层黏连蛋白和纤维连接蛋白在小鼠肾小体发育中的表达

目的 观察层黏连蛋白(LN)和纤维连接蛋白(Fn)在小鼠肾小体发育过程中的表达规律,探讨其与肾小体发生发育的关系及作用.方法 采用免疫组织化学技术结合体视学方法定量检测LN和Fn的表达.结果 胚龄12d的胎鼠LN表达于输尿管芽周围,胚龄14d始,在各期肾小体的基膜均有表达.体视学测量发现,随着肾小体的发育成熟,其阳性表达的面密度值逐渐增多.Fn在除逗号小体以外的各期肾小体的基底膜处均有表达.体视学测量结果显示其表达量逐渐增加.结论 LN和Fn在小鼠肾小体发育和成熟过程中发挥重要作用.     

纤维黏连蛋白生物学特性与造血调控

纤维黏连蛋白是细胞外基质中的一种重要组成成份,具有多种生理功能,是体内的一种重要调整素,对造血细胞生成发育具有调节作用。笔者对纤维黏连蛋白的生化性质、生理功能及对造血细胞的调控作用作一综述。     

低温保存皮肤组织中纤维连接蛋白和层粘连蛋白的表达

目的：观察细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)在不同温度保存皮肤组织中的分布及表达，探讨其与皮肤冷冻保存的关系．方法：用FN，LN抗体对新鲜皮肤以及4℃，-20℃，-80℃或-196℃保存的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定并比较它们在表皮组织中的含量，并通过HE染色比较观察皮肤的组织结构变化。结果：与新鲜皮肤组相比，-196℃，H抗冻液中皮肤组织结构保存较好，FN，LN含量变化不明显，而4℃，-20℃，-80℃保存皮肤的组织结构均有明显破坏，FN，LN含量亦明显下降。结论：皮肤低温冷冻保存时细胞外基质中FN，LN发生丢失。     

创伤愈合中纤维连接蛋白、胶原及层粘连蛋白变化的研究

用免疫组化和组化方法观察火器伤伤口愈合过程中肉芽组织中纤维连接蛋白（Fn）、胶原及层粘连蛋白（Ln）的变化，并用计算机图象分析系统进行定量分析,结果发现伤后2周肉芽组织基质中Fn、胶原（不含Ⅳ型胶原）及Ln均较1周时增多（P＜0.05）。说明Fn、胶原及Ln对肉芽组织基质的形成起重要作用。     

低温储存对皮肤组织E-钙黏素和β-连接素表达的影响

目的：观察黏附分子E-钙黏素(E-cadherin)、β-连接素(β-catenin)在不同温度储存皮肤组织中的分布，以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法：用E-cadherin、β-catenin抗体对5种储存条件下的皮肤作免疫组化染色，用图像分析仪测定表皮组织中的含量。结果：与新鲜皮片组相比，-196℃ H抗冻液中储存皮肤组织结构保存较好，E-cadherin、β-catenin含量变化不明显，而4℃、-20℃、-80℃储存皮肤组织结构破坏明显，含量亦明显下降。结论：皮肤低温储存冷冻损伤与黏附分子破坏有关。     

盆腔结缔组织炎大鼠模型的层黏连蛋白表达

目的 建立混合菌液致SD大鼠盆腔结缔组织炎模型,研究大鼠盆腔黏连组织的病理学改变与层黏连蛋白表达.方法 用注射器将细菌混悬液0.5 mL,注入大鼠盆腔,并结合子宫穿孔手术,建立SD大鼠盆腔结缔组织炎模型.采用Philips分级评分法对大鼠盆腔黏连程度分级评分,切取黏连组织,用多聚甲醛固定,进行病理检测,并采用免疫组化法测定层黏连蛋白表达情况.结果 模型组大鼠盆腔黏连Philips分级评分以Ⅲ级为主,与正常对照组比较差异极显著.HE染色镜检模型组可见大量炎细胞浸润,脓肿形成,伴有多少不等的纤维组织增生.免疫组化染色镜检模型组可见层黏连蛋白高表达,纤维结缔组织增生程度越高,层黏连蛋白表达越多.结论 盆腔注射混合菌液并结合子宫穿孔手术,可作为建立大鼠盆腔结缔组织炎模型的方法.层黏连蛋白在盆腔结缔组织炎发病中起重要作用,参与整个炎症过程并维持盆腔黏连组织纤维化,可作为判断盆腔结缔组织炎的炎症和纤维化程度的参考指标.     

纤维黏连蛋白碎片增加整合素α5 β1在髓核细胞表达的研究

目的 探讨纤维黏连蛋白碎片对整合素α5和β1亚基在兔间盘髓核细胞上表达的影响.方法 体外分离和培养兔间盘髓核细胞,在培养液中加入纤维黏连蛋白碎片,通过免疫印迹技术、免疫荧光技术及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测整合素α5和β1亚基的表达情况,同时比较Ⅱ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶9和13(MMP9,13)的表达.结果 加入纤维黏连蛋白碎片后,髓核细胞的整合素α5和β1亚基表达明显增加,而Ⅱ型胶原蛋白表达下降,MMP9和MMP13的表达增加.结论 纤维黏连蛋白碎片可以诱导髓核细胞退变,同时可以增加整合素α5和β1亚基的表达.     

局部亚低温对大鼠脑缺血再灌注基质金属蛋白酶9及细胞外基质蛋白表达的影响

目的研究局部亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤时基质金属蛋白酶9(metalloproteinase 9,MMP9)、细胞外基质蛋白———层黏连蛋白(laminin,LN)和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响,为局部亚低温应用于脑缺血的临床治疗提供理论依据。方法改良线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,脑缺血时间为2 h,缺血即刻于大鼠头部放置冰块,脑温维持在32.5℃～33.5℃,并持续至再灌后1 h。采用12分评分法与2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法进行神经功能评分和脑梗死体积测定;免疫荧光方法测定检测缺血半暗带MMP9、LN及FN的表达。结果与正常体温再灌注组比较,局部亚低温再灌注组脑梗死体积百分比和神经功能评分均减小(P<0.01);脑组织MMP9表达降低(P<0.05),LN及FN表达升高(P<0.05)。结论在大鼠脑缺血再灌注损伤中,局部亚低温能够明显减小脑梗死体积,改善神经功能。局部亚低温可能通过减少MMP9的表达,增加LN及FN的表达发挥神经保护作用。     

基质金属蛋白酶-9与层黏连蛋白在原发性干燥综合征唇腺中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、层黏连蛋白(Laminin,LN)在原发性干燥综合征(Primary Sjgrens’s Syndrome,PSS)患者唇腺组织的表达及其与唇腺病理分级的相关性。方法采用免疫组化S-P法检测59例PSS患者,30例正常对照者唇腺中MMP-9,LN表达。结果原发性干燥综合征患者唇腺组织中MMP-9高表达,LN低表达,而对照组唇腺组织中MMP-9低表达,LN高表达;MMP-9的表达强度随唇腺病理分级升高而增强,LN的表达随唇腺病理分级升高而减弱;MMP-9与LN的表达呈现负相关性。结论MMP-9、LN在PSS患者唇腺组织中存在异常表达,并且二者的表达情况与病理分级相关。     

氨基胍和维生素C调节糖尿病大鼠主动脉层黏连蛋白B1 mRNA表达的研究

1 材料与方法 1.1 实验动物、仪器和试剂 雄性SD大鼠70只,2月龄,体质量200～250 g,购自中南大学动物部.怡成 SENTEST手持式快速全血葡萄糖测试仪,日丽7170型自动生化.氨基胍(AG, Sigma, Co.USA);维生素C(VitaminC, VitC,天津药业焦作有限公司,批号:040217-1);链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ, Sigma, Co. USA).     

低温冷冻对皮肤组织桥粒芯糖蛋白2表达的影响

目的:观察桥粒芯糖蛋白2(desmoglein2,Dsg2)在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用Dsg2抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,采用计算机图像定量分析方法测定表皮组织中的含量,并用H.E染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃温度条件下保存皮肤组织结构保存较好,Dsg2含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤可能与Dsg2破坏有关。     

低温储存对皮肤组织α辅肌动蛋白和纽蛋白表达的影响

目的:观察α辅肌动蛋白和纽蛋白在不同温度保存皮肤组织中的分布,以探讨其与皮肤冷冻损伤的关系。方法:用α-actinin、vinculin抗体对5种保存条件下的皮肤组织作免疫组化染色,用图像分析仪测定表皮组织中的含量,并用HE染色观察皮肤的组织结构变化。结果:与新鲜皮片组相比,-196℃H抗冻液中保存皮肤组织结构保存较好,α-actinin、vinculin含量变化不明显,而4℃、-20℃、-80℃保存皮肤组织结构破坏明显,含量亦明显下降。结论:皮肤低温保存冷冻损伤与黏附分子α-actinin、vinculin破坏有关。     

海藻糖对低温储存皮肤β-actin的mRNA转录水平及其蛋白表达的影响

目的:观察新型低温保护剂(cryoprotectant,CPA)海藻糖(trehalose)对皮肤骨架蛋白β-肌动蛋白(β-actin)表达及mRNA转录水平的调节作用,以了解在传统低温保护剂中添加海藻糖后是否优于单纯传统低温保护剂的作用。方法:实验将新鲜成人皮肤分为4组,分别经海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)、二甲基亚砜-去血清角质细胞培养液(D-K)、DMEM作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜皮肤为对照组。采用免疫组织化学染色及W estern b lot方法观察β-actin蛋白表达、采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β-actin基因水平进行深入的研究。结果:T-D组β-actin蛋白表达及基因转录与新鲜组相似(P>0.05),D-P作用其次,其余两组与新鲜组对比均降低明显(P<0.05)。结论:传统低温保护剂中添加海藻糖后对低温储存皮肤β-actin表达的保护作用优于单纯传统低温保护剂。     

IgA肾病患者尿中层粘蛋白、纤维连结蛋白的检测及其意义

利用单克隆抗体酶标夹心法检测了４４例ＩｇＡ肾病患者尿中层粘蛋白（ＬＮ）、纤维连结蛋白（ＦＮ）的含量，发现两者的含量均较正常人明显增高（Ｐ＜０．０１），且尿中ＬＮ及ＦＮ的含量与肾脏组织学病变的程度呈显著的正相关关系。尿中ＬＮ、ＦＮ的检测为临床提供了一种判断ＩｇＡ肾病病变程度以及预后的无创性评估方法     

Smad4反义寡核苷酸对高糖培养的人肾小球系膜细胞分泌纤连蛋白、层黏连蛋白的影响

目的 观察Smad4反义寡核苷酸(antioligodeoxynucleotide,antiODN)对体外高糖培养的人肾小球系膜细胞(human glomerular mesangial cells,HGMC)分泌纤连蛋白(fibronectin,FN),层黏连蛋白(laminin,LN)的影响.方法 用脂质体法将正义、反义、错义Smad4寡核苷酸瞬时转染体外培养的HGMC,并进行高糖培养,同时设立正常糖组、高糖组、甘露醇组、脂质体组为对照组,用ELISA法检测培养上清液中FN、LN的含量,进行统计学分析.结果 转染Smad4反义寡核苷酸的HGMC分泌的FN、LN量与正常对照组相比无统计学意义(P>0.05),而与高糖组、正义组、错义组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 随着高糖作用的时间延长,体外培养的HGMC分泌的FN、LN量逐渐增加,而转染Smad4 antiODN可以抑制高糖的刺激,减少FN、LN的表达,从而减少系膜细胞细胞外基质的堆积,为延缓肾脏纤维化提供了新的途径.     

蚕蚀性角膜溃疡中Ⅲ型胶原层粘连蛋白与纤维连接蛋白的表达

目的比较蚕蚀性角膜溃疡与正常角膜中Ⅲ型胶原、层粘连蛋白及纤维连接蛋白的定位与含量.方法应用间接免疫荧光技术检测蚕蚀性角膜溃疡与正常角膜中Ⅲ型胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白的分布.阳性结果应用图像分析系统进行定量分析.结果Ⅲ型胶原在正常角膜中无表达,在蚕蚀性角膜溃疡中分布在基质溃疡处.层粘连蛋白在正常角膜基底膜微量表达,在蚕蚀性角膜溃疡基底膜和Bowman's膜表达增多.纤维连接蛋白在正常角膜基底膜呈连续线状分布,在蚕蚀性角膜溃疡上皮层及基质溃疡处有表达,而在基底膜未见表达.结论蚕蚀性角膜溃疡上皮基底膜在其发病机制中可能发挥作用,需要进一步深入研究.     

层粘蛋白及受体在宫颈癌中的表达及意义

目的 探讨层粘蛋白及受体在人宫颈癌中表达及其临床意义。方法 应用SABC免疫组化法检测20例正常宫颈组织，26例宫颈原位癌，21例宫颈浸润癌Ⅰ－Ⅱ级，18例宫颈浸润癌Ⅲ级组织中层粘蛋白及受体的表达。结果 层粘蛋白在正常宫颈组织及原位癌中强表达，在宫颈浸润癌中间断或缺失，二者有显著性差异（P＜0．05）。层粘蛋白受体在正常宫颈组织及原位癌中阴性表达，在宫颈浸润癌中呈强阳性表达。有显著性差异（P＜0．05）。结论 层粘蛋白及受体在人宫颈浸润癌组织中有显著性改变，可为宫颈癌病理诊断及预后判断的标志。