小鼠天然CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达α7烟碱型乙酰胆碱受体

目的探讨C57BL／6J小鼠的天然CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）是否存在α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAchR）。方法使用小鼠调节性T细胞试剂盒分离小鼠脾脏CD4^＋CD25^＋Treg,流式细胞术鉴定CD4^＋CD25^＋Treg的纯度。分别采用免疫荧光染色、共聚焦显微镜、Western印迹和逆转录聚合酶链反应检测Treg表面α7nAchR蛋白／基凶表达：结果α-银环蛇毒素-FITC染色、流式检测显示Treg细胞表面结合α-银环蛇毒素-FITC;共聚焦显微镜成像观察到Treg细胞表面结合大量α-银环蛇毒索;Western印迹检测证实Treg细胞样本中检测到了清楚的α7nAchR条带,分子量大小约为55kD;RT-PCR分析发现Treg细胞样本中检测到了199bp大小的特异性α7nAchR目的基因条带。结论小鼠天然CD4^＋CD25^＋Treg细胞表达α7nAChR。     

α7烟碱型乙酰胆碱受体在重症肌无力胸腺细胞中的表达及其功能

目的 探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者胸腺细胞中α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nicotinic acetylcholine receptor,α7 nAChR)的表达及其对胸腺细胞分泌细胞因子和T细胞增殖的影响。方法 选取2021年6月—2022年6月河南省人民医院重症肌无力综合诊疗中心收治的行胸腔镜下胸腺扩大切除术MG患者为MG组,另选取阜外华中心血管病医院成人心外科2021年6月—2022年9月行心脏疾病手术过程中为暴露术野行部分胸腺切除术的患者为对照组。制备MG组及对照组胸腺单细胞悬液,采用实时荧光聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹法检测患者胸腺细胞中α7 nAChR的表达情况。采用CD3/CD28单抗偶联磁珠诱导T细胞活化,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测胸腺细胞中细胞因子干扰素-γ(interferongamma,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-4(interleukin-4,IL-4)、IL-6、IL-10、IL...     

α7烟碱型乙酰胆碱受体在肺癌中作用的研究进展

肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。吸烟是肺癌最主要的危险因素,尼古丁是烟草烟雾中危害最大的成分之一。烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs）在哺乳动物体细胞和癌细胞中均广泛存在,并执行多种重要功能。α7nAChR是nAChRs家族重要成员,与尼古丁具有高亲和力,在尼古丁诱导的肺癌细胞增殖、血管生成、侵袭和远处转移过程中起关键作用。目前,许多α7nAChR抑制剂已在体外和体内研究中显示出抑制肺癌细胞增殖、侵袭和血管生成从而对抗疾病进展的良好效果,提示α7nAChR可能成为肺癌潜在治疗靶点。本文对α7nAChR在肺癌进展中作用的研究进展进行综述。     

机械通气相关性肺损伤中α7烟碱型乙酰胆碱受体的作用和机制

背景 机械通气是治疗急性肺损伤(acute lung injury,ALI)和急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的必要措施,但同时又增加了机械通气相关性肺损伤(ventilation-induced lung injury,VILI)的发病率.而胆碱能抗炎通路是近年来发现的一种通过传出迷走神经来抑制炎症的神经-内分泌抗炎途径,其主要通过α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptors type,α7nAChR)发挥作用. 目的 对α7nAChR在VILI中的作用和机制的研究进展进行回顾和总结. 内容 共4部分:①VILI研究现状与共识;②胆碱能抗炎通路的研究进展;③α7nAChR在VILI中的具体机制;④归纳总结. 趋向α7nAChR在VILI中的作用和机制错综复杂,弄清这些复杂的信号转导机制对于揭示VILI的发生机制和预防VILI的发生具有临床意义.     

尼古丁对BV-2小胶质细胞α7烟碱型乙酰胆碱受体、小胶质细胞P2X4受体表达和脑源性神经营养因子释放的影响

目的观察尼古丁对BV-2小胶质α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nicotine acetyleholine receptor,α7nAChR）、小胶质细胞P2X4受体（P2X4receptor,P2X4R）表达和脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）释放的影响,以探讨小胶质细胞参与尼古丁所致痛觉过敏的可能分子机制。方法①BV-2小胶质细胞接种在含12mm圆形盖玻片无菌12孔板,待细胞处于对数生长期,完全随机分为2组：α7nAChR组和P2X4R组。免疫荧光标记检测α7nAChR和P2X4R在BV-2小胶质细胞上的表达。②当12孔板中BV-2细胞处于对数生长期,完全随机分为4组：尼古丁实验组（N组）,尼古丁终浓度为100μm／L;无血清培养基培养的空白对照组（C组）;尼古丁拮抗剂组（NM组）,10nmol／L甲基牛扁碱（methyllycaconitine,MLA）预孵育30min,改用含尼古丁的无血清培养基培养;单纯拮抗剂组（M组）,10nmol／LMLA预孵育30min,改用无血清培养基培养。培养72h后收集各组细胞。应用实时荧光定量PCR（real-timequantitativePCR,RT-qPCR）检测α7nAChRmRNA和P2X4RmRNA表达量的变化,Westernblot检测α7nAChR和P2X4R蛋白表达量的变化。③当12孔板中细胞处于对数生长期,完全随机分为4组：正常对照组（Control组）、尼古丁预处理＋DMEM组（Nicotine＋DMEM组）、尼古丁预处理＋激动剂组（Nieotine＋ATP组）,尼古丁预处理＋拮抗剂组（Nicotine＋5-BDBD组）。其中激动剂和拮抗剂由DMEM无血清培养基稀释,在尼古丁处理72h后加入,各组总体积保持一致,24h后ELISA检测培养液中BDNF释放量。结果①免疫荧光标记结果显示BV-2细胞存在α7nAChR和P2X4R的阳性表达。②RT-qPCR结果显示尼古丁可上调BV-2细胞α7nAChRmRNA和P2X4RmRNA的表达,α7nAChR特异性拮抗剂MLA可抑制α7nAChRmRNA和P2X4RmRNA表达的上调;Westernblot结果显示尼古丁处理可使BV-2细胞α7nAChR和P2X4R蛋白的表达上调,α7nAChR特异性拮抗剂MLA可抑制α7nAChR和P2X4R蛋白表达的上调。③ELISA检测培养液中BDNF含量结果显示：Nieofine＋ATP组较Nieofine＋DMEM组和Control组显著增多（P〈0．05）,Nicotine＋DMEM组较Control组增多（P〈0．05）;Nicotine＋5-BDBD组较Nicotine＋DMEM组和Control组显著减少（P〈0．05）.结论尼古丁可能通过α7nAChR上调小胶质细胞上P2X4R的表达进而通过BDNF的释放引起痛觉过敏的产生。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞与肿瘤免疫的研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)是一类具有免疫调节功能的T细胞亚群,可通过直接接触和细胞因子依赖等方式下调机体免疫反应,维持自身免疫耐受。近年来,Treg细胞已成为自身免疫、肿瘤免疫及移植免疫等领域的研究热点。本文就该类细胞的研究现状及其在肿瘤治疗方面的作用进行简要综述。     

大黄素对大鼠肝移植后CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的研究大黄素对大鼠肝移植后CD4+CD25+调节性T细胞的比例以及对其免疫抑制功能的影响。方法双袖套法建立大鼠原位肝移植模型,以大黄素和环孢素A(CsA)分别在术后腹腔给药,并以给予PBS作为模型对照组,观察不同药物移植后大鼠存活时间的影响,以及对移植术后大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregulatory cells,Treg)亚群的变化以及免疫功能的影响。结果大黄素能显著延长大鼠原位肝移植的术后成活时间,大黄素组大鼠的平均存活时间(17.4±2.5)d与肝移植模型对照组(8.8±1.9)d相比差异具有统计学意义;大鼠肝移植后大黄素给药可显著上调受体大鼠外周血以及肝内CD4+CD25+Treg的比例,并显著增强CD4+CD25+Treg抑制效应性T细胞的增殖能力(P0.05)。结论大黄素能够延长大鼠原位肝移植的术后成活时间,并可能通过上调外周血以及肝内CD4+CD25+Treg的数量及免疫抑制功能来实现移植后免疫排斥反应的抑制。     

调节性CD4~+CD25~+T细胞的分离纯化及免疫功能研究

目的 制备调节性CD~+ CD25~+T细胞(Treg)分析其免疫功能,诱导局部免疫耐受防治同种异体复合组织移植(CTA)排斥反应.方法 采用免疫磁珠法(MACS)从雄性大鼠脾脏细胞分离CD4~+CD25~+Treg(1×10~6),2%锥虫蓝染色检测活性、流式细胞术分析其纯度,在5 mg/L抗CD3的刺激下观察其反应性、增殖及其与200 U/ml细胞介素(IL)-2的关系.结果 从8只雄性大鼠脾脏分选出的CD4~+CD25~+Treg活性平均为(97.90±0.36)%及纯度为(96.05±0.41)%,CD3刺激呈低反应,按比例培养抑制率为89%,IL-2可使CD4~+CD25~-抑制逆转.结论 MACS能快速分选出较高纯度的CD4~+CD25~+Treg,并且活性良好在体外具有免疫无能及免疫抑制作用,能满足动物CTA排斥反应研究的需要.     

信号转导和转录激活因子5在小鼠CD4+CD25+调节性T细胞中的表达

目的:观察信号转导和转录激活因子5(STAT5)在小鼠CD4+CD25+调节性T细胞中的表达情况.方法:免疫磁珠法分离C57BL/6J小鼠脾脏中的CD4+CD25+调节性T细胞,共聚焦荧光法检测细胞内STAT5的分布并进行初步定位,进一步采用Western blot技术从蛋白水平检测细胞内STAT5的表达.结果:激光共...     

七氟醚麻醉对大鼠海马α7烟碱型乙酰胆碱受体、胆碱酯酶和胆碱乙酰移位酶蛋白含量的影响

目的研究七氟醚麻醉对大鼠海马α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAchR)、胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰移位酶(ChaT)蛋白含量的影响。方法健康SD新生大鼠120只,雌雄不拘,1周龄,随机分为五组:空白组、空氧组、七氟醚组(SEV组)、α7nAchR激动剂组(PNU组)和α7nAchR拮抗剂组(MLA组),每组24只。空白组自由喂养;空氧组吸入60%的氧气即运载气体(1 L/min O_2+1 L/min空气)2 h;SEV组吸入3.4%七氟醚+运载气体2 h;PNU组单次腹腔注射α7nAchR激动剂PNU-282987,24 h后吸入3.4%七氟醚+运载气体2 h;MLA组单次腹腔注射α7nAchR拮抗剂甲基牛扁亭,24 h后吸入3.4%七氟醚+运载气体2 h。麻醉清醒后2 h、1周、4周取海马组织,采用Western blot法测定α7nAchR、AChE、ChaT蛋白含量。结果麻醉清醒后2 h SEV组、PNU组、MLA组α7nAchR蛋白含量明显低于空氧组(P0.05);PNU组、MLA组AChE蛋白含量明显高于空氧组(P0.05);SEV组、PNU组、MLA组ChaT蛋白含量明显低于空氧组(P0.05)。麻醉清醒后1周空白组、SEV组、PNU组海马中α7nAchR蛋白含量明显高于空氧组(P0.05),MLA组α7nAchR蛋白含量明显低于空氧组(P0.05);空白组、PNU组AChE蛋白含量明显高于空氧组(P0.05);空白组ChaT蛋白含量明显高于空氧组,SEV组ChaT蛋白含量明显低于空氧组(P0.05)。麻醉清醒后4周五组AChE蛋白含量差异无统计学意义;SEV组α7nAchR蛋白含量明显高于空白组,PUN组和MLA组明显低于空白组(P0.05);空白组、SEV组和PNU组ChaT蛋白含量明显低于空氧组,MLA组明显高于空氧组(P0.05)。结论吸入七氟醚后能抑制ChaT、α7nAChR;对AChE并无直接作用;α7nAChR激动剂能有效缓解吸入七氟醚对α7nAChR、ChaT抑制作用,并在1周左右达到高峰;氧浓度在60%左右能增加α7nAChR蛋白含量,一定程度对抗七氟醚抑制作用。     

乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的分子表达研究

目的:分析乙型肝炎患者外周血Tregs水平并探讨其在HBV感染者中发病机制的作用.方法:采用流式细胞术检测不同类型乙型肝炎患者及健康对照组外周血Tregs的水平及应用荧光定量PCR技术测定其血清中HBvDNA载量.结果:①慢性乙型肝炎组(CHB)Tregs表达率较急性乙型肝炎组(AHB)有明显差异(P＜0.05),与无症状携带者组及健康对照组则有显著差异(P均＜0.01);②AHB组较健康对照组的稍低,但无统计学意义(P>0.05),且明显低于CHB组(P＜0.01)；③无症状携带者组与健康对照组相比无显著差异(P＞0.05).④CHB组外周血HBVDNA载量较其他三组明显偏低(P＜0.01)；AHB组与无症状携带者组、健康对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).⑤不同类型HBV感染患者外周血Tregs表达率与HBVDNA载量呈正相关.结论:①外周血Tregs表达的水平与乙肝患者病情轻重有一定关系,它在乙型肝炎持续感染中可能发挥了重要作用.②不同类型HBV感染患者外周血Tregs表达率与HBVDNA载量呈正相关.     

CD4+CD25+调节性T细胞与移植免疫耐受

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞是一类具有特殊免疫调节功能的T细胞亚群,它所介导的免疫抑制在移植免疫耐受的诱导和维持中起关键作用。本文对近年来CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的作用机制及免疫耐受等方面的研究进行了综述。     

α7烟碱型胆碱能受体调节胆管癌细胞化疗敏感性的相关探讨

目的 观察尼古丁对胆管癌细胞QBC939化疗敏感性影响,并初步探讨其作用靶点.方法 应用MTT法检测α7烟碱型胆碱能受体激动剂尼古丁及其阻断剂α银环蛇毒素(α-BTX)干预后的人胆管癌细胞QBC939经5-FU处理后存活增生能力变化,应用单克降平板试验观察尼古丁及α银环蛇毒素对5-FU处理后细胞克降形成率变化.结果 经5-FU处理后,尼古丁刺激组(终浓度分别为10-3 g/L、10-4 g/L、10-5g/L)细胞存活率分别为128％、124％、118％,细胞存活率较阴性对照组明显升高,并呈一定的浓度依赖性,而α银环蛇毒素刺激组(2 μg/mL)、尼古丁α银环蛇毒素联合组细胞存活率分别为92％、94％、93％、92％.尼古丁刺激组(6.2±0.40)的克隆形成能力明显高于α银环蛇毒素刺激组(3.2±0.20)、联合组(3.2±0.20)及对照组(3.4±0.33).结论 尼古丁可明显降低胆管癌细胞对化疗药物的敏感性,其可能是通过α7烟碱型胆碱能受体发挥化疗抵抗效应.     

CD4+CD25+调节性T细胞与免疫耐受的研究进展

CD4 CD25 调节性T细胞的主要功能是抑制自身反应性T细胞,其在维持机体T细胞内环境稳定,调节和保持对自身抗原耐受之间的平衡以及移植免疫耐受方面具有重要作用。本文主要就CD4 CD25 调节性T细胞的功能、作用机制以及免疫抑制药物对调节性T细胞的影响等研究进展进行综述。     

反复自然流产患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的检测

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)在反复自然流产发病机制中的作用。方法:应用流式细胞术检测29例原因不明的反复自然流产妇女(URSA组)和20例正常妊娠妇女(正常对照组)外周血中CD4+CD25+Tr的比例。结果:URSA组外周血中CD4+CD25brightTr百分率[(1.98±0.96)%]显著低于正常对照组[(3.21±1.25)%,P<0.05],而2组间CD4+CD25+总百分率、CD4+CD25dim细胞百分率以及CD4+CD25bright/CD4+比值均无显著性差异(P均>0.05)。结论:URSA的发生可能与患者CD4+CD25brightTr比例下降有关,CD4+CD25brightTr在母胎免疫耐受中发挥重要作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞与免疫耐受的研究进展

CD4＋CD25＋调节性T细胞的主要功能是抑制自身反应性T细胞,对于维持机体T细胞内环境的稳定,调节和保持对自身抗原耐受之间的平衡以及移植免疫耐受具有重要作用。本文主要就CD4＋CD25＋调节性T细胞的功能和作用机制以及免疫抑制药物对其的影响等研究进展进行综述。     

CD4+CD25+调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植自发性免疫耐受状态中的作用

目的 探讨CD4+CD25+调节性T细胞在维持小鼠肝脏移植免疫耐受状态中的作用.方法 进行小鼠原位肝脏移植,诱导出移植免疫耐受后,向受体注射抗CD25抗体(PC61)以去除CD4+CD25+T细胞,检测受体内CD4+CD25+T细胞数量及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)的表达以确定CD4+CD25+T细胞完全被清除,同时观察受体生存时间.结果 与同种同系小鼠肝脏移植结果 相似,同种异系肝脏移植小鼠的生存时间亦均超过70 d.移植免疫耐受诱导后,PC61不同注射方案均能完全去除受体小鼠肝脏、脾脏及血液中的CD4+CD25+T细胞,且移植肝脏中Foxp3 mRNA的表达也明显降低,表明完全去除了CD4+CD25+调节性T细胞,但肝脏移植动物生存时间并未受到影响.结论 CD4+CD25+调节性T细胞对于小鼠肝脏移植自发性免疫耐受的维持并非必需.     

胃癌患者手术前后CD4+CD25+调节性T细胞的变化

目的 研究胃癌患者手术前、后调节性T细胞(Treg)及FoxP3表达的变化.方法 采用流式细胞术检测20例胃癌患者术前及其中15例接受了手术者术后1周(简称术后)以及15例因胃部不适接受胃镜检查的自愿者(正常对照组)外周血中Treg数量的变化,用RT-PCR法检测Treg的特异性分子标志物FoxP3的转录水平,同时用免疫组织化学法检测胃癌组织中FoxP3蛋白的表达情况.结果 胃癌患者术前外周血中CD4+T细胞中的CD4+ CD25+比例明显高于正常对照组[(19.39±5.58)%比(9.91±3.23)%,P＜0.01],而术后CD4+ CD25+比例较术前明显下降[(13.50±5.93)%比(19.39±5.58)%,P＜0.05].胃癌患者术前外周血中FoxP3转录水平明显高于正常对照组(0.86±0.03比0.64±0.02,P＜0.01),而术后较术前明显下降(0.73±0.04比0.86±0.03,P＜0.05),提示FoxP3转录水平与Treg变化一致.胃癌患者外周血中CD4+T细胞在单个核细胞中的比例与正常对照组相比明显下降(P＜0.01),而手术前、后变化不明显.20例胃癌患者中13例胃癌癌细胞的细胞浆中有不同程度的FoxP3蛋白表达(强阳性2例,中阳性6例,弱阳性5例),7例胃癌患者的胃癌细胞中不表达.结论 Treg可能通过免疫抑制作用在胃癌的发生、发展中发挥作用,肿瘤组织本身可能是引起Treg变化的重要始动因素.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞体内外培养扩增方法的研究进展

随着医学的进步及外科技术的提升,器官移植已成为治疗终末期疾病的有效手段。免疫抑制剂的出现对器官移植的发展具有划时代的意义,在移植术中及术后应用免疫抑制剂可避免、减轻或逆转排斥反应,从而大大提高了移植物的存活率。然而,应用免疫抑制剂的同时也带来了一系列问题,如感染几率增加、恶性肿瘤发生率升高、费用昂贵并且需要实时监测血药浓度等。诱导和维持移植物与受体之间产生免疫耐受,被认为是解决这一问题的有效办法,即在不使用免疫抑制剂的情况下使移植物获得与自身组织相同的地位而长期存活,同时又不损伤免疫系统对其他非己抗原的反应性。     

CD4+CD25+调节性T细胞对小鼠肝脏移植自发性免疫耐受的影响

目的 研究CD4+CD25+调节性T细胞在诱导自发性肝脏免疫耐受中的作用.方法 向受体和供体注射抗CD25抗体(PC61)后进行小鼠原位肝脏移植,观测其生存时间.术后20～30 d切取移植肝脏行HE染色,同时观察CD4+CD25+T细胞对CD4+T细胞和CD8+T细胞功能的影响.结果 去除受体而不是供体小鼠的CD4+CD25+T细胞可以导致肝移植排斥反应.而且,去除CD4+CD25+T细胞使移植物的白细胞浸润明显增多,组织损伤加重.同时,去除CD4+CD25+T细胞导致CD4+T细胞的增殖活性和CD8+T细胞的细胞毒活性明显增强.结论 受体来源的CD4+CD25+调节性T细胞在小鼠肝脏移植免疫耐受诱导中起重要作用.

Abstract：

Objective To examine the contribution of CD4+ CD25+ regulatory T cells to liver transplant tolerance. Methods After injection of anti-CD25 monoclonal antibody (mAb, PC61), mouse orthotopic liver transplantation was performed and survivals were determined. The paraffin-embedded sections of hepatic allografts were cut and stained with hematoxylin and eosin (HE). Furthermore, the effect of CD4+ CD25+ regulatory T cells on proliferative response of CD4+ T cells and cytotoxicity of CD8+ T cells was examined by depleting these regulatory T cells. Results Depletion of these cells in the recipients but not in the donors before liver transplantation caused rejection. Histological analyses of hepatic allografts with PC61 treatment showed extensive leukocyte infiltration and tissue destruction, whereas those in the control group showed minimal changes. Moreover, elimination of CD4+CD25+ T cells resulted in the enhancement of both proliferative response of CD4+ T cells and cytotoxicity of CD8+ T cells against donor-type alloantigen. Conclusions These results suggest that CD4+CD25+ regulatory T cells were important for tolerance induction to hepatic allografts.