氯化锂-匹罗卡品癫痫模型研究

氯化锂-匹罗卡品（LI—PILO）点燃大鼠癫痫模型具有同人类癫痫持续状态或颞叶癫痫相似的特征，是理想的颞叶癫痫模型。本文重点对模型的制作、病理改变机制及致病机制等进行综述。     

氯化锂-匹罗卡品致大鼠急性癫痫模型

目的：建立氯化锂-匹罗卡品化学诱导的大鼠急性癫痫模型。方法：雄性Wistar大鼠55只，随机分为生理盐水对照组、地西泮组和致痫组。氯化锂腹腔注射后10～10h后给予匹罗卡品。结果：生理盐水对照组大鼠均为0级发作，地西泮组中8只大鼠为0级发作，2只出现Ⅰ级发作；致痫组均达到Ⅲ级以上的痫性发作，其中Ⅲ级2只(2／35)，Ⅳ级3只(3／35)，Ⅴ级30只(30／35)。致痫组大鼠在匹罗卡品腹注射后10～90min内全部出现急性痫性发作。结论：氯化锂-匹罗卡品诱导的大鼠急性癫痫模型具有制作方便、致痫成功率高和动物死亡率低等特点，具有同人类癫痫持续状态和颞叶癫痫相似的行为和脑电图改变。     

氯化锂-匹罗卡品致癎大鼠的模型研究

目的:探讨氯化锂(LiCl)-匹罗卡品(PILO)致大鼠的行为学特征及海马病理改变。方法:建立改良的LiCl-PILO致大鼠模型,观察大鼠行为,尼氏染色观察不同时间点大鼠海马病理改变,FJB染色观察大鼠海马神经元及其轴突、树突变性。结果:大鼠腹腔注射LiCl-PILO后,癫持续状态(SE)诱发成功率为92.5%,死亡率21.25%;尼氏染色结果显示,实验组大鼠海马神经元于SE后7d和60d缺失最明显,与对照组相比,齿状回颗粒细胞减少(P<0.05),CA1、CA3区锥体细胞和门区神经元均显著减少(P<0.01);FJB染色结果显示,实验组大鼠海马神经元于SE后7d和60d变性最明显,主要集中在CA1、CA3区锥体细胞层和门区,SE后7d海马腔隙-分子层亦可见变性的神经元轴突和树突。结论:改良后的LiCl-PILO致模型SE诱发成功率高,死亡率低,可基本复制人类颞叶癫的发作特点及病理改变;颞叶癫海马神经元的缺失可能是由于神经元的变性死亡。     

全蝎醇提物与丙戊酸干预氯化锂-匹罗卡品慢性点燃模型大鼠癫痫发作的疗效比较

目的 探讨全蝎醇提物(Ethanol Extracts of Scorpion,EES)与丙戊酸(Valproic Acid,VPA)干预氯化锂一匹罗卡品(Lithium Chloride-Pilocarpine,Licl-Pilo)慢性点燃模型大鼠癫痫发作的疗效.方法 186只成年雄性大鼠除6只设为正常对照组外.其余均建立Licl-Pilo慢性点燃大鼠模型,遣模成功后分为模型组、VPA干预组、低 EES 剂量干预组(EESL干预组)、中EES剂量干预组(EESM干预组)和高EES剂量干预组(EESH干预组)各36只.正常对照组、模型组分别灌胃给予等容积的生理盐水,VPA干预组灌胃给予VPA溶液[浓度为120 ms/(kg·d)],EESL干预组、EESM干预组、EESH干预组灌胃给予EES溶液[浓度分别为290 ms/(kg·d)、580 nag/(kg·d)及1160 ms/(kg·d)],观察30天内致痫大鼠慢性癫痛自发性发作(spontaneous seizures,SRS)、发作级别、发作次数,并进行组问比较.结果 Licl-Pilo慢性点燃模型鼠的造模成功率为85.65%,各实验组SRS发生频率5～15次/周.治疗后,EESM干预组、EESH干预组和VPA干预组癫痫大鼠痫性发作级别及SRS发作次数与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);EESL干预组治疗效果不明显,与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 一定剂量的EES能显著降低癫痫大鼠的自发性发作,且与疗效呈明显的量效关系,即剂量越大疗效越好,该结果 为EES的抗癫痫作用提供了行为学依据.     

低频经颅磁刺激对匹罗卡品致痫大鼠癫痫发作及海马细胞神经肽Y表达的影响

目的 观察低频经颅磁刺激（LF-TMS）对匹罗卡品（PLO）致痫大鼠皮质脑电图及大鼠海马各区神经肽Y（NPY）表达的影响。方法雄性SD大鼠40只，随机分为对照组（PLO组）、干预组（PLO＋LFTMS组）。各组给予相关干预处理后腹腔注射PLO建立癫痫模型，观察皮质脑电图及海马HE染色、NPY免疫组化染色观察。结果两组间皮质脑电图指标比较，发现磁刺激干预后潜伏期延长、痫波频率及大发作次数降低。HE染色显示，对照组海马各区神经元显著变性、死亡，以海马CA3区明显；干预组海马各区神经元损害减轻。NPY的免疫组化染色显示对照组各时间点海马各区NPY阳性细胞增多，明显高于干预组，差异有统计学意义。结论 LF—TMS不仅可以延迟PLO癫痫点燃的形成．还可以缓解点燃后的癫痫发作程度；LF—TMS可明显影响海马各区NPY阳性细胞数。NPY与癫痫发作程度相关，提示NPY表达与癫痫之间关系紧密，NPY可能具有抗痫和神经保护作用。     

匹罗卡品癫痫模型及戊四唑点燃模型的行为学、组织学对比研究

匹罗卡品癫痫持续状态(SE)模型及戊四唑点燃模型均是临床常用的癫痫动物模型,两种模型有不同特点,采用不同的模型可能会有不同的试验结果。神经元丢失及苔藓纤维出芽是癫痫产生过程中较常见的组织病理学变化,目前少见对癫痫产生过程中的续贯性研究报告。本研究同步观察两种模型     

应用Fluoro-Jade C染色评价小鼠匹罗卡品癫痫模型中隔区神经变性情况

目的应用Fluoro-Jade C(FJC)染色方法在小鼠匹罗卡品癫痫模型中探测隔区结构中神经元的变性情况,以了解隔区结构在慢性颞叶癫痫发生中的病理变化和癫痫反复发作的神经基础。方法雄性昆明小鼠10只(对照组5只,匹罗卡品处理组5只)。在癫痫持续状态后12 h处死处理组小鼠。在隔区水平切制冠状切片,行FJC染色,在荧光显微镜下观察FJC阳性细胞的形态和在隔区中的整体分布情况。结果在处理组,FJC染色的脑切片上可以很清楚地看到呈亮黄绿色荧光的FJC阳性细胞,呈神经元形态,胞体和突起均清晰显示。外隔区出现大量FJC阳性细胞,而内侧隔区和对照组未见。结论在小鼠匹罗卡品癫痫模型中运用FJC染色技术显示外侧隔区中发生了大量神经元变性,此研究有利于更好地理解颞叶癫痫中中枢神经系统所发生的病理变化和自发反复发作的癫痫机制。     

匹鲁卡品致癫大鼠模型癫痫持续状态皮质脑电图 记录方法的研究

目的:探讨匹鲁卡品致癫大鼠模型癫痫持续状态皮质脑电图的记录方法。方法:30只SD大鼠随机分为3组,各10只,A组顺序注射氯化锂、阿托品、匹鲁卡品,确认模型成功后注射乌拉坦麻醉,固定大鼠于定位仪上记录皮质脑电图;B组顺序注射氯化锂、阿托品,注射乌拉坦麻醉后固定大鼠于定位仪,注射匹鲁卡品后记录皮质脑电图;C组注射生理盐水,乌拉坦麻醉后固定大鼠于定位仪,注射生理盐水后记录皮质脑电图;比较3组脑电图痫样放电特征及死亡率。结果:A组痫样放电出现率100%(10/10),死亡率10%(1/10);B组痫样放电出现率60%(6/10),死亡率40%(4/10);C组痫样放电出现率0%(0/10),死亡率0%(0/10)。结论:注射氯化锂、阿托品、匹鲁卡品建立模型后乌拉坦麻醉大鼠记录皮质脑电图,痫样放电出现率高,动物死亡率低。     

丹参多酚酸盐对匹鲁卡品致痫大鼠BDNF表达的影响

目的探讨丹参多酚酸盐对匹鲁卡品致痫大鼠脑内神经元的损伤及BDNF表达的影响,探讨其抗痫的可能机制。方法采用匹鲁卡品诱发癫痫状态模型,随机分为丹参多酚酸盐干预组、盐水干预组和对照组,观察各组大鼠的行为学改变,用免疫组织化学法标记显示各组大鼠脑内海马BDNF的表达变化。结果在海马CA1区有BDNF阳性细胞表达,各组比较行t检验,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论丹参多酚酸盐可以明显降低急性癫痫痉挛性大鼠的发作等级和发作时间,可能通过BDNF的表达增高来发挥作用。     

氯化锂-匹罗卡品致大鼠的模型研究

目的:探讨氯化锂(LiCl)-匹罗卡品(PILO)致大鼠的行为学特征及海马病理改变。方法:建立改良的LiCl-PILO致大鼠模型,观察大鼠行为,尼氏染色观察不同时间点大鼠海马病理改变,FJB染色观察大鼠海马神经元及其轴突、树突变性。结果:大鼠腹腔注射LiCl-PILO后,癫持续状态(SE)诱发成功率为92.5%,死亡率21.25%;尼氏染色结果显示,实验组大鼠海马神经元于SE后7d和60d缺失最明显,与对照组相比,齿状回颗粒细胞减少(P0.05),CA1、CA3区锥体细胞和门区神经元均显著减少(P0.01);FJB染色结果显示,实验组大鼠海马神经元于SE后7d和60d变性最明显,主要集中在CA1、CA3区锥体细胞层和门区,SE后7d海马腔隙-分子层亦可见变性的神经元轴突和树突。结论:改良后的LiCl-PILO致模型SE诱发成功率高,死亡率低,可基本复制人类颞叶癫的发作特点及病理改变;颞叶癫海马神经元的缺失可能是由于神经元的变性死亡。     

自发性癫痫大鼠皮质和海马中GLT-1、EAAC-1表达

目的:研究自发性癫痫大鼠皮质、海马中谷氨酸转运体-1(GLT-1)、兴奋性氨基酸载体-1(EAAC-1)的转录、表达水平及其意义。方法:选取自发性癫痫Wistar大鼠(癫痫组)和正常Wistar大鼠(正常组)各10只,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测2组大鼠皮质、海马中GLT-1、EAAC1 m RNA转录水平,采用蛋白质印迹技术检测2组大鼠皮质、海马中GLT-1、EAAC-1蛋白的表达水平。结果:癫痫组大鼠皮质中EAAC-1 m RNA相对灰度值为(0.67±0.21),明显低于正常组大鼠的(1.54±0.38)(P0.01);2组大鼠皮质中GLT-1 m RNA和海马中GLT-1 m RNA、EAAC-1 m RNA相对灰度值差异无统计学意义(P0.05)。癫痫组大鼠皮质中EAAC-1、GLT-1蛋白表达水平的相对灰度值分别为(72.6±8.7)和(103.7±12.6),显著低于正常组大鼠的(116.5±15.1)和(139.5±14.2)(P0.01);癫痫组大鼠海马中GLT-1蛋白表达水平的相对灰度值(196.7±23.5)明显的高于正常组大鼠的(145.5±19.7)(P0.01);2组大鼠海马中EAAC-1蛋白表达水平的相对灰度值差异无统计学意义(P0.05)。结论:自发性癫痫大鼠皮质中GLT-1、EAAC-1表达水平下调可能与癫痫发生有关。     

钾离子通道相互作用蛋白1与γ-氨基丁酸能神经元在戊四唑致癫痫大鼠海马部位的改变

目的研究钾离子通道相互作用蛋白1（KChIP1）在癫痫发生过程中的变化及其与γ-氨基丁酸（GABA）能神经元的关系。方法成年大鼠制作急性戊四唑癫痫模型,免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察大鼠脑中KChIP1免疫阳性神经元与GABA能阳性神经元在海马部位的表达及改变。结果急性戊四唑癫痫大鼠海马部KChIP1阳性神经元数较对照组明显增加（P〈0.05）,GABA能阳性神经元、KChIP1/GABA双标阳性神经元数与对照组无显著性差异（P〉0.05）;KChIP1和GABA能阳性神经元在海马部位的共存率约为63.9%。结论KChIP1在癫痫发生中可能起重要作用;KChIP1与GABA能神经元虽有密切的共存关系,但在功能上并不完全一致。     

基于表达谱芯片技术的食管鳞状细胞癌相关差异基因的筛选及功能研究

目的利用食管鳞状细胞癌细胞相关基因芯片数据,筛选与食管癌显著相关的关键基因,并对关键基因所在的模块进行功能研究。方法从基因表达数据库 GEO 数据库中下载数据 GSE17351（数据共10个样本,正常和食管鳞状细胞癌样本组织各5个）,利用 R软件包做数据预处理和差异表达分析,选取差异表达基因（FDR ＜ 0.05及差异值 ＞2或＜ -2）。然后对差异表达基因进行生物信息学分析,首先投入 String 在线分析工具获得差异表达基因的蛋白-蛋白相互作用网络（score ＞0.9）,统计网络中各个节点的度,挑选出最关键的主效基因（hub基因）。然后利用Cytoscape软件插件 Mcode对整个网络进行网络模块化,并通过插件Bingo（P value＜ 0.05）对hub基因所在的模块进行功能注释,推测模块中影响基因特异性表达导致食管癌的机制和方式。结果通过比较正常和患病者食管鳞状细胞癌表达数据,筛选到600个差异表达的基因,构建了包含268对差异表达基因产物蛋白对的相互作用网络。找到最关键 hub 基因 TOP2A。得到1个包括hub基因在内由5个差异表达基因组成的模块,模块功能最显著富集在染色体分离和浓缩;发现与多种癌症相关的基因TOP2A共同起染色体活动基因 NCAPG。结论食管鳞癌的发生与最关键基因 TOP2A的异常表达有关,推测与之功能发生作用的基因 NCAPG 基因通过与 TOP2A 相同的机制和方式（染色体中前期活动）影响着癌症特异性基因的表达。     

黄芎合剂对高脂血症大鼠动脉粥样硬化形成的影响

【目的】观察黄芎合剂对高脂血症大鼠动脉粥样硬化形成的影响。【方法】以高脂合剂灌胃建立Wistar大鼠动脉粥样硬化模型,用黄芎合剂灌胃,连续45 d,然后取血清用酶法测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL);取大动脉做动脉粥样硬化病理形态学检查。【结果】与模型组相比:①黄芎合剂对TG无明显的影响(0.81±0.28 mmol/L vs 0.94±0.25 mmol/L,P>0.1),但能明显降低TC水平(2.69±0.16 mmol/L vs 5.57±1.24 mmol/L,P<0.01)和LDL水平(3.25±0.87 mmol/L vs 7.33±1.31 mmol/L,P<0.01),增加HDL浓度(0.62±0.19 mmol/L vs 0.42±0.12 mmol/L,P<0.05)。②黄芎合剂对主动脉粥样硬化斑块的形成具有明显的抑制作用(P<0.01)。【结论】黄芪川芎合剂有降低高脂血症和抑制动脉粥样硬化斑块形成的作用。     

Analysis of a circRNA-, miRNA-, and mRNA-associated ceRNA network reveals potential biomarkers in preeclampsia a ceRNA network in preeclampsia

BackgroundPreeclampsia (PE), one of hypertension-related disorders of pregnancy, is a common cause of maternal death worldwide. This study aimed to identify a circRNA-miRNA-mRNA-associated ceRNA network and related pathways in PE.Material and methodsWe downloaded 3 microarray datasets from the Gene Expression Omnibus database, obtained 163 differentially expressed circRNAs (dif-circRNAs) (61 upregulated and 102 downregulated), 39 differentially expressed microRNAs (dif-miRNAs) (22 upregulated and 17 downregulated), and 271 differentially expressed mRNAs (dif-mRNAs) (168 upregulated and 103 downregulated) from placenta tissues of PE. Functional enrichment analysis and protein-protein interaction (PPI) network with module analysis of dif-mRNAs were performed. The regulatory relationship between dif-miRNAs and dif-mRNAs/circRNAs was predicted via related databases. A circRNA-miRNA-mRNA regulatory network was constructed.ResultsA total of 53 pairs were obtained, including 13 circRNAs (10 upregulated and 3 downregulated), 9 miRNAs (3 upregulated and 6 downregulated) and 31 mRNAs (22 upregulated and 9 downregulated). GNB5 and IL2RB were obtained. KEGG enrichment analysis showed that both of them were closely related with the PI3K-Akt signalling pathway. Therefore, ceRNAs might affect the PI3K-Akt signalling pathway via the upregulation of GNB5 by binding to miR-1248 in PE. Meanwhile, hsa_circ_0052661 might upregulate IL2RB by binding miR-4303 to play a role in PE in the same way.ConclusionGNB5 and IL2RB might be key genes involved in the PI3K-Akt signalling pathway in PE, and hsa_circ_0087208, hsa_circ_0035443, hsa_circ_0067557 and hsa_circ_0052661 might regulate these key genes in PE by binding miR-1248 or miR-4303.

Key messages

• There is still a lack of predictive and diagnostic factors for preeclampsia, which is a common cause of maternal death worldwide.
• This study identified a novel circRNA-associated ceRNA network and related pathways in preeclampsia.
• GNB5 and IL2RB might be key genes in their related circRNA-associated ceRNA network, and probably take an important role in preeclampsia via PI3K-Akt signalling pathway, which made them to be potential markers of preeclampsia.

     

灵芝三萜对癫痫大鼠学习记忆损伤的效果

目的 研究灵芝三萜对戊四氮致痫大鼠认知功能的影响及其作用机制。方法 75只Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组、癫痫模型组、灵芝三萜组、外源性单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)组和灵芝三萜联合GM1组,每组15只。除空白对照组外,其余各组用戊四氮35 mg/kg腹腔注射,每天1次,持续28 d。各用药组在每天腹腔注射戊四氮的同时进行相应给药。造模后,行Morris水迷宫测试;HE染色及透射电镜观察海马神经元;实时定量聚合酶链反应检测大鼠海马肌动蛋白结合蛋白(Cofilin)、突触素(SYN)、神经生长相关蛋白43 (GAP-43)的mRNA表达水平。结果 与空白对照组比较,各时间点癫痫模型组逃避潜伏期延长(P < 0.05);与癫痫模型组比较,各用药组逃避潜伏期均缩短,部分时间点有显著性差异( P < 0.05)。与癫痫模型组比较,各用药组穿越平台次数明显增多( P < 0.01),在目标象限停留时间明显延长( P < 0.01)。各用药组海马神经元数增加,核溶解碎裂减少,核膜结构较清楚,突触小泡增多,突触数量增加,细胞器结构有所改善。与空白对照组相比,癫痫模型组Cofilin mRNA水平上调( P < 0.05),SYN mRNA和GAP-43 mRNA水平降低( P < 0.05);与癫痫模型组比较,各用药组Cofilin mRNA表达水平降低( P < 0.05),SYN mRNA表达水平升高( P < 0.05),仅灵芝三萜联合GM1组GAP-43 mRNA升高( P < 0.05)。 结论 灵芝三萜和GM1及两者联合用药均可改善癫痫大鼠的学习记忆能力及神经元形态结构,其机制可能与影响海马突触生长重塑相关基因表达有关,以达到保护大脑神经元的作用。     

双氧水预处理诱导脑缺血耐受的实验研究

目的：探讨双氧水预处理对大鼠局灶性脑缺血（FCI）损伤的保护作用及钠离子通道在双氧水预处理中的作用。方法：40只雄性SD大鼠采用线栓法制作FCI模型，随机分为A组，单纯缺血再灌注组；B组，缺血前24h用微量泵1h内缓慢静脉泵入3％的双氧水1ml；C组，缺血前24h给予利多卡因（5mg／kg，ip）；D组，利多卡因加双氧水预处理组，每组10只。于再灌注后24h行脑功能障碍评分，并处死测量脑梗死容积。结果：B组脑功能障碍评分和脑梗死容积显著低于A组（P〈0．05）；C、D组与A组比较差异无显著性意义。结论：双氧水预处理对大鼠FCI损伤有明显的保护作用，但此作用可被利多卡因阻断，提示钠离子通道参与此效应的形成机制。     

28醇对6-羟基多巴胺致帕金森病大鼠模型行为学的改善作用

目的 检测28醇对6-羟基多巴胺(6-OHDA)致帕金森病(PD)大鼠模型的作用.方法 将大鼠分为假手术组(n=1 5)、模型组(n=15)、低剂量组(n=12)、中剂量组(n=12)和高剂量组(n=12).将6-OHDA注人大鼠右侧纹状体制备PD模型,治疗组分别以28醇17.5 mg/kg、35 mg/kg、70 m...     

长托宁对大鼠肢体缺血再灌注后远隔急性肺损伤的保护作用

[目的]探讨长托宁对大鼠肢体缺血再灌注后远隔急性肺损伤的保护作用.[方法]制备大鼠肢体缺血再灌注后远隔急性肺损伤模型.60只健康雄性SD大鼠随机分成6组（n=10）：空白对照组（C组）,缺血再灌注组（H组）和不同剂量长托宁组（R1组：0.01mg/kg,; R2组：0.05 mg/kg;R3组：0.1 mg/kg; R4组：0.5 mg/kg）.长托宁于肢体缺血前30 min尾静脉注入,术毕比较各组大鼠血浆中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素10（IL-10）水平,肺组织过氧化物酶（MPO）活性,支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞计数（WBC）和蛋白总量（Pr）,肺湿/干重比（W/D）以及肺组织病理学的改变.[结果]与C组相比,远隔缺血再灌注导致血浆中TNF-α 和IL-10水平及BALF内白细胞数量增多,蛋白总量和肺组织MPO活性增加,肺组织结构遭到破坏.与H组相比,静脉注入长托宁均使血浆中TNF-α水平显著降低,BALF内中性粒细胞浸润、蛋白总量减少,降低了肺组织MPO活性,以R3、R4组效果最为显著,肺组织病理破坏也最轻.[结论]长托宁能够剂量依赖性地减轻大鼠肢体缺血再灌注后远隔急性肺损伤.     

颞叶癫痫模型大鼠海马区血管形成素-1、血管内皮 生长因子的表达

目的:探讨颞叶癫痫模型大鼠海马区血管形成素-1(Ang-1)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其在颞叶癫痫中的作用。方法:选取雄性Wistar大鼠60只,腹腔注射氯化锂-匹罗卡品及生理盐水分别建立颞叶癫痫模型组及对照组;观察大鼠行为学改变,比较2组大鼠海马区Ang-1、VEGF的动态表达过程。结果:模型组均可见动物出现行为呆滞、活动减少、凝视、前肢搔痒样动作或平衡不能等异常表现,部分伴有外周胆碱能反应,但症状程度较轻,持续数十分钟后可自行缓解。对照组动物无抽搐表现。第1小时,模型组的Ang-1表达较对照组减少(P0.05),至第3天降至最低水平,后逐渐升高(P0.05),至18 d接近正常水平(P0.05);VEGF表达第1天升高(P0.05),至第3天升至最高水平(P0.05),后逐渐降低,至18 d接近正常水平(P0.05)。结论:抽搐频繁时,Ang-1表达持续降低,VEGF表达持续升高;抽搐减少时,Ang-1和VEGF表达逐渐恢复正常。Ang-1与VEGF表达呈直线负相关关系。