的峰位分子量

双灵固本散由灵芝子实体提取物和孢子制成的散剂。它具有免疫调节，抗肿瘤和抗氧化等药理作用。多糖肽是灵芝主要活性成分之一，常用多糖的定量分析方法多因试剂不稳定等原因，影响测定结果准确度。本实验拟定多糖肽的峰位分子量作为质控指标，根据多糖的分子量呈多分散性特点，需要用统计方法表征其平均分子量”。     

灵芝多糖肽GL-PPSQ_2结构研究及其应用

目的从灵芝Ganoderma水提物中分离纯化活性多糖肽,对其进行结构研究,并作为对照品用于灵芝产品中多糖肽含量测定。方法采用热水提取、膜超滤技术和凝胶过滤色谱等方法进行分离纯化,根据理化测定及波谱数据分析鉴定化合物结构。检测多糖肽含量采用高效液相色谱仪附紫外检测器,以水作为流动相,体积流量为1mL/min。结果灵芝多糖肽相对分子质量为5.0×10~4,质量分数97%以上,得率为0.49%,多糖含量达87.17%,单糖组成以葡萄糖为主和少量甘露糖组成的多糖,其物质的量比为31.85∶1.00,含有16种氨基酸,氨基酸总量为5.04%。依据甲基化、一维和二维核磁谱图,GL-PPSQ2结构重复单元为主链由→3)-β-D-Glcp-(1→构成,每4个→3)-β-D-Glcp-(1→在O-6位连接一个长支链,该支链由α-D-Glcp-(1→、→4,6)-β-D-Glcp-(1→、→4)-β-D-Glcp-(1→和→6)-β-D-Glcp-(1→依次相连构成。结论通过膜技术和凝胶色谱分离纯化得到活性多糖肽,该方法简便、快速,为灵芝提取物及其产品中多糖肽质量控制提供了科学依据。     

HPLC法测定不同品种及段木栽培灵芝子实体中麦角甾醇含量

目的:以麦角甾醇为测定指标,建立灵芝子实体质量评价的HPLC方法,对不同品种及段木栽培灵芝子实体中麦角甾醇的含量进行比较研究。方法:采用HPLC法定量分析17个不同品种及14个不同段木树种的栽培灵芝子实体。色谱柱:Diamonsil C18,流动相:乙腈,流速:1.0 mL/min,柱温:40℃,检测波长:282 nm。结果:确定了灵芝子实体中麦角甾醇的提取方法和HPLC含量测定方法。不同品种麦角甾醇含量范围为0.093%～0.243%,其中韩芝-2号、圆芝、明-1、野生1号同时具有较高的麦角甾醇含量和转化率;不同段木树种麦角甾醇含量范围为0.080%～0.227%,以白栎、杨梅的麦角甾醇含量及转化率均较高。结论:本方法操作简便、结果准确,可用于灵芝子实体中麦角甾醇的含量测定和灵芝质量评价研究,为人工栽培灵芝的品种及段木树种的选择提供了参考。     

18种不同来源灵芝的多糖含量测定

目的：比较18种不同来源灵芝的多糖含量差异。方法：采用超声法提取，以0．2％蒽酮-H2SO4显色，紫外分光光度法测定多糖含量。结果：不同来源灵芝中多糖含量具有明显差异，以东北大袋料培养的灵芝多糖含量最高为2．74％，以广东野生赤芝含量最低为1．60％。结论：不同来源的灵芝由于地理环境因素和培养条件的不同，多糖含量存在明显差异，提示不能简单的以灵芝产地和栽培条件评价其质量。本实验为灵芝内在质量评价和为扩展灵芝资源提供参考依据。     

灵芝及其制剂中灵芝多糖的提取与含量测定的研究概况

目的：介绍近10年来灵芝及其制剂中灵芝多糖的提取和含量测定的方法。方法：通过查阅相关文献．综述其提取和含量测定的研究概况。结果：灵芝多糖的提取以水提为主．并可在提取前对灵芝子实体采取预处理，多糖的含量测定方法主要有可见紫外分光光度计法和滴定法如姆松华尔格法。结论：灵芝多糖的水提取和含量测定方法简单、可行．但控制灵芝及其制剂的质量的方法尚有待进一步探索与研究。     

破壁与不破壁灵芝孢子粉多糖的分析

目的研究灵芝孢子粉多糖的组成、相对分子质量及相对分子质量分布,比较破壁与不破壁灵芝孢子粉多糖的异同。方法用不同提取方法提取灵芝孢子粉多糖,采用气相色谱-质谱(GC-MS)、高效液相色谱(HPLC)分析灵芝孢子粉多糖的单糖组成,用凝胶渗透色谱(GPC)分析灵芝孢子粉多糖的相对分子质量及其分布。结果不同提取方法所得灵芝孢子粉多糖的得率不同,破壁后灵芝孢子粉含的多糖是不破壁的1.7倍;灵芝孢子粉多糖是由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖,破壁与不破壁的多糖组成完全相同,其相对质量分数略有区别;破壁灵芝孢子粉多糖的GPC有两个多糖峰,相对分子质量分别为7.80×104和1.17×104,而不破壁灵芝孢子粉多糖只有相对分子质量为7.80×104的一个峰。结论破壁与不破壁孢子粉多糖的单糖组成相同,但破壁灵芝孢子粉多糖较不破壁孢子粉的多糖高出70%,增加部分为相对分子质量较小的多糖。这可以解释破壁灵芝孢子粉的功效好于不破壁灵芝孢子粉的原因。     

灵芝生长过程中灵芝多糖含量变化规律研究

目的：对灵芝人工袋料栽培生长过程中灵芝多糖的含量变化情况进行跟踪测量，研究灵芝多糖在灵芝生长过程中的含量变化规律。方法：采用硫酸一苯酚法对不同生育时期的灵芝培养基和子实体样品中灵芝多糖的含量进行测定，比较不同生育时期灵芝多糖含量的变化规律。结果：在灵芝培养基中，随着灵芝菌丝的生长和成熟，灵芝多糖的含量逐步增加，直到开伞期达到最高值，从孢子弹射期后，灵芝多糖含量急剧下降。在灵芝子实体中，从灵芝现蕾开始，灵芝多糖含量逐步增加，到孢子弹射前达到最高值，孢子弹射后，含量急剧下降。从子实体和培养基中灵芝多糖含量的对比情况来看，在孢子弹射前，子实体中灵芝多糖含量远高于培养基；但在孢子弹射后，子实体和培养基中灵芝多糖含量均急剧下降，二者的灵芝多糖含量没有极显著差异。结论：在灵芝生产中，应该选择在开伞期后、孢子弹射前采收子实体为宜。这时采收的灵芝子实体产品灵芝多糖含量最高，品质最好。将灵芝采收后的培养基用于灵芝多糖的提取，进行合理的开发利用，可以大力提高灵芝生产的经济效益。     

不同品种灵芝多糖含量差异研究

目的 :比较产粉灵芝与无粉灵芝多糖含量的不同,明确不同品种灵芝子实体多糖含量的差异。 方法 :光学显微镜观察灵芝子实体结构,蒽酮-硫酸法测定了不同品种灵芝多糖含量。 结果 :无粉灵芝的多糖含量比产粉灵芝多糖含量高出近1倍;灵芝子实体由4部分组成,分别为菌皮、皮层、菌肉、菌管;子实体中菌管所占比例最大,厚度比例占70％以上,且多糖含量在各部分中也最高,最高可达3.88％。 结论 :无粉灵芝多糖含量高于产粉灵芝;菌管是灵芝子实体多糖的主要来源。     

灵芝多糖肽中单糖的组成

目的从灵芝Ganoderma lucidum子实体中分离得到的GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT43种多糖肽,对其单糖组成和摩尔比进行比较。方法多糖肽经三氟乙酸水解后,用1-苯基-3-甲基-5-吡啶啉酮(PMP)衍生化,在高效液相245nm紫外检测,使用KH2PO4(pH5.0)-乙腈(83.5∶16.5)等度洗脱,9种单糖的色谱峰分离清晰,大多呈基线分离。结果经实验确定GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT4均由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸等9种单糖组成。结论灵芝子实体活性成分多糖肽中的核糖系属首次报道。     

灵芝孢子粉散发与采收

通过对野外段木栽培的灵芝孢子成熟期,孢子散发与季节、昼夜时间、温度、空气相对湿度、菌盖厚度等关系,以及孢子粉的采收时间、方法和技术的探索,阐明灵芝孢子散发的规律与采收技术,为灵芝孢子粉药材的生产与采收提供科学依据。     

灵芝中灵芝多糖的含量测定研究

灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss·ex Fr·)Karst·或紫芝Ganoderma sinenseZhao·Xu et Zhang的干燥子实体。其化学成分复杂,目前已知主要含有多糖(肽)类、三萜类、核苷类等[1]。灵芝多糖类具有抗肿瘤作用、免疫调节作用、降血糖、降血脂、抗氧化和抗衰老等作用,被认为是灵芝扶正固本的重要有效成分[2]。本研究建立了灵芝多糖的含量测定方法。本实验采用分光光度法,以葡萄糖为对照品,经硫酸蒽酮显色后测定其吸     

灵芝孢子多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抗肿瘤活性的研究

目的：研究灵芝孢子多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抗肿瘤活性．方法：通过对EC荷瘤小鼠的血清半数溶血值和网状内皮系统（RES）吞噬功能的检测考察灵芝孢子多糖对荷瘤小鼠的体液免疫及细胞免疫功能的影响：通过WBC、骨髓有核细胞数等指标观察灵芝孢子多糖（160，80，40mg／kg）灌胃（ig）给药对S180荷瘤小鼠放、化疗的减毒作用；通过抑瘤率的检测观察灵芝孢子多糖（160，80，40mg／kg）灌胃（ig）给药对S180，H22，EC等移植性肿瘤的生长抑制作用。结果：与正常对照组相比，灵芝孢子多糖（160、80mg／kg）可显著提高由荷瘤引起的小鼠血清半数溶血值的降低（p〈0．01，p〈0．05），表明其可明显提高荷瘤小鼠的体液免疫功能；且灵芝孢子多糖（160，80mg／kg）可显著提高EC荷瘤小鼠的免疫吞噬系数α、吞噬指数K和脾脏指数，表明其亦可提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能；与S180空白对照组相比，灵芝孢子多糖（160，80mg／kg）ig组可显著抑制由放、化疗引起的S180荷瘤小鼠WBC、骨髓有核细胞数等指标的下降（p〈0．05）：与空白对照组相比，灵芝孢子多糖（160，80mg／kg）ig组可显著抑制小鼠S180 H22，EC移植性肿瘤的生长（p〈0．01）。     

灵芝孢子精粉可真灵

今年,我试栽10平方米,200多株紫灵芝,很成功,产灵芝子实体(芝冠)30多斤,产灵芝孢子精粉2.5斤。 据《神农本草经》中记述:灵芝称为“仙草”、“不老草”,它能增长智慧不忘,久食轻身不老。据现代科学测试:灵芝含有多糖体、灵芝酸、有机锌、有机锗、纤维素、腺苷、嘌呤等60多种药理活性成分,及人体必需的18种氨基酸,还有23种微量元素。临床应用表明、灵芝孢子精粉对肿瘤病变、心脑血管、哮喘、失眠症、便秘症疗效显著。     

光质对灵芝生长与灵芝多糖含量的影响

目的:研究不同光质对灵芝生长发育和灵芝多糖含量的影响,为灵芝优质高产栽培提供理论依据。方法:栽培灵芝时进行不同光质处理,在灵芝不同生长发育时期观测其形态变化并测量多糖含量。结果:不同光质处理形态上弹孢前期灵芝菌盖厚度与菌盖表面环纹的数目与对照差异显著,灵芝多糖含量出现最高值时期不同。蓝色光质处理在现蕾期、开伞期、弹孢后期多糖含量均高于对照,且差异显著。绿色光质处理有助于生长末期多糖积累。不同光质处理对灵芝子实体产量与灵芝孢子粉产量均有影响。结论:对照处理灵芝子实体产量高,性状好;蓝色光质处理可以提高灵芝多糖含量。     

虫草灵芝多糖复合物片剂的制备及体内活性研究

目的制备虫草、灵芝多糖复合物片剂,验证所制备的虫草、灵芝多糖复合物片剂的药理活性。方法对虫草、灵芝多糖复合物片剂的提高免疫力活性、抗疲劳活性、耐缺氧活性进行了体内活性实验。结果虫草、灵芝多糖复合物片剂具有提高免疫力、抗疲劳活性及耐缺氧活性的功效。毒理学实验表明虫草、灵芝多糖复合物片剂无毒性反应,口服给药安全。结论虫草灵芝多糖复合物片剂具有开发为优良提高免疫力、抗疲劳、耐缺氧制剂的潜力。     

灵芝多糖联合低剂量顺铂抑瘤作用及对荷瘤鼠免疫功能的影响

目的研究灵芝多糖与顺铂联合用药对荷瘤小鼠的肿瘤生长情况及其免疫功能的影响。方法Balb／c小鼠腋下接种小鼠肺癌细胞株Lewis5×10^6个细胞,待肿瘤至100min^3分组给药。分为对照组、灵芝多糖组（1次／2d,40mg／kg,灌胃）、顺铂组（1次／2d,2mg／kg,腹腔注射）和联合用药组（等剂量的顺铂和灵芝多糖）。每3天测量一次肿瘤的体积,30d后解剖,检测荷瘤小鼠的肿瘤大小、脾脏的变化,脾脏和外周血中免疫细胞的变化以及相关免疫细胞的功能。结果灵芝多糖可有效增加小剂量顺铂的抗肿瘤效果,提高荷瘤小鼠的存活率,使小鼠外周血中Th细胞向Thl转化,增加细胞免疫功能,并增加骨髓来源DC细胞表面CDllc分子的表达（与对照组比较灵芝多糖组从1．06％升至4．59％,与顺铂比较,联合用药组从2．8％升至7．21％）,提高抗原提呈能力。结论灵芝多糖可以提高荷瘤小鼠的免疫功能,与小剂量顺铂联合用药后,具有协同抗肿瘤生长作用,且可提高小鼠存活率。     

灵芝-淫羊藿菌质总多糖量动态变化的初步研究

目的 探讨灵芝-淫羊藿菌质发酵的工艺及总多糖的动态变化.方法 选取4个灵芝菌株,以淫羊藿为培养基质进行固体发酵,并利用苯酚-硫酸法测定灵芝-淫羊藿菌质的总多糖量.结果 灵芝-淫羊藿菌质总多糖量明显高于对照培养的灵芝多糖量(P＜0.05);对灵芝和淫羊藿发酵组合的多糖量进行动态变化研究,发现灵芝菌种A-淫羊藿菌质的发酵终点确定为21 d,灵芝菌种B、C和D的发酵终点确定为28 d.结论 与对照培养灵芝及未发酵的淫羊藿相比,灵芝对淫羊藿发酵可提高总多糖量3～13倍,效果良好.     

响应面法优化灵芝孢子粉药渣多糖提取工艺

目的优化灵芝孢子粉药渣中多糖的提取工艺。方法采用超声波法提取灵芝孢子粉药渣中多糖,苯酚-硫酸法测定灵芝孢子粉药渣中多糖含量;在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken试验设计,以多糖提取率为响应值,优选灵芝孢子粉药渣多糖提取工艺。结果灵芝孢子粉药渣多糖最佳工艺提取条件为超声波功率300W,液固比120:1(ml/g),提取时间30min,提取温度65℃。在此最佳提取条件下灵芝孢子粉药渣中多糖提取率为6.31%,理论值为6.56%,与理论值相对误差小于5%。结论采用超声提取法可以充分提取灵芝孢子粉药渣中的多糖,为中药废弃物的开发利用提供了一条新的途径。