常氧和低氧条件下介导大鼠神经干细胞分化的信号通路分析

目的:观察常氧和低氧环境下大鼠大脑皮层神经干细胞(NSCS)体外分化情况,并比较PI3K/Akt、JNK和Notch三条信号通路在不同氧环境下神经干细胞分化时所发挥作用的异同。方法:将体外悬浮培养48 h的神经干细胞转移至4%低氧和常氧中贴壁培养。更换培养基诱导分化,同时加入LY294002(PI3-K/Akt抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂)和DAPT(Notch抑制剂),48 h后行β-微管蛋白Ⅲ(β-TubulinIII)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞荧光染色。对神经元和星形胶质细胞进行计数并分别计算各占的比例。结果:(1)低氧对照组神经元所占比例高于常氧对照组,星形胶质细胞低于常氧对照组,均具有统计学差异(P<0.01)。(2)在常氧环境下,LY294002组神经元所占比例显著低于常氧DMSO对照组(P<0.01),星形胶质细胞所占比例显著高于常氧DMSO对照组(P<0.01);和常氧DMSO组相比,SP600125组和DAPT组神经元和星形胶质细胞所占比例均无显著差异。(3)在低氧环境下,和低氧DMSO组比较,LY294002组和SP600125组神经元和星形胶质细胞所占比例均无显著性差异;DAPT组神经元所占比例显著高于常氧DMSO对照组(P<0.01),星形胶质细胞所占比例低于常氧DMSO对照组,无显著性差异。结论:PI3K/Akt介导了常氧条件下神经干细胞向神经元方向的分化;低氧可能通过抑制Notch信号通路促进神经干细胞向神经元方向分化。     

低氧对胎鼠中脑NSCs的促体外增殖作用

目的观察低氧对大鼠中脑神经干细胞体外增殖的影响,并探讨其增殖的可能机制。方法取孕13.5 d的W istar大鼠,麻醉后取胚胎,分离中脑神经干细胞(NSC),常规培养鉴定后分3组:对照组;10%O2组;3%O2组。采用4孔板培养3~4 d后进行神经球记数,用流式细胞仪测定其增殖指数,最后用RT-PCR方法测定低氧(10%O2)不同时间点(1、3、6、12、24、48和72 h)低氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA的表达水平。结果低氧组神经球记数和增殖指数明显高于对照组,尤以10%O2组最为明显(P<0.01);10%O2组12 h和48 h时的HIF-1αmRNA表达水平比同一时间点的对照组明显增加。结论轻中度低氧有利于NSC的体外增殖,而HIF-1可能在其中发挥了重要作用。     

MPP+诱导的PC12细胞和星形胶质细胞共育对神经干细胞突触素和生长相关蛋白-43表达的影响

目的探讨星形胶质细胞和1-甲基-4苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞共育对神经干细胞(NSC)突触素和生长相关蛋白-43表达的影响。方法 PC12细胞分别经MPP+诱导不同时间点(0h、24h、48h、72h、96h)后分为两部分,一部分应用流式细胞技术检测PC12细胞凋亡率;另一部分与星形胶质细胞共育2d,然后收集各组细胞条件培养液,对神经干细胞进行诱导分化,免疫荧光检测神经干细胞突触素(SYN)和生长相关蛋白-43(GAP-43)表达。结果在MPP+作用48h时间点,PC12细胞凋亡率达高峰(P0.05)。MPP+与PC12细胞和星形胶质细胞条件培养液共育48h可上调神经干细胞中突触素(A值=34.09±2.69)和GAP-43(A值=49.36±5.98)表达水平(P0.05)。结论星形胶质细胞与MPP+诱导凋亡的PC12细胞共育后,促进神经干细胞突触素和GAP-43表达。     

低氧促进神经干细胞增殖分化过程中低氧诱导因子-1α表达的变化

目的:观察小鼠胎脑皮质神经干细胞(NSCs)在体外低氧条件下细胞增殖与分化以及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达情况,分析HIF-1α对NSCs增殖与分化的作用。方法:体外低氧条件下(3%O2)培养扩增胚鼠皮质来源的细胞,实验分低氧1、2、3、4d组,常氧组为对照。免疫细胞化学染色法鉴定神经干细胞及其子代细胞,RT-PCR检测实验组细胞HIF-1α mRNA的表达。结果:低氧4d组细胞呈HIF-1α阳性,其余HIF-1α为阴性。实验组神经元特异性烯醇酶(NSE)平均灰度值进行性增加。各实验组HIF-1α mRNA与对照组相比具有显著性差异。结论:在低氧能促进NSCs的增殖与分化过程中,HIF-1α表达变化可能在其中发挥了重要作用。     

人胚脑神经干细胞的分离培养、克隆和分化

探讨从人胚脑分离培养的神经干细胞在增殖和分化方面的生物学特点。用无血清培养技术从 4月龄人胎中脑组织中分离培养出神经干细胞 ,用有限稀释法获得单细胞克隆球 ,消化后用含 Brd U的培养液培养 ,待形成神经干细胞球后 ,进行 Brd U和nestin免疫荧光检测。取第 4代神经干细胞球用含 10 % FBS的培养液诱导分化 ,3周后分别进行神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞特异性标记物 MAP-2、GFAP和 CNP免疫荧光检测。结果显示 ,单细胞悬液培养 2周后可形成神经干细胞球 ;神经球 Br-d U和 nestin免疫荧光检测均呈阳性 ;神经干细胞分化后呈 MAP-2、GFAP和 CNP阳性的三种类型细胞 ,但分化的神经元数量较少、胞体较小、突起较少。提示从人胚中脑组织中分离得到的神经干细胞具有增殖和自我更新能力 ,并具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的多分化潜能 ;与啮齿类动物相比 ,人神经干细胞增殖速度较慢 ,分化的神经元较少且稍欠成熟     

低氧对人脐带间充质干细胞生物学特性及增殖的影响

目的探讨低氧培养条件对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的生长和增殖的影响。方法采用人脐带酶消化法分离培养hUC-MSCs,分别将细胞置入体积分数20%、10%、3%O2条件下培养,通过细胞成脂、成骨分化诱导及流式细胞仪检测其表面标志物,鉴定hUC-MSCs;绘制细胞生长曲线,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况。结果低氧条件培养hUC-MSCs具有成脂、成骨等多项分化的潜能;流式细胞仪检测呈CD105、CD73、CD90、CD44、HLA-ABC高表达,CD106、CD29、CD45、CD34、HLA-DR低表达;体积分数3%O2培养组与正常体积分数20%O2培养组及体积分数10%O2培养组相比(各组倍增时间分别为17.2 h、20.8 h、18.9 h),细胞增殖速度加快(P0.05);G0/G1期细胞减少(各组G0/G1期细胞数分别为77.11%±3.89%、83.92%±5.59%、80.19%±5.16%),S期细胞增多(S期细胞数分别为15.73%±2.56%、10.91%±1.86%、13.31%±2.31%),增殖指数升高(P0.05);细胞凋亡率降低(流式细胞仪检测各组凋亡率分别为13.41%±1.39%、20.83%±1.81%、19.11%±2.44%)(P0.05)。结论体积分数3%O2持续培养可促进hUCMSCs的增殖,减少细胞凋亡。     

红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用

目的 观察红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液（EACM）对神经干细胞促分化作用及对分化后细胞的保护作用。 方法 原代培养神经干细胞和1型星形胶质细胞,收集红细胞生成素(EPO)刺激的星形胶质细胞上清液,用于神经干细胞分化实验的研究。对分化后的细胞进行免疫细胞化学染色,计算其分化为神经元的比率;同时利用FeSO₄和H₂O₂制造细胞损伤模型,用EACM继续培养48h,然后检测细胞活性和存活细胞数。 结果 EACM组神经干细胞分化明显,神经元比率较星形胶质细胞上清组和对照组均有明显增加。分化后的细胞中加入H₂O₂后,继续用EACM培养的实验组吸光度(A)值和细胞存活百分比均较对照组高。 结论 红细胞生成素激活的星形胶质细胞条件培养液对神经干细胞有促其向神经元分化的作用,并对分化后的细胞有保护作用。     

胎儿脑组织体外保存获取神经干细胞的时限

目的　探讨人胎儿脑海马组织体外保存不同时限后培养获取神经干细胞的可行性。　方法　利用无血清培养 ,从死亡后孵育在 4℃Hank液 0h、4h、2 4h、4 8h、72h及 96h的胎儿海马分离细胞 ,在体外连续传代培养 ;采用免疫荧光细胞化学方法检测培养细胞的神经上皮干细胞蛋白 (nestin)表达、经BrdU孵育后的BrdU表达以及诱导分化后的神经元标记 (tubulin)或星型胶质细胞抗原 (GFAP)表达 ;比较不同时限的细胞在Nestin的表达、增殖能力和诱导分化后神经元及胶质细胞比例的差异。　结果　从保存在 4℃Hank液 72h以内的各组胎儿海马中均可获得具有连续增殖能力的神经球 ,培养出的细胞Nestin表达为阳性 ,通过BrdU的摄取表明细胞处于活跃的有丝分裂状态 ,在此期限内各组之间无明显差异 ;诱导分化后的神经元和胶质细胞比例在各组之间亦相似 ;但随着在Hank液中孵育时间的延长 ,所获得的神经球数量呈减少趋势 ;在 96h组则未能获得神经球。　结论　人胎儿海马组织在 4℃Hank液中孵育 72h内可培养出呈神经球样生长的神经干细胞 ,但神经球数量与孵育时间呈负相关     

重组γ-神经胶质成熟因子诱导体外神经干细胞分化为星形胶质细胞

目的探索γ-神经胶质成熟因子(GMFG)能否促进大鼠神经干细胞增殖并分化成神经胶质细胞。方法无菌分离大鼠胚胎脑组织进行原代培养和传代培养,将第3代含有神经球的培养基制成细胞悬液,经Nestin免疫荧光染色检测呈阳性后,分4组培养,1组、2组每天分别加入5μg/L、10μg/L重组GMFG,3组加入10%胎牛血清(FBS),对照组为培养基。结果对照组细胞培养4 d后见少数细胞增殖并长出细长的分支;FBS组细胞培养3 d后大量增殖并分化,形态学上为原浆型星形胶质细胞,呈扁平片状贴在培养皿表面;GMFG组细胞培养2 d后大量增殖并分化,形态学上为纤维型星形胶质细胞,5μg/L组细胞分化不如10μg/L组细胞分化明显。结论GMFG能诱导神经干细胞在体外增殖并分化为星形胶质细胞。     

氧体积分数变化与大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及迁移*

背景：研究表明,细胞分化程度低的骨髓间充质干细胞移植在缺血环境的转归对疗效有很大影响。 目的：探讨氧体积分数改变对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和归巢能力的影响。 方法：分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,分别在低氧(体积分数1%O2)和常氧(体积分数20%O2)条件下培养0~7 d。细胞Transwell小室迁移实验分组为4组：体积分数1%O2培养1%O2迁移组、体积分数20%O2培养1%O2迁移组、体积分数1%O2培养20%O2迁移组和体积分数20%O2培养20%O2迁移组,比较不同氧体积分数变化条件下迁移细胞数。观察不同氧体积分数变化对间充质干细胞表达整合素β1和细胞间黏附分子1的影响,实验分为4组：恒定体积分数20%O2培养;恒定体积分数1% O2培养;体积分数20%O2培养后1%O2继续培养6 h;体积分数1%O2培养后20%O2继续培养6 h。 结果与结论：骨髓间充质干细胞在体积分数1%O2环境下增殖能力及迁移能力均增强,在体积分数20%O2环境下增殖能力及迁移能力减弱(P < 0.05);整合素β1表达水平在体积分数1%O2环境下增强(P < 0.05)。提示大鼠骨髓间充质干细胞移植在低氧(体积分数1%O2)下增殖和迁移能力增强。关键词：低氧;骨髓间充质干细胞;移植;整合素β1;迁移 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.005     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.