微小RNA125b-5p在氧化应激损伤中的作用实验研究

目的:利用体外神经元模型,探讨miR125b-5p对氧化应激的影响。方法:建立过氧化氢(H_2O_2)诱导神经元细胞氧化应激模型,将miR125b-5p的类似物(mimics)转染至HT22细胞实现其过表达。造体外氧化应激模型,采用MTT(噻唑蓝)法检测细胞活力,实时定量PCR(qPCR)检测miR125b-5p表达水平及抗氧化酶HO-1、Mn SOD的基因表达水平。分析微小RNA125b-5p对氧化应激损伤的影响。结果:在体外氧化应激模型中miR125b-5p表达量明显下降;转染miR125b-5p的类似物(miR125b-5p mimics)后,和阴性对照(NC)相比,miR125b-5p在HT22细胞中过表达显著增加;MTT结果显示,miR125b-5p mimics组与对照组相比细胞存活率明显增加;qPCR结果显示,与NC组相比,miR125b-5p过表达可上调抗氧化酶HO-1和Mn SOD mRNA表达水平,发挥抗氧化作用。结论:miR125b-5p在H_2O_2刺激的神经元细胞中明显下调,miR125b-5p过表达可显著提高神经元细胞存活率。miR125b-5p抗过氧化氢诱导的神经元氧化损伤的作用机制可能与提高抗氧化酶HO-1、Mn SOD mRNA的表达相关。     

微阵列芯片分析miR-125b-5p在胃癌中的表达及临床意义

目的: 运用生物信息学技术分析胃癌中microRNA表达特征。方法: 使用R语言软件包分析GEO芯片数据集的两个子集中的miRNA表达量的差异;采用qRT-PCR技术检测本院60例胃癌患者癌组织及20例胃癌手术患者癌旁组织中miR-125b-5p的表达量,统计分析其表达特征与分化程度、TNM分期、性别、年龄、家族史及肿瘤直径之间的关系。结果： miR-125b-5p在GSE93415和GSE99415中的表达均上调,且其在胃癌组织与癌旁胃组织表达量差异具有统计学意义（P<0.05）。使用qRT-PCR验证了miR-125b-5p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织的趋势,miR-125b-5p表达量与TNM分期和浸润程度有关（P<0.05）,与年龄、性别、家族史、肿瘤直径和分化程度均无关（P>0.05）;高表达miR-125b-5p的胃癌患者生存期明显缩短。结论： 胃癌组织miR-125b-5p高表达,且与胃癌TNM分期、浸润程度及总生存率有关。     

MiR-125b-5p 抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase（http://starbase. sysu.edu.cn/）生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcDNA3.1组、miR-125b-5p mimic+pcDNA3.1-CD147组,应用RT-qPCR和Westem blot实验检测各组中miR-125b-5p水平,CD147蛋白和mRNA水平;应用CCK-8实验、Transwell实验检测各组卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 RT-qPCR技术证实miR-125b-5p在癌组织和卵巢癌细胞株中均低表达,而CD147在癌组织和卵巢癌细胞株中均高表达（P<0.05）;选择SKOV3和HO8910细胞进行转染,过表达miR-125b-5p后的卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力均被抑制（P<0.05）;Starbase生信软件预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-125b-5p 和CD147存在一个靶向调控关系;在SKOV3细胞中转染过表达质粒和对照质粒,转染成功后,过表达miR-125b-5p组中miR-125b-5p的表达升高,而CD147的mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）。过表达miR-125b-5p后再转染pcDNA3.1-CD147,CD147的mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）。Transwell实验显示过表达miR-125b-5p后卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到明显抑制,而过表达miR-125b-5p后再过表达CD147,卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的能力得到增强。结论 miR-125b-5p通过负向调控CD147的表达,从而抑制卵巢癌细胞的迁移与侵袭。     

miR-125b-5p靶向调控p53及PDCD4表达对心力衰竭合并心房颤动大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探究微小RNA（miR）-125b-5p靶向调控p53和程序性死亡因子4（PDCD4）对心力衰竭（HF）合并心房颤动（AF）大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法采用随机数字表法将建立HF模型并诱导AF成功的30只SD大鼠分为模型组和miR-125b-5p组,每组15只,另取15只正常大鼠作为对照组。miR-125b-5p组大鼠尾静脉注射miR-125b-5p类似物（300滋g/次,1次/周,连续4周）。分析各组大鼠左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短率（LVFS）、AF诱导率、诱导时间和细胞凋亡情况。采用RT-qPCR检测心肌组织中miR-125b-5p、p53及PDCD4mRNA相对表达水平。采用Westernblot法检测PDCD4和p53蛋白相对表达水平。在心肌细胞中通过双荧光素酶报告实验分别验证miR-125b-5p与p53及PDCD4的靶向关系。结果miR-125b-5p组、模型组的LVEF、LVFS均低于对照组,AF诱导率、诱导时间、凋亡指数、PDCD4及p53mRNA和蛋白相对表达水平均高于对照组（均P＜0.05）。miR-125b-5p组的LVEF、LVFS和miR-125b-5p相对表达水平高于模型组,AF诱导率、诱导时间、凋亡指数、PDCD4及p53mRNA和蛋白相对表达水平均低于模型组（均P＜0.05）。3组大鼠miR-125b-5p、p53及PDCD4mRNA相对表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。miR-125b-5p能够与PDCD4和p53的靶向结合（P＜0.05）。结论miR-125b-5p通过抑制PDCD4和p53蛋白抑制心肌细胞的凋亡,从而缓解HF合并AF。     

稳定过表达/下调表达miR-125b-5p Jurkat T细胞株的建立及验证

目的 构建稳定过表达/下调表达miR-125b-5p的Jurkat T细胞株,为miR-125b-5p在免疫性疾病中的发病机制研究奠定基础。 方法 扩增质粒,经293T细胞包装产生慢病毒颗粒,感染Jurkat T细胞,RT-qPCR检测miR-125b-5p表达情况,Western blotting检测下游靶基因UVRAG表达情况。采用单因素方差分析,2组之间比较应用LSD检验,P<0.05为差异具有统计学意义。 结果 hsa-miR-125b-5p慢病毒过表达载体及对照转染Jurkat T细胞后均有绿色荧光表达,hsa-miR-125b-5p慢病毒干扰载体及对照转染Jurkat T细胞后均有红色荧光表达;RT-qPCR显示和对照组比较慢病毒过表达载体组miR-125b-5p表达水平明显增高(P<0.01),慢病毒干扰载体组miR-125b-5p表达水平明显降低(P<0.01),差异均有统计学意义。Western blotting显示和对照组比较,慢病毒过表达载体组下游靶基因UVRAG表达明显降低(P<0.001),慢病毒干扰载体组下游靶基因UVRAG表达明显升高(P<0.001),差异均有统计学意义。 结论 成功建立了稳定过表达/下调表达hsa-miR-125b-5p的Jurkat T细胞株。      

基于circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1探讨肥胖性高血压发生的分子机制

目的 基于circNRG-1/miR-193b-5p/NRG-1轴探讨肥胖性高血压发生的分子生物学机制.方法 90只SD大鼠采用随机数字表法将其分为空白对照组(n=30)、肥胖性高血压组(n=30)、NRG-1阻断剂组(n=30)三组,检测大鼠的血压、体质量、Lee系数、脂肪系数、血清中三酰甘油和总胆固醇水平及胸主动脉中circNRG-1/miR-193b-5 p/NRG-1的表达;微阵列分析肥胖性高血压大鼠中circNRG-1的表达;双荧光素酶分析circNRG-1与miR-193b-5p的靶向关系.结果 微阵列结果发现,在空白对照组和肥胖性高血压组之间有382个circRNAs的差异表达,其中235个表达上调,147个表达下调(＞2倍);与空白对照组比较,肥胖性高血压组的MMU-CircRNA-42742(其父本基因为NRG-1)上调,肥胖性高血压组大鼠的收缩压、体质量、Lee系数、脂肪系数、血清中三酰甘油、总胆固醇、胸主动脉中NRG-1、circNRG-1、miR-193b-5p的mRNA表达均升高,且血管壁增生,血管中膜增厚;与肥胖性高血压组比较,NRG-1阻断剂组大鼠的收缩压、体质量、Lee系数、脂肪系数、血清中三酰甘油、总胆固醇、胸主动脉中NRG-1、circNRG-1、miR-193b-5p的mRNA表达均降低,且血管出现重构现象.结论 肥胖性高血压大鼠中circNRG-1、NRG-1表达上调,miR-193b-5p表达下调,阻断NRG-1后肥胖性高血压大鼠症状有所改善,circNRG-1/miR-193 b-5 p/NRG-1轴可能是治疗肥胖性高血压的潜在靶点.     

miR-125b-5p调控HK2抑制胆囊癌细胞增殖和糖酵解

  目的  研究miR-125b-5p通过HK2调控人胆囊癌细胞增殖和糖酵解的作用机制。  方法  分别在人胆囊癌细胞GBC-SD中转染NC mimic、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic+pcDNA-NC、miR-125b-5p mimic+pcDNA-HK2。实时荧光定量聚合酶链式反应（Real Time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR）检测miR-125b-5p和HK2 mRNA的表达,Western blot检测HK2和LDHA、PDK1的蛋白表达。细胞计数试剂盒-8（cell countingKit-8,CCK-8）检测细胞增殖活力,糖酵解相关试剂盒检测乳酸生成、葡萄糖消耗以及ATP生成。双荧光素酶报告基因实验对miR-125b-5p和HK2的靶向关系进行验证。  结果  miR-125b-5p在胆囊癌细胞系GBC-SD和NOZ（P < 0.001）以及组织（P < 0.01）中表达降低,且在GBC-SD细胞中低于NOZ细胞中。过表达miR-125b-5p可显著抑制GBC-SD细胞的增殖（P < 0.05）、葡萄糖消耗（P < 0.05）、乳酸（P < 0.001）和ATP的生成（P < 0.01）以及LDHA（P < 0.01）、PDK1（P < 0.001）、HK2（P < 0.0001）表达。starBase数据库和双荧光素酶报告基因实验证实miR-125b-5p靶向负调控HK2。过表达miR-125b-5p和HK2组中细胞的增殖（P < 0.01）、葡萄糖摄取（P < 0.05）、乳酸（P < 0.01）和ATP（P < 0.05）的生成以及LDHA（P < 0.05）、PDK1（P < 0.05）、HK2（P < 0.05）表达显著高于仅过表达miR-125b-5p组。  结论  过表达miR-125b-5p靶向HK2,抑制人胆囊癌细胞GBC-SD的增殖和有氧糖酵解。     

冠心病患者外周血单核细胞中miR-125a-5p、miR-193b的表达

目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)患者外周血单核细胞中mi R-125a-5p、mi R-193b的表达水平。方法收集研究对象共102例,分为四组,其中对照组25例(A组),稳定型心绞痛组22例(B组),不稳定型心绞痛组26例(C组),急性心肌梗死组29例(D组)。抽取静脉血,进行单核细胞分离、提取总RNA,实时荧光定量(RT-q PCR),检测外周血单核细胞中mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平。结果与A组比较,B组、C组、D组mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平显著降低(P <0.01);与B组比较,C组、D组mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平显著上调(P <0.01);而C组和D组之间mi R-125a-5p、mi R-193b表达水平差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 mi R-125a-5p、mi R-193b可能参与动脉粥样硬化的发生和进展,可能为动脉粥样硬化治疗的新靶点。     

miR-15b-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-15b-5p在胃癌中的表达变化,探索其对胃癌细胞功能的影响。方法:采用实时定量PCR检测35例胃癌组织及其对应的癌旁正常胃组织中miR-15b-5p的表达;构建miR-15b-5p过表达载体及合成miR-15b-5p抑制剂,并转染胃癌细胞系AGS;应用MTT法检测胃癌细胞增殖能力变化;采用流式细胞术分析miR-15b-5p对细胞周期和凋亡的影响。结果:miR-15b-5p在胃癌组织中的表达显著下调(P<0.01);转染miR-15b-5p过表达载体抑制了胃癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞在G_0/G_1期,并诱导了细胞凋亡;转染miR-15b-5p抑制剂促进了胃癌细胞的增殖,使细胞进入S和G_2/M期,并抑制细胞凋亡。结论:miR-15b-5p在胃癌中下调,抑制胃癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

乙肝耐药患者血清microRNA差异表达的研究

目的:本研究旨在探讨miRNA在HBV感染者以及健康人群中的差异表达,初步判断miRNA用于乙肝耐药的诊断价值。方法:40名HBV感染患者作为实验组,8名健康体检者作为对照,用PCR反向点杂交法检测实验组乙肝耐药突变情况,再分别检测实验组和对照组的miR-122-5p和miR-125b-5p表达情况,结果进行统计分析。结论:(1)患者感染HBV导致miR-122-5p和miR-125b-5p的表达水平增加;(2)无法确定耐药突变是否会影响miR-122-5p和miR-125b-5p的表达;(3)无论是单独耐药突变还是联合耐药突变,miR-122-5p和miR-125b-5p的表达无差异。     

miR-21负向调控宫颈癌HeLa细胞株中hTERT的表达

  目的  通过观察在miR-21作用下hTERT的表达情况，探讨在宫颈癌HeLa细胞中miR-21对hTERT的调控作用。  方法  利用RT-PCR 法及West Blot 法分别检测HeLa中miR-21 的表达，以及hTERT蛋白的表达情况；通过实验设计，生成miR-21模拟物和 miR-21抑制剂，并分别设立两组的空白对照序列；将空转liposome2000 （lipo2000）设为对照组，利用脂质体 liposome2000包裹宫颈癌细胞株 HeLa并予以转染。在转染后24 h及时检测hTERT及蛋白的表达量。  结果  HeLa细胞株中miR-21及hTERT表达阳性；转染后24 h模拟物组、模拟物对照组、抑制剂组、抑制剂对照组、脂质体组 hTERT mRNA相对表达水平分别为（0.51±0.33）、（0.69±0.19）、（1.33±0.39）、（0.83±0.26）和（0.58±0.16）；蛋白相对表达水平分别为（0.41±0.18）、（0.62±0.18）、（1.45±0.60）、（0.83±0.15）和（0.82±0.30）；模拟物组与其对照组及脂质体组相比较，hTERT mRNA及蛋白表达情况均较低且差异有统计学意义（P < 0.05）；相反，在抑制剂组与其对照组及脂质体组相比较中，hTERT mRNA及蛋白表达情况明显升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  通过检测发现miR-21及hTERT基因在HeLa细胞株中均呈现高表达状态；miR- 21可以调节hTERT mRNA 和蛋白表达水平，从而发挥负向调控hTERT的作用。     

miR-125a-3p对动脉粥样硬化斑块及M1/M2巨噬细胞、MMP-9和VEGF的影响

  目的   探讨miR-125a-3p对大耳兔动脉粥样硬化斑块形成、M1/M2巨噬细胞、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响。  方法  15只成年雄性健康日本大耳兔,随机分为3组,每组5只,对照组给予普通饲料喂养,动脉粥样硬化模型组给予牛血清白蛋白注射和高胆固醇饲料喂养,miR-125a-3p抑制剂干预组给予动脉粥样硬化兔注射miR-125a-3p干扰慢病毒载体。油红O染色后图像分析法测定斑块面积,免疫组化法测定MMP-9和VEGF,免疫荧光法检测斑块组织中M1标记物CD11c和M2标记物CD206。  结果  与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂组斑块面积百分比显著降低（P < 0.0001）。与对照组相比,动脉粥样硬化组MMP-9（P < 0.001）、VEGF（P < 0.01）和CD11c（P < 0.001）水平显著升高,CD206水平显著降低（P < 0.001）;与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂干预组MMP-9（P < 0.01）、VEGF（P < 0.01）和CD11c（P < 0.001）水平有所降低,CD206水平有所升高（P < 0.001）。  结论  抑制miR-125a-3p可减轻动脉粥样硬化斑块的形成,平衡M1/M2巨噬细胞,降低斑块组织中MMP-9和VEGF的表达,miR-125a-3p可能是治疗不稳定动脉粥样硬化斑块的新靶点。     

miR-219-5p靶向SOX5在口腔癌中的作用初探

  目的  研究miR-219-5p 与SOX5在口腔鳞状细胞癌中是否存在差异性表达,并探讨miR-219-5p 对SOX5的靶向调控作用,  方法  运用口腔鳞状细胞癌细胞株SCC4及SCC9,人正常皮肤成纤维细胞系（HF）作为对照,对miR-219-5p与SOX5在个细胞系中的表达情况进行检测（RT-qPCR、Western blot）;并在SCC4及SCC9细胞株中验证miR-219-5p对SOX5表达的靶向调控作用。  结果  与正常人纤维细胞相比,miR-219-5p的表达水平显著降低,而SOX5的表达水平显著增加,差异有统计学意义（P < 0.05）;miR-219-5p与SOX5的表达水平具有负相关（P < 0.05）;在SCC4及SCC9细胞中,miR-219-5p通过结合3' 非编码区（3'-UTR）靶向调控SOX5的表达。  结论  miR-219-5p可能通过对SOX5的靶向调控参与了口腔鳞状细胞癌的发生发展,为协助临床预后评估和/或筛选治疗的新候选药物提供了科学依据。     

miR-582-5p调控Notch1减轻心肌缺血再灌注损伤的研究

  目的  检测小鼠心肌缺血再灌注和HL-1细胞HR模型后miR-582-5p和Notch1在其中的表达变化，以此探讨miR-582-5p调控Notch1保护心肌的作用。  方法  通过建立小鼠心肌缺血再灌注模型和HL-1细胞氧糖剥夺再复氧模型，使用qPCR检测miR-582-5p和Notch1在小鼠IR和细胞HR后的表达量，继而使用TargetScan网站预测miR-582-5p和Notch1的靶向结合位点，在细胞中转染miR-582-5p和Notch1的Inhibitor和Mimics，再次检测miR-582-5p和Notch1的表达变化，最后使用CCK-8实验检测HL-1细胞转染Inhibitor和Mimics后的细胞活力。  结果  在小鼠IR和HL-1细胞HR后，miR-582-5p表达明显升高（P < 0.01），Notch1表达显著下降（P < 0.001），而在转染Inhibitor后，miR-582-5p明显下调（P < 0.001），同时Notch1显著上调（P = 0.017），并且心肌细胞活力得到显著提高（P = 0.006），而在转染Mimics后结果完全相反。  结论  miR-582-5p可以通过调控Notch1从而保护心肌以此来对抗心肌缺血缺氧。     

长链非编码RNA-p21调控微小RNA-9/去乙酰化酶1信号通路逆转结直肠癌细胞奥沙利铂耐药性

  目的  探讨长链非编码RNA（LncRNA）-p21调控微小RNA-9（miR-9）/去乙酰化酶1（SIRT1）信号通路逆转结直肠癌（CRC）奥沙利铂相关的细胞自噬及耐药性的分子机制。  方法  采用qPCR方法LncRNA-p21的表达检测,Westbloting blotting法检测细胞自噬相关蛋白（微管相关蛋白1轻链3-Ⅰ（（LC3-I）、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ））,自噬底物 （P62）、去乙酰化酶1（Sirtuin-1,SIRT1）、miR-9 的表达水平;克隆形成实验检测细胞活性。  结果  （1）LncRNA-p21 在奥沙利铂耐药的结直肠肿瘤细胞 HCT116,SW620 中高表达,差异有统计学意义（P < 0.001）;（2）敲降 LncRNA-p21 可抑制细胞自噬,改善 HCT116 细胞对奥沙利铂的化疗敏感性;（3）敲降 LncRNA-p21 后 miR-9 表达上调,而miR-9 过表达可增强 HCT116 细胞对奥沙利铂的化疗敏感性,差异有统计学意义（P < 0.001）;（4）同时,SIRT1 的表达受到 LncRNA-p21 和 miR-9 的调控。  结论  结直肠肿瘤对于化疗药奥沙利铂抵抗可能由LncRNA-p21诱导细胞自噬增强而引起,其过程可能通过 LncRNA-p21调控miR-9/SIRT1信号通路而实现。     

miRNA-148b-3p调节胎盘滋养细胞GLUT1表达与ICP子代糖代谢紊乱关系的研究

  目的  研究miRNA-148b-3p在妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP）孕妇胎盘组织中的表达及对滋养细胞葡萄糖转运蛋白-1（glucose transporter 1,GLUT1）的调控,探索ICP孕妇子代糖代谢异常的可能机制。  方法  收集2017年3月至2018年1月于四川大学华西第二医院产科行剖宫分娩的ICP孕妇30例,正常妊娠孕妇30例,分别收集胎盘组织、母血及脐血,提取胎盘组织miRNA,母血及脐血送检生化指标。采用实时荧光定量PCR验证miR-148b-3p在两组胎盘中的表达差异。通过lipofectaine3000脂质体包裹miR-148b-3p inhibitor/mimics转染人滋养细胞HTR-8,实时荧光定量PCR验证转染后细胞中miR-148b-3p的表达水平;Western blot检测转染后细胞中GLUT1的表达水平。  结果  ICP孕妇母血空腹血糖（fasting blood glucose,FPG）及其胎儿脐血胰岛素水平较对照组增高（P<0.05）。ICP组胎盘组织中miR-148b-3p表达量较对照组下降（P<0.05）。转染miR-148b-3p inhibitor后,与转染inhibitor control比较,HTR-8细胞中miR-148b-3p的表达水平下降（P<0.05）,GLUT1蛋白的表达量升高（P<0.05）;转染miR-148b-3p mimics后,与转染mimics control比较,HTR-8细胞中miR-148b-3p的表达水平上升（P<0.05）,GLUT1蛋白的表达量降低（P<0.05）。  结论  miR-148b-3p可能通过对胎盘滋养细胞GLUT1表达的负向调控参与了ICP子代糖代谢异常的发生。     

急性冠状动脉综合征患者早期冠状动脉病变的评估

  目的  探讨血浆miR-30a与冠状动脉血管内超声（IVUS）在急性冠状动脉综合征（ACS）患者早期冠状动脉病变评估中的作用。   方法  随机入选88例ACS患者，包括稳定性心绞痛组（SA组，42例）和ACS组（46例）。用IVUS检测斑块负荷和重构指数（RI），用Real-time PCR法检测血浆miR-30a的含量。研究ACS组斑块负荷、RI和血浆miR-30a的变化。用Pearson相关性分析斑块负荷、血浆miR-30a和RI的关系。  结果  与SA组比较，ACS组患者斑块负荷增加[（62.82±4.40）%比（68.32±4.59）%]；RI增加（0.90±0.03）比（1.15±0.05）；血浆miR-30a升高[（8.10±1.09）2-ΔΔct*104比（11.66±1.19）2-ΔΔct*104]（P < 0.05）。RI和斑块负荷（r = 0.482，P = 0.000）、血浆miR-30a水平（r = 0.817，P = 0.000）呈正相关。  结论  ACS患者早期已发生冠状动脉正性重构，血浆miR-30a可以作为ACS早期冠状动脉病变的评估指标。     

miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化

  目的  研究miR-490-3p在分子水平上通过HMGA2蛋白对SW1990细胞上皮间充质转化的影响。  方法  通过实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌细胞SW1990中miR-490-3p的表达。通过转染质粒[miR-490-3p阻遏物（inhibitor）和miR-490-3p模拟物（mimic）以及各自的阴性对照质粒]调控miR-490-3p在SW1990细胞中的表达并通过RT-qPCR法验证转染效率。转染48 h后，通过CCK8检测、划痕法、Transwell小室检测，流式细胞仪检测等分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等恶性生物学特征的影响。通过Western blot检测细胞中上皮间充质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平。同时，用数据库预测miR-490-3p及其靶基因HMGA2的靶向关系，并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证，通过Western blot检测细胞中HMGA2的蛋白表达水平。  结果  （1）与HPDE正常细胞相比，SW1990癌细胞中miR-490-3p表达水平明显降低（P = 0.215）；（2）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞的凋亡率显著高于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组（P < 0.0001）。miR-490-3p 下调后，SW1990细胞的凋亡率显著低于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著高于对照组（P < 0.0001）；（3）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著高于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著低于对照组（P < 0.0001）；miR-490-3p 下调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著低于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著高于对照组（P < 0.0001）；（4）HMGA2是miR-490-3p的靶向基因。  结论  miR-490-3p可通过靶向HMGA2抑制SW1990胰腺癌细胞EMT，从而影响胰腺癌的的发生发展进程，揭示HMGA2和miR-490-3p可能为胰腺癌诊断和治疗的靶点。     

UBE2C基因沉默表达对人胃癌AGS细胞增殖和迁移的影响

  目的  探讨UBE2C基因沉默对人胃癌AGS细胞增殖和迁移能力的影响。  方法  将用RNA 干扰技术构建的UBE2C-shRNA表达载体转染到293T细胞，用含有病毒颗粒的上清感染人胃癌AGS细胞，经puromycin筛选获得稳定表达的AGS细胞株。实验分为UBE2C表达沉默人胃癌AGS细胞组（干扰组）和对照组。采用qRT-PCR验证人胃癌AGS细胞中UBE2C的mRNA 表达水平，随后利用实时无标记细胞分析仪（RTCA）检测UBE2C沉默对人胃癌AGS细胞的增殖和迁移情况；同时应用CCK-8 细胞增殖检测试剂盒进一步印证UBE2C表达水平对人胃癌AGS细胞增殖能力影响。  结果  干扰组中UBE2C mRNA 表达 水平与对照组相比明显降低，AGS细胞增殖和迁移能力显著下降（P < 0.01）。  结论  靶向沉默UBE2C基因表达能抑制人胃癌AGS细胞恶性生物学行为。