转录因子T-bet在Th1/Th2分化中的作用及意义

T-bet是属于T-box家族的新型转录因子,选择性地表达于Th1细胞,作为Th1特异的转录因子能诱导IFN-γ的产生,在Th1细胞的分化中起着决定性的作用。T-bet是IFN-γ基因强有力的转录激活剂,又能诱导并保持IL-12Rβ2的表达,且能将分化中的效应性Th2和已完全分化的Th2逆转为Th1,伴随产生大量的IFN-γ,并抑制IL-4、IL-5、IL-13等Th2型细胞因子的产生。T-bet在T细胞活化过程中能被IFN-γ诱导而上调;通过STAT1依赖的途径,TGF-β能通过抑制T-bet而抑制Th1分化。T-bet与Th1/Th2相关疾病的联系正日益受到关注。     

CpG ODN对rHBsAg免疫小鼠Th1/Th2型免疫应答的影响

目的：初步探讨CpC寡脱氧核苷酸(CpG ODN)与重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)联合免疫小鼠的Th1／Th2型免疫应答效应。方法：BALB／c小鼠经后腿胫骨前肌免疫2次，ELISA法检测血清乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)IgG亚类IgG2a/IgG1的比值；生物活性法检测脾细胞诱生上清中的IFN-γ和IL-2含量；ABC-ELISA法检测小鼠血清中IL-4、IL-10及IL-12含量。结果：加CpG ODN组与单独注射rHBsAg组相比：抗-HBs IgG亚类IgG2a／IgG1比值明显高；Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的表达增强，抑制Th2型细胞因子IL-4和IL-10的产生。结论：CpCODN能够明显增强rHBsAg免疫小鼠Th1型抗体亚类IgG2a的产生，并且诱导Th1型细胞因子的表达，抑制Th2型细胞因子的表达。     

ST2在博来霉素诱导的肺纤维化小鼠体内的动态表达北大核心CSCD

目的:探讨ST2是否在博来霉素(Bleomycin,BLM)诱导的肺纤维化小鼠体内表达,进一步探索肺纤维化的发病机制。方法:BLM诱导急性肺纤维化模型,H&E、Masson染色检测肺部急性炎症及纤维化程度。Western blot检测蛋白ST2的动态表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肺组织中的IL-4、IFN-γ水平,IFN-γ/IL-4代表Th1/Th2。结果:与对照组相比,BLM组中蛋白ST2、MyD88、TRAF6的表达呈现出一致的上升趋势,在第7、14、28天的差异有统计学意义(P<0.01);在肺纤维化过程中IFN-γ/IL-4比值逐渐减小,与对照组相比,在第14、28天时的差异有统计学意义(P<0.01);蛋白ST2、MyD88、TRAF6的表达与IL-4的相对表达趋势一致,而与IFN-γ的相对表达趋势相反。结论:在肺纤维化过程中,伴有蛋白ST2、MyD88、TRAF6的高表达;ST2介导的Th1/Th2细胞因子漂移参与了肺纤维化过程。     

MBD2对Th2/Th17细胞平衡的调控及其在哮喘中的作用研究北大核心CSCD

目的:探究甲基CpG结合区域蛋白2(MBD2)在哮喘中的作用及其对Th2/Th17分化的影响。方法:在条件性敲除CD4+T细胞中MBD2表达的小鼠构建以中性粒细胞浸润为主的哮喘模型,并将小鼠分为4组:WT生理盐水组(A组)、WT哮喘组(B组)、CD4CreMBD2fl/fl生理盐水组(C组)、CD4CreMBD2fl/fl哮喘组(D组),每组10只。应用RT-PCR和Western blot实验检测MBD2在各组小鼠脾脏组织中的表达;使用乙酰胆碱(Mch)激发试验检测各组小鼠的气道高反应;收集小鼠肺泡灌洗液(BALF),使用血细胞计数法计算其中的细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数量,ELISA法检测细胞因子IL-4与IL-17的表达,HE染色观察各组小鼠肺组织的病理学改变;免疫磁珠分选各组小鼠脾脏中的CD4+T细胞,流式细胞术、RT-PCR及ELISA分别检测Th2、Th17细胞比例及其相关细胞因子的表达水平;分离并培养小鼠na?ve CD4+T细胞,通过慢病毒载体以靶向沉默细胞中MBD2基因表达,流式细胞术检测其对na?ve CD4+T细胞Th2与Th17分化的影响。结果:与A、B组小鼠相比,C组与D组小鼠脾脏组织中MBD2的mRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01);A组与C组小鼠肺组织结构正常,而B组小鼠肺组织中支气管黏膜充血水肿,管腔狭窄,黏膜上皮细胞出现大量坏死脱落,大量炎症细胞浸润,D组介于A组与B组之间;与A组小鼠相比,B组与D组小鼠的气道反应性显著增高(P<0.05),且BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、IL-4及IL-17均显著增加(P<0.05),C组中仅有嗜酸性粒细胞及IL-4明显增加(P<0.01);而与B组相比,D组小鼠中嗜酸性粒细胞及IL-4表达均明显增加(P<0.05)。在脾脏淋巴细胞中,B组与D组小鼠的Th2、Th17细胞比例、GATA3和RORγt mRNA及IL-4与IL-17表达水平均较A、C组小鼠显著增加(P<0.01),与B组相比,D组小鼠中以Th2细胞及相关细胞因子占主导地位(P<0.05);成功利用慢病毒载体沉默小鼠na?ve CD4+T细胞MBD2的表达,且沉默其表达后能显著促进Th2细胞的分化比例(P<0.05),而Th17细胞比例明显降低(P<0.05)。结论:敲除CD4+T细胞中MBD2基因表达可通过促进Th2细胞及IL-4细胞因子表达,而抑制Th17细胞及IL-17表达从而改善以中性粒细胞浸润为主的重症哮喘。     

抗IgE抗体对哮喘模型小鼠的气道高反应和Th2类细胞因子的影响

目的探讨抗IgE抗体在哮喘小鼠模型中对气道高反应及Th2类细胞因子变化的影响及其可能机制。方法雌性Balb/c小鼠30只随机分成3组,即正常对照组、哮喘模型组和抗IgE抗体干预组。分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、TGF-β1含量以及蛋白表达。应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化。结果抗IgE抗体治疗组与哮喘模型组比较气道阻力明显降低。哮喘模型组小鼠BALF和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、TGF-β1含量和蛋白表达明显升高,与正常对照组比较,显著差异(P<0.05)。抗IgE抗体干预组小鼠BALF和肺组织中IL-4、IL-5、IL-13含量和蛋白表达水平均明显降低;IL-10、TGF-β1含量和蛋白表达水平上升不明显,与哮喘模型组比较,没有显著差异(P>0.05)。结论抗IgE抗体对哮喘小鼠的治疗作用,其机制可能与调节Th2细胞所分泌的炎症细胞因子有关。     

BALB/c小鼠感染弓形虫后Th1/Th2免疫漂移的实验研究

目的：动态分析BALB/c小鼠感染弓形虫后Th1/Th2免疫失衡及免疫漂移特点,并探讨转录因子T-bet和GA-TA-3在此过程中的改变及其意义。方法：90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组30只,弓形虫感染组60只。于感染后奇数天每天处死感染组小鼠2只,对照组小鼠1只,采用ELISA法动态检测各组小鼠血清中IFN-γ和IL-4的水平,同时应用荧光定量PCR方法检测小鼠脾细胞中T-bet和GATA-3 mRNA的表达情况。结果：感染组小鼠中,血清IFN-γ于感染后第4天开始显著升高,第5~7天维持在高峰值,从第8天开始下降,第9天降至正常水平;IL-4于感染后第8天开始显著升高,第9天升至峰值,从第14天开始下降,第15天降至正常水平;脾细胞T-bet mRNA的表达在感染后第3天升高,第5天达高峰后于第9天降至正常水平;脾细胞GATA-3 mRNA的表达在感染后第7天升高,第11天达高峰,于第13天降至正常水平。正常对照组小鼠在实验期内IFN-γI、L-4水平没有明显变化,维持在正常的较低水平。结论：BALB/c小鼠感染弓形虫后诱导的免疫应答在感染急性期（第1~8天）以Th1应答为主,第9至13天,宿主免疫应答以Th2细胞应答为主,之后Th1/Th2应答基本恢复平衡。Th1应答向Th2应答的漂移与T-bet和GATA-3 mRNA的表达相关并受其调控,Th1/Th2型免疫应答的发生时相和效应强度可能影响弓形虫感染的最终结局。     

急性MCMV感染对小鼠脾Th1/Th2/Th17细胞亚群分化的影响

目的:在整体水平观察小鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠脾Th1/Th2/Th17细胞亚群分化及其主要的效应性细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A)表达的影响.方法:建立MCMV感染模型,8只BALB/c小鼠分别于接种MCMV Smith株后3天和14天各处死4只;另设8只接种唾液腺匀浆的模拟感染小鼠作为对照.用空斑形成试验测定肝、脾和唾液腺组织病毒滴度;流式细胞术检测脾T淋巴细胞中Th1(CD4+ IFN-γ+)、Th2(CD4+ IL-4+)、Th17(CD4+IL-17A+)细胞比例,双抗体夹心ELISA法检测脾细胞培养上清中病毒特异性IFN-γ、IL-4、IL-17A水平.结果:MCMV感染早期肝、脾和唾液腺组织中病毒呈低水平复制,而感染后14天仅在唾液腺组织呈高水平复制;Th1细胞比例及病毒特异性IFN-γ主要在MCMV感染早期呈显著升高(P ＜0.01);Th2细胞及IL-4均无明显表达及改变;Th17细胞及病毒特异性IL-17A则主要在感染后14天升高(P＜0.05).结论:MCMV感染早期,机体通过上调Th1细胞分化比例及IFN-γ的表达发挥抗病毒效应,而MCMV诱导Th17细胞分化及IL-17A的高表达可能是MCMV感染致宿主特异性细胞免疫功能失调并逃避机体特异性细胞免疫攻击的原因之一.     

混合皮肤移植中IL-10在自体角朊细胞诱导局部免疫耐受中的作用

目的：探讨IL-10在混合皮肤移植中角朊细胞诱导的局部免疫耐受中的作用。方法：利用已经建立的MEIC体外模拟系统，检测在引入和未引入自体角朊细胞的实验系统上清中IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的浓度，并用IL-10基因敲除小鼠实验观察IL-10在诱导抑制中的作用。结果：在未引入自体角朊细胞的MELC体系中，表现的是典型的Th1相关的细胞因子动力学曲线，在加入自体角朊细胞后，则出现了细胞因子由Th1和Th2转换的动力学曲线，且IL-10起着关键的作用，在以IL-10基因knockout小鼠的角朊细胞去替代实验体系中的正常小鼠角朊细胞时，对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制率虽有所下降，但无显著差异，而以IL-10基因knockout小鼠的淋巴细胞替代实验体系中的正常小鼠的淋巴细胞时，对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制作用被显著缓解，表明对抑制起关键调节作用的是自体淋巴细胞来源的IL-10，而非自体角朊细胞分泌的IL-10。结论：在混合皮肤移植中，自体角朊细胞是通过激活Th2细胞，后者分泌大量的IL-10和IL-4等细胞因子来抑制Th1细胞增殖，从而抑制Th1亚群所介导的细胞免疫及移植物排斥来诱导局部免疫耐受的。     

MiR-143在Lewis肺癌小鼠外周血中的表达及其对Th1/Th2平衡的影响

目的 利用小鼠Lewis肺癌移植肿瘤模型探究肺癌疾病进展过程中外周血微小RNA的表达及其对Th1/Th2平衡的调控作用。方法 利用Real-time PCR实验检测血浆中miR-143、miR-217、miR-195和miR-615的表达水平;用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠外周血血清IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10表达水平,用流式细胞术检测小鼠脾脏CD4+IFN-γ+Th1细胞及CD4+IL-4+Th2细胞比例,测量并统计荷瘤小鼠皮下接种部位肿瘤体积及肺部转移性结节;分离小鼠外周血CD4 T细胞,检测转录因子T-bet和GATA3的表达。结果 与Normal组相比,LCC组小鼠外周血血清miR-143表达水平显著上升,miR-217、miR-195和miR-615表达水平没有明显变化。与Normal组相比,LCC组小鼠外周血Th1相关细胞因子表达水平及脾脏Th1细胞比例下降,而Th2相关细胞因子表达水平上升,且Th1/Th2比率显著下降。而Anti-miR-143组Th1相关细胞因子及Th1细胞比例升高,且Th2相关细胞因子比例下降。与LCC组相比,Anti-miR...     

消退素D1对干燥综合征小鼠免疫调节的影响

目的 探讨消退素D1(RvD1)对干燥综合征（SS）小鼠免疫调节的影响。方法 20只非肥胖糖尿病（NOD）小鼠随机分为模型组和RvD1组,每组10只,另选10只Balb/c小鼠为对照组。8周后检测小鼠的饮水量、唾液量、颌下腺质量和体质量。检测小鼠血清白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-10和干扰素（IFN）-γ水平。流式细胞术检测血清辅助性T细胞（Th）1和Th2的表达。RT-PCR法检测颌下腺组织T-bet和GATA-3 mRNA的表达量。结果 与对照组比较,模型组小鼠饮水量明显升高,唾液量明显降低（P<0.05）;而与模型组比较,RvD1组小鼠饮水量明显降低,唾液量明显升高（P<0.05）。与对照组比较,模型组小鼠颌下腺质量与指数均明显降低（P<0.05）;与模型组比较,RvD1组小鼠颌下腺质量与指数均明显升高（P<0.05）。与对照组比较,模型组小鼠Th1细胞比例显著升高,Th2细胞比例降低（P<0.05）;与模型组比较,RvD1组小鼠Th1细胞的比例显著降低,Th2细胞的比例升高。与对照组相比,模型组小鼠IL-2和IFN-γ表达明显升高,IL-...     

慢性乙肝患者树突状细胞对Th1/Th2分化的影响

探讨慢性乙肝患者树突状细胞(dendritic cells,DC)对CD4+Th细胞亚群分化的影响。分离慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC),以rhIL-4(50 ng/ml)、rhGM-CSF(10 ng/ml)和rhTNF-α(100 u/ml)诱导培养DC。以流式细胞仪检测DC表面CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子表达情况。MTT法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力。免疫磁珠分离外周血CD4+T细胞亚群,PMA+Ionomycin刺激后胞内荧光染色,流式细胞仪检测辅助性T细胞(helper T cell,Th)内特征性细胞因子IFN-γ/IL-4以判断Th1/Th2分化。ELISA法检测DC或Th细胞培养上清中IL-6、IL-12、IFN-γ和IL-4的含量。结果:慢性乙肝患者的DC表达CD1a、CD83、CD80、CD86、HLA-DR分子水平明显低于正常人(P<0.01);培养至第7天,慢性乙肝患者DC分泌的IL-12水平低于正常人(P<0.01),而分泌的IL-6水平增高(P<0.05)。与正常人相比,慢性乙肝患者外周血中Th1细胞占CD4+T细胞的百分比较低(P<0.01),其Th细胞培养上清中IFN-γ的量也较低(P<0.01)。患者DC与同种异体的健康人Th细胞共培养,刺激Th1型细胞因子IFN-γ产生的能力低于正常人(P<0.01)。慢性乙肝患者体内DC功能的异常可能导致了外周血Th1细胞分化不足。     

MIP-1α和MCP-1在沙眼衣原体肺感染中的产生及与机体防御的关系

目的：探讨趋化性细胞因子巨噬细胞炎症蛋白-1(MIP-1α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在沙眼衣原体肺感染中的产生及与机体防御的关系。方法：用沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染小鼠，酶消化法制备小鼠肺组织炎症细胞，Wright-Giemsa染色计数巨噬细胞占肺炎症细胞的百分率；用RT-PCR检测小鼠肺组织趋化性细胞因子及细胞因子mRNA表达；ELISA法检测肺组织匀浆中细胞因子分泌。结果：MoPn感染后7及14天，MIP-1α和MCP-1及其相应的受体CCR1、CCR2在小鼠肺组织中的表达明显增高。与之趋化作用有关的单核．巨噬细胞在肺组织中的浸润也随之增高；而且MoPn感染上调Th1细胞因子IFN-γ及IL-12的表达及分泌，未见Th2细胞因子IL-4在肺组织中的基因表达及分泌；但具有免疫抑制作用的Th2细胞因子IL-10在感染后7天明显表达。结论：衣原体呼吸道感染诱导CC趋化性细胞因子MIP-1α和MCP-1高表达，可能与单核细胞免疫防御及Th1／Th2免疫应答调节有关。     

牛膝多糖对CD4+T细胞的诱导和分化作用研究

目的：探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制。 方法： (1)以牛膝多糖 (800 mg/L)分别对哮喘和肺癌病人的(PBMC)进行体外诱导培养，在18 h以RT-PCR检测IFN-γ和IL-4的基因表达率。(2)用牛膝多糖在不同时间内和不同剂量分别对Th细胞进行体外诱导其分化，并分别收集细胞悬液和抽提细胞中RNA，分别采用RT-PCR和ELISA检测Th细胞所分泌的IFN-γ和IL-4的含量。 结果： (1)哮喘和肺癌患者PBMC中IFN-γ mRNA表达率分别由6/25升到14/25(P<0.01)、3/22升到10/22(P<0.05)，IL-4 mRNA的表达率由17/25降到9/25(P<0.05)、14/22降到5/22(P<0.05)。 (2)Th细胞培养至6 h，即可检到IFN-γ mRNA分泌，18 h达到高峰，之后迅速下降，48 h已难以检出。而IL-4被抑制。(3) IFN-γ蛋白表达量存在时间依赖性，从18-24 h时段开始，蛋白表达量开始显著增加(P<0.05)，但在24 h、36 h和48 h的3个时段内，蛋白表达量增加不明显(P>0.05)，进入平台期。IL-4蛋白表达量被抑制。(4)IFN-γ基因水平和蛋白表达量分别与牛膝多糖的诱导浓度相关(r=0.979)。400 mg/L和800 mg/L是较好的的诱导浓度。而IL-4的蛋白表达被抑制。 结论： (1)应用牛膝多糖能初步纠正肺癌和哮喘患者Th1和Th2细胞因子的失平衡。(2)牛膝多糖能在转录水平和翻译水平促进Th1类细胞因子的分泌，而抑制Th2类细胞因子的分泌。     

清心胶囊对病毒性心肌炎不同分期Th细胞分化的影响

目的:观察病毒性心肌炎(VMC)不同分期Th细胞分化的变化以及清心胶囊对这一环节的干预作用。方法:复制VMC急性期和恢复期BALB/c小鼠模型,给予清心较囊治疗后,采用光镜和透射电镜观察心肌病理改变,ELISA法检测血清IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平。结果:无论急性期还是恢复期,经清心胶囊治疗后,VMC小鼠心肌病变均明显减轻;VMC小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平显著降低(P<0.01,P<0.05),IL-10或IL-4水平显著升高(P<0.05),与正常组比较无显著差异(P>0.05)。结论:清心胶囊能够通过抑制Th1应答,促进Th2应答从而恢复Th1/Th2细胞平衡。     

TNF-α通过NF-κB增强Th9细胞分化抑制肺癌细胞生长

目的 研究TNF-α通过NF-κB增强Th9细胞分化抑制肺癌细胞生长的功能并对其相关机制进行初步探讨。方法 分离野生型小鼠脾脏CD4+T细胞,体外诱导Th9细胞分化。荧光定量PCR检测IL-9、IL-5和IL-13表达,ELISA检测Th细胞分泌IL-9变化。荧光定量PCR检测TNF-α在不同时间点对Th9细胞中IL-9表达的影响;TNF-α刺激分化的Th9细胞,免疫印迹检测NF-κB通路相关蛋白p-IKKα/β和IkB-α表达。使用NF-κB通路阻断剂,荧光定量PCR检测IL-9、IL-5和IL-13的表达。将体外TNF-α刺激诱导分化的Th9淋巴细胞通过尾静脉注射入肺癌小鼠体内,荧光定量PCR检测小鼠脾脏中IL-9、IL-5和IL-13的表达,免疫印迹检测小鼠肺癌组织中凋亡蛋白Bax/Bcl2表达,免疫荧光染色检测小鼠肺癌组织细胞增殖情况。结果 荧光定量PCR显示,TNF-α联合Th9极化细胞因子TGF-β和IL-4增加Th细胞中IL-9、IL-5和IL-13的表达;ELISA实验结果显示,Th细胞分泌IL-9明显增多;荧光定量PCR显示,TNF-α处理后的Th9细胞中IL-9的表...     

转染IL-10的树突状细胞对小鼠哮喘气道表达的影响

研究小鼠重组腺病毒载体Ad-mIL-10及其转染的树突状细胞(dendritic cell,DC)对小鼠哮喘模型气道炎症的影响,探讨其相关的发病机制。用基因工程的方法构建小鼠IL-10腺病毒重组体Ad-mIL-10,并转染小鼠骨髓来源的DC。以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏小鼠并雾化吸入激发的方法制作小鼠哮喘模型。第一次腹腔OVA致敏后静脉给予Ad-mIL-10、Ad-EGFP、Ad-EGFP转染的DC或Ad-mIL-10转染的DC,并设立哮喘模型制作对照组,观察各组小鼠血液、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的CD3+T细胞中的IL-10+IL-4-的Tr细胞及IL-10+IL-4+的Th2细胞比例变化,ELISA方法测定外周血及肺泡灌洗液中的IFN-γ、IL-4、IL-10水平,以观察Th1、Th2细胞的数量、功能变化以及IL-10的变化。结果显示Ad-mIL-10、Ad-EGFP、Ad-EGFP-DC对哮喘模型小鼠体内Tr细胞和Th2细胞的数量及肺部炎症局部的Th1及Th2细胞功能无明显影响;Ad-mIL-10转染的DC可以诱导哮喘模型小鼠体内IL-4-IL-10+的Tr细胞的增加及IL-4+IL-10+的Th2细胞的减少,并抑制哮喘模型小鼠肺部Th2细胞的功能,但对Th1细胞的功能无明显影响。提示单独应用Ad-mIL-10静脉注射产生高浓度的IL-10并不能诱导Tr细胞分化和抑制Th2细胞的激活。Ad-mIL-10转染的DC可以诱导原始T细胞向Tr细胞方向分化,并抑制Th2细胞的数量和功能。     

羌活提取物对哮喘小鼠Thl/Th2细胞平衡的影响及其对p38信号通路的作用

目的 探讨羌活提取物（EN）对哮喘小鼠Thl/Th2细胞平衡的影响,以及p38信号通路在其中的作用。 方法 60只雄性清洁级BABL/c小鼠,随机分为6组,每组10只,分别为正常对照组;卵蛋白(OVA)哮喘组;羌活低剂量组;羌活高剂量组、SB203580组和地塞米松组。在末次激发24 h后小鼠肺组织行HE染色。分别用ELISA检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中白细胞介素（IL）-4、IL-5、IL-13和γ-干扰素（IFN-γ）含量以及Western blotting检测肺组织IL-4、IFN-γ、P38蛋白表达。
结果 哮喘组小鼠与对照组小鼠相比较,BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平增高,而IFN-γ的表达明显降低(P<0.05),肺部炎症浸润明显(P<0.05);肺组织IL-4和磷酸化P38蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05),而肺组织IFN-γ的表达明显低于对照组(P<0.05)。羌活低、高剂量组、SB203580组和地塞米松组与哮喘模型组相比较,BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13浓度以及肺组织IL-4和磷酸化P38蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);肺部炎症明显减轻(P<0.05);BALF和肺组织中IFN-γ明显升高(P<0.05)。 结论 羌活提取物具有明显的抗哮喘作用,其机制可能是通过抑制P38信号通路,影响Thl/Th2细胞平衡实现的。     

TREM2通过激活Th17细胞调节神经免疫炎症并保护局灶性脑缺血再灌注损伤北大核心CSCD

目的:探讨髓细胞触发受体2(TREM2)调节局灶性脑缺血再灌注损伤和神经免疫炎症的作用和机制。方法:对小鼠的大脑行中动脉闭塞术(MCAO)以建立局灶性缺血再灌注损伤模型,分为假手术组(sham组)和MCAO组(n=6)。小干扰RNA(siRNA)构建TREM2的沉默质粒(TREM2 siRNA组),构建TREM2过表达质粒(pcDNA-TREM2组),以及各自的阴性对照(CON siRNA)组和pcDNA组分别感染MCAO小鼠。采用IL-17抑制剂苏金单抗(SEC)联合pcDNA-TREM2处理MCAO组(MCAO+pcDNA-TREM2+SEC组)。qPCR和Western blot检测TNF-α、IL-1β、IL-17和TREM2表达;免疫荧光法检测脑部TREM2定位;TTC染色评价脑损伤程度;流式细胞术检测Th17细胞比例。结果:TREM2表达于小胶质细胞,且MCAO组TREM2表达均增加(P<0.05)。沉默TREM2诱导神经元细胞凋亡(F=206.971,P=0.001)、梗死体积和神经功能障碍评分升高(均P<0.05),TNF-α和IL-1β的mRNA水平升高,IL-10降低(均P<0.05)。过表达TREM2导致TNF-α、IL-1β表达降低,而IL-10和IL-17表达及Th17阳性细胞比例升高(均P<0.05)。与MCAO+pcDNA-TREM2组比较,MCAO+pcDNA-TREM2+SEC组的Th17细胞比例降低、神经元百分比降低,脑损伤程度增加,TNF-α、IL-1β表达升高,IL-10和IL-17表达降低(均P<0.05)。结论:过表达TREM2可通过激活Th17细胞并抑制神经炎症从而保护局灶性脑缺血再灌注损伤。     

重组质粒pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS)对Balb/c小鼠的免疫作用

目的探讨重组质粒pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISS)对Balb/c小鼠免疫的作用。方法构建真核表达质粒pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISSb,ISSc),将其免疫Balb/c小鼠,ELISA法检测免疫后小鼠血清中HBcAb、IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-4和IL-10的含量。结果 pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISSb,ISSc)重组质粒均能诱导Balb/c小鼠产生特异性抗体HBcAb,pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISSb)组较pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISSc)组产生的抗-HBc效价显著增高(P<0.01),且其免疫Balb/c小鼠后能使Th1型细胞因子IFN-γ、IL-2和IL-12的表达增强,抑制Th2型细胞因子IL-4和IL-10的产生。结论 pZeoSV2(+)/CpG-HBcAg(ISSb,ISSc)重组质粒对小鼠HBcAb的产生具有明显的促进作用,含CpG-HBcAg(ISSb)的重组质粒能够明显增强小鼠血清Th1型细胞因子的表达,抑制Th2型细胞因子的表达。     

T细胞疫苗对CIA的免疫调节作用

目的探讨T细胞疫苗(TCV)对小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)的免疫调节作用。方法通过TCV干预CIA模型,观察小鼠发病情况,运用免疫组化技术观察局部关节病变程度;FACs分析T细胞亚群变化;ELISA检测细胞培养上清中TGF-β、IFN-γ、IL-17水平;定量PCR方法检测Treg、Th1、Th17细胞相关转录因子表达水平。结果经过TCV干预,小鼠自身反应性T细胞的增殖能力被显著抑制,CII抗体水平也显著下降;相较CIA组,TCV组Treg细胞百分比上升,Th1、Th17细胞百分比明显降低;各细胞分泌细胞因子的能力也发生相应的变化,其中TGF-β上升,IFN-γ、IL-17降低;Treg细胞转录因子Foxp3基因水平提高,Th1、Th17细胞转录因子T-bet、RORα及RORγt的mRNA水平降低。结论 TCV干预可通过抑制CIA小鼠自身反应性T细胞增殖,上调小鼠体内Treg细胞并抑制Th1、Th17细胞的表达而发挥免疫调节作用,有效降低小鼠发病严重度和关节炎症。