蒿本内酯介导PI3K/AKT/mTOR信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护机制研究

目的:探究蒿本内酯介导PI3K/AKT/mTOR信号通路对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用机制.方法:40只大鼠随机分为假手术组、模型组、蒿本内酯组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组,每组各10只.采用改良大脑中动脉线栓法制作大鼠缺血再灌注损伤模型,比较各组大鼠神经行为学评分、脑梗死体积比值、细胞凋亡阳性细胞数,检测脑组织中凋亡相关因子以及PI3K/AKT/mTOR信号通路的表达水平.结果:蒿本内酯组神经行为学评分、脑梗死体积比值、细胞凋亡阳性细胞数低于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05);蒿本内酯组大鼠脑组织中凋亡相关因子Bcl2 mRNA水平高于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05),而Bax、caspase3 mRNA水平低于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05);蒿本内酯组大鼠脑组织中凋亡相关因子Bcl2蛋白及p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达高于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05),Bax、caspase3蛋白表达低于模型组和蒿本内酯+PI3K抑制剂LY294002组(P＜0.05).结论:蒿本内酯可通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路来抑制神经细胞凋亡,进而发挥对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用.     

苦参碱联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探究苦参碱（Mat）联合LY294002对人髓系白血病K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度Mat单药和联合LY294002对K562细胞增殖的影响;将K562细胞分为对照组、Mat组、LY294002组和Mat+LY294002组,分别采用0.4 g/L Mat及10μmol/L LY294002单独或联合干预48 h后,应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术annexinⅤ-FITC/PI双标记检测细胞凋亡,PI单标记检测细胞周期变化,Western blot法检测Mat联合LY294002对K562细胞p-mTOR、p-PI3K、Akt、p-Akt、CyclinD1、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,不同浓度Mat单药和联合LY294002均可抑制K562细胞的增殖,具有时间和浓度依赖性,且联合组增殖抑制率比单药组明显升高（P<0.01）。形态学检查显示,联合用药组比单药组凋亡表现更明显。流式细胞结果显示,与对照组及单药组相比,联合组显著促进细胞凋亡[（42.50±2.63）%,P...     

LY294002通过PI3K/Akt/Mtor对CD133+CD44+结直肠癌干细胞自我更新、增殖能力的影响

目的:探讨LY294002对CD133+CD44+结直肠癌干细胞自我更新、增殖能力的影响及其机制.方法: 通过流式细胞术从人结直肠癌HCT116细胞中分选CD133+CD44+的肿瘤干细胞(CSCs),不同浓度(10、20、30 μmol/L)LY294002作用CSCs,对照组不使用药物.成球实验及有限浓度稀释法检测细胞自我更新能力,细胞活性计数法及平板克隆实验检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及流式细胞术检测PI3K/Akt/mTOR信号通路基因Akt、磷酸化Akt、诱骗受体3(DcR3)、B淋巴细胞瘤-2(Bc--2)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达变化.结果: 与对照组相比,30 μmol/L LY294002作用实验组成球能力明显削弱(P＜0. 01),CSCs比例明显下降(P＜0. 05),增殖能力明显削弱(P＜0. 01),G0G1期细胞周期受到阻滞(P＜0. 01);磷酸化Akt表达降低(P＜0. 01),DcR3、Bcl-2、mTOR及Cyclin D1表达量下调(P＜0. 01).结论: LY294002可能通过PI3K/Akt/mTOR通路导致结直肠癌CSCs周期阻滞、抑制其自我更新、增殖能力.     

莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的：探讨莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法：采用CCK-8法检测不同浓度（5、10、25、50、100 μmol/L）莪术醇,0 μmol/L莪术醇为对照组,干预SKOV3细胞24 h、48 h的增殖抑制率,并计算IC50值;划痕实验和Transwell小室法分别检测细胞的迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测莪术醇及PI3K/AKT通路阻断剂LY294002对细胞PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达的影响。结果：莪术醇对SKOV3细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性但不呈现时间依赖性,IC50值为48 μmol/L;莪术醇能明显抑制SKOV3细胞的迁移与侵袭,促进其凋亡（均P＜0.01）,降低细胞PI3K、AKT总蛋白表达（均P＜0.05）,显著降低其活化形式p-PI3K、p-AKT的表达（均P＜0.01）;莪术醇与LY294002联用后表现出良好的协同作用,较单独用莪术醇时下调p-PI3K、p-AKT蛋白更为显著（P＜0.05）。结论：莪术醇能抑制SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭,并诱导其凋亡,其作用机制与抑制PI3K/AKT通路有关。     

1，25（OH）2D3对人系膜细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的影响

目的 观察1,25-二羟维生素D3〔1,25（OH）2D3〕对人系膜细胞（HMC）增殖及Akt、mTOR表达的影响,探讨PI3K/Akt信号通路在1,25（OH）2D3对HMC增殖调控中的作用。方法 体外培养HMC,取传代培养至第3～7代细胞分为4组：正常对照组（N组）、1,25（OH）2D3组（10-8 mol/L,VD组）、PI3K抑制剂干预组（LY294002 2 μg/ml,LY组）,LY294002（2 μg/ml）联合1,25（OH）2D3组（10-8 mol/L）组（LY+VD组）,干预48 h,倒置相差显微镜观察各组细胞生长,CCK-8法检测各组细胞增殖,流式细胞术检测各组细胞周期时相分布,Western blotting检测各组Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR表达的情况。结果 各实验组吸光度值（A值）比较,差异有统计学意义（F=281.641,P＜0.01）,其中VD组、LY组和LY+VD组A值均低于N组,LY+VD组A值均分别低于VD组和LY组,差异均有统计学意义（P＜0.01）。各实验组G2/M期比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。各实验组G1期、S期和PI比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;其中VD组、LY组和LY+VD组G1期均高于N组,S期和PI均低于N组,LY+VD组G1期均高于VD组,S期和PI均低于VD组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。各实验组Akt/β-actin、mTOR/β-actin灰度值比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。各实验组p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR灰度值比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中VD组、LY组和LY+VD组p-Akt/Akt、p-nmTOR/mTOR灰度值均低于N组,LY+VD组p-Akt/Akt、p-nmTOR/mTOR灰度值均低于VD组和LY组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 1,25-（OH）2D3可通过PI3K/Akt信号通路抑制体外培养HMC的增殖。     

急性白血病肺部感染病原菌分布情况及药敏研究

目的 探讨维生素D（vitamin D，VD）对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）大鼠卵巢颗粒细胞（granulosa cells，GCs）凋亡的影响。方法 选取3周龄SD雌性大鼠21只，采用随机数字表法分为对照组（n=6）和造模组（n=15），建立PCOS大鼠模型。造模组采用来曲唑[1mg/（kg·d），溶于0.5%羧甲纤维素钠溶液]灌胃联合高脂饲料喂养，对照组采用等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，给予普通饲料喂养，将12只造模成功的大鼠（3只造模失败），采用随机数字表法分为PCOS组（n=6）和PCOS+VD组（n=6），两组灌胃同等剂量玉米油，普通饲料喂养，连续21d。比较对照组、PCOS组和PCOS+VD组大鼠的动情周期、卵巢形态学变化，以及血清25羟维生素D[25 hydroxyvitam D，25-（OH）D]、睾酮（testosterone，T）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、促卵泡激素（follicle-stimulating hormone，FSH）水平。造模结束后，分离GCs进行体外培养，根据培养方式分为GCs对照组（n=6）、GCs-PCOS组（n=6）、GCs-（PCOS+VD）组（n=6）、GCs-（PCOS+ VD+LY294002）组（n=6）。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率，透射电镜观察细胞凋亡小体，蛋白免疫印迹法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达。结果 与对照组比较，PCOS组大鼠血清中T、LH水平升高，FSH、25-（OH）D水平降低，动情周期紊乱，卵巢呈多囊样改变，差异均有统计学意义（P<0.05）；与PCOS组比较，PCOS+VD组大鼠血清T、LH降低，FSH及25-（OH）D水平升高，动情周期恢复正常，囊状卵泡数量减少，差异均有统计学意义（P<0.05）。与GCs对照组比较，GCs-PCOS组GCs凋亡率及Bax蛋白表达增加，Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达减少，差异均有统计学意义（P<0.05）；与GCs-PCOS组比较，GCs-（PCOS+VD）组的GCs凋亡率及Bax蛋白表达降低，Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；与GCs-（PCOS+VD）组比较，GCs-（PCOS+VD+LY294002）组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 VD可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制GCs凋亡。     

维生素D对PCOS大鼠颗粒细胞凋亡的影响

目的 探讨维生素D（vitamin D，VD）对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）大鼠卵巢颗粒细胞（granulosa cells，GCs）凋亡的影响。方法 选取3周龄SD雌性大鼠21只，采用随机数字表法分为对照组（n=6）和造模组（n=15），建立PCOS大鼠模型。造模组采用来曲唑[1mg/（kg·d），溶于0.5%羧甲纤维素钠溶液]灌胃联合高脂饲料喂养，对照组采用等量的0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，给予普通饲料喂养，将12只造模成功的大鼠（3只造模失败），采用随机数字表法分为PCOS组（n=6）和PCOS+VD组（n=6），两组灌胃同等剂量玉米油，普通饲料喂养，连续21d。比较对照组、PCOS组和PCOS+VD组大鼠的动情周期、卵巢形态学变化，以及血清25羟维生素D[25 hydroxyvitam D，25-（OH）D]、睾酮（testosterone，T）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、促卵泡激素（follicle-stimulating hormone，FSH）水平。造模结束后，分离GCs进行体外培养，根据培养方式分为GCs对照组（n=6）、GCs-PCOS组（n=6）、GCs-（PCOS+VD）组（n=6）、GCs-（PCOS+ VD+LY294002）组（n=6）。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率，透射电镜观察细胞凋亡小体，蛋白免疫印迹法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达。结果 与对照组比较，PCOS组大鼠血清中T、LH水平升高，FSH、25-（OH）D水平降低，动情周期紊乱，卵巢呈多囊样改变，差异均有统计学意义（P<0.05）；与PCOS组比较，PCOS+VD组大鼠血清T、LH降低，FSH及25-（OH）D水平升高，动情周期恢复正常，囊状卵泡数量减少，差异均有统计学意义（P<0.05）。与GCs对照组比较，GCs-PCOS组GCs凋亡率及Bax蛋白表达增加，Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达减少，差异均有统计学意义（P<0.05）；与GCs-PCOS组比较，GCs-（PCOS+VD）组的GCs凋亡率及Bax蛋白表达降低，Bcl-2、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达增加，差异均有统计学意义（P<0.05）；与GCs-（PCOS+VD）组比较，GCs-（PCOS+VD+LY294002）组的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 VD可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制GCs凋亡。     

胰岛素样生长因子-2对婴幼儿血管瘤干细胞增殖及脂肪分化的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-2( IGF-2)对婴幼儿血管瘤干细胞(HemSCs)增殖及向脂肪分化的影响.方法 搜集3例增生期草莓状婴幼儿血管瘤术后组织,采用胶原酶消化分离后CD133免疫磁珠吸附得到血管瘤干细胞. CCK-8法检测不同浓度IGF-2对HemSCs增殖的影响,Western blot检测空白对照组及 IGF-2 组(100 ng/ml)、IGF-2 +OSI-906 组(IGF-2: 100 ng/ml; OSI-906: IGF-1R受体抑制剂1 μmol/L)、IGF-2+LY294002 组(LY294002: PI3K 抑制剂10 μmol/L)、LY294002组( 10 μmol/L)各组细胞中脂肪转化因子 C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ、adiponectin、p-AKT及total AKT的表达.结果 IGF-2在体外对HemSCs增殖有明显促进作用( P＜0. 05);Western blot法显示,与 IGF-2 +OSI-906 组、IGF-2+LY294002 组、 LY294002 组及空白对照组比较, IGF-2 组C/EBPα、C/EBPβ、 PPARγ、 adiponectin 表达量增加( P ＜0. 05);与IGF-2+OSI-906组、IGF-2+LY294002组及空白对照组比较, IGF-2 组 p-AKT 表达量增加( P ＜0. 05).结论 IGF-2可能通过 IGF-1R/PI3K/AKT通路影响 HemSCs的脂肪转化过程.     

miR-152-5p对肝癌细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制

目的 探讨miR-152-5p对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 采用RT-PCR检测正常肝细胞HL-7702和人肝癌细胞HepG2中miR-152-5p差异表达。将HepG2细胞系进行脂质体转染并分为：NC mimics组、miR-152-5p mimics、NC inhibitor组和miR-152-5p inhibitor组,采用RT-PCR检测细胞中miR-152-5p的表达水平,采用CCK-8法和EdU法检测各组细胞的活力及增殖能力,利用流式细胞术及Western blotting检测各组细胞凋亡率以及细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3的表达水平。HepG2细胞系进行脂质体转染并分为：NC inhibitor组、miR-152-5p inhibitor组、miR-152-5p inhibitor+LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂)组,应用Western blotting、EdU法和流式细胞术检测细胞PI3K/AKT通路相关蛋白PI3K(p-PI3K/PI3K)、AKT(p-AKT/AKT)的磷酸化水平、增殖...     

ARHI基因抑制胰腺癌细胞增殖的作用机制研究

目的 观察ARHI基因对胰腺癌细胞增殖的影响,探讨其抑制细胞增殖的机制。方法 2009年3-9月人胰腺癌细胞株PANC-1选自北京协和医院,根据转入质粒将培养细胞分为Control组（无转染质粒的PANC-1细胞）、Vector组（稳定表达pIRES2-EGFP质粒的PANC-1细胞）、ARHI组（稳定表达pIRES2-EGFP-ARHI质粒的PANC-1细胞）。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析3组胰腺癌细胞在培养第0、1、2、3、4、5天增殖情况;应用流式细胞仪检测3组胰腺癌细胞周期;通过Western blotting法检测3组ARHI、磷酸化丝氨酸蛋白激酶（p-AKT）、MDM2、p53、p21WAF1、丝氨酸蛋白激酶（AKT）表达;应用碘化丙啶（PI）-3K/AKT抑制剂LY294002干预ARHI组,检测ARHI、p-AKT、MDM2、p53、p21WAF1、AKT表达。结果 3组培养第1、2、3、4、5天细胞增殖情况比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Vector组培养第4、5天细胞增殖情况与Control组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;ARHI组培养第1、2、3、4、5天细胞增殖情况与Control组和Vector组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。3组细胞周期比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。Vector组G0-G1期、S期细胞所占比例与Control组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;ARHI组G0-G1期、S期细胞所占比例与Control组和Vector组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;ARHI组G2-M期细胞所占比例与Control组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。与Control组和Vector组相比,ARHI组p-AKT、MDM2表达降低,p53、p21WAF1表达增多,而AKT表达没有变化;ARHI组加入LY294002与未加入LY294002相比,p-AKT、MDM2表达降低,p53、p21WAF1表达增加,而ARHI、AKT表达没有变化。结论 ARHI基因通过抑制PI-3K/AKT/MDM2,导致p53、p21WAF1表达上调,在胰腺癌发生中起着重要的作用。     

华蟾素对非小细胞肺癌细胞株A549细胞增殖及PTEN/AKT/mTOR信号通路表达的影响

目的观察华蟾素对肺癌细胞A549及PTEN/AKT/mTOR信号通路蛋白表达的影响。方法在培养肺癌细胞株NCI-A549中分别加入不同浓度的华蟾素,应用细胞计数试剂盒-8检测24、48、72 h后细胞增殖活力,Ki67及EdU检测72 h细胞增殖活力,免疫印迹法检测磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白以及磷酸化第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因（phosphorylated-phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,p-PTEN）蛋白表达。结果0.2 μg/mL华蟾素作用于A549细胞株48 h后显示明显抑制增殖作用（P < 0.01）,0.8 μg/mL华蟾素处理12 h后均具有不同程度抑制增殖作用（P < 0.05~P < 0.01）。不同浓度华蟾素作用于细胞72 h后,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-S6、p-PTEN表达量均较对照组下降（P < 0.05~P < 0.01）,而PI3K、AKT、mTOR、S6及PTEN表达量与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。结论华蟾素可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白磷酸化,抑制肺癌细胞A549的增殖。     

含活血通络方血清对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞增殖作用的研究

目的 探究含活血通络方血清调控IncRNA MEG3对高糖诱导人视网膜血管内皮细胞（human retinal microvascular endothelialcells,hRMECs）增殖及凋亡的影响作用。方法 选取20只SD大鼠,采用随机数字表法对10只大鼠灌胃活血通络方,10只灌胃等量生理盐水。灌胃结束1h后制备相应血清。分别采用5mmol/L葡萄糖或30mmol/L的D-甘露醇、葡萄糖溶液对hRMECs细胞进行诱导24h。按照诱导情况将细胞分为正常对照组（5mmol/L葡萄糖,n=6）、等渗组（30mmol/LD-甘露醇,n=6）、高糖组（30mmol/L葡萄糖,n=6）、高糖+2.5%含药血清组（n=6）、高糖+7.5%含药血清组（n=6）、高糖+10%含药血清组（n=6）,相应血清干预24h。采用CCK-8法、酶联免疫吸附法检测细胞增殖情况及丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase,GSH-Px）含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time fluorescence...     

槲皮素对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞AKT/mTOR信号通路及自噬的影响

目的：分析槲皮素对人脐静脉内皮细胞自噬和增殖的影响,探讨其与AKT/mTOR信号通路调控的关系及机制。方法：培养人脐静脉内皮细胞,MTT法检测细胞活力,MDC染色法检测自噬泡水平,Western印迹检测自噬相关蛋白水平,运用3-MA研究槲皮素对自噬和细胞增殖的影响。结果：槲皮素能增加人脐静脉内皮细胞活力(P<0.01),上调细胞中MDC染色标记的荧光颗粒,并伴随浓度的上调明显增加(P<0.01),能促进脐静脉内皮细胞中自噬蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平表达(P<0.01),降低p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平(P<0.01)。与槲皮素组比较,槲皮素+3-MA组细胞活力和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均明显降低(P<0.05),p-mTOR/mTOR明显增加(P<0.05)。结论：槲皮素可通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导细胞自噬来调控脐静脉内皮细胞增殖。     

基于网络药理学分析灯盏乙素治疗动脉粥样硬化的分子机制和体内验证

  目的  基于网络药理学分析灯盏乙素（Scutellarin） 治疗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS） 潜在的分子生物学机制。  方法  通过PubChem数据库进行灯盏乙素潜在的靶点预测,运用Disgenet,CeneCards筛选与AS关联的靶基因,利用Cytoscape 3.9.0建立疾病-靶点-成份可视化网络,使用String构建蛋白互作网络图,利用David数据库进行GO及KECG的网络构建。另外,高脂喂养复制APOE-/-小鼠AS模型, 用不同浓度的灯盏乙素灌胃治疗,利用RT-PCR方法验证筛选所得核心通路的表达变化。  结果   （1）网络药理学预测结果:灯盏乙素治疗AS的核心靶点共有肿瘤坏死因子-α （TNF-α）,AKT丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT serine/threonine kinase,MAPK）,低密度脂蛋白受体（Low density lipoprotein receptor）,载脂蛋白E（apolipoprotein E,APOE）等共106个。灯盏乙素调控PI3K/AKT信号通路（hsa04151）、Ras信号通路（hsa04014）、MAPK信号通路（hsa04010）（P < 0.05）等涉及细胞的增殖,炎症反应,氧化应激,及细胞凋亡等生物学过程来治疗AS;（2） 体内实验验证的结果:和模型组相比,灯盏乙素组呈浓度依耐性地下调PI3K、AKT、mTOR和Bcl-2 的mRNA表达,上调Bax和Caspase-3的mRNA表达,（ P < 0.05）。另外,和模型组相比,灯盏乙素则呈浓度依耐性地下调小鼠血清TNF-α和IL-1β的含量（ P < 0.05）。  结论  经过网络药理学筛选和RT-PCR验证,灯盏乙素通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制APOE-/-小鼠AS模型炎症反应,促进细胞凋亡而治疗AS。     

逍遥散通过PI3K/AKT/mTOR通路调节mPFC-BLA髓鞘功能改善VaD小鼠焦虑抑郁行为

目的 研究逍遥散(XYP)对血管性痴呆(VaD)小鼠焦虑抑郁行为表型的作用及可能机制.方法 3月龄雄性C57BL/6小鼠,采用双侧颈总动脉狭窄术(BCAS)并给予慢性束缚应激(CRS),构建VaD伴焦虑抑郁小鼠模型.将造模小鼠分为模型组、氟西汀(阳性对照)组以及逍遥散低、中、高剂量组,对照组为假手术无束缚组.逍遥散低、...     

Ghrelin对脂肪间充质干细胞神经分化的影响

目的：探讨Ghrelin联合LY294002对脂肪间充质干细胞(ADSCs)神经分化的影响,并阐明其作用机制。方法：倒置相差显微镜下观察ADSCs形态表现,流式细胞术鉴定ADSCs表面抗体阳性表达率,将第4代ADSCs分为对照组(不进行干预)、LY294002组[给予40μmol·L^-1磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B (Akt)通路特异抑制剂LY294002]、Ghrelin组(给予0.1μmol·L^-1Ghrelin)、Ghrelin+LY294002组(给予40μmol·L^-1LY294002+0.1μmol·L^-1Ghrelin)。倒置相差显微镜下观察各组ADSCs神经分化后的形态表现,免疫荧光染色法检测各组ADSCs中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞百分率,Western blotting法检测各组ADSCs中PI3K/Akt通路蛋白表达水平,并计算磷酸化PI3K (p-PI3K)/PI3K和磷酸化Akt (p-Akt)/...     

新藤黄酸通过PTEN-PI3K/AKT/VEGF/eNOS信号通路干预人脐静脉内皮细胞血管生成的研究

目的 探究PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号通路在新藤黄酸（gambogenic acid,GNA）抑制人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial, HUVECs）迁移中的作用。方法 倒置显微镜下观察HUVECs形态变化;Boyden chamber实验以及细胞划痕实验观察GNA对HUVECs迁移能力的影响;硝酸还原酶法检测NO水平;Western blot法检测GNA及LY29400预处理对HUVECs内磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、p-AKT表达水平的影响;HUVECs转染PTEN-siRNA后,RT-PCR实验检测VEGF mRNA的表达水平。结果 GNA能有效抑制HUVECs迁移,其抑制效果与剂量相关（P＜0.05）。GNA和抑制剂LY294002以及L-NAME均能有效抑制NO的产生,且GNA+LY294002组、GNA+L-NAME组抑制效果更好（P＜0.05）;Western blot检测结果显示,GNA上调PTEN蛋白表达水平,下调eNOS、p-PI3K、p-AKT蛋白表达水平（P＜0.05）。RT-PCR检测结果表明,PTEN-siRNA转染后,GNA能上调VEGF mRNA基因的表达水平（P＜0.05）。结论 GNA通过PTEN-PI3K/Akt/VEGF/eNOS信号传导通路,抑制HUVECs迁移,阻止HUVECs血管生成。     

纳米二氧化硅通过PI3K/AKt信号通路影响肺泡巨噬细胞凋亡的研究

  目的  探讨磷脂酰肌醇激酶-3/蛋白激酶B（phosphatidyl inositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKt）信号通路对纳米二氧化硅（nano silica,NS）粉尘诱导肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages,AM）凋亡发生的影响。  方法  通过不同质量浓度的NS粉尘染毒AM细胞后,CCK-8法检测细胞存活率;荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测PI3K抑制剂LY294002预处理前后细胞的凋亡率与线粒体膜电位;Western blot法检测PI3K抑制剂LY294002预处理前后细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及磷酸化（p）-PI3K、p-AKt的表达水平。  结果  NS可降低AM细胞的存活率,部分细胞出现凋亡形态学改变;LY294002预处理AM后,线粒体膜电位水平的下降程度增加,并下调Bcl-2、p-PI3K、p-AKt蛋白的表达,同时上调Bax蛋白的表达,增加细胞凋亡率。  结论  PI3K/AKt信号通路可能参与了NS诱导AM细胞的凋亡过程。     

益胃扶正汤对气虚血瘀型胃癌前病变患者的疗效及其相关机理的研究

  目的  探讨益胃扶正汤对气虚血瘀型胃癌前病变(precancerous lesions of gastric cancer,PLGC)患者的疗效及其对胃黏膜组织蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)通路表达的影响。  方法  选取2017年3月—2018年10月在温州市中医院接受治疗的气虚血瘀型PLGC患者88例,根据随机数字表法将患者分为研究组和对照组,各44例。对照组患者给予胃复春片进行治疗,研究组患者在服用胃复春片的基础上给予益胃扶正汤进行治疗。比较2组患者的临床疗效、病理评分、临床症状积分以及不良反应,采用电化学发光免疫分析法检测血清肿瘤标志物水平,采用免疫组织化学法观察胃黏膜组织中p-AKT和p-mTOR在治疗前后的表达。  结果  治疗后,研究组的临床总有效率(86.36%)高于对照组(68.18%,P < 0.05)。2组患者的黏膜炎症、炎症活动度、腺体萎缩、肠上皮化生和异型增生等病理评分均明显降低,且研究组的各项病理评分均低于对照组(均P < 0.05)。2组患者的胃脘胀满、胃痛、倦怠乏力、纳差、大便稀溏、嗳气反酸等症状积分治疗后均明显降低,且研究组的各项病理评分均低于对照组(均P < 0.05)。治疗后,研究组的血清CEA、CA19-9、CA125水平均低于对照组(均P < 0.05)。治疗后,研究组患者胃黏膜组织p-AKT、p-mTOR阳性表达率均低于对照组(均P < 0.05)。2组患者均未出现明显的不良反应。  结论  益胃扶正汤可通过调节AKT/mTOR通路来治疗气虚血瘀型PLGC。