2-甲氧雌二醇诱导人子宫内膜癌细胞株凋亡的实验研究

目的:探讨2-甲氧雌二醇(2-ME)对人子宫内膜癌细胞株KLE细胞凋亡的影响。方法:选用人子宫内膜癌细胞株KLE进行体外培养,实验组加入不同浓度2-ME,对照组不含2-ME。用电子显微镜(电镜)观察细胞形态变化;流式细胞仪(FCM)观察细胞的凋亡率及细胞周期的变化,以及免疫组织化学方法检测P53和Bcl-2的表达强度。结果:2-ME作用后G0/G1期细胞增加,并伴随G0/G1期细胞的增加,出现细胞凋亡峰和凋亡率的升高(P<0.05)。电镜下观察到KLE细胞染色体边集、核固缩、凋亡小体,P53和bc1-2阳性表达率明显下降。结论:2-ME对人子宫内膜癌KLE细胞株有诱导凋亡作用。     

华蟾素对子宫内膜癌HHUA细胞芳香化酶表达的影响和意义

目的探讨华蟾素（cinobufagin）对体外培养子宫内膜癌HHUA细胞芳香化酶和雌二醇（estradiol,E2）表达的影响和意义。方法30例原代培养的正常子宫内膜组织和30例子宫内膜癌HHUA细胞分别取自2007年至2008年因功能性子宫出血（功血）而在本院诊刮和因子宫内膜癌在本院手术治疗患者。其组织学检查分别确诊为增生期内膜和子宫内膜癌HHUA细胞,体外（invitro）培养正常子宫内膜细胞（A组,n=30）和子宫内膜癌HHUA细胞。再将30例子宫内膜癌患者的子宫内膜癌HHUA细胞分成两部分,一部分纳入子宫内膜癌HHUA细胞组（B组,n=30）,一部分用华蟾索干预后,纳入子宫内膜癌HHUA细胞华蟾素干预组（C组,n=30）,应用RT—PCR检测芳香化酶表达,发光免疫法检测雌二醇表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果正常子宫内膜细胞（A组）不表达芳香化酶mRNA（aromatasemRNA）,不合成雌二醇,细胞凋亡率为（8．02±0．93）％;子宫内膜癌HHUA细胞（B组）表达芳香化酶mRNA,可合成雌二醇,细胞凋亡率为（1．08±0．21）％,低于正常子宫内膜细胞（P〈0．05）。华蟾素干预（C组）后,子宫内膜癌HHUA细胞芳香化酶mRNA的表达和雌二醇的合成均下降,细胞凋亡率为（27．14±4．12）％,高于B组（P〈0．05）。结论子宫内膜癌HHuA细胞可利用芳香化酶合成内源性雌二醇,华蟾素可抑制子宫内膜癌HHuA细胞芳香化酶mRNA的表达和雌二醇的合成,抑制癌细胞增殖。     

大剂量米非司酮和孕激素联合治疗子宫内膜癌的临床效果及安全性评价

目的:探讨大剂量米非司酮和孕激素联合治疗子宫内膜癌的临床效果及安全性。方法:选择我院2016年5月-2017年7月收治的70例子宫内膜癌患者作为研究对象,随机分为两组,对照组35例,口服大剂量醋酸甲地孕酮治疗,观察组35例,大剂量米非司酮和孕激素联合口服治疗。观察两组患者临床效果。结果:观察组治疗总有效率达91.43%,显著高于对照组的71.43%,P0.05;观察组PR、ER、PCNA、Bcl-2表达水平显著低于对照组,Bax表达水平显著高于对照组,P0.05。结论:大剂量米非司酮和孕激素联合治疗子宫内膜癌能够显著提高临床疗效,并具有良好的安全性。     

孕激素在子宫内膜癌治疗中的作用

目的通过观察孕激素对尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)产生的影响,探讨孕激素治疗子宫内膜癌的机制。方法体外培养人子宫内膜癌细胞株(hec-1b),在实验组中加入含孕激素(1×10-8mol／L)的培养液,对照组加入等量空白培养液,培养48 h后,应用Western-blot和RT- PCR检测2组hec-1b中uPA及其mPNA的表达;将含不同浓度孕激素的培养液加入体外培养的各组hee-1b细胞中,对照组加入等量空白培养液48 h后,应用Hoechst染色,观察不同浓度下,hec- 1b的增殖及凋亡情况。结果在含孕激素血清培养的hec-1b细胞中uPA及其mPNA的表达明显低于无激素血清培养的hec-1b细胞;当孕激素浓度升至1×10-8～1×10-5mol／L时,hec-1b细胞的增殖被明显抑制,细胞凋亡增加,且具有剂量依赖性。结论孕激素能够抑制与子宫内膜癌细胞增殖、侵袭相关的uPA的表达;高浓度的孕激素能诱导子宫内膜癌细胞凋亡。这可能是孕激素治疗子宫内膜癌的机制之一。     

子宫内膜甾体激素受体在不孕症发病机制中的作用

甾体激素受体主要为雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及雄激素受体(AR).三者在子宫内膜的表达存在一定的特点,并受激素及其他生长因子调节.近年来研究发现子宫内膜甾体激素受体的表达异常可能是导致不孕症的重要原因之一.其中,黄体功能不全ER、PR低表达;多囊卵巢综合征ER、PR、AR高表达;子宫内膜异位症(EMs)ER高表达,PR-B/PR-A比率降低.     

子宫内膜癌患者PTEN的表达及其临床意义探讨

目的:研究抑癌基因PTEN在子宫内膜腺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:采用免疫组化SP法检测103例子宫内膜腺癌病理标本PTEN的表达,并对其中54例患者进行5年随访,对PTEN表达情况与生存率进行相关性分析。结果:①子宫内膜腺癌患者PTEN阳性表达率明显高于健康对照组(χ2=83.96,P<0.001)。②子宫内膜腺癌组织分级G3级、临床分期Ⅲ-Ⅳ期、浸润超过1/2肌层厚度及有淋巴结转移者PTEN阳性表达明显降低。③PTEN阳性率与子宫内膜癌术后5年存活率有关(χ2=7.64,r=0.3521,P<0.01),PTEN高表达者,术后5年存活率也越高。结论:子宫内膜癌患者存在PTEN表达下调,PTEN表达与子宫内膜癌临床病理分级、分期、癌细胞浸润、转移及预后有关;子宫内膜组织PTEN检测对诊断子宫内膜癌并判定其恶性程度和预后具有重要意义。     

DJ-1在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的:探讨DJ-1基因mRNA及其蛋白在子宫内膜癌、癌旁组织及正常子宫内膜组织中的表达规律及临床意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白印迹(Western blot)及免疫组织化学Elivision法检测100例子宫内膜癌、癌旁组织及30例正常子宫内膜组织中DJ-1基因mRNA及其蛋白的表达情况,分析DJ-1基因在子宫内膜癌组织中的表达与肿瘤的病理类型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、期别及患者血CA125水平等临床病理特征之间的关系。结果:子宫内膜癌组织中的DJ-1 mRNA及DJ-1蛋白的表达均明显高于癌旁组织及正常子宫内膜组织,癌旁组织及正常子宫内膜组织间表达无显著差异。DJ-1 mRNA的表达与子宫内膜癌的病理类型、期别及血CA125水平无明显相关性;中低分化的子宫内膜癌组织中DJ-1 mRNA的表达高于高分化者,深肌层浸润的子宫内膜癌组织中DJ-1 mRNA的表达高于局限于黏膜层及浅肌层浸润者,DJ-1 mRNA在有淋巴结转移的患者中的表达高于无淋巴结转移者。结论:DJ-1 mRNA及蛋白在子宫内膜癌组织中高表达,且可能参与了子宫内膜癌的发展、浸润和转移等环节的调控。     

裙带菜多糖对人食管癌细胞TE-13生长抑制作用的研究

[目的]观察裙带菜多糖(PUP)对食管癌细胞TE-13的生长抑制作用,探讨其诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡的机制。[方法]以食管癌细胞TE-13作为研究对象,MTT法检测PUP对其增殖的抑制作用;在电子透镜下观察PUP对TE-13超微凋亡结构的影响;流式细胞技术检测其周期分布和凋亡率;RT-PCR法检测PUP对TE-13细胞中凋亡相关基因Survivin表达的影响。[结果]PUP对食管癌细胞TE-13有显著增殖抑制效应,作用时间越长,在一定范围内的PUP浓度越大,抑制效应越强。PUP作用48h时半数抑制浓度(IC50)为52.17μg/ml。25、50、100μg/ml的PUP作用48h后,TE-13均发生凋亡形态的变化;100μg/ml PUP处理72h后,凋亡率为52.19%;周期分布显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少。RT-PCR结果显示PUP能降低食管癌细胞中Survivin mRNA的表达。[结论]PUP在体外显著抑制食管癌细胞TE-13的增殖,其机制与PUP诱导食管癌周期阻滞和下调Survivin mRNA的表达有关。     

干扰KIF14基因对子宫内膜癌细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨KIF14基因对子宫内膜癌顺铂耐药细胞增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法:RT-qPCR和western-blot检测子宫内膜癌细胞Ishikawa及子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP中KIF14水平;将siRNA-KIF14及siRNA-NC转染Ishikawa/DDP细胞作为si-KIF14组和si-NC组,耐药组细胞不做处理,通过克隆形成实验检测干扰KIF14后子宫内膜癌顺铂耐药细胞增殖情况;流式细胞仪检测干扰KIF14后子宫内膜癌顺铂耐药细胞凋亡情况,western-blot检测增殖、凋亡及耐药基因相关蛋白ki-67、Bax、cleaved-Caspase-3、MDR1、P-gp表达水平;取各组细胞加入系列浓度顺铂,MTT法检测干扰KIF14后子宫内膜癌顺铂耐药细胞对顺铂敏感性。结果:与子宫内膜癌细胞Ishikawa相比,KIF14在子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP中高表达(P0.001);与耐药组和si-NC组相比,干扰KIF14后si-KIF14组Ishikawa/DDP细胞克隆形成数目和ki-67蛋白水平下降,细胞凋亡率以及Bax、cleaved-Caspase-3蛋白水平升高,IC50值下降,多药耐药基因MDR1、P-gp蛋白水平下降(均P0.001)。结论:干扰KIF14表达能够抑制子宫内膜癌顺铂耐药细胞Ishikawa/DDP增殖,促进凋亡,增加对顺铂的敏感性。     

三苯氧胺对大剂量孕激素治疗子宫内膜癌的调节作用

子宫内膜癌是常见的妇科恶性肿瘤之一。近年来,我国子宫内膜癌的发率逐渐上升,且呈年轻化趋势,保留生育功能成为这些年轻患者的迫切需求,目前保守治疗常用的药物为孕激素类药物。长期大剂量使用孕激素类药物可导致子宫内膜癌患者对孕激素耐药,子宫内膜癌对孕激素耐药是治疗失败的主要原因,有临床资料显示三苯氧胺可提高子宫内膜癌细胞腺体及间质细胞内孕激素受体(PR)的表达,三苯氧胺与大剂量孕激素联合治疗子宫内膜癌,能增加子宫内膜癌患者保守治疗的成功率。本文检索相关文献,就三苯氧胺对大剂量孕激素治疗子宫内膜癌的调节作用的研究进展做一综述。     

丹参酮ⅡA对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的探索丹参酮ⅡA对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株,按照丹参酮ⅡA浓度的不同将实验分为5组,A组为空白对照组(0μg/m L),B组为溶剂对照组(0.25%DMSO),C组为低浓度组(1μg/mL),D组为中浓度组(5μg/mL),E组为高浓度组(25μg/mL)。通过处理不同时间(24 h、48 h、72 h)后,观察各组细胞的生长状态及形态学变化;采用CCK 8法检测各组细胞的体外增殖情况;采用Flow Cytometry法检测细胞的凋亡率和周期分布情况。结果随着丹参酮药物浓度和作用时间的增加,细胞数量逐渐减少、贴壁性变差、细胞碎片及漂浮细胞增多。Ishikawa细胞的增殖率逐渐下降,Ishikawa细胞的凋亡率和G 2/M期细胞百分比增加,呈时间浓度依赖性增加。结论丹参酮ⅡA可以抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,促进其凋亡,并可诱导其发生G 2/M期阻滞。     

类胡萝卜素对人乳腺癌细胞增殖及bcl-2基因表达的影响

目的 观察类胡萝卜素对人乳腺癌MCF－7细胞存活率、细胞周期和凋亡,以及对凋亡相关基因bcl－2的影响。方法 用MTT检测类胡萝卜素对MCF－7细胞作用的时间效应和剂量效应;流式细胞仪观察类胡萝卜素处理人乳腺癌细胞后细胞周期以及细胞凋亡的改变。用RT－PCR检测凋亡相关基因bcl－2的变化。结果 6种结构不同的类胡萝卜素对MCF－7乳腺癌细胞展现出不同的增殖抑制效果,60μmol／L的β－胡萝卡素和番茄红素在第4天的抑制率分别为88．4％和87．8％,而玉米黄素、角黄素、虾青素和玉米黄素双棕榈酸酯的抑制作用较弱。类胡萝卜素并不诱导87．8％,而玉米黄素、角黄素、虾青素和玉米黄毒素双棕榈酸酯的抑制作用较弱。类胡萝卜素并不诱导MCF－7细胞凋亡,番茄红素可阻滞细胞周期于G1／M,玉米黄素双棕榈酸酯可阻滞细胞周期于G0／G1期,而其他类胡萝卡素并不影响细胞周期。类胡萝卜素可不同程度地下调凋亡相关基因bcl－2mRNA的表达,bcl－2基因的下调与类胡萝卜素的抑制作用呈较明显的相关性。结论 类胡萝卜素可直接抑制人乳腺癌细胞MCF－7的增殖,不同结构的类胡萝卜素可能具有不同的抑制机制。     

不同浓度米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

目的:研究不同浓度米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞凋亡的影响。方法:采用体外培养的子宫肌瘤细胞,用不同浓度米非司酮处理后培养48h,用流式细胞仪分析子宫肌瘤细胞周期和凋亡率的改变。结果:不同浓度的米非司酮均可诱导子宫肌瘤细胞的凋亡,随着米非司酮浓度的增加,子宫肌瘤细胞的凋亡率有增高的趋势(P<0·05),低浓度米非司酮(10-8~10-7mol/L)可使G2/M期子宫肌瘤细胞比例减少(P<0·05),高浓度米非司酮(10-6~10-4mol/L)可使S期细胞比例减少(P<0·05)和G2/M期细胞比例减少(P<0·01)。结论:米非司酮可引起体外培养子宫肌瘤细胞的凋亡,呈现浓度-效应关系,低浓度米非司酮和高浓度米非司酮可能引起不同时期子宫肌瘤细胞的凋亡。     

维生素D类似物EB1089对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨维生素D类似物EB1089对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养维生素D3受体(VDR)阳性和阴性的肝癌细胞株HepG2和HCCT细胞,培养时添加100、10和1nmol/LEB1089,分别作用2、4和6d后,用四唑蓝比色实验(MTT)、平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长;用反转录PCR(RTPCR)检测VDRmRNA的表达;用流式细胞仪和电子显微镜检测细胞凋亡。结果EB1089对VDRmRNA表达阳性的HepG2细胞的抑制率为175%～721%,对VDRmRNA表达阴性的HCCT细胞没有抑制作用;电镜结果显示EB1089可诱导HepG2细胞凋亡,流式细胞仪结果显示凋亡细胞的百分比为214%,并可阻滞细胞周期于G1期。结论EB1089对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用,可通过VDR受体抑制人肝癌细胞的增殖,并可诱导HepG2细胞凋亡。     

FTY720对人乳腺癌MCF-7细胞、喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的:探讨FTY720抑制人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖作用。方法:将人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞用不同浓度FTY720作用48 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡率的影响。结果:MTT结果显示,FTY720对乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖均有抑制作用,而且对喉癌Hep-2细胞抑制作用的浓度依赖性高于对乳腺癌细胞的作用;流式细胞术检测结果显示,FTY720可将乳腺癌MCF-7细胞阻滞于G1期,将喉癌Hep-2细胞阻滞于G2/M期,并明显促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论:一定浓度的FTY720能明显抑制体外培养的乳腺癌和喉癌细胞增殖,调节其细胞周期,诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

下调LOX基因对肾癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及机制研究

目的 探讨LOX对肾癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其作用机制。方法 将si-con、si-LOX质粒分别转染至786-0细胞中,记为si-con组、si-LOX组,转染采用脂质体法。蛋白质印迹（Western Blot）检测赖氨酰氧化酶(LOX)、周期素依赖性激酶4（CDK4）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、蛋白激酶B（Akt）表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果 与正常肾小管上皮细胞HK-2相比,肾癌细胞786-0、GRC-1、A498中LOX表达水平显著升高（P＜0.001）。敲减LOX肾癌细胞786-0的活力显著降低（t=8.440,P＜0.001）,786-0细胞的凋亡率显著升高（t=25.628,P＜0.001）,G0/G1期细胞所占比例增加（t=7.211,P＜0.001）,S期细胞所占比例减少（t=13.190,P＜0.001）,786-0细胞中CDK4、Bcl2、p-Akt表达水平显著降低（t=15.660、13.914、12.349,P＜0.001）,786-0细胞中Bax表达水平显著升高（t=22.057,P＜0.001）。结论 敲减LOX能抑制肾癌细胞增殖,促进细胞凋亡,影响细胞周期,其机制可能与PI3K/Akt信号通路有关,可为肾癌的治疗提供新思路。     

维生素D受体异常表达对大鼠肾小管上皮细胞增殖凋亡的影响

目的 研究维生素D受体（VDR）异常表达对大鼠肾小管上皮细胞增殖凋亡的影响。方法 制取大鼠肾小管上皮细胞,并构建VDR干扰和过表达载体。将VDR干扰和过表达载体分别转染到大鼠肾小管上皮细胞中,通过MTT法检测VDR干扰和过表达后大鼠肾小管上皮细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期;Annexin - PI法检测细胞凋亡情况。结果 与对照组相比,过表达VDR后,大鼠肾小管上皮细胞的VDR蛋白表达显著上调,增殖速度下降,发生G1期阻滞,凋亡比例增多,差异具有统计学意义。而干扰VDR表达后,结果与上述相反,即大鼠肾小管上皮细胞的VDR蛋白表达显著下调,增殖速度加快,细胞凋亡比例降低,差异具有统计学意义。结论 VDR能促进大鼠肾小管上皮细胞发生细胞周期G1期阻滞,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

菌灵诱导小鼠睾丸支持细胞凋亡及周期阻滞的研究

目的 观察多菌灵对小鼠睾丸支持细胞系（TM4）周期及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法 不同浓度(0.25、0.5、1、2、4、8 μg/ml)的多菌灵体外作用TM4细胞48 h,运用MTT法检测OD值及计算细胞存活率,PI染色法检测TM4细胞周期的分布变化,Annexin V/PI双标识标记法检测TM4细胞的凋亡情况,应用荧光探针DCFH - DA法检测TM4细胞内活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）的相对荧光强度,qRT - PCR法检测TM4细胞内Bax和Bcl - 2 mRNA的表达水平。结果 随着多菌灵浓度的升高,TM4细胞的增殖受到抑制,细胞周期分布发生变化,G2/M期的细胞呈现增加的趋势（P＜0.01）,胞内Bax mRNA和ROS表达水平也逐步升高（P＜0.05,P＜0.01）,而Bcl - 2 mRNA表达则逐步下降（P＜0.01）。结论 多菌灵可诱导TM4细胞凋亡并发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与Bax、Bcl - 2 mRNA及ROS的异常表达有关。     

东北菱对鼠肝癌H22细胞凋亡及细胞周期进程的影响

目的研究东北菱对鼠肝癌H22细胞凋亡及周期的影响。方法用东北菱对鼠肝癌如细胞进行体外实验，采用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡。结果细胞周期阻滞在G1／G0期，S期细胞明显减少，凋亡率在43．11％，而阳性5-Fu组凋亡率为19．62％。结论东北菱能促进肿瘤细胞凋亡。