系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞转录因子NF—AT和AP—1活性的初步观察

目的观察系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)NF-AT和AP-1活性,并进一步探讨其临床意义.方法NF-AT和AP-1活性检测采用电泳迁移率改变法(EMSA).结果①活动期(19例)和缓解期(13例)SLE患者PBMC NF-AT活性均显著高于正常对照组(P＜0.05);活动期SLE显著高于缓解期(P＜0.05).②活动期SLE组PBMC AP-1活性均显著低于正常对照组(P＜0.01);缓解期SLE与正常对照组无明显差别(P＞0.05).③血清抗dsDNA抗体阳性SLE患者(21例)NF-AT明显高于抗dsDNA抗体阴性组(11例)(P＜0.05),而两组患者AP-1活性无显著差异(P＞0.05).④SLE患者PBMC NF-AT活性与CRP和SLEDAI呈正相关关系,与ESR、ANA、C3无相关关系;AP-1与上述各临床指标无相关关系.结论SLE外周血单个细胞中存在介导细胞内信号转导的转录因子NF-AT和AP-1表达异常,这可能与SLE的发病机制有关;NF-AT可能与SLE的疾病活性有关.     

系统性红斑狼疮PBMCs c-myc mRNA的表达及其与疾病活动性相关性研究

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)外周血单个核细胞(PBMCs)的c-myc mRNA表达在SLE发病中的作用.方法:从33例SLE患者及20例健康对照组外周静脉血中分离PBMCs,提取总RNA作模板,按文献设计合成c-myc引物,以β-actin作内参,应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SLE患者及健康对照的PBMCs c-myc mRNA表达水平并进行组间比较,用系统性红斑狼疮疾病活动性指数(SLEDAI)评定每例患者疾病活动性,并对SLE患者PBMCs的c-myc mRNA表达水平与SLEDAI进行相关分析.结果:c-myc及β-actin的RT-PCR扩增产物电泳显示分别为268和163 bp条带.SLE患者PBMCs的c-myc mRNA相对表达量为0.58±0.26,而正常对照的相对表达量为0.07 ±0.04,两组差别有显著性(t'=11.024,P=0.000).25例活动期SLE患者的c-myc mRNA相对表达量为0.62±0.25,而8例缓解稳定期SLE患者的c-myc mRNA相对表达量为0.25 ±0.01,组间差别也有显著性(t'=7.86,P=0.000).SLE患者PBMCs的c-myc mRNA相对表达量与SLEDAI呈正相关(r =0.865 1,P＜0.05).结论:SLE患者PBMCs的c-myc mRNA表达异常,c-myc mRNA表达水平与SLE疾病活动评分指数呈直线正相关关系.c-myc mRNA表达水平可作为判断SLE疾病活动性的一个指标.     

系统性红斑狼疮患者外周血Th2型细胞因子受体水平的研究

目的探讨Th2型细胞因子受体(IL-4R、IL-6R、IL-10R)在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及其临床意义.方法应用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测89例SLE患者和30例正常人外周血单核细胞(PBMC)中IL-4R、IL-6R和IL-10R mRNA的表达水平;用ELISA法检测血清中IL-4、IL-6和IL-10水平.结果①活动期SLE患者和非活动期SLE患者及正常人Th2型细胞因子受体阳性表达率为100%.②PBMC中,IL-4R mRNA表达水平活动期SLE患者(1组)为0.604±0.147,非活动期SLE患者(2组)为0.40±0.13,正常人(3组)为0.37±0.07;IL-6R mRNA表达水平1组为0.90±0.27,2组为0.52±0.11,3组为0.57±0.24;IL-10R mRNA表达水平1组为0.87±0.29,2组为0.72±0.21,3组为0.68±0.14.1组和2组间比较无显著性差异(P＜0.05),1组和3组间比较有显著性差异(P=0.00),2组和3组间比较无显著性差异(P＞0.05).③血清中IL-4、IL-6和IL-10水平1组显著高于2组和3组(P＜0.05),2组显著高于3组(P＜0.05).活动期SLE患者和非活动期SLE患者血清中的IL-4水平与PBMC上的IL-4R的表达水平呈正相关(r=0.622和r=0.859,P＜0.05).活动期SLE患者和非活动期SLE患者血清中的IL-6水平与PBMC上的IL-6R的表达水平呈正相关(r=0.887和r=0.615,P＜0.05).活动期SLE患者和非活动期SLE患者血清中的IL-10水平与PBMC上的IL-10R的表达水平呈正相关(r=0.888和r=0.787,P＜0.05).结论Th2型细胞因子及其受体的异常表达可能在SLE疾病活动和发展过程中起重要作用.检测SLE患者PBMC中Th2型细胞因子受体的表达水平可作为疾病的活动性指标之一.     

HSP90以及IL-6在系统型红斑狼疮发病中的作用

目的研究系统型红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中热休克蛋白90(HSP90)、血清中白细胞介素6(IL6)的水平,探讨与活动期SLE的相关性。方法应用Western印迹检测20例SLE活动期患者(A组)与20例正常人(B组)PBMC中HSP90的表达,并利用酶联免疫法(ELISA)检测其血清中IL6水平。结果①A组HSP90表达水平为0.47±0.05,B组为0.18±0.07,差异有统计学意义(P<0.01);②血清中IL6水平在A组[(32.97±8.65)pg/ml]显著高于B组[(10.46±4.33)pg/ml](P<0.05);③A组血清中IL6水平与PBMC中HSP90表达呈正相关(r=0.61,P<0.01),且与SLE疾病活动指数(SLEDAI)正相关(r=0.48,P<0.01)。结论IL6可作为病情活动监测指标,IL6与HSP90的异常高表达可能在SLE发病机制中起重要作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞干扰素诱导基因IFIT1和IFIT4 mRNA表达水平的研究

为分析系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中两个干扰素 （IFN）诱导基因（IFIT1、IFIT4）的表达及其与SLE疾病活动度的相关性,运用实 时定量聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测95例SLE患者与48名正常对照者的 IFIT1、IFIT4的mRNA表达水平,并且与抗ds-DNA抗体等指标比较,分析IFIT1、 IFIT4的mRNA表达水平以及与抗ds-DNA抗体、SLEDAI积分之间的相关性。结果 显示：①SLE组与正常对照组相比,IFIT1、IFIT4的mRNA表达显著增高 （P〈0.01）;SLE活动组与SLE缓解组比较,IFIT1、IFIT4的mRNA表达增高 （P〈0.05）;SLE组IFIT1、IFIT4的mRNA表达水平之间呈正相关（r〉0.5,P〈0.05） 。②抗ds-DNA抗体与IFIT1、IFIT4的mRNA表达水平及SLEDAI积分呈正相关 （r〉0.5,P〈0.05）。结论：SLE患者IFIT1、IFIT4的mRNA表达水平显著增高,并且 与SLEDAI积分呈显著正相关,IFIT1、IF-IT4的mRNA表达水平对SLE患者病情活 动程度的判断有较大价值,抑制这2个基因的表达可能为SLE的治疗提供新的靶 点。     

系统性红斑狼疮患者外周血Th1细胞自噬相关标记物的表达

目的:探讨系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血Th1细胞自噬相关标记物的表达情况及意义.方法:应用流式细胞术检测68例SLE患者及23例正常人外周血Th1细胞自噬相关标记物的表达水平,并分析其与补体C3 、SLEDAI评分和血清Anti-dsDNA水平的相关性.结果:SLE患者Th1细胞自噬标记物Beclin-1和Phospho-mTOR的水平均低于正常人,而LC3的水平高于正常人(均P＜0.05);活动期SLE患者Phospho-mTOR水平低于非活动期患者(P＜0.05).SLE患者Th1细胞Phospho-mTOR水平与SLEDAI评分呈负相关,与血清C3水平呈正相关,与血清Anti-dsDNA水平呈负相关(均P＜0.05).外周血Th1细胞Phospho-mTOR和补体C3水平变化在判断SLE患者疾病活动情况时敏感性高于血清Anti-dsDNA,但特异性不如血清Anti-dsDNA.结论:SLE患者外周血Th1细胞存在自噬异常现象,且自噬相关标记物Phos-pho-mTOR的表达与病情活动度相关,有望成为评价SLE活动度的指标之一.     

系统性红斑狼疮患者外周血调节性T细胞、Foxp3和IL-6的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞(regulatory Tcells,Tregs)、Foxp3mRNA和血浆IL-6表达的意义。方法对38例SLE患者和16例正常人采用流式细胞术检测外周血CD4 CD25 Tregs百分率,RT-PCR检测Foxp3mRNA表达,ELISA法检测IL-6水平。结果①SLE活动组和非活动组的CD4 CD25 Tregs水平均显著低于正常对照组(P<0.01);②SLE活动组的Foxp3mRNA表达水平明显低于正常对照组(P<0.05);③SLE活动组和非活动组血浆的IL-6水平均显著高于正常对照组(P<0.01),而且活动组显著高于非活动组(P<0.05);④38例SLE患者的CD4 CD25 Tregs水平与SLEDAI评分呈显著性负相关(P<0.01),Foxp3mRNA水平与CD4 CD25 Tregs呈显著性正相关(P<0.01),血浆IL-6水平与SLEDAI评分之间呈显著性正相关(P<0.01),血浆IL-6水平与CD4 CD25 Tregs/CD4 细胞比值呈显著负相关(P<0.05)。结论CD4 CD25 Tregs和Foxp3以及IL-6可能在SLE的发生和发展中发挥重要作用。     

系统性红斑狼疮患者血清IL-10的水平及临床意义

目的 观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清IL-10的表达与疾病活动的关系.方法 选取22例SLE患者及24名健康人作为对照,根据狼疮疾病活动指数(SLE disease activity index,SLEDAI)将SLE患者分为活动期组和非活动期组,检测血清抗dsDNA抗体,血清总补体溶血活性(CH50)及C反应蛋白(C reactive protein,CRP),酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-10表达.结果 与对照组[(18.11±6.97)ng/L]相比,IL-10在SLE活动期组[(78.54±5.62)ng/L,P＜0.01]及非活动期组[(30.36±10.98)ng/L,P＜0.05]均有所增高,活动期组增高更为明显(与非活动期组相比,P＜0.05).IL-10水平与SLEDAI呈正相关(SLE活动期,r=0.77,P＜0.01;SLE非活动期,r=0.84,P＜0.01),IL-10的水平与抗dsDNA抗体(r=0.71,P＜0.01)、CRP(r=0.63,P＜0.01)和CH50(r=-0.56,P＜0.05)均相关.结论 IL-10在SLE患者血清中表达升高,在疾病活动时更为明显,IL-10能反应疾病活动的程度,可以做为临床观察SLE疾病活动的指标之一.     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞miR-125b及miR-145的表达及临床意义

目的探讨miR-125b及miR-145在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其临床意义。方法选取海南省人民医院收治的136例SLE患者,采用SLE病情活动指数(SLEDAI)评分将其分为低活动组(n=75)和高活动组(n=61),另选取60例健康体检者作为对照组。采用实时定量PCR(RT-PCR)法检测各组PBMC中miR-125b及miR-145水平,分析其对SLE患者的诊断价值。Pearson相关分析SLE患者miR-125b及miR-145水平与抗双链DNA(dsDNA)抗体、C3、C4、IgG、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)及SLEDAI评分的相关性。结果 SLE组、高活动组和低活动组抗dsDNA抗体、ESR、IgG及CRP水平均明显高于对照组(P<0.05),而C3及C4水平均明显低于对照组(P<0.05)。SLE组、高活动组和低活动组PBMC中miR-125b(0.84±0.23、0.42±0.09和1.53±0.28 vs 6.12±1.83)及miR-145(0.68±0.17、0.35±0.06和1.12±0.20 vs 2.15±0.64)表达水平均明显低于对照组(P<0.01),且高活动组PBMC中miR-125b(0.42±0.09 vs 1.53±0.28)及miR-145(0.35±0.06 vs1.12±0.20)表达水平明显低于低活动组(P<0.01)。SLE患者治疗后miR-125b(2.60±0.71 vs 0.84±0.23)及miR-145(1.96±0.58 vs 0.68±0.17)表达水平明显高于治疗前(P<0.01),SLE患者治疗后抗dsDNA抗体(96.24±17.20 vs 272.36±64.35)水平明显低于治疗前(P<0.01)。ROC曲线分析显示,miR-125b、miR-145及抗dsDNA抗体三项联合诊断SLE的AUC(95%CI)为0.928(0.871～0.986),其敏感度(90.4%)和特异度(85.0%)较好。相关分析显示,SLE患者miR-125b、miR-145与抗dsDNA抗体、IgG、SLEDAI评分均呈负相关(P<0.05),miR-125b与miR-145呈明显正相关(r=0.805,P<0.05)。结论 miR-125b及miR-145水平在SLE患者PBMC中明显降低,且与SLE病情活动相关,联合抗dsDNA抗体检测对SLE诊断具有一定价值。     

TLR9、IFN-α和BAFF水平与系统性红斑狼疮的相关性研究

目的检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)Toll样受体(TLR)-9 mRNA及血清干扰素(IFN)-α、B细胞活化因子(BAFF)水平,探讨TLR9与SLE疾病活动的关系及与IFN-α、BAFF在SLE发病中可能的相互作用。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测40例SLE患者及20例健康对照者PBMCs中TLR9 mRNA水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测60例SLE患者及20例健康对照者血清IFN-α、BAFF水平。结果 1SLE患者外周血单个核细胞TLR9 mRNA表达水平较健康对照组上调(P0.05);TLR9 mRNA表达水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)、血沉(ESR)呈正相关(P0.01,P0.05);与补体3(C3)呈负相关(P0.05)。2SLE患者血清中BAFF、IFN-α水平高于健康对照(P均0.05);BAFF、IFN-α水平均与SLEDAI呈正相关(P0.05)。3SLE患者中抗ds-DNA抗体阳性者TLR9 mRNA、BAFF与IFN-α水平高于阴性者(P均0.05)。4SLE患者外周血单个核细胞TLR9mRNA表达水平与血清中BAFF、IFN-α水平正相关(P0.01);血清中BAFF与IFN-α呈正相关(P0.05)。结论 SLE患者外周血单个核细胞TLR9 mRNA表达上调,血清中BAFF、IFN-α分泌增加,均与疾病活动相关。SLE患者外周血单个核细胞TLR9 mRNA表达与血清IFN-α、BAFF水平之间及BAFF和IFN-α之间均呈显著正相关,提示TLR9、BAFF及IFN-α参与了人类SLE的发病过程并相互调控,在SLE疾病活动维持中起重要作用。     

尖锐湿疣组织中IFN-γ mRNA、IL- 4 mRNA的表达

目的:通过检测尖锐湿疣(CA)组织中干扰素γ(IFN-γ)mRNA和白介素4( IL-4) mRNA的表达情况来研究其与尖锐湿疣复发的关系.方法:以正常包皮组织作为对照,采用原位逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测22例治疗后复发CA患者和14例未复发患者皮损中IFN-γ mRNA和IL-4 mRNA的原位表达情况.结果:CA患者皮损局部IFN-γ mRNA和IL-4 mRNA的表达均高于正常对照组(P<0.01);复发组IL-4 mRNA的表达均高于未复发组,未复发组IFN-γ mRNA的表达均高于复发组(P<0.01).结论:IFN-γ mRNA表达增高有利于CA的消退.     

Quality control of eukaryotic mRNA: safeguarding cells from abnormal mRNA function

Cells routinely make mistakes. Some mistakes are encoded by the genome and may manifest as inherited or acquired diseases. Other mistakes occur because metabolic processes can be intrinsically inefficient or inaccurate. Consequently, cells have developed mechanisms to minimize the damage that would result if mistakes went unchecked. Here, we provide an overview of three quality control mechanisms--nonsense-mediated mRNA decay, nonstop mRNA decay, and no-go mRNA decay. Each surveys mRNAs during translation and degrades those mRNAs that direct aberrant protein synthesis. Along with other types of quality control that occur during the complex processes of mRNA biogenesis, these mRNA surveillance mechanisms help to ensure the integrity of protein-encoding gene expression.     

癫痫大鼠海马NMDA受体亚基NR2A和BDNF mRNA水平的检测

目的 通过锂-匹罗卡品癫痫模型(ithium-pilocarpine seizures rats model of epilepsy,LPS),研究NMDA受体亚基NR2A、BDNF mRNA的表达,探讨NR2A、BDNF在LPS中的作用.方法 建立氯化锂-匹罗卡品大鼠模型,运用原位杂交技术检测致痫后各组不同时间点海马CA1、CA3及DG区NR2A与BDNF mRNA的表达.结果 LPS海马NR2A、BDNF mRNA在各观察时间点及部位模型组与正常对照组比较均有明显上调,且有显著统计学差异(P＜0.05).模型组NR2A mRNA的表达上调7 d达峰值(P＜0.05);而BDNF mRNA表达上调14 d达峰值.VPA干预组NR2A mRNA在大鼠海马不同时间及部位(除1 d的CA3区)的表达较模型组明显下调(P＜0.05);BDNF mRNA在大鼠海马不同时间及部位(除28 d的DG区)的表达较模型组明显下调(P＜0.05).结论 锂-匹罗卡品腹腔注射可诱导大鼠海马NR2A和BDNF mRNA的表达明显上调;NR2A mRNA表达的增强可能是诱导调控BDNF mRNA表达增强的重要机制之一,说明NMDA受体亚基NR2A可能成为抑制癫痫发作的新靶点.     

Cellular localisation of somatostatin mRNA and neuropeptide Y mRNA in foetal striatal tissue grafts

Using in situ nucleic acid hybridisation histochemistry, we have studied the expression of somatostatin mRNA and neuropeptide Y mRNA in grafts of embryonic striatal neurones implanted into the ibotenic acid-lesioned rat neostriatum. Tissue sections of the grafted striatum were incubated with either 32P- or 35S-labelled complementary oligodeoxyribonucleotide probes specific for somatostatin mRNA and neuropeptide Y mRNA, exposed with X-ray film and dipped in Ilford K-5 emulsion. Neither somatostatin mRNA nor neuropeptide Y mRNA was detectable in the ibotenic acid-lesioned striatum indicating a pronounced degeneration of somatostatin- and neuropeptide Y-containing neurones. However, in the striatal grafts the levels of somatostatin mRNA and neuropeptide Y mRNA were substantially increased over those in the control intact striata. The results suggest that in the grafts, somatostatin mRNA and neuropeptide Y mRNA were expressed in a higher proportion of primordial striatal neurones and there was also an increased level of expression of each neuropeptide gene per individual neurone (reflecting a higher synthetic activity of such neurones) compared to the intact mature striatum. These data demonstrate the sensitivity of the in situ hybridisation technique to study patterns of gene expression in developing neuronal tissues after transplantation.     

无义介导的mRNA降解与肿瘤

无义介导的mRNA降解（nonsense-mediated mRNA decay，NMD）能够选择性降解含有翻译提前终止密码子(premature translation termination condon, PTC)的mRNA，从而防止对机体有害的截短蛋白(truncated proteins)的产生，它是真核生物中广泛存在的一种高度保守的有效的监督机制。 NMD与肿瘤发生发展过程中的基因突变有密切关系。