原头蚴体外刺激巨噬细胞高表达PPARα/γ并调节其极化

目的:探讨原头蚴与RAW264.7 共培养后PPARα/γ的表达水平以及对巨噬细胞极化的作用。方法:原头蚴与RAW264.7 共培养12、24、36、48、72 h 取细胞。用Qrt-PCR 的方法检测RAW264.7 细胞PPARα/γ的表达水平,用qRT-PCR 的方法检测巨噬细胞M1 型相关因子TNF-α、MCP-1、IL-1β和M2 型相关因子Arg-1、TGF-α、Fizz-1 的水平,ELISA 的方法检测Arg-1 和MR 的表达量。结果:RAW264.7 细胞PPARα/γ的表达水平和M2 型相关因子Arg-1、TGF 、Fizz-1 和MR 均逐渐升高,72 h 表达最高(P<0.05);巨噬细胞M1 型相关因子TNF 、MCP-1、IL-1茁先升高后降低(P<0.05),Arg-1 和MR 的蛋白水平也逐渐增高。结论:原头蚴与RAW264.7 共培养后PPARα/γ的表达逐渐升高,可能促进巨噬细胞由M1 型向M2 型极化,从而在虫体免疫逃逸中发挥一定作用。     

细粒棘球蚴感染小鼠早期阶段Tim-3表达的初步分析

目的:了解Tim-3作为一个新型促炎因子,在细粒棘球蚴感染小鼠的早期阶段的表达水平。方法:原头蚴感染BALB/c小鼠后1、5、9、13天,取其腹腔巨噬细胞和脾细胞。采用流式细胞术(FCM)检测各时间点腹腔巨噬细胞、脾巨噬细胞、脾CD3+细胞Tim-3的表达水平。采用qRT-PCR法检测各时间点TLR4的mRNA水平。结果:细粒棘球蚴组与对照组小鼠CD3+脾细胞Tim-3表达无明显差别;小鼠脾脏巨噬细胞(9、13天)、腹腔巨噬细胞(5、9、13天)表面Tim-3表达水平较对照组有升高,与对照组有显著差异(P<0.05)。巨噬细胞数量无明显变化。小鼠感染细粒棘球蚴第1天时TLR4 mRNA的表达水平升高,并与对照组有显著差异(P<0.05)。结论:小鼠感染细粒棘球蚴早期,巨噬细胞Tim-3的表达升高,并可能通过下调TLR4的表达,抑制了巨噬细胞功能,从而抑制宿主的免疫杀伤,产生了免疫逃避作用。     

细粒棘球蚴早期感染促进小鼠体内IL-22的产生

目的探讨小鼠腹腔细粒棘球蚴感染早期主要产生IL-22的CD4~+T细胞Th1、Th17和Th22细胞以及IL-22R1的表达情况。方法建立小鼠腹腔细粒棘球蚴感染模型,分别在感染后第3、6、9、12天收集外周血、小鼠脾淋巴细胞以及肝脏和肠管组织。ELISA检测外周血IFN-γ和IL-17、IL-22的蛋白表达量;qRT-PCR检测脾淋巴细胞中Th1细胞相关因子(Ifng、Tbx21基因)、Th17细胞相关因子(IL-17、Rorc基因)、Th22细胞相关因子(IL-22、Ahr基因)以及肝脏和肠管组织中IL-22R1的mRNA表达水平;流式细胞术检测脾淋巴细胞中Th1细胞(CD4~+IFN-γ~+)、Th17细胞(CD4~+IFN-γ~-IL-22~+IL-17~+)及Th22细胞(CD4~+IFN-γ~-IL-22~+IL-17~-)的百分比情况。结果与对照组相比,ELISA、qRT-PCR和流式细胞术检测细粒棘球蚴感染后Th1细胞、Th17细胞、Th22细胞增高:qRT-PCR检测细粒棘球蚴感染后肝脏和肠管IL-22R1的表达增高。结论细粒棘球蚴感染小鼠早期,主要产生IL-22的CD4~+T细胞Th1、Th17、Th22细胞比例以及IL-22R1表达增加,可能参与了宿主的免疫防御反应。     

洛美利嗪调控小鼠巨噬细胞极化的机制研究

目的:探究洛美利嗪对小鼠巨噬细胞M1型和M2型极化的调控作用及分子机制。方法:采用RTqPCR及Western blot实验检测洛美利嗪对小鼠骨髓来源的巨噬细胞和Raw 264.7小鼠巨噬细胞M1和M2型极化的影响;Western blot实验检测洛美利嗪对调控巨噬细胞极化的丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、核因子κB(NF-κB)和信号转导及转录激活因子6(STAT6)信号通路的影响。结果:洛美利嗪能够显著抑制脂多糖(LPS)诱导的M1型巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β的产生(P0.01),且剂量依赖性地降低M1型极化标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达(P0.05),同时促进IL-4诱导的M2型巨噬细胞标志物几丁质酶3样蛋白3(CHI3L3/Ym-1)、Fizz-1(found in inflammatory zone-1)和精氨酸酶1(Arg-1)的mRNA和蛋白表达(P0.05)。洛美利嗪能够剂量依赖性地抑制MAPK信号通路中p38 MAPK、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)的磷酸化以及NF-κB信号通路中NF-κB p65的磷酸化,并促进核因子κB抑制因子α(IκBα)的表达(P0.05),进而介导巨噬细胞极化。结论:洛美利嗪可以通过调控MAPK和NF-κB信号通路进而剂量依赖性地抑制小鼠巨噬细胞M1型极化,同时洛美利嗪还可以显著促进M2型极化。     

鹿血晶增强巨噬细胞抗黑色素瘤作用及其机制研究

目的:探索鹿血晶对巨噬细胞杀伤黑色素瘤细胞的影响。方法:细胞增殖试剂盒(CCK8)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡和巨噬细胞吞噬情况。qRT-PCR法检测炎症因子mRNA表达水平,ELISA检测上清炎症因子浓度。蛋白印迹法检测mTOR信号通路下游4EBP和S6磷酸化水平。结果:鹿血晶刺激后Raw264.7细胞培养上清抑制B16F10细胞活力,促进B16F10细胞凋亡。鹿血晶促进Raw264.7细胞吞噬B16F10细胞,增强Raw264.7细胞活力,并上调炎症因子iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA表达,促进上述炎症因子分泌,上调4EBP和S6蛋白磷酸化水平。结论:鹿血晶通过活化mTOR信号通路提高巨噬细胞对黑色素瘤细胞的杀伤作用。     

小鼠巨噬细胞功能极化可塑性的初步探讨

目的通过鉴定小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDM)的功能表型,从而研究巨噬细胞功能极化的可塑性及其内在机制。方法采用流式细胞术检测体外诱导分化的小鼠骨髓来源巨噬细胞纯度;采用荧光定量PCR技术检测由RAW264.7极化的M1、M2巨噬细胞中M1、M2特定标记基因的表达来鉴定RAW264.7的功能状态;小鼠BMDM极化为M1、M2巨噬细胞时,荧光定量PCR技术检测M1、M2中特定标记基因TNF-α、IL-6、Arginase、Fizz-1 mRNA水平的表达,组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin A(TSA)、DNA去甲基化酶抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞(Aza)刺激M1、M2巨噬细胞后,检测TNF-α、IL-6、Arginase、Fizz-1 mRNA水平表达的变化。结果 RAW264.7细胞经LPS刺激8 h极化为M1巨噬细胞;RAW264.7细胞经IL-4体外刺激24 h极化为M2巨噬细胞。小鼠BMDM在LPS、IL-4刺激下,分别极化为M1、M2巨噬细胞,改变体外刺激条件,M1巨噬细胞可重分化为M2样巨噬细胞,M2巨噬细胞可重分化为M1样巨噬细胞,M1样巨噬细胞和M2巨噬细胞是介于M1、M2中间状态的2种巨噬细胞;药物TSA、Aza的加入使M1、M2中特定标记基因TNF-α、IL-6、Arginase、Fizz-1 mRNA水平表达增加。结论巨噬细胞的功能极化具有可塑性,巨噬细胞的极化可能与染色质状态的改变有关。     

脐带来源间充质干细胞抑制巨噬细胞M1极化

目的：探究人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对巨噬细胞M1/M2极化的作用。方法：将hUC-MSCs与佛波酯（PMA）诱导分化的巨噬细胞样细胞（pTHP-1巨噬细胞）共培养后进行转录组测序分析,筛选差异表达基因,进一步进行GO及KEGG富集分析。细胞增殖实验（CCK-8和EdU）分析hUC-MSCs对pTHP-1细胞增殖的影响。流式细胞术检测hUC-MSCs对LPS刺激的pTHP-1巨噬细胞炎症因子TNF-α表达及抑炎因子IL-10表达的影响。qRT-PCR及流式细胞术探究hUC-MSCs对pTHP-1巨噬细胞M1/M2相关分子表型的作用。结果：转录组测序数据分析发现hUC-MSCs与pTHP-1细胞共培养后M1相关基因TNF-α(P<0.05)、HLA-DRA(P<0.01)明显下调,M2相关基因ARG1(P<0.05)明显上调,提示hUC-MSCs抑制巨噬细胞向M1表型极化。GO和KEGG富集分析提示这些表达失调的基因参与调控炎症与免疫应答。hUC-MSCs抑制pTHP-1巨噬细胞增殖,且抑制TNF-α表达（P<0.001）,促进IL-10表达（P<...     

长链非编码RNA(lncRNA)对巨噬细胞极化转录调控的研究进展

经典活化型巨噬细胞(M1型)和替代活化型巨噬细胞(M2型)是两种具有不同表型和功能的巨噬细胞亚群。巨噬细胞能响应微环境信号,迅速从一种极化状态转换到另一种极化状态。巨噬细胞极化受核因子κB(NF-κB)、信号转导子和转录激活子(STAT)、干扰素调节因子(IRF)等转录因子调控,进而参与多种炎症相关性疾病的发生发展。长链非编码RNA(lncRNA)可调控NF-κB抑制蛋白(IκB)磷酸化改变NF-κB核移位,或通过与p65/p50形成复合物抑制NF-κB与其靶基因启动子结合,进而调控巨噬细胞极性; lncRNA可直接调控Janus激酶2(JAK2)/STAT通路,或间接通过细胞因子信号传送阻抑物(SOCS)调控STAT表达参与巨噬细胞极化调控; lncRNA通过调控多梳抑制复合物2(PRC2)等间接影响IRF的转录,调控巨噬细胞极化。深入了解lncRNA对巨噬细胞极化转录调控的作用机制,有助于为这些疾病的诊断和治疗提供新的策略。     

南蛇藤素通过调控M2型巨噬细胞极化提高A549细胞对顺铂的敏感性

目的：探讨南蛇藤素（CEL）通过调控M2型巨噬细胞极化提高肺癌细胞A549对顺铂敏感性的作用及可能机制。方法：体外培养巨噬细胞RAW264.7和肺癌细胞A549,CCK-8检测CEL对细胞活性的影响。IL-4/IL-13诱导RAW264.7细胞极化后给予CEL,qRT-PCR和免疫荧光实验检测M2型巨噬细胞相关标志物表达。Western blot检测RAW264.7细胞p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT表达。将A549细胞分为对照组、CEL组、M2组（A549细胞与M2型巨噬细胞共培养）、M2+CEL组（A549细胞与CEL处理的M2型巨噬细胞共培养）和M2+LY-294002组（A549细胞与LY-294002处理的M2型巨噬细胞共培养）,给予顺铂处理后,CCK-8检测细胞活性,Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：80 nmol/L CEL抑制RAW264.7细胞活性但对A549细胞活性无影响。40 nmol/L CEL处理RAW264.7细胞后,IL-4/IL-13诱导的M2型巨噬细胞标志物MRC1、Arg1和CD163表达明显降低,p-PI3K和...     

核仁素对心肌梗死后巨噬细胞极化的影响及其机制的初步研究

目的:探讨核仁素对心肌梗死后巨噬细胞极化的影响及其作用机制。方法:采用小鼠心肌梗死模型;采用心肌内注射核仁素RNA干扰的慢病毒载体,从整体水平观察核仁素低表达对小鼠心梗后死亡率的影响及对巨噬细胞极化的影响;采用流式细胞术检测巨噬细胞极化情况。结果:心肌梗死1 d后,核仁素表达减少,3 d后表达增加,5 d后明显升高,达(2.73±0.47)倍,7 d后有所下降。小鼠心肌梗死2 d、5 d后,心肌中巨噬细胞明显增多;心肌梗死2 d后心肌中M1型巨噬细胞占77.71%,而心肌梗死5 d后心肌中M2型巨噬细胞占82.13%。核仁素低表达可抑制心肌梗死5 d后M2型巨噬细胞的极化,但对巨噬细胞的侵润无明显影响,可明显减少心肌梗死后28 d的存活率。核仁素过表达可使巨噬细胞极化相关基因NOTCH1和STAT6的m RNA水平表达上调,而核仁素低表达可下调NOTCH1和STAT6的m RNA表达水平。结论:核仁素可调控心梗后巨噬细胞的极化,核仁素低表达可增加小鼠心梗后死亡率。     

原头蚴通过刺激巨噬细胞分泌KLF4促使其向M2分化

目的探讨原头蚴可能通过刺激巨噬细胞分泌KLF4而促使其向M2分化。方法原头蚴与RAW264.7细胞共培养,分别在12、36、48、84 h收集细胞和培养上清液,q RT-PCR检测KLF4、M1(Arg-1,Fizz-1,MR)、M2(TNF-α、IL-6、MCP-1)巨噬细胞因子的表达;ELISA检测相关因子分泌的含量。结果实验组(84 h)的KLF4 m RNA水平较对照组明显升高。随着感染时间延长,M2巨噬细胞的m RNA表达量及分泌含量呈上升趋势,M1巨噬细胞的m RNA表达量及分泌含量呈先升后降趋势。结论原头蚴刺激RAW264.7细胞,可能通过分泌某些抗原、蛋白,诱导巨噬细胞KLF4高表达而促使其向M2分化,抑制巨噬细胞的功能,从而逃逸宿主的免疫杀伤。     

自噬抑制剂巴弗洛霉素A1对巨噬细胞极化的影响

目的:探讨自噬下游抑制剂巴弗洛霉素A1(bafilomycin A1,Baf A1)对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7极化的影响。方法:用Baf A1作用于小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,酶联免疫吸附实验检测M1/M2极化相关细胞因子的含量;流式细胞术检测细胞表面M1/M2极化相关标志物;免疫荧光观察自噬小体形成情况;Western blot检测自噬相关蛋白水平变化。结果:Baf A1处理后,RAW264.7细胞分泌的促炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)显著增高(P0.01),而抑炎性细胞因子IL-10和IL-13的含量变化无显著差异。Baf A1处理的细胞表面标志物中CD197和HLA-DR(M1标志物)双阳性率与对照组相比显著升高(P0.05),说明Baf A1可以诱导巨噬细胞向M1方向极化。免疫荧光结果显示,Baf A1处理后细胞自噬小体显著增多(P0.05)。Western blot结果显示Baf A1处理后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ表达显著升高(P0.05),而P62蛋白表达无显著差异。在自噬激活剂雷帕霉素处理组中,自噬体同样显著增多(P0.05),但P62蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:巴弗洛霉素A1可以诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7向M1方向极化,可能与其抑制自噬下游自噬溶酶体的形成有关。     

BTK抑制剂GDC-0853通过TLR4/NF-κB通路抑制M1巨噬细胞极化并改善UUO肾损伤

目的探究BTK抑制剂GDC-0853对巨噬细胞极化的影响、对小鼠单侧输尿管梗阻(unilated ureteral obstruction,UUO)肾损伤的缓解作用并揭示其相关的机制。方法使用不同浓度BTK抑制剂GDC-0853(20、50、100μmol/L)干预LPS+IFNγ诱导RAW264.7小鼠M0型巨噬细胞向M1型极化,流式细胞术检测巨噬细胞M1型标记物CD86与M2型标记物CD206的表达频率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-23(IL-23)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA水平,Western blot法检测CD86、iNOS蛋白表达以及TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达情况;60只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham)、UUO组、UUO+BTK抑制剂GDC-0853(低、中、高剂量)组,分别予以生理盐水和20 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg GDC-0853灌胃预处理3 d,UUO术后再处理7 d后取小鼠肾组织,HE染色观察肾组织病理变化,免疫组化染色检测iNOS阳性表达。结果与LPS+IFNγ组比较,不同浓度BTK抑制剂GDC-0853干预后,M1型巨噬细胞标记物CD86百分比下降而M2型巨噬细胞标记物CD206百分比上升,TNF-α、IL-6、IL-23、iNOS mRNA表达水平以及CD86、iNOS、TLR4、p-IκBα、p-P65蛋白表达水平也显著下降,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.01)。BTK抑制剂GDC-0853处理的小鼠肾组织病理损伤较UUO组呈剂量依赖性地减轻,同时,iNOS阳性表达较UUO组也呈剂量依赖性地减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论BTK抑制剂GDC-0853可改善小鼠UUO的肾损伤,可能是通过介导TLR4/NF-κB信号通路调控巨噬细胞M1的极化来实现的。     

下调Bcl-2家族蛋白促进MTB感染的小鼠巨噬细胞系凋亡

目的探讨Mcl-1shRNA靶向下调Mcl-1的表达后,Bcl-2家族蛋白对不同毒力结核杆菌感染的小鼠Raw264.7巨噬细胞凋亡的调控作用。方法用XJ-MTB、H37Rv、H37Ra和卡介苗(BCG)感染小鼠Raw264.7巨噬细胞,并用Mcl-1 shRNA作用于感染的巨噬细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2家族蛋白Mcl-1和Bax的表达;实时荧光定量PCR检测Mcl-1、Bcl-2、Bax、caspase-3与细胞色素C mRNA的表达。结果 1)不同毒力的MTB感染可诱导小鼠Raw264.7巨噬细胞的凋亡,靶向下调Mcl-1的表达可显著提高XJ-MTB和H37Rv感染的宿主巨噬细胞的凋亡率。2)XJ-MTB和H37Rv感染可显著上调Bcl-2家族抗凋亡成员Mcl-1与Bcl-2的表达,应用Mcl-1 shRNA沉默Mcl-1基因后Mcl-1与Bcl-2水平显著下降,同时增高Bax的表达。3)不同毒力的MTB感染小鼠Raw264.7巨噬细胞后caspase-3和细胞色素C表达升高,靶向下调Mcl-1可以进一步上调感染组caspase-3和细胞色素C的表达。结论 MTB感染后小鼠Raw264.7巨噬细胞中Bcl-2家族蛋白与基因的表达水平与菌株毒力相关,应用Mcl-1shRNA下调Mcl-1的表达可以促进宿主巨噬细胞的凋亡。     

Kruppel样因子6基因对巨噬细胞中胆固醇蓄积的影响

背景:研究表明,Kruppel样因子6与巨噬细胞极化密切相关。但是,关于Kruppel样因子6在巨噬泡沫细胞形成中的作用尚不清楚。目的:观察Kruppel样因子6过表达对氧化低密度脂蛋白刺激下的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积及对ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响。方法:取Raw264.7巨噬细胞株分别转染慢病毒空载体和重组载体p CDH-KLF6,作为对照组和Kruppel样因子6组,另取稳定感染慢病毒空载体的Raw264.7巨噬细胞株和稳定感染重组载体p CDH-KLF6的Raw264.7巨噬细胞株均加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育48 h后,得到氧化低密度脂蛋白组和Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组。结果与结论:与对照组相比,氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平显著增加(P0.05)。与氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞相比,Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平明显下降,胆固醇酯/总胆固醇明显降低(P0.05)。而未加入氧化低密度脂蛋白处理的2组细胞内脂质表达水平少,且对照组与Kruppel样因子6组相比,细胞内脂质表达水平差异无显著性意义。提示Kruppel样因子6可能通过促进ATP结合盒转运蛋白A1的表达,抑制氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。     

芒果苷通过MMP9调控巨噬细胞M2极化对胰腺癌的作用及其机制研究

目的：探讨芒果苷通过MMP9调控M2型巨噬细胞极化治疗胰腺癌的作用及机制。方法：在体内水平绘制肿瘤生长曲线,免疫组化染色评价芒果苷对胰腺癌的治疗效果;免疫荧光、ELISA检测芒果苷对胰腺癌中M2型巨噬细胞表达的影响;免疫荧光、ELISA、Western blot及qRT-PCR检测芒果苷对MMP9以及下游M2型巨噬细胞极化相关信号通路表达的影响。在体外水平利用MTT检测M2型极化巨噬细胞对胰腺癌的作用及芒果苷对胰腺癌的治疗效果;ELISA检测芒果苷对M2型极化巨噬细胞的影响;免疫荧光及Western blot检测芒果苷对MMP9及下游M2巨噬细胞极化相关信号通路表达的影响。结果：小鼠胰腺癌模型中,芒果苷可抑制胰腺癌生长,且可抑制胰腺癌中M2极化巨噬细胞表达;同时芒果苷可抑制胰腺癌中MMP9及下游M2巨噬细胞极化相关信号通路表达。在M2型极化巨噬细胞-胰腺癌细胞共培养模型中,芒果苷抑制胰腺癌细胞增殖,抑制巨噬细胞M2型极化,同时抑制MMP9及下游M2巨噬细胞极化相关信号通路表达。结论：芒果苷可通过抑制MMP9及下游M2巨噬细胞极化相关信号通路抑制巨噬细胞M2极化治疗胰腺癌。     

细粒棘球蚴感染中阻断TGF-β1受体对淋巴细胞的影响

目的:观察TGF-β1对细粒棘球蚴体外与BALB/c小鼠T淋巴细胞培养的影响。方法:阻断剂组:BALB/c小鼠脾细胞+细粒棘球蚴+SB525334共培养;对照组:BALB/c小鼠脾细胞+细粒棘球蚴+PBS共培养;空白对照:BALB/c小鼠脾细胞+RPMI-1640培养基+SB525334共培养。方法:48 h收集淋巴细胞,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群、CD4+CD25+T细胞的数量、NK细胞的数量及其活性受体NKG2D的表达;乳酸脱氢酶法检测NK细胞的杀伤活性。结果:体外阻断TGF-β1受体后,引起细粒棘球蚴介导的CD4+T细胞数量升高、CD8+T细胞数量降低、CD4+/CD8+T细胞比值升高、CD4+CD25+T细胞数量减少、NK细胞活性受体NKG2D的表达增加、NK细胞对靶细胞Yac-1的裂解率增加和NK细胞活性及其活性受体NKG2D成正相关。结论:体外阻断TGF-β1受体可提高T淋巴细胞免疫,从而抵制细粒棘球蚴的感染。     

川续断皂苷Ⅵ对M1/M2型巨噬细胞极化的调节作用及机制

目的：研究川续断皂苷Ⅵ对M1/M2型巨噬细胞极化的调节作用及机制。方法：MTT法检测川续断皂苷Ⅵ对RAW264.7细胞活力的影响。ELISA检测脂多糖（LPS）诱导状态下RAW264.7细胞上清中TNF-α和IL-6的分泌量；Griess法检测LPS诱导状态下RAW264.7细胞上清中一氧化氮（NO）含量；荧光定量PCR检测TNF-α、IL-6、精氨酸酶-1(Arg-1)、血红素加氧酶1(HO-1)和细胞因子信号转导抑制蛋白-2(SOCS2)基因表达水平。Western blot检测一氧化氮合酶（iNOS）和p-p65蛋白表达。结果：在LPS诱导的RAW264.7细胞中，川续断皂苷Ⅵ抑制TNF-α、IL-6、iNOS和p-p65蛋白或基因表达水平，同时增加HO-1基因表达。川续断皂苷Ⅵ能抑制LPS诱导下RAW264.7细胞分泌的NO。川续断皂苷Ⅵ增加IL-4诱导下M2型巨噬细胞标志物Arg1和SOCS2基因表达。结论：川续断皂苷Ⅵ可以抑制RAW264.7巨噬细胞向M1型极化，同时促进其向M2型极化，可通过调节M1/M2型巨噬细胞极化发挥其抗炎免疫调节作用。     

Sesn2通过激活mTOR信号通路调节LPS诱导的巨噬细胞M1极化和炎症反应

目的：探讨sestrin 2 (Sesn2)在巨噬细胞中的功能及其通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路对巨噬细胞极化和炎症的影响。方法：用小干扰RNA构建Sesn2沉默（si-Sesn2）的RAW264.7小鼠巨噬细胞胞株,通过脂多糖（LPS）处理RAW264.7细胞建立体外炎症模型。RT-qPCR评估白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、CD86和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA水平;ELISA检测培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平;流式细胞术确定CD86标记的M1型巨噬细胞百分比;Western blot分析mTOR、p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K）和真核翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)的蛋白表达水平。结果：在LPS诱导的体外炎症模型中,Sesn2在RAW264.7细胞中的表达上调,IL-1β、IL-6、TNF-α以及M1型巨噬细胞标志物CD86和iNOS的表达显著增加,伴随mTOR、p70S6K和4EBP1蛋白表达水平的升高。而si-Sesn2进一步促进了上述效应,但这些变化可通过雷帕霉素预处理减轻。结论：S...     

炙甘草多糖对小鼠巨噬细胞再极化的影响

目的:建立探讨炙甘草中等分子量多糖(MPRR)诱导巨噬细胞极化的情况,阐明肿瘤微环境中极化后巨噬细胞对小鼠4T1乳腺癌细胞生长的影响。方法:培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,采用IL-4诱导并建立M2型极化模型,将培养细胞分为未诱导细胞(M0)组、M2极化(IL-4诱导)组、MPRR诱导组和Rp组(IL-4诱导12 h后MPRR再极化诱导组),流式细胞术分析巨噬细胞极化标志(CD86和CD206)的表达。免疫印迹技术分析转录因子STAT-6表达和磷酸化。收集不同条件下巨噬细胞培养上清液,ELISA法检测其IFN-γ和TGF-β浓度。结果:与对照组比较,IL-4诱导后细胞发生M2极化,可检测到RAW264.7细胞表面CD86表达下降(P<0.05),CD206表达增加(P<0.05)。而MPRR促进细胞向M1极化,可观察到其促进CD86表达而降低CD206表达(P<0.05)。M2极化后STAT-6磷酸化增加,IFN-γ分泌减少而TGF-β分泌增加(P<0.05);经MPRR处理减弱STAT-6磷酸化和TGF-β的分泌,促进IFN-γ分泌(P<0.05)。结...