丙泊酚对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的:研究丙泊酚对结直肠癌细胞活力、侵袭和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:10、25、50和100μmol/L的丙泊酚处理Lo Vo细胞72 h,或以100μmol/L的丙泊酚处理细胞12、24、48和72 h,CCK-8实验检测细胞活力;Transwell小室检测经100μmol/L丙泊酚处理72 h的细胞的侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、Notch1和发状分裂相关增强子1(Hes1)的蛋白表达。结果:丙泊酚可抑制结直肠癌细胞活力;丙泊酚组细胞侵袭能力、S期细胞及MMP-2、MMP-9、Notch1和Hes1蛋白表达均显著低于对照组,而细胞凋亡率、G0/G1期细胞及cleaved caspase-3的蛋白水平均显著高于对照组(P0.01)。结论:丙泊酚可抑制结直肠癌Lo Vo细胞生长及侵袭能力,阻滞细胞周期,并诱导细胞凋亡,其机制与下调Notch1信号通路有关。     

紫檀芪对小鼠HT22细胞模拟缺血再灌注损伤的保护作用北大核心CSCD

目的探索紫檀芪(PTE)对小鼠HT22细胞模拟缺血再灌注(SIR)的影响及机制。方法建立HT22细胞SIR模型,分别用(1.25、2.50、5.00)μmol/L PTE处理SIR模型细胞。通过相差倒置显微镜观察细胞生长状态,利用MTT法检测细胞活力,利用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡,利用分光光度法检测线粒体复合物Ⅰ和Ⅳ活性,利用JC-1染色法检测线粒体膜电位(MMP),利用2',7'-二氯二氢荧光素乙酸乙酯(H2DCFDA)染色检测线粒体活性氧(ROS),利用Western blot法检测血红素加氧酶1(HO-1)、NADPH醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)的蛋白水平。结果与对照组细胞相比,SIR损伤组细胞贴壁减少,细胞活性较差。PTE以浓度依赖的方式增强SIR损伤的HT22细胞活力,减少SIR损伤细胞凋亡,提高线粒体复合物Ⅰ/Ⅳ活性和MMP,减少ROS水平,上调HO-1、NQO1和GST蛋白的表达。结论 PTE对HT22细胞SIR损伤具有保护作用,其机制是通过减轻线粒体损伤和促进HO-1、NQO1和GST蛋白的表达。     

沉默miR-8063促进结直肠癌细胞获得多药耐药性及机制研究北大核心CSCD

目的:探讨沉默miR-8063促进结直肠癌SW480、HT29细胞多药耐药性及分子机制。方法:分别采用miR-8063-inhibitor-GFP-PURO慢病毒载体和阴性对照病毒(NC-GFP-PURO)转染SW480、HT29细胞,建立实验组(SW480-sh-miR-8063、HT29-sh-miR-8063)和对照组(SW480-sh-NC、HT9-sh-NC),RT-qPCR检测miR-8063表达;CCK-8测定5-氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)对两组细胞24 h、48 h及72 h的生长抑制率;RT-qPCR和Western blot检测耐药基因P-gp、ABCG2 mRNA和蛋白表达;Western blot检测WNT/β-catenin信号通路关键指标WNT3A、WNT5A及β-catenin蛋白表达。结果:与对照组相比,实验组miR-8063基因表达显著降低(P<0.01),48 h、72 h时5-FU和OXA对细胞的抑制率显著降低(P<0.01),耐药基因P-gp、ABCG2 mRNA及蛋白表达显著提高(P<0.01),WNT3A、WNT5A及β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:沉默miR-8063基因可促进CRC细胞耐药基因P-gp、ABCG2表达,使CRC细胞SW480和HT29获得多药耐药性,其分子机制可能与激活WNT/β-catenin信号通路有关。     

miR-581对结直肠癌SW620细胞侵袭和转移的影响

探讨miR-581对结直肠癌SW620细胞侵袭转移能力的影响。首先,用miR-581mimics转染SW620细胞作为实验组(miR-581),用对照组mimics转染SW620细胞作为对照组(vector);用qRT-PCR检测2组细胞中miR-581的mRNA表达水平;划痕实验和transwell实验检测2组细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blotting检测2组细胞中MMP-1和MMP-9的蛋白表达水平。结果显示,实验组细胞中miR-581表达较对照组明显增高(P0.05);划痕实验显示实验组细胞划痕愈合率较对照组减慢(P0.05),transwell结果显示实验组细胞较对照组细胞穿膜细胞数减少(P0.05);Western blotting结果显示实验组MMP-1和MMP-9的表达都较对照组降低(P0.05)。以上结果提示miR-581可以抑制SW620细胞的侵袭和转移。     

lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的探讨lncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中lncRNA RAB11B-AS1的表达水平。构建稳定过表达RAB11B-AS1的SW480细胞系,MTT方法检测SW480细胞的增殖能力变化;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭能力变化,划痕实验检测SW480细胞迁移能力变化;Western blot检测SW480细胞中细胞周期蛋白1(cyclin D1)和CDK6的表达水平。结果 RAB11B-AS1在结直肠癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P0.01);在SW480中的表达显著低于NCM460细胞(P0.01)。RAB11B-AS1过表达后,SW480细胞的增殖、侵袭与迁移能力显著降低,凋亡率显著升高,cyclin D1与CDK6的蛋白表达降低(P0.01)。结论 lncRNA RAB11B-AS1在结直肠癌组织中表达降低,过表达RAB11B-AS1能够抑制SW480细胞的增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡。     

IncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响

目的 探讨IncRNA RAB11B-AS1对结直肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响及可能机制.方法 qRT-PCR方法检测34例结直肠癌组织及相应的癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460与人结直肠癌细胞株SW480中IncRNA RAB11B-AS1的表达水平.构建稳定过表达RAB11B-AS1的S...     

miR-581 对结直肠癌SW620 细胞增殖能力的影响

目的:探讨miR-581 对结直肠癌SW620 细胞增殖能力的影响。方法:分别用携带miR-581 基因的慢病毒颗粒(LV-miR-581-GFP)和miR-581 mimics(miR-581)转染人结肠癌细胞株SW620 作为实验组;用对照组病毒颗粒(LV-GFP)和对照组mimics (Vector)转染SW620 细胞株作为阴性对照组。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-581 的mRNA 表达水平;CCK8 和克隆形成实验检测细胞增殖能力和克隆形成能力的变化。结果:实验组SW620 细胞中miR-581 表达较对照组明显增高(P<0.05);CCK8 和克隆形成实验显示过表达实验组细胞的增殖及克隆形成能力较对照组明显增强(P<0.05)。结论:miR-581 对结直肠癌SW620 细胞的增殖具有促进作用。     

外泌体circRPPH1促进结直肠癌增殖和转移北大核心CSCD

目的:探讨外泌体circRPPH1在结直肠癌(CRC)细胞中的生物学功能及潜在作用机制。方法:对GEO数据库GSE126094进行分析,筛选并验证CRC组织差异表达circRNA。SW620和SW480细胞转染circRPPH1 shRNA(sh-circRPPH1)后,MTT、流式细胞术和Transwell实验观察细胞增殖活性、细胞周期、迁移和侵袭能力变化。将转染Oe-circRPPH1质粒和sh-circRPPH1的SW620和SW480细胞(供体细胞)分别与未经处理的SW620和SW480细胞(受体细胞)共培养,qRT-PCR检测供体细胞、细胞外泌体及受体细胞circRPPH1表达。在线生物信息学数据和双荧光素酶报告基因实验预测并验证circRPPH1的靶miRNA及其下游靶基因。结果:circRPPH1在CRC肿瘤组织和癌细胞中高表达;敲除circRPPH1可抑制SW620和SW480细胞增殖、阻滞细胞周期、抑制细胞迁移和侵袭。SW620和SW480细胞可通过外泌体将circRPPH1传递给周围癌细胞。生物信息学和荧光素酶报告基因实验显示,circRPPH1在CRC细胞中起miR-330-5p海绵作用,miR-330-5p在CRC肿瘤组织和癌细胞中均呈低表达;NRAS是miR-330-5p的下游靶基因,在CRC肿瘤组织和癌细胞中均呈高表达。结论:circRPPH1在CRC细胞增殖和转移过程中发挥重要作用,并可能通过海绵miRNA发挥调控作用,提示外泌体circRPPH1在CRC中起致癌作用,可能是CRC的潜在生物标志物。     

微小RNA-1273g-3p对人结直肠癌HCT116和SW480细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨微小RNA(MicroRNA,miR)-1273g-3p对结直肠癌细胞增殖和迁移的调控作用.方法:将miR-1273g-3p模拟物分别转染人结肠癌细胞(Human colon cancer cell,HCT116)和人结肠腺癌细胞(Human colon adenocarcinoma,SW480)细胞株,通过聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)测定miR1273g-3p的表达情况;四唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测miR-1273g-3p对细胞增殖的作用;Transwell实验检测细胞的迁移能力.结果:转染miR-1273g-3p模拟物后,结直肠癌HCT116和SW480细胞miR-1273g-3p相对表达量明显上调;MTT和Transell实验结果显示,过表达miR-1273g-3p能明显促进HCT116和SW480细胞的增殖和迁移(P<0.01).结论:miR-1273g-3p具有促进结直肠癌HCT116和SW480细胞株增殖和迁移的作用.     

紫檀芪对小鼠缺血性脑损伤的神经保护机制研究

目的:探索紫檀芪(PTE)对小鼠缺血性脑损伤中的保护作用及机制。方法:将C57雄性C57BL/6J小鼠分为假手术组(sham)、脑缺血再灌注损伤组(IR)、紫檀芪治疗组(PTE+IR)和紫檀芪阻断剂Zn PP抑制紫檀芪治疗组(PTE+Zn PP+IR),其中PTE的剂量为5 mg/kg,于脑缺血再灌注损伤(IR)前连续5 d每天腹腔给药1次,Zn PP以3 mg/kg的剂量于IR前30 min及IR后24 h分别腹腔给药1次;然后于缺血性脑损伤后0、2、12、24 h及48 h (IR0、IR2、IR12、IR24 h及IR48 h)对小鼠进行神经行为学评分;最后于IR48 h对小鼠进行干湿比重法脑水含量测定,TUNEL试剂盒检测细胞凋亡,Western Blot检测caspase-3及cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:PTE可降低缺血性脑损伤后小鼠神经行为学评分、减轻脑水含量、降低细胞凋亡率及下调凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达而保护神经细胞,但是PTE的这些神经保护作用可被其抑制剂Zn PP逆转。结论:PTE在鼠脑缺血再灌注损伤中具有明确的保护作用...     

紫檀芪对前列腺癌骨转移PC-3细胞活力、凋亡及能量代谢的影响

目的:探讨紫檀芪对人前列腺癌骨转移PC-3细胞活力、凋亡及能量代谢的影响.方法:采用CCK-8法检测紫檀芪对PC-3细胞活力的半数抑制浓度(IC50)和时间依赖性.采用流式细胞术测定紫檀芪对PC-3细胞周期及凋亡的影响.采用分光光度法测定紫檀芪对PC-3细胞能量代谢的影响.采用Western blot法检测相关凋亡蛋白...     

miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及可能机制

目的 探讨miR-27a对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法 qRT-PCR方法检测人结肠癌细胞株SW480与人正常结肠黏膜上皮细胞NCM460中miR-27a的表达水平。体外培养SW480细胞,将SW480细胞随机分为空白对照组(不进行任何处理)、miR-27a抑制剂组（转染miR-27a inhibitor）与阴性对照组（转染miR-27a inhibitor NC）,采用脂质体法进行转染,实时荧光定量PCR方法验证转染效率。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测SW480细胞增殖;Transwell实验检测SW480细胞侵袭与迁移;流式细胞术检测SW480细胞凋亡;Western blot法检测转染后叉头框蛋白O1(FOXO1)、组织金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)、泛素连接酶FBW7的表达。结果 miR-27a在SW480细胞中的表达水平显著高于NCM460细胞（P<0.01）。转染miR-27a抑制剂后,SW480细胞中miR-27a的表达水平明显降低,转染成功。抑制miR-27a表达后,SW480细胞的增殖、迁移与侵袭能力显著降低,凋亡率显...     

基因沉默PRDX1 表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA 干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA 干扰PRDX1 的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480 细胞,转染后的SW480 细胞可分为PRDX1 基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白表达;采用Transwell 侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1 表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot 检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1 表达可有效抑制结直肠癌SW480 细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1 的SW480 细胞系构建成功;Transwell 侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot 结果显示,与Vector 组相比,si-PRDX1 组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2 及MMP-9 的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480 细胞的PRDX1 表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2 及MMP-9 的表达介导。     

紫檀芪对宫颈癌细胞自噬及SIRT1-FoxO信号通路的影响

目的:探讨紫檀芪(PTE)对宫颈癌细胞自噬及SIRT1-FoxO信号通路的影响。方法:以人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象。采用CCK-8法和流式细胞术分别测定不同浓度的PTE对HeLa细胞活力和凋亡率的影响;透射电镜观察细胞中自噬体数目;qPCR测定细胞中SIRT1和FoxO的mRNA表达;Western blot测定细胞中SIRT1、FoxO、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、Bax和Bcl-2水平。结果:PTE作用于HeLa细胞24和48 h后,细胞活力抑制率随浓度增加而升高。与0μmol/L PTE相比,15、30和60μmol/L PTE处理后,HeLa细胞凋亡率、细胞中自噬体数目及Bax、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、SIRT1和FoxO水平显著升高(P<0.05),Bcl-2和p62水平显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论:PTE可能通过激活SIRT1-FoxO信号通路诱导HeLa细胞自噬和凋亡,从而抑制HeLa细胞活力。     

lncRNA PTENP1通过miR-142-5p/PTEN分子轴调控结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的:探讨lncRNA PTENP1(PTENP1)通过miR-142-5p/PTEN轴调控结直肠癌(CRC)HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制.方法:采用RT-qPCR检测CRC组织和细胞系中PTENP1和miR-142-5p的表达水平;在HCT116细胞中转染pcDNA3.1-PTENP1、sh-PTENP...     

WNT信号抑制因子DKK3基因 对结直肠癌细胞系HCT116迁移与侵袭的影响

目的分析DKK3在结直肠癌组织中的表达及对患者预后的影响,同时探索DKK3对结直肠癌细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响,并对机制进行一定的探索。方法在线数据库分析DKK3在结直肠癌组织中的表达及其对患者预后的影响。用RNA干扰技术,下调DKK3;用MTT检测细胞增殖,同时运用细胞小室迁移实验检测细胞迁移及侵袭能力,并通过RT-qPCR技术以及Western blot技术检测迁移相关蛋白表达。结果与正常组织相比,DKK3在结直肠癌组织中的表达显著上调并会导致患者整体预后情况变差(P0.05),干涉DKK3后细胞增殖速率明显减缓(P0.05),并且细胞迁移以及侵袭能力减弱(P0.01)。MMP2、 MMP7以及MMP9与DKK3的表达呈正相关关系(P0.001)。在敲低DKK3后,MMP2、 MMP7、 MMP9以及p-ERK的表达均显著下调(P0.01)。结论 DKK3在结直肠癌细胞系HCT116中表达上调,可能通过MAPK/ERK信号通路促进细胞增殖以及迁移能力。