CpG-ODN气道内应用抑制哮喘小鼠过敏性气道炎症及GATA-3的表达

目的　研究气道内应用CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)对小鼠哮喘模型气道过敏性炎症的治疗作用及对肺内GATA 3表达的影响。方法　鸡卵蛋白 (OVA)免疫BALB c小鼠建立哮喘模型 ,激发后 1h气道内滴入 10 0 μgCpG ODN ,处死动物后观察支气管肺泡灌洗液 (BALF)中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比 (EOS % )的变化及IL 4、IL 5、IL 12、IFN γ的含量变化。取肺组织行病理切片HE染色、AB PAS染色检查 ,观察小鼠气道炎症情况 ,免疫组化染色观察CpG ODN对小鼠哮喘模型肺部GATA 3表达的影响。结果　CpG ODN治疗组BALF中IL 12和IFN γ的产生增加 ,IL 4、IL 5的产生减少 ,BALF中细胞总数及嗜酸性粒细胞比例降低 ,肺部炎症情况明显减轻 ,肺血管周围及支气管周围表达GATA 3的细胞数较哮喘模型组及对照寡核苷酸治疗组明显减少。结论　哮喘小鼠激发阶段气道内滴入CpG可能通过诱导IL 12、IFN γ产生 ,抑制GATA 3的表达 ,导致TH2型细胞因子的产生减少 ,从而减轻哮喘气道过敏性炎症。     

转录因子T-bet/GATA-3比率评价哮喘患者Th1/Th2失衡及CpG ODN干预机制的研究

目的: 探讨哮喘患者PBMCs中转录因子T-bet/GATA-3比率与Th1/Th2细胞失衡的关系及体外CpG干预后T-bet/GATA3比率的变化及其对Th1/Th2细胞平衡的调节作用。方法: 用RT-PCR法测定30例发作期哮喘患者（哮喘组）及20例慢性阻塞性肺病患者（COPD组）及20例正常人（对照组） PBMCs中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及TLR9 mRNA的表达强度，用ELISA法测定血浆IL-4、IL-5、IL-13和IFNγ的表达水平，以观察哮喘患者PBMCs中转录因子T-bet/GATA-3比率与Th1/Th2细胞失衡的关系。将20例发作期哮喘患者的PBMCs分为2部分，一份加入CpG ODN和PHA（CpG组），一份仅加入PHA（对照组），培养48 h后分别收集培养液和细胞，采用RT-PCR法测定细胞中T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及TLR9 mRNA的表达强度，ELISA法测定培养液中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的表达水平。结果： 哮喘患者PBMCs中T-bet/GATA-3的比率显著低于COPD患者和正常人，IL-4、IL-5、IL-13的水平显著高于COPD患者和正常人，与T-bet/GATA-3的比率呈负相关，而IFN-γ的水平显著降低，与T-bet/GATA-3的比率呈正相关。哮喘组TLR9的表达强度显著弱于COPD患者和正常人。CpG干预组细胞培养液中IL-4、IL-5和IL-13的水平分别显著低于对照组，IFN-γ的水平显著高于对照组。CpG干预组细胞中T-bet mRNA和TLR9 mRNA的表达强度显著强于对照组，GATA-3 mRNA的表达强度显著低于对照组；T-bet/GATA-3的比率显著高于对照组。结论: 哮喘患者T-bet/GATA-3的比率降低，可以作为评价Th1/Th2细胞失衡的精确指标。CpG ODN可以上调T-bet的表达，下调GATA-3的表达，从而上调T-bet/GATA-3的比率，逆转Th1/Th2细胞失衡，是一种很有前景的哮喘治疗手段。     

转录因子T-bet和GATA-3对小儿肺炎支原体肺炎免疫调控作用的研究

T—bet和GATA-3是T辅助细胞（Th）特异性转录因子和极性分化的关键决定因素，为探讨二者在小儿肺炎支原体（MP）肺炎中的免疫调控作用，研究了24例MP肺炎患儿外周血淋巴细胞T—bet mRNA、GATA-3 mRNA和Th1类细胞因子IFN-γ，Th2类细胞因子IL4蛋白表达水平及其相互关系。     

转录因子GATA-1的研究进展

GATA1是最早发现的GATA家族成员,表达在早期红系细胞、巨核细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、睾丸基质Sertoli细胞及非造血胚胎干细胞中。转录因子GATA-1在正常红细胞增殖、分化过程中起重要的生物学作用,且控制着巨核细胞、肥大细胞和嗜酸性细胞的分化。转录因子GATA-1可以和许多生物大分子柜互作用,如红细胞生成素（EPO）、FOG（friend of GATA）、GATA-2等,在血小板减少症、多发性骨髓瘤、白血病等疾病发病中发挥着重要的生物学效应。     

转录因子GATA-2的研究进展

转录因子GATA-2是具有锌指结构的GATA家族中的一员，它在造血系统中广泛表达。且与造血细胞的分化、发育关系密切．GATA-2主要调控造血干／祖细胞的增殖和分化，亦可调控其他造血相关因子的表达，并与白血病等血液病的发生有一定的相关．     

转录因子GATA-2的研究进展

转录因子GATA-2是具有锌指结构的GATA家族中的一员,它在造血系统中广泛表达,且与造血细胞的分化、发育关系密切.GATA-2主要调控造血干/祖细胞的增殖和分化,亦可调控其他造血相关因子的表达,并与白血病等血液病的发生有一定的相关.     

以T-bet/GATA-3的比率作为评价哮喘患者Th1/Th2失衡指标的探讨

目的：探讨哮喘患者PBMCs中转录因子T-beL／GATA-3的比率与Th1／Th2细胞失衡的关系。方法：采用RT-PCR法测定30例发作期哮喘患者(哮喘组)及20例慢性阻塞性肺病患者(COPD组)及20例正常人(对照组)PBMCs中T-bet和GATA-3的活性，ELISA法测定血浆IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的表达水平。结果：哮喘组PBMCs中T-bet／GATA-3的比率较COPD组和对照组明显降低，Th2细胞因子IL-4、IL-5、IL-13的水平增高，与T-bet／GATA-3的比率成负相关，而Th1细胞因子IFN-γ的水平降低，与T-bet／GATA-3的比率成正相关。结论：哮喘患者T-bet／GATA-3的比率降低，可以作为评价Th1／Th2细胞失衡的精确指标。     

唾液乳杆菌对哮喘Balb/c小鼠气道高反应性及T-bet/GATA-3表达的影响

目的探讨唾液乳杆菌对哮喘Balb/c小鼠气道高反应性及T-bet/GATA-3表达的影响。方法选择30只4周、体质量16~18 g、SPF级Balb/c雌性小鼠,随机分成3组:正常对照组(N)、哮喘组(A)、哮喘加唾液乳杆菌组(AH)。应用卵蛋白建立急性哮喘模型,无创肺功能仪测定小鼠气道反应性、病理HE染色观察肺部炎症改变、Real-time PCR法检测肺组织中GATA-3 m RNA及T-bet m RNA表达。结果哮喘组小鼠较正常对照组小鼠气道反应性增高,AH组较哮喘组小鼠气道反应性降低(P0.05);病理HE染色见哮喘组支气管管壁增厚、管腔狭窄、气管及血管周围可见大量以嗜酸性粒细胞为主的炎症细胞浸润,管腔中较多炎性分泌物,AH组小鼠肺组织病理改变较哮喘组明显减轻;哮喘组小鼠肺组织中GATA-3m RNA表达水平较N组明显升高,T-betm RNA表达水平较N组明显降低(P0.05);而AH组小鼠肺组织中GATA-3m RNA表达水平较哮喘组明显降低,T-betm RNA表达水平较哮喘组明显升高(P0.05)。结论致敏前唾液乳杆菌灌胃一定程度上减轻了哮喘小鼠的气道高反应性及气道炎症,通过在转录水平增加T-betm RNA表达同时抑制GATA-3m RNA表达,进而改善哮喘小鼠Th1/Th2失衡,为支气管哮喘的免疫防治提供新的途径。     

雷公藤对致敏小鼠T细胞IL-5 mRNA表达及转录因子GATA-3活性的抑制作用

探讨雷公藤内酯醇 (TP )对致敏小鼠T淋巴细胞IL 5mRNA表达的影响及其机制。采用卵蛋白 (OVA )致敏的方法建立模型 ;运用原位杂交染色法 (ISH )观察TP对T淋巴细胞IL 5mRNA表达的影响 ;通过凝胶电泳迁移率实验 (EMSA )对CD4+T淋巴细胞核转录因子GATA 3的DNA结合活性进行检测 ,同时就TP的作用与地塞米松 (DM )相比较。结果表明致敏小鼠T淋巴细胞IL 5mRNA表达显著高于正常对照组 (P <0 0 1) ,经TP、DM处理后 ,其IL 5mRNA表达显著低于致敏组(P <0 0 1)。致敏小鼠CD4+ T淋巴细胞体外经伴刀豆蛋白A (ConA )刺激后 ,GATA 3的DNA结合活性与正常对照组比较显著增强 ,并呈时间依赖关系 ,经TP、DM处理后 ,GATA 3的DNA结合活性显著减弱。TP抑制IL 5基因转录的分子机制可能与其抑制GATA 3的DNA结合活性有关。     

黄芪和地塞米松对哮喘失衡表达转录因子T-bet/GATA-3不同的调节作用

目的 观察T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在支气管哮喘中失衡表达,探讨黄芪和地塞米松对其不同的调节作用.方法 40只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组和黄芪组,20只雄性SPF级致敏SD大鼠脾脏中分离获得CD4+T细胞,苏木精·伊红染色观察气道病理改变;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清中IL-4、IL-5、IFN-γ含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-4、IL-5、IFN-γ、T-bet和GATA-3 mRNA表达;Western blot法检测T-bet和GATA-3蛋白表达.结果 肺组织中嗜酸粒细胞(EOS)、淋巴细胞、管壁面积/支气管管腔内周长(WA/Pi)和支气管平滑肌面积/支气管管腔内周长(ASM/Pi)哮喘组比对照组明显增多或增厚(P均<0.01),地塞米松组和黄芪组明显低于哮喘组(P均<0.01);血清中IL-4和IL-5含量,哮喘组高于对照组(P均<0.01),地塞米松组和黄芪组均低于哮喘组(P均<0.01),血清中IFN-γ含量哮喘组远低于对照组(P<0.01),地塞米松组低于对照组(P<0.01),但黄芪组明显高于哮喘组(P<0.01).在大鼠肺组织和致敏大鼠脾CD4+ T细胞中,IFN-γ mRNA、T-bet mRNA和蛋白表达哮喘组明显低于对照组(P均<0.01),地塞米松组与哮喘组相似(P>0.05),黄芪组与对照组相似,但明显高于哮喘组(P<0.01);IL-4和IL-5 mRNA、GATA-3 mRNA和蛋白表达,哮喘组异常高于对照组(P<0.01),地塞米松组和黄芪组均明显低于哮喘组(P<0.01);肺组织中T-bet/GATA-3蛋白表达量比值,哮喘组明显低于对照组(P<0.01),地塞米松组与哮喘组相近(P>0.05),黄芪组与对照组的比值相近(P>0.05),明显高于哮喘组和地塞米松组(P均(0.01).结论 T细胞特异转录因子T-bet/GATA-3在哮喘中失衡表达,黄芪抑制哮喘气道炎症可能通过双向调节T-bet和GATA-3平衡来实现,地塞米松抑制GATA-3表达,不能增加T-bet表达,其抑制哮喘气道炎症并非通过调节转录因子T-bet和GATA-3平衡实现.     

GATA-3在大鼠哮喘模型气道炎症中作用的实验研究

目的：探讨GATA-3在Wistar大鼠哮喘模型气道炎症中的作用。 方法： 按常用方法复制大鼠哮喘模型并分为哮喘组(A组)，地塞米松治疗组（D组），反义寡核苷酸治疗组（AS组），无意义寡核苷酸治疗组（NS组）和正常对照组（N组）5组，每组10只。反义寡核苷酸和无意义寡核苷酸经鼻气管内给药，地塞米松腹腔注射给药。HE染色方法观察气道炎症变化。免疫组化方法观察GATA-3阳性细胞数。用RT-PCR方法观察大鼠肺组织GATA-3 mRNA表达。用Western 蛋白印迹法检测肺组织中GATA-3蛋白质表达。 结果： A组GATA-3 mRNA和蛋白质的表达量及气道嗜酸性粒细胞浸润数量明显大于N组（P<0.01）。AS组和D组GATA-3 mRNA和蛋白质表达量及气道嗜酸性粒细胞浸润数量均明显低于A组（P<0.01）。NS组GATA-3 mRNA和蛋白质表达量和嗜酸性粒细胞浸润数量与A组相比差异无显著（P>0.05）。GATA-3的表达与大鼠支气管肺组织中嗜酸性粒细胞浸润数量呈正相关，r=0.995(P<0.01)。 结论： GATA-3反义寡核苷酸能特异性地抑制GATA-3基因的表达，减轻气道炎症反应。GATA-3 在Wistar大鼠哮喘模型效应阶段气道炎症中具有重要作用。     

雾化吸入干扰素γ阻断GATA-3表达防治哮喘的实验研究

目的 研究雾化吸入IFN-γ对支气管哮喘（哮喘）防治作用及其机制。方法 以Balb/c小鼠采用卵蛋白（OVA）、氢氧化铝建立哮喘模型（C组）,于23d至30d雾化吸入IFN-γ 12μg 1次/d,31d时取肺泡灌洗液（BALF）测定细胞成分,白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素5（IL-5）浓度,取血测定血浆IgE水平,观察肺组织病理学变化及GATA-3的表达。设正常对照组（A组）和哮喘模型PBS处理组（B组）。每组小鼠12只。结果 ①C组BALF中的嗜酸性粒细胞（EOS）数量明显低于B组（P〈0．01）;②C组BALF中的IL-4和IL-5的水平明显低于B组（P〈0．01）;③C组血浆中总IgE和OVA特异性IgE水平显著低于B组（P〈0．01）;④B组支气管平滑肌肥厚,黏膜充血、水肿,黏膜层增厚,并有EOS为主的炎性细胞浸润,管腔内可见黏液栓,支气管壁周围有EOS为主的炎症细胞浸润,而C组小鼠的上述炎症性改变则明显减轻;⑤免疫组化显示B组肺组织中GATA-3的表达明显增加,而C组GATA-3的表达明显减少。结论 雾化吸入IFN-γ可抑制哮喘鼠IL4、IL5的合成,抑制气道炎症,抑制EOS在气道内的炎性浸润及降低血浆总LgE和OVA特异性LgE水平,其机制可能与IFN-γ阻断GATA-3的表达,从而继发抑制Th2型反应有关。     

维药祖发奇尼对哮喘大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA表达水平的影响

目的:研究维吾尔药祖发奇尼对哮喘大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平的影响,探讨祖发奇尼治疗哮喘的免疫机制。方法:将大鼠随机分为正常对照组,哮喘模型组,地塞米松治疗组及祖发奇尼高、低剂量治疗组。采用卵清白蛋白(OVA)、氢氧化铝[Al(OH)3]及百白破疫苗联合致敏和OVA生理盐水雾化激发的方法制备哮喘模型。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平。结果:正常对照组与哮喘模型组、哮喘模型组与各治疗组大鼠肺组织T-bet、GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,祖发奇尼治疗后哮喘大鼠肺组织GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05),而T-bet的表达水平显著增高(P<0.05);祖发奇尼高剂量治疗组大鼠肺组织GATA-3、STAT-3 mRNA的表达水平明显低于低剂量治疗组(P<0.05),而T-bet的水平明显高于低剂量治疗组(P<0.05)。各组大鼠肺组织T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达水平呈负相关关系(r=-0.696),STAT-3mRNA表达水平与T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达水平分别呈负、正相关(r=-0.767,r=0.772),P值均<0.05。结论:祖发奇尼可能在转录水平对Th1、Th2和Th17的分化进行调节,发挥抗炎作用。     

Foxp3转染对哮喘小鼠脾淋巴细胞功能的影响

目的: 转染Foxp3至哮喘小鼠脾淋巴细胞,探讨Foxp3表达对脾淋巴细胞功能的影响。方法: 卵白蛋白(OVA)致敏激发制作哮喘小鼠模型,收集培养脾脏淋巴细胞;使用电穿孔法转染真核表达载体pcDNA3.1(-)-Foxp3至脾脏淋巴细胞,并设转染空质粒组和对照组;RT-PCR和Western blotting检测Foxp3的表达;流式细胞术检测转染后CD4⁺CD25⁺ Treg细胞/CD4⁺细胞比例;MTT法检测转染后的脾脏淋巴细胞增殖反应,ELISA检测脾淋巴细胞上清中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的含量。结果: 转染组Foxp3 mRNA 和蛋白的表达水平显著高于空质粒组和对照组;转染Foxp3后CD4⁺CD25⁺ Treg细胞/CD4⁺细胞比例显著高于空质粒组和对照组;与空质粒组和对照组相比,转染pcDNA3.1(-)-Foxp3质粒明显抑制了脾淋巴细胞增殖;转染组细胞上清中IL-4和IFN-γ含量低于空质粒组和对照组。结论: 转染pcDNA3.1(-)-Foxp3至哮喘小鼠脾淋巴细胞,Foxp3得到有效表达。Foxp3的高表达能增加CD4⁺CD25⁺ T细胞的数量,抑制哮喘小鼠脾淋巴细胞的增殖以及Th1和Th2细胞因子的产生。     

高原红细胞增多症模型大鼠骨髓CD71~+细胞GATA-1和GATA-2表达的相关性

目的:探讨高原红细胞增多症(HAPC)模型大鼠骨髓CD71+细胞转录因子GATA-1和GATA-2表达的相关性。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和HAPC模型组。在海拔4 300 m自然环境下复制HAPC模型并采用骨髓涂片、骨髓细胞分类计数和血液学参数检测进行验证。流式细胞术检测骨髓CD71~+细胞数量相对变化趋势;RT-q PCR和Western blot法检测GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达变化,低氧培养CD71~+细胞,筛选最佳干扰序列GATA-1 shRNA1后,转染96 h,RT-q PCR和Western blot法检测GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达水平。结果:骨髓细胞分类计数、涂片及血液学参数检测结果显示,HAPC大鼠模型复制成功。与对照组比较,HAPC模型组骨髓CD71~+细胞明显增多,骨髓CD71~+细胞GATA-1的mRNA和蛋白表达增高,GATA-2的mRNA和蛋白表达差异无统计学显著性。对照组GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达呈负相关,HAPC模型组GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达无显著相关性。GATA-1 shRNA1干扰96 h后,GATA-1的mRNA和蛋白表达低于对照组,但是GATA-2的mRNA和蛋白表达变化差异无统计学显著性。结论:HAPC大鼠骨髓CD71+细胞GATA-1和GATA-2表达异常,两者的负相关关系改变可能是导致HAPC发生的机制之一。     

金黄色葡萄球菌肠毒素对小鼠慢性哮喘模型的抗炎作用

目的：用金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）和肠毒素B（SEB）干预幼年小鼠,观察它们对小鼠慢性哮喘气道炎症的影响以及对气道内相关细胞因子水平的调节作用。方法：实验组中BALB/c小鼠在出生后1周开始腹腔注射0.1 mL SEA或SEB（浓度1 mg/L）,隔天注射,共7次。其它小组注射相同剂量生理盐水对照。BALB/c 小鼠出生后4周建立哮喘模型,实验组和模型组分别在0、7和14 d用卵白蛋白（OVA）腹腔注射致敏,在28 d开始隔天OVA雾化激发哮喘,共7次,末次激发后24-48 h内取支气管肺泡灌洗液（BALF）,进行嗜酸性粒细胞和总白细胞计数,其余BALF离心-70 ℃冻存检测细胞因子,固定肺组织做病理切片分析。结果:SEA组和SEB组小鼠肺组织炎症反应轻于模型组,BALF中嗜酸性粒细胞数量少于模型组 (P＜0.05);SEA、SEB组BALF中Th1细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）高于模型组(P＜0.05);而Th2细胞因子白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）和嗜酸性粒细胞趋化因子（eotaxin）均低于模型组(P＜0.01)。结论:早期感染 SEA、SEB可以减少小鼠慢性哮喘支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的数量,可能通过调节Th1/Th2细胞因子比值减轻气道中的哮喘炎症反应。     

尼古丁对卵蛋白致敏大鼠CD4+T细胞Th1/Th2细胞因子和T-bet/GATA-3表达的影响

目的 研究尼古丁对卵白蛋白致敏大鼠CD4+T淋巴细胞Th1/Th2平衡的影响.方法 卵清白蛋白(OVA)腹腔注射致敏Wistar大鼠,CD4+T淋巴细胞纯化柱分离大鼠脾脏CD4+T细胞,体外培养,将细胞随机分为4组:对照组、1 μg/ml尼古丁组、10 μg/ml尼古丁组、100μg/ml尼古丁组(各组加等浓度的OVA),不同浓度尼古丁刺激24 h,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液IFN-γ和IL-4含量,实时荧光定量PCR检测培养细胞T-bet和GATA-3 mRNA的表达.结果 (1)不同尼古丁干预组IFN-γ的表达分别为(113.78±6.06) ng/L、(70.31±7.26) ng/L、( 20.00±2.14)ng/L,均较对照组[(142.30±5.89) ng/L]明显减少,差异有统计学意义(F=265.52,P＜0.01);不同尼古丁干预组IL-4的表达分别为(50.97±3.07) ng/L、(69.49±3.91) ng/L、( 93.63±4.56)ng/L,均较对照组[ (36.91±3.24) ng/L]明显增加,差异有统计学意义(F=128.67,P＜0.01).(2)不同尼古丁干预组T-bet mRNA分别为0.73±0.03、0.57±0.04、0.31 ±0.00,均较对照组(0.98±0.09)明显减少,差异有统计学意义(F=75.76,P＜0.01);不同尼古丁干预组GATA-3 mRNA的表达分别为4.31±0.26、5.16±0.23、1.56±0.14,均较对照组(1.00±0.07)明显增加,差异有统计学意义(F=348.41,P＜0.01).结论 尼古丁可能通过促进转录因子GATA-3 mRNA的表达同时抑制T-bet mRNA的表达,在哮喘Th2过敏性气道炎症中具有一定的作用.