Toll样受体4在慢性阻塞性肺疾病中作用的研究进展

Toll样受体(TLRs)是一类最早发现的固有免疫受体,其中TLR4是介导来源于革兰阴氏菌细胞壁外膜脂多糖反应中的主要信号转导分子,参与多种疾病炎症过程.TLR4参加对抗细菌感染是常见的慢性阻塞性肺疾病(COPD)的防御机制之一.把TLR4作为靶点将是COPD临床治疗中一种新的潜在的治疗方法.     

人脐血血清对巨噬细胞Toll样受体4表达及功能的影响

目的研究人脐血血清(cord blood serum,CBS)对巨噬细胞RAW264.7 Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)表达及功能的影响。方法取足月孕妇脐带血和外周血血清,与RAW264.7细胞共孵育,电镜下观察形态学变化,MTT法检测血清对RAW264.7细胞活性的影响;RT-PCR和流式细胞术检测RAW264.7细胞TLR4基因和蛋白表达水平;免疫荧光技术检测RAW264.7细胞I_κB_α水平,RR-PCR检测RAW264.7细胞COX-2的表达,以反映TLR4信号途径活化程度。结果人脐血血清可下调RAW264.7细胞TLR4的mRNA和蛋白表达水平;人脐血血清预孵育可抑制由LPS诱导的RAW264.7细胞NF-_κB激活和COX-2的表达。结论人脐血血清能抑制巨噬细胞TLR4的表达及其下游信号传递,这为阐明脐血血清对脐血细胞免疫功能调节的机制提供了新的实验线索。     

巨噬细胞中Toll样受体的信号转导链接自体吞噬通路与吞噬作用

众所周知，细胞的吞噬作用和自体吞噬是2个古老的、高度保守的过程，它们分别参与细胞外和细胞液中生物体的清除。不管是对代谢的调节，还是对自身的防御，细胞的自体吞噬都会形成1个双层膜结构，此膜结构称为自噬体，自噬体与溶酶体融合，细胞内容物被降解，这个过程类似于吞噬小体的成熟过程。     

脂多糖刺激对牛单核细胞由来的巨噬细胞Toll样受体表达的影响

目的:研究牛末梢血中单核细胞由来的巨噬细胞在受到LPS刺激后细胞表面Toll样受体表达的变化.方法:试验采取3头日本黑牛外周血,进行分离得到外周血单核细胞,并用Repcell进行巨噬细胞的分离培养,7天后用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激细胞24小时后,通过RT-PCR测定巨噬细胞表面Toll样受体mRNA的表达以及细胞因子mRNA的表达.结果:在LPS刺激24小时后,IL-6、 TNF-α和IL-1βmRNA的表达量显著升高(P＜0.05),与此同时IL-8和IL-12p40 mRNA的表达量相对提高;TLR1和TLR10的转录物显著下降(P＜0.05),然而TLR2、4和6保持稳定.结论:巨噬细胞在受到病原刺激后通过提高IL-6、 TNF-α和IL-1β mRNA的表达量,从而提高了天然免疫的作用.该研究为探讨巨噬细胞在无然免疫中的作用奠定了基础.     

肺泡巨噬细胞免疫代谢与慢性阻塞性肺疾病关系的研究进展

肺泡巨噬细胞（AMs）在慢性阻塞性肺疾病（COPD）的发病中起着重要作用，代谢途径和代谢产物的改变是AMs功能和相关疾病进展的关键因素之一。本文就影响AMs代谢变化的因素，以及代谢变化如何影响AMs的功能作了阐述，并进一步总结了AMs的免疫代谢变化在COPD中的研究进展，以期为COPD的防治提供新的思路和途径。     

N-Ac-PGP通过激活TLR4诱导巨噬细胞的M1极化并提高慢性阻塞性肺疾病炎症水平

目的：探究N-乙酰化脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸（N-acetylated proline-glycine-proline, N-Ac-PGP）通过Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)诱导巨噬细胞M1极化对慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease, COPD）炎症反应的影响。方法：检测COPD患者痰液中N-Ac-PGP和M1型巨噬细胞炎性细胞因子的表达。体外培养人单核细胞白血病细胞THP-1,使用佛波脂（phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）诱导使之分化为M0型巨噬细胞,然后使用脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）和N-Ac-PGP诱导M0型巨噬细胞极化为M1型。采用RTqPCR和Western blot法分别检测巨噬细胞表面标志物CD11b、CD45、CD86和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）的mRNA和蛋白表达水平。使用ELISA检测M1型巨噬细胞炎性细胞因子肿瘤坏死因子α(tu-m...     

NOD样受体蛋白3对小鼠巨噬细胞吞噬创伤弧菌能力的影响

目的探讨NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)对巨噬细胞吞噬创伤弧菌能力的影响和调控机制。方法转录组测序分析创伤弧菌感染J774A.1细胞吞噬相关基因的表达谱;CRISPR-Cas9基因编辑技术构建NLRP3敲除(NLRP3 KO)的J774A.1细胞;流式细胞术分析未敲除J774A.1和NLRP3 KO J774A.1细胞对创伤弧菌和pHrodo RED标记的大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)修饰微球的吞噬能力;荧光定量PCR检测吞噬相关基因Fgr2b的表达情况。结果J774A.1细胞感染创伤弧菌后,吞噬功能相关基因表达谱中约有18个基因表达上调(P<0.05);NLRP3 KO J774A.1细胞在NLRP3的第2个外显子中有5个碱基的缺失,发生移码突变,导致NLRP3表达缺陷;创伤弧菌或E.coli修饰微球体外作用后,NLRP3 KO J774A.1细胞较未敲除组吞噬能力均显著增强,差异有统计学意义;与未敲除组比较,创伤弧菌感染的NLRP3 KO J774A.1细胞中Fgr2b基因的表达显著升高,差异有统计学意义。结论NLRP3能负调控巨噬细胞对创伤弧菌的吞噬功能,其作用机制可能与调控吞噬相关基因Fgr2b的表达有关。     

大鼠慢性阻塞性肺疾病模型的建立及其气道和肺组织M受体的水平

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种重要的慢性呼吸系统疾病，其基础和临床研究越来越广泛，目前国内虽然有慢性支气管炎(慢支)动物模型的文献报道，但均未能证实其有气流阻塞，因此，不能称之为COPD。我们采用组织学检查和肺功能测定的方法对吸入高浓度SO2气体诱导的大鼠COPD模型进行了鉴定，并对其气道和肺组织M受体进行了检测。1 材料和方法1.1 动物：选体重80～120g雄性Wistar大鼠17只，随机分为2组，COPD组8只，正常对照组9只。将COPD组大鼠暴露于250ppm的SO2气体，5h/d,5d/w，共7周。1.2 肺功能测定：乌拉坦腹腔注射麻醉大鼠，…     

Toll样受体2和4在髋关节滑膜巨噬细胞中的表达

目的　探讨TLR2和TLR4在髋关节滑膜巨噬细胞中的表达。 方法　收集2007年至　2010年因髋关节疾病在我院行髋关节手术患者的髋关节滑膜标本共47例,其中股骨颈骨折24例（A组）,股骨头坏死18例（B组）,人工髋关节置换术后假体无菌性松动5例（C组）。采用免疫组化SP法检测TLR2和TLR4在3组的髋关节滑膜巨噬细胞中的表达,在高倍镜（×400）视野下对阳性的巨噬细胞的进行观察及计数,并作统计分析。 结果　各组用histoscore计算阳性巨噬细胞百分数得分,每高倍视野下A组中TLR2（0.27±0.33）,TLR4 （0.69±0.18）;B组中TLR2 （0.31±0.19）,TLR4 （0.71±0.31）;C组中　TLR2 （1.78±0.18）,TLR4 （2.00±0.39）。TLR2和TLR4在C组中表达较A组、B组高（P＜0.001）,而且3组中TLR4均较TLR2表达要高（P＜0.001）。 结论　TLR2及TLR4在人工关节无菌性松动患者的假体周围组织巨噬细胞中表达明显增多,可能参与了巨噬细胞介导的假体无菌性松动过程。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3的表达降低

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3(TLR3)的表达及其临床意义.方法 分别采集慢性乙型肝炎患者和健康志愿者外周血,荧光定量PCR法检测血清HBV DNA复制水平;使用RT-PCR、流式细胞术以及免疫印迹技术分别检测外周血单个核细胞TLR3的mRNA、蛋白的表达;使用ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素β(IFN-p)水平.结果 慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中的TLR3表达显著低于健康志愿者,且降低水平与血清HBV DNA复制水平相关;慢性乙型肝炎患者外周血TNF-α、IFN-β浓度显著低于健康志愿者,且降低的水平与血清HBV DNA复制水平相关.结论 慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞TLR3的表达与乙肝病毒的复制水平相关.     

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡巨噬细胞延迟整流钾通道的活性研究

目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠肺泡巨噬细胞延迟整流钾通道（KV）活性变化。 方法： 随机将大鼠分为COPD模型组和对照组,采用香烟烟雾吸入法复制大鼠COPD模型。应用全细胞电压或电流膜片钳的方法，观察和比较正常对照大鼠与COPD模型大鼠肺泡巨噬细胞（AM）KV电流活性、膜电位和电容的差异。 结果： （1）COPD组支气管肺泡灌洗液（BALF）中单个核细胞总数及AM细胞数均显著高于对照组(P<0.01)；（2）COPD大鼠BALF中AM细胞Kv电流幅度［（520.5±38.7） pA，+50 mV,n=30］显著低于对照组［（713.6±44.4） pA，+50 mV,n=30，P<0.01］；（3）COPD组AM细胞电容［（101.6±7.6）pF, n=42］与对照组［（97.4±1.6）pF,n=67］无显著差异(P>0.05)。但模型组AM膜电位［（-24.6±4.5） mV，n=18］负值显著低于对照组［（-37.9±6.1） mV,n=34，P<0.01］。 结论： COPD大鼠肺泡AM细胞KV功能下调，细胞膜电位负值降低，兴奋性升高。该机制可能与AM细胞促进COPD发病的形成机制有关。     

慢性阻塞性肺疾病患者的护理体会

目的：研究综合护理干预对治疗COPD患者疗效的影响。方法本文选取了我院2013年2月~2014年2月收治的60例COPD的临床护理记录,将患者随机分为实验组和对照组各30例,对两组患者的生活满意度、遵医依从性进行比较分析。结果对照组采用常规护理,实验组在常规护理的基础上附加综合护理干预措施,比较2组患者的生活满意度、遵医依从性发现,实验组状况均有优于对照组,差异均具有统计学意义(<0.05)。结论综合护理干预可消除其负面情绪,积极主动的配合治疗,提高治愈率,提升患者的生活品质。     

人偏肺病毒感染人肺上皮细胞后Toll样受体的表达及其功能

目的 观察人偏肺病毒(human metapneumoviras)感染人肺上皮细胞后Toll样受体(TLR)表达变化及其信号通路的功能,探讨hMPV诱导气道炎症的部分机制.方法 hMPV感染体外培养的人肺上皮细胞株A549,检测病毒在A549细胞中的生长曲线,并通过RT-PCR,real-timeRT-PCR方法检测细胞TLR mRNA的表达,ELISA检测细胞培养上清IFN-α及TNF-α的表达.结果 (1)hMPV可在A549细胞中复制,感染后3 d达高峰10~(5.2)TCID_(50)/ml.(2)RT-PCR结果提示:hMPV感染A549细胞6 h后大部分TLR的表达均上调.(3)定量PCR结果提示:hMPV感染A549细胞后TLR3-4、TLR7-9的表达增高,且有时间依赖性,而紫外灭活的hMPV刺激细胞后TLR表达无明显变化.(4)ELISA结果提示hMPV感染后24 h,IFN-α及TNF-α的表达均明显升高.结论 人偏肺病毒感染A549细胞后可上调TLR表达,其诱导的炎性反应与部分TLR介导的信号转导途径有关.     

中性粒细胞中Toll样受体的表达与功能

中性粒细胞是最重要的固有免疫细胞,通过黏附、趋化、识别、脱颗粒、杀伤和降解等一系列过程杀灭病原微生物,介导炎症反应。整个过程受到众多细胞因子及其受体的调控,Toll样受体(TLR)作为最主要的固有免疫识别受体,在中性粒细胞的聚集、活化和凋亡中都起着重要的调控作用。     

Toll样受体4在肺缺血再灌注损伤免疫机制调控中作用

肺缺血再灌注损伤(LIRI)是肺移植术后一种严重威胁生命安全的并发症,并且与随后的闭塞性细支气管炎综合征的发展密切关联.当细胞受损时,其通过Toll样受体家族(TLRs)尤其是Toll样受体4(TLR4)来识别所释放的内源性配体,这一过程即为损伤关联分子模式(DAMPs).研究表明,TLR4在肺缺血再灌注损伤的病理生理过程中担任重要角色.     

Toll样受体在动脉粥样硬化中作用的研究进展

Toll样受体(TLRs)是模式识别受体(PRRs)之一,其因胞外段与一种果蝇蛋白Toll同源而得名.TLRs广泛分布于巨噬细胞、树突样细胞、T细胞、B细胞等免疫细胞,还存在于一些组织细胞中,如心肌细胞等.TLRs不仅可诱导固有免疫反应作为机体对病原微生物的第一道防线,也可通过激活抗原递呈细胞诱导适应性免疫反应.大量证据表明,TLRs除参与宿主抵抗病原菌的侵害之外,还在非感染性组织损伤中起作用,例如心肌缺血再灌注损伤,缺血后心肌重塑和动脉粥样硬化等疾病.故了解TLRs信号通路及其在心血管疾病中的作用可帮助我们确定干预心血管疾病的潜在靶点,且有重要的临床应用价值.     

树突状细胞及其Toll样受体与乙型肝炎慢性化研究进展

目前认为,机体对乙型肝炎病毒（HBV）的免疫耐受是乙型肝炎慢性化的主要原因。作为最重要的抗原呈递细胞,树突状细胞（DC）无论数量不足还是功能缺陷都将导致HBV在体内的持续感染。Toll样受体（TLR）是当前免疫学研究的热点,近年来,人们逐渐认识到慢性乙型肝炎（CHB）患者体内Dc的TLR存在表达异常,这可能是导致乙型肝炎慢性化的一个重要原因。     

同步悬空俯卧位对稳定期慢性阻塞性肺疾病患者肺通气功能的影响

探讨同步悬空俯卧位对稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺通气功能情况的影响。方法 2009年6月至10月本院门诊就诊的12例稳定期COPD患者,在人工呼吸床上随机采用仰卧位、悬空俯卧位、托平俯卧位、同步悬空俯卧位4种不同体位,每个体位观察10 min,通过NICO无创心肺功能监测系统连续测定患者在不同体位时的心率、动脉血氧饱和度、呼气末二氧化碳分压等一般生命体征和呼吸频率、潮气量、肺泡潮气量、生理无效腔(Vd/Vt)、吸气峰流速(PIF)、呼气峰流速(PEF)等呼吸动力学指标。根据患者的肺功能按美国胸科协会(ATS)和欧洲呼吸学会(ERS)制定的肺功能共同指南标准划分不同阻塞程度,并分析存在通气功能障碍患者的潮气量和呼吸频率等肺功能变化情况。结果 4种体位对心率、动脉血氧饱和度、呼气末二氧化碳分压无明显的影响。呼吸频率在4种体位中由慢至快呈现同步悬空俯卧位＜仰卧位＜托平俯卧位＜悬空俯卧位的趋势[(14.8±3.2)次/min＜(17.6±4.5)次/min ＜(18.4±3.4)次/min＜(19.5±3.4)次/min,均P＜0.05],潮气量和肺泡潮气量由高至低呈现同步悬空俯卧位＞仰卧位＞托平俯卧位＞悬空俯卧位的趋势。生理无效腔、PIF、PEF各组差异无统计学意义。3例重度和5例极重度阻塞通气功能障碍的患者潮气量在各体位间差异均无统计学意义,呼吸频率则在同步悬空俯卧位时最低,分别为(15.3±1.8)次/min、(16.6±1.8)次/min,且与悬空俯卧位时的呼吸频率差异有统计学意义[(19.4±3.4)次/min、(21.4±3.6)次/min,均P＜0.05]。结论 同步悬空俯卧位与其他两种俯卧呼吸体位一样,经短时间观察是安全稳定的,同步悬空俯卧位显著降低患者的呼吸频率、增加潮气量。在阻塞性通气功能障碍的情况下,对潮气量的影响不明显,但仍能降低患者的呼吸频率。     

冬虫夏草对慢性阻塞性肺疾病大鼠树突状细胞功能的影响

目的: 研究冬虫夏草对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠树突状细胞(DCs)功能的影响及其分子机制。方法: 将大鼠随机分为COPD模型组、冬虫夏草治疗组和正常对照组,观察各组大鼠气道病理改变,分离培养鼠DCs,ELISA法检测DCs培养上清液和DCs-T细胞共培养上清液中细胞因子含量。结果: 与正常对照组相比,COPD模型组和冬虫夏草治疗组的平均肺泡计数减少(P＜0.05),冬虫夏草治疗组高于COPD模型组,但差异无统计学意义(P>0.05)。冬虫夏草治疗组DCs-T细胞共培养后上清液中IFN-γ水平高于COPD模型组和正常对照组(P<0.05),IL-5水平各组无显著差异(P>0.05)。冬虫夏草治疗组DCs上清液中TNF-α和IL-12 p70水平高于COPD模型组和正常对照组(P<0.05)。结论: 冬虫夏草可促使COPD大鼠DCs产生Th1型细胞因子,机制可能与DCs产生的IL-12 p70促进T细胞产生IFN-γ有关。     

慢性阻塞性肺疾病患者社会支持状况调查

目的：调查慢性阻塞性肺病患者社会支持状况，方法：６０例患者个人资源询问表进行问卷评分，并与６０例健康者作对照。结果：ＣＯＰＤ患者社会支持评分低于对照组，年龄，病程和通气功能与社会支持评分有显著相关性。结论；重视ＣＯＰＤ患者的社会支持干预有利于病情康复。