低温治疗通过p38 MAPK信号通路抑制UVB诱导的小鼠皮肤炎症北大核心CSCD

目的探讨局部低温治疗对中波紫外线辐射(UVB)诱导的皮肤炎症的作用机制。方法角质形成细胞体外培养后接受如下3种处理:仅低温治疗、仅UVB照射、UVB照射后低温治疗,检测低温治疗对UVB照射后角质形成细胞的作用。将野生型雌性C57BL/6小鼠分为3组:低温治疗组、UVB组、UVB+低温治疗组。通过数字测微计测量、组织病理学、免疫组织化学、免疫荧光、定量RT-PCR和Western blot检测低温治疗对UVB诱导炎症的影响。结果低温治疗可显著减少UVB诱导的巨噬细胞和T细胞浸润(P<0.05),并显著抑制UVB诱导的p38磷酸化(P<0.05),减少相关的炎症反应,包括减轻耳肿胀反应、表皮增生(P<0.05)和皮肤炎症(P<0.05),减少小鼠模型中相关细胞因子表达和细胞凋亡(P<0.05)。结论低温治疗是治疗UVB诱导的皮肤炎症的一种有效的方法。     

香椿子多酚通过p38 MAPK通路抑制6-OHDA诱导的神经炎症反应

目的:研究香椿子多酚(PTSS)通过调节p38促分裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)所诱导的PC12细胞帕金森病(PD)模型的神经炎症反应。方法:将PC12细胞分为四组:对照组、模型组(6-OHDA 100μmol/L)、PTSS低剂量组(6-OHDA+PTSS 100μmol/L)、PTSS高剂量组(6-OHDA+PTSS 200μmol/L)。倒置显微镜下观察各组PC12细胞形态学的变化;采用细胞计数CCK-8法检测细胞活性;免疫细胞化学染色法和Western Blot检测诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、核因子κB p65(NF-κB p65)、p38 MAPK和p-p38 MAPK的表达变化。结果:(1)细胞形态观察显示:与对照组相比,6-OHDA模型组细胞胞体出现空泡,皱缩变形颜色暗淡,部分细胞折光性增高,细胞死亡数目明显增多,细胞聚集成片。PTSS低剂量组,细胞状态明显改善。(2)模型组PC12细胞活力显著降低,而PTSS能有效抑制PC12细胞活力的降低(P0.05),PTSS低剂量组比高剂量组改善效果更为显著(P0.05)。(3)与对照组比较,模型组细胞iNOS、COX-2、NF-κB p65、p38 MAPK和p-p38 MAPK表达明显升高,而PTSS组上述分子表达明显降低。结论:PTSS可有效逆转6-OHDA导致的PC12细胞损伤,其机制可能与下调p38 MAPK信号通路从而抑制神经炎症反应有关。     

p38MAPK信号通路在雨蛙素诱导的胰腺AR42J细胞炎症反应中的作用

目的: 探讨p38 MAPK信号通路在急性胰腺炎体外模型中的作用。方法: AR42J细胞随机分为3组:正常对照组、雨蛙素组(10^-8mol/L雨蛙素)和SB203580组(10 μmol/L SB203580+10^-8mol/L雨蛙素)。于3 h收集细胞,检测淀粉酶分泌率;免疫荧光染色观察p-p38 MAPK核移位;Western blotting印迹检测p-p38 MAPK和TNF-α蛋白表达;EMSA检测NF-κB活性。结果: 与正常对照组比较,雨蛙素组淀粉酶分泌率和TNF-α蛋白水平增高(P<0.01),p-p38 MAPK表达及NF-κB活性表达增加(P<0.01);免疫荧光示雨蛙素组p-p38 MAPK发生了核移位。而与雨蛙素组相比,SB203580组明显降低淀粉酶分泌率和TNF-α蛋白表达(P<0.01),p-p38 MAPK和NF-κB的活性表达也下降(P<0.05);SB203580还抑制了p-p38 MAPK核移位。结论: p38 MAPK通路参与了胰腺细胞内的炎症反应,其机制可能涉及NF-κB通路的活化。     

mmLDL通过p38 MAPK通路上调小鼠肠系膜动脉ET受体

目的:探讨弱氧化修饰低密度脂蛋白(mm LDL)是否通过激活p38 MAPK炎症通路上调小鼠肠系膜动脉内皮素(ET)A型(ET_A)和B型(ET_B)受体。方法:将昆明小鼠分为正常对照组(尾静脉注射生理盐水)、mm LDL组(尾静脉注射mm LDL)、LDL组(尾静脉注射LDL)、mm LDL+SB 203580组(尾静脉注射mm LDL及腹腔注射p38 MAPK抑制剂SB 203580)和mm LDL+DMSO组(尾静脉注射mm LDL及腹腔注射DMSO)。微血管张力描记仪记录ET_B受体激动剂角蝰毒素6c和ET-1引起肠系膜动脉收缩的量效曲线;RT-q PCR检测ET_B受体、ET_A受体和白细胞介素(IL-6)的m RNA表达;ELISA检测血清IL-6的水平;Western blot检测ET_B受体、ET_A受体、IL-6、p38 MAPK、p-p38MAPK、NF-κB和p-NF-κB的蛋白水平。结果:mm LDL引起ET_B     

TPX2通过p38 MAPK信号通路诱导直肠癌HR-8348细胞凋亡

目的:研究下调非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)对直肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:用TPX2小干扰RNA(si RNA)转染直肠癌HR-8348细胞,记为TPX2 si RNA组;以不做转染的细胞作为正常对照(control)组;以转染si RNA阴性对照(si RNA-NC)的细胞作为si RNA-NC组;用p38 MAPK抑制剂处理敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞记为TPX2 si RNA+SB203580组。RT-qPCR和Western blot测定TPX2的表达水平,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK、cleaved caspase-3和Bcl-2的蛋白水平。结果:TPX2 si RNA转染后HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白表达水平显著下降(P 0. 05),而转染si RNA-NC对HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白水平没有影响。敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞存活率降低,凋亡率升高,细胞中的cleaved caspase-3、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显升高,Bcl-2水平水平降低,与control组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。与TPX2 si RNA组相比,TPX2 si RNA+SB203580组的HR-8348细胞凋亡率、cleaved caspase-3水平和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显降低,存活率明显升高(P 0. 05)。结论:TPX2表达下调可以通过激活p38 MAPK促进直肠癌HR-8348细胞凋亡。     

糖皮质激素通过抑制p38MAPK信号通路缓解大鼠内毒素性急性肺损伤

目的： 研究糖皮质激素对内毒素导致的急性肺损伤的影响及作用机制。方法: 成年雄性SD大鼠被随机分为6组：对照组（control 组,n=6）;LPS组（n=24）;地塞米松＋LPS组（Dex＋LPS组,n=24）;糖皮质激素受体拮抗剂RU486组（RU486组,n=6）;RU486+LPS组（n=24）以及RU486＋Dex＋LPS组（n=24）。除对照组和RU486组外,其余4组在注射LPS后1、3、6、12 h又被分为4个亚组。分别检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNF-α和IL-6的浓度,肺组织的病理变化,以及肺组织中p38MAPK的活化状态和MKP-1的表达情况。另外又分别比较了LPS组与RU486＋LPS组、Dex＋LPS组与RU486＋Dex＋LPS组大鼠48 h的死亡率。结果: 注射LPS后,BALF中TNF-α 和IL-6的浓度明显升高（P<0.05）,HE染色显示肺组织内广泛炎症反应。而这些现象在应用RU486后变得更加严重,并且RU486＋LPS组的死亡率也明显高于LPS组(P<0.05)。地塞米松能明显缓解LPS导致的肺损伤,糖皮质激素受体(GR)参与此作用。另外,在注射LPS后,肺组织中磷酸化的p38MAPK的表达明显升高,而MKP-1的表达则明显受到抑制。地塞米松能显著降低p38MAPK的磷酸化,这一作用也是GR依赖的。结论: 糖皮质激素活化GR诱导肺组织中MKP-1的表达,进而抑制p38MAPK的活化,从而发挥其抗炎作用,缓解LPS诱导的肺损伤。     

利拉鲁肽通过p38 MAPK通路改善高同型半胱氨酸血症诱导的大鼠海马氧化应激及炎症损伤

目的:探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)类似物利拉鲁肽(Lir)对高同型半胱氨酸血症(Hhcy)大鼠海马损伤的保护作用及其机制。方法:40只SD大鼠随机分为对照(Ctrl)组、模型(Hhcy)组、Lir低剂量(12.5μg·kg~(-1)·h~(-1))组、Lir中剂量(25.0μg·kg~(-1)·h~(-1))组和Lir高剂量(37.5μg·kg~(-1)·h~(-1))组,采用Western blot法检测大鼠海马组织内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中p38、JNK和ERK1/2的蛋白表达及活性依赖的磷酸化水平,同时采用Western blot和免疫组织化学法检测内质网应激标志蛋白免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平;采用酶标法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果:Hhcy可明显上调p-p38、BIP和CHOP的蛋白表达量,降低SOD和GSH的活性,升高MDA含量及IL-1β、IL-6和TNF-α水平;腹腔注射Lir可浓度依赖性地改善Hhcy引起的上述内质网应激和炎症反应,并伴有p38 MAPK通路的抑制。结论:Lir可改善Hhcy诱导的大鼠海马组织氧化应激和炎症损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK信号通路的过度激活有关。     

p38MAPK通路参与亚急性帕金森病模型小鼠黑质iNOS表达的调控

目的:研究1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致Parkinson病(PD)小鼠模型黑质p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路对诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iN-OS)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达调控,以探讨PD多巴胺能神经元丢失的可能机制。方法:采用MPTP制备PD小鼠模型,观察行为学变化;采用免疫组化和免疫蛋白印迹法,观察黑质区酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、iNOS、caspase-3和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)阳性细胞数和蛋白表达水平变化及给予p38MAPK特异性抑制剂SB203580后对上述变化的影响。结果:模型II组TH阳性神经元明显丢失,小鼠出现典型的PD样行为学表现;模型I组小鼠黑质区p-p38MAPK、iNOS、caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加。经SB203580处理后,上述变化明显减轻(P0.01)。结论:p38MAPK通路对PD模型小鼠黑质区细胞凋亡可能起重要的调控作用,抑制该通路具有一定神经保护作用。     

姜黄素对糖尿病肾病p38MAPK信号通路的影响

目的观察姜黄素治疗糖尿病肾病的疗效,并探讨其对p38MAPK信号通路的影响。方法 12只db/db小鼠,分为模型组和姜黄素治疗组,6只db/m小鼠为对照组。小鼠系膜细胞(MES-13)分为低糖对照组,高糖模型组,高糖+姜黄素处理组。生化检测小鼠血糖、血尿素及血肌酐水平,ELISA法检测db/db小鼠24h尿微量白蛋白,PAS染色行肾小球硬化指数评分,Western blot检测致纤维化因子CTGF和38MAPK在db/db小鼠肾组织和系膜细胞中的表达。结果 db/db小鼠血糖、血尿素及血肌酐明显升高,伴有大量蛋白尿,肾小球硬化,db/db小鼠肾组织和经过高糖处理的系膜细胞中磷酸化的P38以及CTGF的表达均明显增加。姜黄素治疗后降低了血尿素及血肌酐的水平,减少db/db小鼠蛋白尿,减轻了肾小球硬化,抑制了db/db小鼠肾组织和高糖处理的系膜细胞中P38的磷酸化,降低了CTGF的表达。结论姜黄素对糖尿病肾病的治疗作用,与抑制38MAPK信号通路的磷酸化相关。     

p38 MAPK信号通路参与受体介导的细胞内吞的调控

目的：观察p38 MAPK信号转导通路在受体介导的细胞内吞中的作用。方法：利用Alexa 594标记的转铁蛋白作为受体介导的内吞作用的观察指标，来研究p38特异性抑制剂SB203580或ERK通路特异性抑制剂PD98059预处理以及p38基因敲除对该过程的影响。 结果：在受体介导的细胞内吞中，p38被磷酸化激活。SB203580的预处理或p38基因的敲除都能阻断受体介导的细胞内吞，而PD98059的预处理对该过程没有影响。 结论：p38 MAPK信号转导通路参与了受体介导的细胞内吞的调控。     

肾缺血后处理通过抑制p38 MAPK信号通路减轻大鼠肾缺血再灌注损伤

目的:探讨肾缺血后处理通过抑制p38 MAPK信号通路对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响.方法:采用中线剖腹手术和右肾切除术,将大鼠随机分为3组:假手术组(sham)、肾缺血再灌注组(I/R)和肾脏缺血后处理组(RI-Post)进行后续实验,全自动生化分析仪检测肾功能指标,HE染色观察肾组织损伤情况,TUNEL染色和免疫组化...     

PM2.5通过p38 MAPK信号通路影响血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:研究细颗粒物(PM2.5)对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响,以及p38 MAPK信号通路在其中的作用。方法:体外培养人血管平滑肌细胞,分为对照组和不同浓度PM2.5染毒组,分别用PBS及6.25、12.5和25 mg/L的PM2.5作用于细胞,用CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的变化,用划痕实验和Transwell法检测细胞的迁移能力,然后根据结果选取PM2.5最强作用浓度染毒细胞,在不同时点用Western blot法检测p38MAPK信号分子的磷酸化改变,并观察用特异性抑制剂阻断p38 MAPK信号后细胞在PM2.5刺激下的增殖和迁移情况。结果:与对照组比较,PM2.5染毒可明显促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移能力,在设定的浓度范围内以12.5 mg/L浓度组的作用最为明显(P<0.05)。Western blot结果显示,12.5 mg/L PM2.5染毒可上调血管平滑肌细胞p38 MAPK的磷酸化水平;而加入p38 MAPK抑制剂SB203580预处理后,PM2.5诱导的细胞增殖和迁移明显受到抑制,说明p38 MAPK可能介导PM2.5的毒性作用。结论:PM...     

Fractalkine通过激活p38MAPK信号通路调控狼疮性肾炎小鼠Treg细胞凋亡北大核心CSCD

目的:探讨趋化因子Fractalkine(FKN)对狼疮性肾炎(LN)小鼠Treg细胞凋亡的影响及机制。方法:构建LN小鼠模型,使用FKN中和抗体(Anti-FKN)、p38MAPK信号通路的抑制剂(SB203580)、p38MAPK信号通路的激活剂(U-46619)作用于正常小鼠及模型小鼠,采用免疫组化检测小鼠肾组织中FKN、磷酸化p38(p-p38)及Foxp3的蛋白表达;采用免疫磁珠法分选模型小鼠脾脏CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞,使用腺病毒转染细胞的方式敲低FKN的表达水平,同时使用p38MAPK信号通路抑制剂(SB203580)及激活剂(U-46619)干预细胞。采用Western blot验证FKN敲低的成功转染、检测p38、p-p38、Foxp3、凋亡相关因子(Bax、Bcl-2及Cyt-c)的蛋白表达。结果:LN小鼠肾组织中的FKN及磷酸化p38MAPK的表达明显上调,低表达FKN可降低LN小鼠肾组织及Treg细胞中FKN和p-p38的表达,增加Foxp3的表达,同时增加细胞内抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,而减少促凋亡因子Bax及Cyt-c蛋白的表达。p38MAPK信号通路抑制剂对上述因子的作用与低表达FKN相似,其激活剂可以逆转这些因子在LN小鼠Treg细胞中的表达。结论:FKN可能通过激活p38MAPK信号通路参与调控LN小鼠Treg细胞凋亡,为阐明LN的发病机制提供了实验依据。     

p38MAPK信号通路与应力介导成肌细胞的凋亡

背景：在体内条件下,细胞力学的功能研究因其所处生理环境的复杂性、实验条件的不易控制而很难得到满意结果。 目的：在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,研究p38MAPK信号通路在成肌细胞凋亡中的作用及其机制。 方法：将体外培养的C2C12细胞分为对照组和SB203580组,SB203580组中加入  20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580。应用细胞应力加载装置Flecell Strain Unit-5000T给细胞提供15%的力值,分别施加0,6,12,24 h的周期性张应力。每分钟10个循环,每循环包括3 s牵张,3 s松弛。Hoechst 33258染色观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测促凋亡基因bax mRNA的表达;Western blot检测信号通路中p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达。 结果与结论：随着加力时间的延长,细胞逐渐出现核固缩及凋亡小体,凋亡率增加(P < 0.05),bax mRNA表达增多(P < 0.05);细胞p38MAPK和p-p38MAPK蛋白均在加力6 h达到最低,此后逐渐升高。p38MAPK抑制剂SB203580可抑制加力引起的细胞凋亡,减少bax mRNA及p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达(P < 0.05)。说明p38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中起到重要的作用。     

p38MAPK与内皮细胞损伤的关系

p3 8MAPK通过磷酸化转录因子引起多种相关基因转录 ,调控活性物质的表达 ,参与血管内皮细胞氧化应激损伤甚至凋亡等过程。在信号通路水平阻断和调控p3 8MAPK的表达和活性 ,可以达到控制和减轻内皮细胞损伤或凋亡的目的。这为临床心血管疾病的防治提供了新的理论依据     

脂联素通过p38MAPK信号通路影响URSA患者外周血AdipoR1和免疫细胞平衡

目的探讨脂联素对不明原因复发性流产(URSA)患者外周血调节性T细胞(Treg)/Th17平衡调节、Adipo R和p38MAPK信号通路的影响。方法以URSA患者为研究对象,正常妊娠女性、健康未孕女性为对照,分离外周血单个核细胞(PBMC),RT-PCR检测Adipo R1/R2表达;脂联素体外干预后,ELISA法检测IL-17和TGF-β分泌水平,RT-PCR检测Adipo R1、Fox P3和RORγt m RNA表达,Western blot检测p38MAPK和p-p38MAPK表达;加入脂联素前先加入p38MAPK抑制剂SB203580,观察SB203580对Fox P3、RORγt、Adipo R1 m RNA表达水平的影响。结果 URSA患者Adipo R1显著降低;脂联素体外处理可升高URSA患者TGF-β分泌水平,降低IL-17水平,上调URSA患者Fox P3和Adipo R1 m RNA表达水平,降低RORγt表达水平,并呈明显的时间依赖性;脂联素可升高URSA患者p38MAPK激酶和p-p38MAPK激酶蛋白表达;p38MAPK抑制剂SB203580单独处理对Fox P3、RORγt和Adipo R1 m RNA表达无明显影响,但能明显抑制脂联素上调Fox P3和Adipo R1 m RNA和下调RORγt m RNA表达的作用。结论脂联素可能通过Adipo R1激活URSA患者体内p38MAPK信号通路改善Treg/Th17平衡而保护妊娠。     

山楂叶黄酮调节p38 MAPK/STAT3信号通路对多囊卵巢综合征大鼠炎症反应的影响

目的 探讨山楂叶黄酮（HLF）调节p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）/信号转导和转录激活子3(STAT3信号通路对多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠炎症反应的影响。方法 将SD雌性大鼠随机分为CK组、model组、HLF-L组、HLF-H组、阳性对照组、激活剂组,每组12只。除CK组外,其他组大鼠均采用颈背部皮下注射脱氢表雄酮构建PCOS大鼠模型,建模成功后进行相应药物,每天灌胃1次,持续4周。H-E染色观察各组大鼠卵巢情况;免疫组化法检测大鼠卵巢肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-6表达;放射免疫法检测各组大鼠血清空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;使用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测大鼠血清黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、孕酮（P）、睾酮（T）、雌二醇（E2）、TNF-α、IL-6、C反应蛋白（CRP）水平;通过western blot法检测大鼠卵巢组织中p38 MAPK/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果 与CK组比较,model组大鼠卵巢出现较多闭锁卵泡,囊性扩张性卵泡明显增多,卵巢组织的TNF-α、...     

p38 MAPK抑制剂SB203580对雨蛙肽诱导的小鼠胰腺组织损伤的影响

 目的：探讨p38 MAPK抑制剂SB203580（SB）对雨蛙肽（caerulein,CAE）诱导的小鼠离体胰腺组织损伤的影响,并探讨其可能的机制。方法：分离小鼠离体胰腺组织后培养4 h,用CAE(10-5mol/L)刺激,加用或不加用SB (10-5mol/L)进行干预,以生理盐水（NS）作为对照。在刺激1 h和4 h后测定胰腺组织活力（MTT）、培养上清液中淀粉酶和脂肪酶活性（生化法）以及白细胞介素6（IL-6）和细胞因子诱导的中性粒细胞趋化因子1（CINC-1）的水平（ELISA法）;同时测定胰腺组织中热休克蛋白60（HSP60)和HSP70蛋白水平（ELISA法）,并用Western blotting测定胰腺组织p38及磷酸化p38 （p-p38）MAPK蛋白的表达。结果：CAE刺激后胰腺组织活力与NS组比较有所下降,尤其在刺激后4 h明显降低（P<0.05）;CAE刺激后1 h,离体胰腺组织培养上清液中淀粉酶、脂肪酶、IL-6和CINC-1水平较NS组均明显升高（P<0.05）;胰腺组织中HSP60、HSP70、p38及p-p38 MAPK蛋白的表达较NS组有所升高（P<0.05）,而SB可不同程度干预CAE引起的这些指标的改变。结论：CAE对离体胰腺组织具有损伤作用,SB可减轻CAE造成的胰腺组织的损伤,其机制可能与其对p38 MAPK抑制进而使炎症反应受到抑制有关;HSP60和HSP70的变化是因为炎症反应减轻而使细胞应激程度降低所致,还是失去了p38 MAPK的调控作用所致,还有待进一步研究。     

孟鲁司特钠联合布地奈德通过p38MAPK通路抑制哮喘炎性反应

目的:探究孟鲁司特钠(Montelukast Sodium)联合布地奈德(Budesonide)治疗支气管哮喘(Bronchial Asthma,BA)的效果及机制.方法:选取雄性BALB/C小鼠24只,随机分为空白组、哮喘组、哮喘+孟鲁司特钠组、哮喘+布地奈德组、哮喘+联合给药组,空白组和哮喘组各6只,其余组各4 只,除空白组外,其余各组小鼠均按照卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)法构建小鼠哮喘模型.建模成功后,对各组小鼠进行相应干预.给药干预结束后,苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色观察比较各组小鼠气道组织形态学变化、酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent assay,ELISA)测定支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素-5(Interleukin-5,IL-5)水平、以及利用蛋白质印迹法(Western blot,WB)肺组织中 p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路蛋白表达水平.结果:与空白组相比,哮喘组、哮喘+孟鲁司特钠组、哮喘+布地奈德组、哮喘+联合给药组小鼠气道均出现黏膜组织增厚和明显的炎性细胞浸润,但联合给药组最轻微;与哮喘组相比,哮喘+孟鲁司特钠组、哮喘+布地奈德组、哮喘+联合给药组小鼠肺泡灌洗液IL-5 水平均明显降低(P<0.05);而与哮喘+孟鲁司特钠组和哮喘+布地奈德组相比,哮喘+联合给药组小鼠肺泡灌洗液IL-5水平明显降低(P<0.05);哮喘+联合给药组小鼠肺组织中的磷酸化-p38丝裂原活化蛋白激酶(Phospho-p38 MAPK,p-p38MAPK)水平明显低于哮喘+孟鲁司特钠组(P<0.05).结论:联合给药能够有效改善哮喘的炎性反应的发生及发展,其机制可能与抑制体内p38MAPK磷酸化激活有关.     

小鼠p38MAPK重组腺病毒载体的构建及其在成骨细胞系中的表达

目的:利用AdEasyTM system构建携带小鼠p38MAPK基因的重组腺病毒,感染成骨细胞系MC3T3-E1,检测外源p38MAPK在细胞中的表达。方法:用PCR的方法扩增p38MAPK基因,将其克隆到pMD18-T载体中,进行测序。经BglⅡ和HindⅢ双酶切后接入pShuttle-CMV穿梭载体,构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-CMV-p38MAPK。将经PmeI线性化的pShuttle-CMV穿梭载体与pAdEasyTMDNA电穿孔共转化BJ5183重组细菌,获取重组腺病毒质粒Ad-p38MAPK,再将经PacI线性化的Ad-p38MAPK重组病毒骨架质粒转染AD293包装细胞,包装并扩增病毒。用Ad-p38MAPK感染小鼠MC3T3-E1成骨样细胞,以Western blot法检测p38MAPK在小鼠成骨细胞中的表达。结果:构建并包装表达p38MAPK蛋白的重组腺病毒,该重组腺病毒在体外能有效感染小鼠成骨细胞系MC3T3-E1并高表达p38MAPK蛋白。结论:成功地构建了携带小鼠p38MAPK基因的重组腺病毒,为研究p38MAPK在成骨细胞中的作用奠定了实验基础。