T细胞受体疫苗与类风湿关节炎

类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis,RA)是一种主要累及多关节的全身病变 ,是我国最常见的风湿性疾病之一 ,在病变关节的滑膜组织中可以看到大量的滑膜衬里细胞增生 ,血管周围T淋巴细胞聚集。大量的研究证实 ,T细胞介导的免疫反应异常是RA的主要发病机制 ,RA实质上是一种T细胞介导的炎症性关节炎。在RA患者的滑膜中 ,有大量的单个核细胞浸润 ,其中 30 %～ 5 0 %是T淋巴细胞 ,而且这些T淋巴细胞绝大多数都处于被激活状态[1] ,活化的T淋巴细胞与滑膜巨噬细胞直接作用 ,分泌细胞因子 ,刺激滑膜细胞释放胶原酶和蛋白酶 ,造成软骨和骨损害 …     

类风湿关节炎患者T细胞抗原受体BV基因的限制性取用初步研究

目的 研究类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）患者病灶部位即关节滑膜组织浸润的受某种自身抗原驱动的T淋巴细胞抗原受体（T cell receptor，TCP）β链的取用格局。方法 采用实时定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）的方法分析RA患者病灶部位T淋巴细胞抗原受体β链的取用：采用PCR—SSP方法对所调查的RA患者的人类自细胞抗原（human leucocyte antigen，HLA）进行了分型。结果 研究发现中国人群RA患者病灶关节滑膜浸润的T淋巴细胞抗原受体主要取用BV14和BV16家族：中国人群RA患者HLA基因型主要以HLA DRBI＊0405为主要特征，与白种人RA患者不同。结论 研究提示中国人群RA患者病灶区自身反应性T细胞具有TCR BV14和BV16的限制性取用．其中TCR BV16的偏移为国内外首次报道。而HLADRBI＊0405类风湿关节炎患者表现出TCR BV16取用的趋势，提示TCR BV16取用受主要组织相容性复合体（MHC）的约束，这为进一步分析诱发RA的发生的免疫异常和自身反应性T细胞的生物学特陛提供了重要试验基础。     

CXCR3 CCR5及其配体在类风湿关节炎患者滑液和外周血中的表达

目的 在单细胞水平上，研究类风湿关节炎（RA）患者滑液及外周血中单核/巨噬细胞，T淋巴细胞上趋化因子受体CCR5及ＣＸＣＲ３的表达。并测定CCR5的配体MIP-1β。激活正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）及T细胞亚群，探讨其在RA发病中的作用机制。方法 分离RA患者滑液单个核细胞（SFMC），外周血单个核细胞（PBMC）及正常人PBMC（对照），以三色荧光素标记物进行流式细胞术分析CD14^ ,CD3^ 细胞膜表面趋化因子受体CCR5，CCR3及细胞内趋化因子MIP-1β，RANTES和细胞因子白细胞介素（IL）-4，干扰素（IFN）-γ的表达率。结果 与PBMC相比，RA患者SFMC中的单核/巨噬细胞，T细胞上趋化因子受体CCR4及CEXR3表达显著增高；且单核/巨噬细胞分泌趋化因子MIP-1β，RANTES的百分比较高；SFMC中Th1细胞亚群（即IFN-γ^ T细胞）的表达率与滑液及外周血中T淋巴细胞上趋化因子受体CCR4及CXCR3的表达率显著相关。结论 趋化因子受体CCR5^ ,CXCR3^ 的单核/巨噬细胞，T细胞积聚在RA患者的病变关节内，且单核/巨噬细胞分泌较多趋化因子；CCR5，CXCR3可能参与调节细胞移动。与Th1细胞亚群及其“伙伴”细胞在RA关节内积聚有关；可能与RA的发病相关。     

IL-2诱导类风湿关节炎与骨关节炎T淋巴细胞STAT3 STAT5酪氨酸磷酸化状态的比较

目的观察白细胞介素(IL)-2作用于类风湿关节炎(RA)与骨关节炎(OA)外周血T淋巴细胞前后,T淋巴细胞中STAT3及STAT5的酪氨酸磷酸化活化状态,并进行比较.方法从RA与OA患者的外周血中分离培养单个核细胞,继而纯化得到T淋巴细胞,静息后,用重组人IL-2刺激,在各时相裂解细胞,收获提取蛋白,进行Western blot分析.结果在静息后,RA与OA的外周血T淋巴细胞中STAT3与STAT5均处于极低水平磷酸化的状态;在IL-2作用后,T淋巴细胞中STAT3和STAT5发生时相性的酪氨酸磷酸化,而RA的T淋巴细胞磷酸化程度较OA显著增高.结论IL-2对RA患者T淋巴细胞的STAT3和STAT5过度激活,引起T淋巴细胞中IL-2信号传导的异常放大效应,可能在RA的发病过程中发挥重要作用.     

沙利度胺对类风湿关节炎T淋巴细胞的免疫调节作用

目的 探讨沙利度胺(Thd)对类风湿关节炎(RA)患者外周血T淋巴细胞的免疫调节作用.方法 在植物血凝素(PHA)刺激下,RA患者外周血T淋巴细胞与不同浓度的Thd(2.5、25、100、300、500μg/ml)共同培养.用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测T淋巴细胞的增殖,用流式细胞术检测T淋巴细胞的凋亡和T淋巴细胞CD152、CD28的表达情况,用Real-time聚合酶链反应(PCR)检测T淋巴细胞的自细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达水平.结果 在体外,与阴性对照组相比,500μg/ml,Thd组显著抑制T淋巴细胞的增殖,促进T淋巴细胞早期凋亡,抑制T淋巴细胞CD3+CD28+表达,促进CD8+CD152+表达,而≤300μg/ml,对T淋巴细胞未见明显影响.与对照组相比,(100～500)μg/ml剂量组可抑制T淋巴细胞IL-6、TNF-α mRNA表达,(2.5～500)μg/ml可促进IL-10 mRNA的表达.结论 Thd可能通过影响RA患者外周血T淋巴细胞增殖、早期凋亡、CD3*CD28+和CD8+CD152+表达,以及IL-6、IL-10、TNF-α mRNA表达,反转RA患者的免疫平衡失控.     

类风湿关节炎患者外周血CD4^＋F淋巴细胞基因表达谱研究探讨

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种严重危害人类健康的慢性自身免疫性疾病，其发病机制不十分明确，一直是国内外医学界关注的课题。研究表明，RA发病与CD4T淋巴细胞有密切关系。本研究应用基因芯片技术．对RA患者及正常人群外周血CD4^＋T细胞基因差异表达进行探索，为阐明RA发病机制提供基因组学基础。     

T细胞免疫核糖核酸治疗大鼠佐剂关节炎的研究

目的 探讨Ｔ细胞核糖酸（ｉＲＮＡ）是否可以通过调节机体免疫功能而影响关节炎病理生理过程，为类风湿关节炎治疗探索一条新路。方法 利用大鼠佐剂性关节炎（ＡＡ）动物模型，腹腔注射Ｔ细胞免疫核糖核酸，观察关节体积、关节指数及关节病理变化。结果 注射１０ｄ后，关节体积、关节指数与关节炎对照组比较差异均有显著性（Ｐ〈０．０５），病理结果显示滑膜组织增生及炎症细胞浸润均较关节炎对照组明显减轻。结论 Ｔ细胞ｉＲＮ     

淋巴细胞激活诱导的受体4-1BB在类风湿关节炎T淋巴细胞亚群上的表达

目的探讨类风湿关节炎(RA)T淋巴细胞上淋巴细胞激活诱导的受体4-1BB的表达及其作用机制。方法应用流式细胞术检测30例RA患者和20名正常对照者外周血T细胞活化前后4-1BB的表达。结果RA患者CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB明显高于正常对照组[表达百分率分别为(18．56±4．08)％,(10．33±2．13)％,(1．24±0．12)％,(0．87±0．09)％,P＜0．01],经抗CD3单抗体外刺激后CD4~ T和CD8~ T细胞表达的4-1BB均显著高于活化前[表达百分率为(33±4)％和(21±8)％,P＜0．01]。RA患者CD4~ T/CD8~ T比值明显升高,而且与4-1BB~ CD4~ T细胞数呈正相关关系(r=0．84,P＜0.01),另外4-1BB~ CD4~ T细胞数与血沉、IgA呈正相关关系(r=0．476,P＜0．05；r=0．659,P＜0．05)。结论RA患者T细胞表达的4-IBB在RA的发生发展中具有重要意义,4-1BB可能通过对CD4~ T活化与增殖参与关节炎症和免疫反应。     

T细胞免疫核糖核酸治疗大鼠佐剂关节炎的研究

目的　探讨T细胞免疫核糖核酸 (iRNA)是否可以通过调节机体免疫功能而影响关节炎病理生理过程 ,为类风湿关节炎治疗探索一条新路。方法　利用大鼠佐剂性关节炎 (AA)动物模型 ,腹腔注射T细胞免疫核糖核酸 ,观察关节体积、关节指数及关节病理变化。结果　注射 10d后 ,关节体积、关节指数与关节炎对照组比较差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ,病理结果显示滑膜组织增生及炎症细胞浸润均较关节炎对照组明显减轻。结论　T细胞iRNA调节免疫系统功能抑制关节炎病理生理过程 ,其机制可能是iRNA通过诱生大量细胞因子的作用。     

类风湿关节炎的炎症与T细胞的糖代谢的关系

RA是一种可导致关节破坏、畸形及功能障碍的自身免疫病,T细胞在RA的发病中起至关重要的作用。糖代谢的正常为T细胞供能在RA的发生中至关重要,因此,作者对近年T细胞的糖代谢在RA的发病机制研究作一综述,以期为RA的治疗寻找新的途径。     

利用T淋巴细胞受体ξ链的变化预测肿瘤坏死因子拮抗剂治疗类风湿关节炎的疗效

目的 探讨ξ链呈低水平表达T淋巴细胞(TCRξ~(dim)T淋巴细胞)在预测类风湿关节炎(RA)患者对肿瘤坏死因子(TNF)拮抗剂疗效反应中的意义,寻找早期预测患者对生物制剂疗效反应的指标.方法 12例血清学阳性的活动性(DAS28＞5.1)RA患者接受了标准方案的英夫利西单抗治疗,在第14周和第30厨时根据欧洲抗风湿联盟(EULAR)临床疗效反应标准对患者的疗效进行评价,并将患者分为疗效显著、疗效中等、疗效不佳3组.每例患者在英夫利西单抗治疗前以及治疗第14周和第30周时采集外周血,采用流式细胞仪的方法对系列标本中不同细胞亚群、TCRξ的表达水平进行研究,并对TCRξ~(dim)T淋巴细胞的移动能力进行分析,并将疗效与TCRξ~(dim)T淋巴细胞的变化进行相关分析.结果 TCRξ~(dim) T淋巴细胞具有很强的移动能力,它们选择性地由外周血向炎症部位移动,导致RA滑液中TCRξ~(dim) T淋巴细胞的数量明显多于相应的外周血(P＜0.05).12例患者中3例疗效显著,6例疗效中等,3例疗效不佳.用药至第30周时临床反应判定为良好的患者,在第14周时外周血中均有CD4~+TCRξ~(dim) T淋巴细胞的聚集;而疗效不佳的患者外周血中这群细胞数量反而下降;14周时TCRξ~(dim) T淋巴细胞变化的百分数与30周时DAS28评分之间密切相关(r~2=0.6835,P＜0.01).结论 TNF拮抗剂是治疗RA有效的药物,用药至第14周时外周血中TCRξ~(dim) T淋巴细胞数量的变化可以预测用药至第30周时的疗效,阻止TCRξ~(dim)效应T淋巴细胞由外周血向关节腔的移动是TNF拮抗剂在RA中发挥作用的重要机制.     

类风湿关节炎患者外周血CD4 T细胞关节局部趋化机制

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4 T细胞比例变化情况及其对关节局部趋化的机制。方法流式细胞术分析RA患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4 T细胞的比例,并分析CD4 T细胞比例与RA疾病活动性评分系统(DAS28)评分间的关系。激光共聚焦方法检测RA患者滑膜局部浸润CD4 T细胞情况。流式细胞术分析RA患者CD4 T细胞表面趋化因子受体表达情况。结果与对照组相比,RA患者外周血PBMC中CD4 T细胞的比例显著降低(P0.01),且RA患者外周血CD4 T细胞比例与DAS28评分呈明显负相关(r=-0.753 0,P=0.001 2)。关节局部CD4 T细胞浸润的激光共聚焦结果显示,与对照组相比,RA患者滑膜中具有更多的CD4 T细胞浸润。趋化因子受体分析结果显示,RA患者外周血CD4 T细胞表面CCR5、CXCR1和CXCR3的表达显著升高(P0.01)。结论 RA患者外周血CD4 T细胞表面表达升高的CCR5、CXCR1和CXCR3可能参与外周血CD4 T细胞向滑膜局部的趋化。     

他克莫司对类风湿关节炎关节滑膜液淋巴细胞协同刺激分子的作用

目的研究他克莫司对类风湿关节炎（RA）患者关节滑膜液淋巴细胞协同刺激分子的作用．并初步探讨其免疫抑制的机制。方法分离培养RA关节滑膜液淋巴细胞，经100nmol/L的他克莫司处理后．用流式细胞仪检测T淋巴细胞协同刺激分子CD28、CD154（CD40L）和B淋巴细胞协同刺激分子CD80、CD86、CD40的表达。同时检测T、B淋巴细胞活化标志CD69、CD25、HLA—DR和CD71的表达．用酶联免疫吸附法（ELISA）检测淋巴细胞培养上清Th1细胞分泌的细胞因子白细胞介素（IL）-2、干扰素（IFN）-γ和Th2细胞分泌的细胞因子IL-6、IL-10的水平，并设不加他克莫司处理的为对照组。结果经他克莫司处理后。T淋巴细胞的CD154（CD40L）和B淋巴细胞的CD86表达阳性率低于对照组（P〈0．05），而T淋巴细胞的CD28和B淋巴细胞的CD80、CD40表达阳性率与对照组相比差异无统计学意义；T、B淋巴细胞的HLA—DR表达阳性率明显低于对照组（P〈0．01），而CD69、CD25、CD71表达阳性率与对照组相比差异无统计学意义；淋巴细胞培养上清Th1细胞分泌的细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2细胞分泌的细胞因子IL-6、IL-10的水平与对照组相比均显著下降（P〈0．01）。结论他克莫司能明显抑制RA关节滑膜液淋巴细胞的活化，降低Th1细胞因子和Th2细胞因子的分泌水平，这种作用可能是通过下调淋巴细胞的协同刺激分子的表达而实现。     

CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞在类风湿关节炎患者外周血中的表达及意义

目的 检测调节性T淋巴细胞新旧标志在活动性类风湿关节炎(RA)患者外周血中的表达,探讨用CD127代替FOXP3对调节性T淋巴细胞进行研究的可能性.方法 选取活动性RA患者32例,其中未经缓解病情抗风湿药(DMARDs)治疗者20例,经DMARDs治疗效果不佳者12例,以25例原发性干燥综合征(pSS)患者和24名健康人作为对照,采用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+CD127low/-及CD4*CD25+FOXP3+T淋巴细胞的比例,同时检测外周血C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、免疫球蛋白、补体等水平并进行相关性分析.结果 RA患者CD4+CD25highT淋巴细胞百分率与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).其CD4+CD25+FOXP3+T淋巴细胞与CD+CD25+CD127low/-T淋巴细胞的百分率均低于健康对照组(P<0.05),但CD4+D25+FOXP3+、CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞在RA患者与pSS患者中的表达差异无统计学意义(P>0.05);这三群细胞的表达水平在RA未经治疗组和治疗效果不佳组之间差异均无统计学意义(P>0.05). RA患者CD4+CD25+FOXP3+T淋巴细胞与CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞之间呈明显正相关(r=0.698,P=0.001),但这两群细胞与患者的CRP、ESR等水平及抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、类风湿因子(RF)均无相关性(P>0.05).结论 活动性RA患者外周血中,CD4+CD25+CD127low/-T淋巴细胞的百分率降低,并且与CD4+CD25+FOXP3+T淋巴细胞呈显著正相关性,提示CD127可能被作为Treg细胞中FOXP3的替代标记.     

强直性脊柱炎患者外周血T淋巴细胞亚群和T淋巴细胞上CD154表达的变化和意义

目的 探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血T淋巴细胞亚群分布和T淋巴细胞上共刺激分子CD154的表达及依那西普治疗对其的影响.方法 用流式细胞仪检测66例AS患者(其中活动期39例,非活动期27例;按临床特征分为外周关节和中轴均受累者35例和单独中轴受累31例)、30例类风湿关节炎(RA)患者及30名健康志愿者外周血T淋巴细胞亚群分布和CD154在CD3+T淋巴细胞上的表达.此外,观察39例AS活动期患者在随机双盲依那西普和安慰剂对照试验中,用药前后CD154的变化.结果 ①AS和RA患者CD4+T淋巴细胞均较健康志愿者高(P＜0.05),而CD8+T淋巴细胞较健康志愿者低(P＜0.05);AS患者外周血T细胞上CD154的表达较健康志愿者和RA患者都明显升高(P＜0.05);②活动期或外周关节受累AS患者T细胞CD154的表达分别较稳定期或单独中轴受累AS患者明显升高(P＜0.05);且CD154的表达与关节压痛数、关节肿胀数呈正相关(P＜0.05);③在依那西普试验的第6周,依那西普组AS患者(19例)T淋巴细胞CD154表达较安慰剂组(20例)明显下降(P＜0.05),与健康志愿者差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AS患者外周血存在T淋巴细胞亚群紊乱和T淋巴细胞上共刺激分子CD154异常表达,可作为临床评价AS病情活动性和依那西普疗效的生物指标之一.     

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞Rho激酶活性检测及其意义

目的 研究系统性红斑狼疮(SEE)患者外周血T细胞中Rho激酶(ROK)活化情况,并进一步探讨其临床意义.方法 收集SLE患者30例,健康人12名和类风湿关节炎(RA)患者8例作为对照组.外周血T细胞分离采用Rosettsep T细胞提取试剂盒提取,ROK活性用磷酸化MYPT1蛋白表达来表示,磷酸化MYPT1蛋白检测采用免疫印迹法,T细胞增殖采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法,细胞因子水平采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测.结果 新鲜分离的SLE患者外周血T细胞ROK活性均显著高于健康对照组和RA组;SLE患者T淋巴细胞在体外培养24 h后ROK活性与健康对照组差异无统计学意义;ROK特异性抑制剂Y27632显著抑制SLE患者T淋巴细胞增殖以及分泌自细胞介素(IL)-6,但对IL-10分泌无显著影响.中、重度病情活动的SLE患者外周血T淋巴细胞ROK活性显著高于轻度活动者(P均＜0.05).SLE患者关节炎、神经精神症状和蛋白尿表现阳性组T淋巴细胞ROK活性显著高于上述临床表现阴性组.结论 SLE患者T淋巴细胞存在ROK信号活化异常,并且可能与T淋巴细胞活化、狼疮? 疾病活动性和某些脏器损害有关.     

类风湿关节炎患者自身反应性T细胞受体氨基酸序列研究

目的 研究类风湿关节炎（RA）患者体内自身反应性T细胞的抗原瓦补区3（CDR3）的序列特性。方法 采用实时定量聚合酶链反应（PCR）的方法扩增带有BV14和BV16的自身反应性T细胞抗原受体β链，用基凶扫描的方法分析抗原互补区3的片断长度，用序列测定的方法分析CDR3的氨基酸序列。结果 RA患者关节滑膜浸润T细胞呈寡克隆扩增，带有BV14和BV16的自身反应性T细胞分别收用不同VDJ片段组合，自身反应性T细胞CDR3长度有15bp、21bp和24bp三种形式，在不同患者自身反应性T细胞CDR3中发现相同氨基酸序列。结论 RA患者自身反应性T细胞在病灶部位受到某些抗原的驱动而发生受体取用的偏移和CDR3的特异性扩增。     

Ⅱ型胶原特异性T细胞系与关节炎发病机制的研究

目的　建立Ⅱ型胶原特异性T细胞系 ,研究其对关节炎的诱导作用。方法　通过用弗氏完全佐剂乳化的鸡Ⅱ型胶原 (CCⅡ )皮内免疫注射诱导Wistar大鼠胶原诱导性关节炎 (CIA)。取CIA大鼠肠系膜淋巴细胞在体外用CCⅡ刺激扩增、建立CCⅡ反应性T细胞系。用3 H TdR掺入试验和流式细胞术分别测定其克隆扩增情况和表型格局。观察T细胞系过继转输后Wistar大鼠关节炎的发生情况 ,同时通过肉眼观察和组织化学法鉴定受体大鼠踝关节的病理特征 ;并用酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定血清中抗CCⅡ抗体。结果　成功建立T细胞系。通过用荧光素标记抗体作细胞表型分析显示 :所建细胞系 98 2 %为T细胞 ,其中 89 7%为CD4 + T细胞。过继转输试验结果显示 :当注入细胞为 5× 1 0 7时可导致 5 0 %大鼠产生关节炎 ,抗CCⅡ抗体也较对照组明显升高。结论　成功建立T细胞系 ;T细胞系转移关节炎的结果提示 :T细胞在CIA发病机制中具有重要作用。这为RA发病机制的研究和T细胞疫苗的治疗提供了实验依据     

T淋巴细胞参与调节甲状旁腺激素对骨代谢的作用

骨免疫学是研究骨代谢和免疫学之间相互作用的交叉学科,骨髓中T淋巴细胞参与了调节骨代谢的一系列反应。近年来,动物实验及临床试验结果提示:T淋巴细胞不仅可以直接分泌促进骨吸收和骨形成的细胞因子,还可以通过参与调节核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)/骨保护素(osteoprotegerin, OPG)、 Wnt等信号通路,调节骨髓基质细胞对甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)的反应,从而影响PTH的作用。本文回顾近年来的研究结果,就T淋巴细胞参与调节PTH相关作用做一综述。     

类风湿关节炎滑液和外周血中T细胞受体ξ链的低水平表达

目的探讨类风湿关节炎（RA）患者外周血和滑液中T细胞受体（TCR）ξ链的表达水平以及不同T淋巴细胞亚群的分布。方法采用细胞表面染色、细胞内染色和流式细胞仪的方法在单个细胞水平分析细胞的表面标记以及细胞内TCRξ的表达。结果RA患者外周血中CD45RB^bright和CD62L＋淋巴细胞的数量多于健康人，然而CD4^＋D25^＋调节T细胞的数量明显减少（P〈0．05）；体外的TCR刺激可以导致TCRξ表达的下降，但是肿瘤坏死因子（TNF）-α促使TCRξ的低水平表达处于持续状态；在健康人外周血中也可以检测到TCRξ^dimT细胞的存在；TCRξ^dimT细胞在RA外周血中的数量少于健康人外周血．但差异无统计学意义。活动性RA患者滑液中TCRξ的表达水平明显低于相应的外周血。结论TCRξ^dimT细胞可能为循环中的效应细胞，在炎症部位关节中聚集并在RA发病机制中起作用。