黄芪甲苷拮抗马兜铃酸Ⅰ所致的急性肾小管损伤

 目的：观察黄芪甲苷对马兜铃酸Ⅰ所致的急性肾小管损伤的影响。方法：（1）体外实验：四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察黄芪甲苷对马兜铃酸Ⅰ所致人近曲小管上皮细胞（HK-2）存活率降低的拮抗作用;（2）动物体内实验：马兜铃酸Ⅰ腹腔注射6 d建立昆明小鼠急性肾损伤模型,同时用50 mg·kg^-1·d^-1黄芪甲苷灌胃进行干预治疗。7 d后检测尿蛋白、尿γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）、血清肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）水平的变化和肾脏组织形态学变化。结果：（1）黄芪甲苷能增加马兜铃酸Ⅰ处理的HK-2细胞存活率,并呈剂量依赖趋势;（2）黄芪甲苷干预组小鼠尿蛋白、尿γ-GT、SCr、和BUN的水平均低于马兜铃酸肾损伤组;近曲小管坏死和裸基底膜面积也较马兜铃酸肾损伤组明显改善。结论：黄芪甲苷可以拮抗马兜铃酸Ⅰ诱导的急性肾小管损伤。     

黄芪甲苷降低结肠巨噬细胞比例减缓溃疡性结肠炎发生发展

目的：观察黄芪甲苷（AS-Ⅳ）在葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（UC）中的保护作用并初步探究其保护机制。方法：将雄性C57BL/6小鼠随机分为Control组和AS-Ⅳ组,AS-Ⅳ组连续灌胃给予AS-Ⅳ（100 mg/kg）7 d。证实AS-Ⅳ对小鼠体质量和结肠长度均无影响后,将雄性C57BL/6小鼠随机分为Control组、DSS组、DSS+AS-Ⅳ组,DSS组小鼠自由饮用2.5%DSS水溶液7 d,DSS+AS-Ⅳ组小鼠自由饮用2.5%DSS水溶液的同时连续灌胃给予AS-Ⅳ（100 mg/kg）7 d。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;qRT-PCR检测小鼠结肠组织细胞因子mRNA表达;流式细胞术检测小鼠外周血和结肠固有层单核/巨噬细胞比例。结果：与Control组相比,AS-Ⅳ组小鼠体质量和结肠无明显变化,DSS组小鼠体质量明显减轻、结肠长度缩短,肠黏膜组织结构破坏,炎症细胞浸润增多,结肠组织TNF-α、IL-1β、IL-6、CCL2、CCR2 mRNA表达显著升高;与DSS组相比,DSS+AS-Ⅳ组小鼠结肠缩短程度和结肠组织炎症细胞浸润水平降低,Ly6C+MHCⅡ...     

玉女煎对棕榈酸诱导的L细胞损伤的影响

目的：研究玉女煎对棕榈酸（PA）诱导的肠L细胞损伤的影响。方法：（1）将不同浓度（1.5、3和6g/L）玉女煎溶液分别与二苯代苦味肼基自由基（DPPH·）溶液（100 mg/L）混合并避光反应30 min,采用全波长酶标仪检测吸光度的变化,评价玉女煎对DPPH·的清除作用。（2）将小鼠肠内分泌细胞系GLUTag分为空白对照组、PA(400μmol/L)组、PA+玉女煎（1.5 g/L）组、PA+玉女煎（3 g/L）组和PA+玉女煎（6 g/L）组,通过Hoechst 33342细胞核染色实验和MTT实验评价玉女煎对PA诱导的细胞凋亡的影响。（3）将GLUTag细胞分为空白对照组、PA组和PA+玉女煎（6 g/L）组,采用免疫荧光染色检测细胞内胰高血糖素样肽1(GLP-1)表达水平,通过2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平,通过Western blot实验检测超氧化物歧化酶1(SOD1)表达水平。结果：（1）玉女煎在体外可显著清除DPPH·（P<0.01）。（2）与PA组比较,玉女煎能以浓度依赖性方式抑制PA诱导的GLUTag细胞活...     

Wnt5a正反馈调控二氧化硅诱导的小鼠肺泡巨噬细胞铁死亡

目的 探讨Wnt5a信号在二氧化硅诱导的小鼠巨噬细胞铁死亡过程中的调控作用。方法 设置C57BL/6小鼠生理盐水组和二氧化硅处理组,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。免疫荧光细胞化学染色法检测小鼠BALF细胞Wnt5a、核因子κB p65(NF-κB p65)和Toll样受体4(TLR4)蛋白的表达;ELISA检测小鼠血浆和BALF上清白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,Western blot法检测(50、100、150、200、300)μg/mL二氧化硅刺激下RAW264.7细胞磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)、Wnt5a、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、裂解型胱天蛋白酶1(c-caspase-1)、消皮素D(gasdermin D)以及铁死亡蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)和转铁蛋白(transferrin)的表达;CellROX~?荧光探针负载法检测活性氧(ROS)的水平;实时荧光定量PCR检测Wnt5a、...     

黄芪甲苷对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制

 目的:观察黄芪甲苷 (AS-IV)对糖尿病肾病(DN)肾脏的保护作用及其机制。方法:38只清洁级雄性SD 大鼠分成正常组（10只）、模型组（14只）和AS-IV 干预组（14只）,用链脲佐菌素造模,成功后1 周开始治疗,期间每 4周动态观测血糖及尿微量白蛋白,治疗12周后处死大鼠取材及采血,取肾皮质行 HE 和Masson染色观察,并检测β 1整合素、整合素连接激酶(ILK)和α-actinin-4的蛋白表达水平。结果:干预8周末AS-IV 组血糖水平较模型组明显降低（P<0.01）。干预12周末AS-IV 组与模型组相比,尿微量白蛋白明显下降（P<001）,并使因造模引起的β 1整合素、ILK 和α-actinin-4 表达水平的变化产生逆变（P<0.05）。与正常组比较,模型组的β 1整合素、ILK 和α-actinin-4 表达水平均有明显差异（P<0.05）。结论:AS-IV 对DN 肾脏有明显保护作用,能降低血糖和尿白蛋白排泄量,改善足细胞黏附功能,从而延缓DN 的进展。     

棕榈酸诱导胰岛素瘤细胞MIN6细胞凋亡

目的探讨蛋白激酶B及其磷酸化在棕榈酸诱导的胰岛素瘤细胞MIN6凋亡中的作用。方法胰岛素瘤细胞MIN6分别在含有不同棕榈酸浓度(0～0.5 mmol/L)的DMEM高糖培养基中孵育,培养基中加或不加PI3K/PKB的阻断剂LY294002;TUNEL法观察凋亡并计数凋亡率;透射电镜观察MIN6细胞超微结构;Western blot检测蛋白激酶B(PKB)及其磷酸化蛋白p-PKB(Ser473)的表达;RT-PCR法检测BAX、BCL-2mRNA的表达。结果MIN6细胞凋亡随着培养基中棕榈酸浓度的增加而增加,LY294002可增强其凋亡程度;棕榈酸抑制MIN6细胞的PKB在473位丝氨酸位点的磷酸化,抑制BCL-2mRNA的表达并促进BAXmRNA的表达。结论棕榈酸可能通过抑制PKB磷酸化的激活而诱导糖尿病时胰岛β细胞的凋亡。     

黄芪甲苷对变应性鼻炎小鼠线粒体动态平衡及NK 细胞分化影响的研究

目的：探讨黄芪甲苷对变应性鼻炎（AR）小鼠NK细胞分化的影响及机制。方法：C57/BL6小鼠随机分为空白组、AR模型组、黄芪甲苷组。观察各组小鼠行为学表现、鼻黏膜炎症反应;ELISA法测定血清IL-4、IL-5、IFN-γ水平;免疫荧光法检测各组NK细胞IL-4、IFN-γ表达;透射电镜等技术观察小鼠线粒体形态。结果：与AR模型组比较,黄芪甲苷组小鼠鼻过敏症状、鼻黏膜炎症明显改善,血清IL-4、IL-5水平降低。黄芪甲苷干预后,OVA致敏小鼠NKp46细胞IL-4、p-Drp1(Ser616)阳性比率降低。同时,黄芪甲苷组小鼠鼻黏膜NK细胞线粒体管状形态较AR模型组有所恢复,线粒体长度明显增加。结论：黄芪甲苷可能通过调节Drp1活性,恢复线粒体动态平衡,抑制NK细胞的NK2分化偏移,发挥改善AR的效应。     

黄芪甲苷对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS)对糖尿病大鼠视网膜氧化应激的影响及其对Müller细胞的保护作用。方法利用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组及AS治疗组,3个月后试剂盒检测视网膜丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量,免疫组化及Western blot检测视网膜神经胶质酸性蛋白(GFAP)变化,Western blot检测Müller细胞功能性蛋白酶——谷氨酰胺合成酶(GS)表达变化。结果与对照组相比,糖尿病组视网膜MDA含量增加,GSH含量减少,GFAP表达增加,GS表达减少(均0.01),AS治疗组视网膜MDA及GSH含量、GFAP及GS表达较糖尿病组均无明显变化(均0.05)。结论 AS抑制糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应,恢复视网膜Müller细胞功能性蛋白酶GS的表达。     

黄芪甲苷对IgA肾病大鼠脾免疫细胞的影响

目的探讨黄芪甲苷(AS)对IgA肾病(IgAN)大鼠脾免疫细胞和肾功能的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、IgAN组、AS低剂量组和高剂量组(n=10)。免疫组化和体视学方法测脾CD3~+、CD4~+T细胞和CD20~+B细胞数密度,免疫荧光法测肾IgA沉积,全自动生化分析仪测24h尿蛋白,显微镜下镜检尿红细胞数。结果与对照组比,IgAN组脾淋巴细胞数密度升高,肾IgA沉积明显,出现血尿、蛋白尿。AS两组与IgAN组比,淋巴细胞数密度下降,肾IgA减少,血尿、蛋白尿减轻。结论 AS有效下调IgAN大鼠脾免疫功能亢进,减轻症状。     

黄芪甲苷可抑制炎性诱导星形胶质细胞激活及炎症反应

背景：星形胶质细胞在中枢神经系统疾病的病理中起着重要作用。星形胶质细胞的表型变化及功能改变,提示其可能是中枢神经系统疾病的有效治疗靶点。前期研究证实,黄芪甲苷可以抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的星形胶质细胞炎性反应,其是否可以通过Notch-1及其下游信号通路调控星形胶质细胞表型和功能,尚不清楚。目的：探讨黄芪甲苷对炎性诱导的星形胶质细胞激活及炎症反应的影响及可能机制。方法：体外培养新生C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,CCK-8法检测星形胶质细胞活力确定黄芪甲苷及Notch活性抑制剂DAPT的最适浓度;然后将星形胶质细胞分为5组：PBS组、LPS组、LPS+黄芪甲苷组、LPS+DAPT组和LPS+DAPT+黄芪甲苷组,ELISA法检测炎性因子分泌水平,Griess法检测一氧化氮水平,用Transwell小室将星形胶质细胞与脾脏单个核细胞共培养,观察CD4 T细胞的迁移情况,免疫荧光染色检测星形胶质细胞活化标志物GFAP、星形胶质细胞的A1标记物C3、A2标记物S100A10以及信号通路相关Notch-1、Jag-1的表达,Western blot...     

黄芪甲苷对成年大鼠视神经切断后视网膜节细胞存活的影响

目的:探讨黄芪甲苷(AST)在成年大鼠视神经切断后对视网膜节细胞(RGCs)存活的影响。方法:动物分为正常组、单纯切断视神经组、AST处理组和生理盐水对照组。用荧光金(FG)逆行示踪标记法及定量解剖学技术观察正常和经AST处理的SD大鼠于视神经切断后5、7、14 d的RGCs的密度。结果:正常组RGCs平均密度为(2 230±156)/mm~2。单纯视神经切断组RGCs平均密度与生理盐水对照组相比较,无显著性差异;AST处理组与单纯切断视神经组和生理盐水对照组相比较,在各个时间点上均存在显著性差异。结论:黄芪甲苷可提高成年大鼠视神经切断后视网膜节细胞短期存活。     

黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响

目的:探讨黄芪甲苷对脑缺血/再灌注损伤大鼠细胞自噬的影响。方法:选取清洁级雄性SD大鼠70只随机分为假手术组、脑缺血/再灌注组、溶剂对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+自噬抑制剂组、自噬抑制剂组和自噬激活剂组。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型。观察大鼠神经缺损症状,根据Zea Longa评分标准挑选模型成功的大鼠;采用TTC染色法检测大鼠脑梗死体积;尼氏染色观察大鼠神经细胞形态学变化;透射电子显微镜观察细胞自噬现象;Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达量的变化。结果:假手术组无神经缺损症状,未出现脑梗死灶,尼氏体丰富、染色均匀。与假手术组相比,脑缺血/再灌注组出现明显的脑梗死灶,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少、着色较浅,透射电镜下可见典型的自噬体,自噬标志蛋白beclin-1和LC3-Ⅱ表达增加(P 0. 05)。与脑缺血/再灌注组相比,黄芪甲苷组和自噬激活剂组可明显减小脑梗死体积,神经细胞有不同程度的恢复,尼氏体稍增多,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均增加(P 0. 05);自噬抑制剂组脑梗死体积增大,神经细胞坏死严重,尼氏体减少,着色变浅,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量均减少(P 0. 05);溶剂对照组无明显变化。与黄芪甲苷组比较,黄芪甲苷+自噬抑制剂组和自噬抑制剂组脑梗死体积增加,神经细胞坏死增多,尼氏体数量减少,自噬体数量、beclin-1和LC3-Ⅱ表达量降低(P 0. 05)。结论:黄芪甲苷可通过激活自噬而减轻脑缺血/再灌注损伤,从而发挥神经保护作用。     

黄芪甲苷通过mTORC1通路调控IgA肾病大鼠脾淋巴细胞分化

目的:探讨黄芪甲苷(AS)通过mTORC1信号通路调控IgA肾病(IgAN)大鼠脾淋巴细胞分化的影响及机制.方法:28只SD大鼠随机分为对照组、IgAN组、雷帕霉素(RAPA)组和AS组.观测大鼠肾IgA沉积情况、脾脏病理变化及脾CD4+T细胞数密度、CD8+T细胞数密度和IL-10、p-mTOR和p-p70S6k表达...     

黄芪甲苷Ⅳ对哮喘小鼠Th2转录因子表达的抑制作用

为探讨黄芪甲苷Ⅳ(astragaloside Ⅳ,AST Ⅳ)对哮喘小鼠免疫失衡的调节机制,用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导小鼠支气管哮喘模型,随机分为对照组、模型组、AST Ⅳ治疗组和地塞米松治疗组。HE染色观察肺组织病理改变;ELISA检测肺组织匀浆中IFN-γ、IL-5、IL-13、IL-17A及TGF-β的含量变化;RT-PCR检测脾脏中转录因子T-bet、GATA-3、STAT-6、RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平。结果显示,AST Ⅳ作用后小鼠肺部炎症细胞浸润及气道上皮细胞损伤明显改善;IL-5、IL-13和IL-17A的表达水平明显低于模型组(P <0.05),而对IFN-γ和TGF-β没有显著作用;AST Ⅳ能显著抑制STAT-6 mRNA的表达(降低2.65倍),同时对GATA-3(降低1.82倍)和RORγt(降低2.22倍)的表达也有抑制作用;但对Foxp3和T-bet mRNA表达无显著影响。研究表明,AST Ⅳ主要通过显著抑制Th2转录因子表达来抑制炎性因子IL-5、IL-13以及IL-17A的产生,从而改善哮喘模型小鼠肺部炎症程度。故AST Ⅳ可能是一种哮喘治疗新的药物活性成分。     

黄芪甲苷对肺炎链球菌体外诱导的肺泡上皮细胞凋亡和炎症反应的影响

目的 探讨黄芪甲苷对肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响和机制探讨。方法体外培养正常肺上皮BEAS-2B细胞,用肺炎链球菌处理后,选择黄芪甲苷10、20、40、60μmol/L处理,采用MTT法检测细胞活性。选择黄芪甲苷40μmol/L进行后续实验,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Cas3、MCP-1、NF-κB蛋白表达;qRT-PCR检测Bcl-2、Bax、Cleaved Cas3、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达量;ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α含量。结果 与Con组相比,SP组细胞活性明显降低（P<0.05, P<0.01）;与SP组相比,SP+Astragaloside Ⅳ各组呈剂量效应关系增加细胞活性（P<0.05, P<0.01）。肺炎链球菌感染细胞后促进凋亡,并增加炎症相关因子和蛋白表达。黄芪甲苷降低肺炎链球菌诱导的细胞凋亡率,及炎症相关因子和蛋白表达。结论 黄芪甲苷能减轻肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎性损伤,...     

黄芪甲苷对慢性心衰大鼠心肌纤维化及能量代谢的影响

目的:研究黄芪甲苷对慢性心衰大鼠心肌纤维化的影响,初步探讨其具体机制。方法:采用腹主动脉缩窄法(AAC)建立大鼠慢性心衰模型,建模成功后随机分为模型组、缬沙坦组及黄芪甲苷组,另建立假手术组。缬沙坦组和黄芪甲苷组分别给予2 mg·kg~(-1)·d~(-1)的缬沙坦及30 mg·kg~(-1)·d~(-1)的黄芪甲苷灌胃,假手术组及模型组给予生理盐水灌胃。8周后收集心脏结构及血流动力学参数,留取心肌染色后观察心肌细胞形态学变化Western blot和RT-qPCR检测长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)、6-磷酸果糖激酶1(PFK1)的蛋白及mRNA表达情况。结果:与假手术组相比,模型组大鼠的左室质量指数(LVMI)、胶原容积分数(CVF)、左室后壁厚度(LVPWD)、PFK1蛋白及mRNA表达均升高(P0.05),LCAD蛋白及mRNA表达均下降(P0.05)。与模型组相比,缬沙坦组及黄芪甲苷组LVMI、CVF、LVPWD、PFK1蛋白及mRNA表达均下降(P0.05),LCAD蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。结论:黄芪甲苷可以抑制慢性心衰大鼠心肌纤维化,其机制可能是通过上调LCAD、下调PFK1、纠正能量代谢异常实现的。     

基于不同载体制备黄芪甲苷人工抗原的研究

目的:比较牛血清白蛋白(BSA)和匙孔型血蓝蛋白(KLH)两种蛋白载体合成黄芪甲苷人工抗原的免疫原性。方法:用高碘酸钠法将黄芪甲苷(AST)分别与蛋白载体BSA和KLH偶联成AST-BSA及AST-KLH免疫6~8周龄的BALB/c雌性小鼠,测定其血清抗体效价;以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白同样以高碘酸钠法合成AST-OVA作为包被抗原。多抗血清经间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)和间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)检测其抗体效价及特异性。结果:经AST-KLH免疫的多抗血清较之AST-BSA免疫的特异性要高,与AST进行竞争酶联免疫检测,其IC50值约为5μg/ml。两种人工抗原免疫所得血清抗体效价均为1∶51 200左右。结论:AST-KLH具有更好的免疫原性,本次实验为进一步建立黄芪甲苷的免疫学检测方法奠定了研究基础。     

细胞铁死亡发生与调控机制的研究进展

正细胞死亡无论在生理还是在病理条件下都是无法避免的重要环节。传统意义上细胞死亡主要分为凋亡(apoptosis)和坏死(necrosis)两大主要类型,但近年来却发现在诸多病理生理情况下亦有自噬(autophagy)、胀亡(oncosis)、副凋亡(paraptosis)、焦亡(pyroptosis)等多种方式参与其中。越来越多细胞死亡方式的发现为进一步明确疾病的发生机制以及为