选择性COX-2抑制剂对大肠癌细胞生长的影响

目的　观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT -2 9细胞增殖和凋亡的影响 ,为治疗结肠癌寻找安全有效的化疗药物。方法　采用噻唑蓝 (MTT)比色法 ,流式细胞仪 (FCM)、吖啶橙 /溴化乙啶染色结合荧光显微镜等技术 ,研究塞来昔布对HT -2 9细胞增殖和凋亡的影响。结果　MTT比色法显示体外塞来昔布抑制HT -2 9细胞生长 ,呈浓度和时间依赖性。FCM结果显示典型的亚二倍体“凋亡峰” ,凋亡率在 ( 7 3 1± 2 3 7) %～ ( 4 8 3± 2 86) %;使G0 /G1 期细胞比例升高 ,S期和G2 /M期比例下降 ,呈一定剂量依赖关系。荧光显微镜下见典型的凋亡形态学改变 :细胞体积缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量和时间依赖。结论　体外塞来昔布抑制HT -2 9细胞增殖 ,并诱导细胞凋亡。这种作用可能与阻止细胞周期进展有关     

NDGA联合塞来昔布对结肠癌细胞诱导凋亡的研究

目的观察5-脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-LOX）抑制剂去申二氢愈创木酸（nordi-hydroguaiaretic acid,NDGA）联合选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂塞来昔布（Cele-coxib）对结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的影响。方法用不同浓度NDGA及塞来昔布处理HT-29细胞,应用甲基偶氮唑蓝（MTT）法、倒置相差显微镜观察、AnnexinV／PI法和RT-PCR方法,研究其抑制HT-29细胞增殖,诱导凋亡的作用。结臬M1丫r法显示,与对照组相比,NDGA和塞来昔布及两药联用组细胞活性下降（0．432±0．024、0．425±0．013、0．303±0．014VS0．693±0．018itz18．79,25．75,37．64,P〈0．01）。NDGA联合塞来昔布组与单独应用NDGA或塞来昔布差异有统计学意义（t=10．21,14．14,P〈0．01）。倒置相差显微镜下显示两种药物都能使体外培养的结肠癌HT-29细胞的形态发生明显变化,而两种药物联合应用后变化更明显。激光共聚焦显微镜下显示应用NDGA及塞来昔布后可以引起HT-29细胞凋亡。RT—PcR检测发现药物作用后Caspase-3表达上调,两种药物联合应用后上调最多。结论MDGA联合塞来昔布较之单独应用可以更强抑制体外培养的HT09细胞增殖,并诱导凋亡,其抑制HT-29细胞诱导凋亡机制与激活Caspase-3途径有关。     

COX-2在上皮性卵巢肿瘤的表达及塞来昔布对卵巢癌A2780细胞株增殖的影响

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)在上皮性卵巢肿瘤的表达及环氧化酶-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)在体外对人卵巢癌A2780细胞株增殖的影响。方法:①采用免疫组化SP法检测COX-2在65例上皮性卵巢癌、18例交界性与18例良性上皮性卵巢肿瘤及9例正常卵巢组织中的表达;②采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察塞来昔布在体外对A2780细胞增殖的影响;③流式细胞仪(FCM)测定塞来昔布在体外对A2780细胞周期的影响。结果:①COX-2在上皮性卵巢癌组(73.80%)及交界性卵巢肿瘤组的表达(66.70%)显著高于良性卵巢肿瘤组(16.70%)及正常卵巢组(11.10%),均P<0.05;②MTT显示,塞来昔布在体外以时间-剂量依赖方式抑制A2780增殖(P<0.05);③塞来昔布作用72 h后A2780细胞周期呈剂量依赖方式出现G0/G1期阻滞(P<0.05)。结论:①COX-2在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤中的表达明显增强,COX-2可能在交界性及恶性上皮性卵巢肿瘤的发生、发展中起一定作用;②体外特异性COX-2抑制剂(塞来昔布)能够抑制卵巢癌A2780细胞株增殖,有可能成为卵巢癌化疗的有效药物。     

大豆异黄酮诱导HeLa细胞凋亡、细胞周期阻滞和[Ca~(2+)]_i浓度升高(英文)

目的探讨大豆异黄酮SI-I抑制HeLa细胞生长机制。方法 HeLa细胞经过10,20,and 40 g/ml的大豆异黄酮SI-I处理4d后,采用倒置显微镜和透射电镜观察其形态学变化,利用流式细胞仪检测细胞周期分布,通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞中[Ca2+]i浓度。结果倒置显微镜观察到HeLa细胞数量明显变少,细胞严重变形。透射电镜观察到HeLa细胞发生凋亡形态学变化。流式细胞仪分析发现HeLa细胞周期阻滞于G0/G1或G2/M期,细胞凋亡率随SI-I浓度的增加而上升。激光扫描共聚焦显微镜观察到凋亡的HeLa细胞内[Ca2+]i显著升高。结论大豆异黄酮SI-I抑制HeLa细胞生长是通过凋亡诱导作用,并且细胞周期阻滞和[Ca2+]i浓度升高可能是其诱导凋亡机制之一。[营养学报,2012,34(4):373-378]     

Wortmannin抑制PI3K途径对白血病细胞周期特异性及BCL-2蛋白表达影响的研究

目的探讨Woltmannin抑制PI3K途径对K562、NB4、HL60细胞周期特异性、BCL-2蛋白表达的影响。探明PI3K途径在K562、NB4、HL60细胞周期、细胞凋亡、BCL-2蛋白表达中的不同作用。方法用PI3K特异抑制剂Wortmannin抑制PI3K途径．AraC诱导细胞凋亡，药物作用214h后，细胞经DNA特异性荧光染色，用流式细胞仪(FCM)检测细胞DNA含量、BCL-2蛋白表达。Multicyele Verson 4．00软件分析细胞DNA含量直方图及细胞周期、BCL-2蛋白表达。观察各细胞系增殖周期、细胞凋亡的变化。结果K562、NB4、HL60细胞经Wortmannin、Ara-C、Wortmannin Ara-C作用24h后细胞出现DNA含量低于G1期的亚二倍体峰(亚G1期细胞)这一凋亡细胞的特征性改变，实验组细胞增殖指数(PI)明显低于对照组，凋亡百分比显著增加。Wortmannin可以通过抑制PI3K通路使K562细胞阻滞于G1期。作用24h后细胞实验组细胞BCL-2蛋白表达较对照组降低，说明Wortmannin可促进K562细胞的凋亡。结论Wortmannin可以通过抑制PI3K通路抑制K562细胞的增殖。并可以通过抑制PBK通路使K562细胞阻滞于GI期。Wortmannin可抑制K562细胞的BCL-2蛋白表达，促进K562细胞的凋亡。Wortmannin属于细胞周期特异性药物。     

家蝇幼虫抗菌蛋白诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的探讨

目的 观察家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞凋亡的诱导，探讨其抗肿瘤作用机制。方法 流式细胞仪测定家蝇幼虫抗菌蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响；HE染色法观察细胞凋亡形态，并测定细胞凋亡指数（AI）。结果 在0．10％组A375的G／M期升高，S期降低。0．50％组G0／G1期、G2／M期和AI／PI（增殖指数）显著增加，S期及PI明显减少。2．50％组S期、PI、AI／PI及细胞凋亡率（Ap）显著增高，G0／G1期大大减少。12．50％组G2／M期、PI、AI／PI及Ap显著增高，G0／G1期和S期明显下降。结论 家蝇幼虫抗菌蛋白对黑色素瘤A375细胞有明显的抑杀作用；家蝇幼虫抗菌物质可能系通过细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡而抑制黑色素瘤A375细胞生长。     

土荆皮酸对HeLa细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的:研究土荆皮酸对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响。方法:采用PCR-ELISA方法检测HeLa细胞经PAB作用前后端粒酶活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布。结果:经PAB作用后,HeLa细胞端粒酶活性下降,随药物浓度增加和作用时间的延长,其抑制作用增强;PAB作用24h后,HeLa细胞G2/M期细胞增多,S期细胞减少,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性。结论:PAB能抑制HeLa细胞的端粒酶活性,其机制可能与其细胞周期阻滞作用有关。     

姜黄素对人肺成纤维细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人肺成纤维细胞(human lung fibroblasts,HLFs)体外生长、细胞周期及凋亡的影响。方法应用CCK-8、Annexin-V/PI、PI流式细胞分析术、免疫印迹法,检测姜黄素对细胞的增殖、凋亡、细胞周期和Bax蛋白表达的影响。结果姜黄素对HLFs的增殖有抑制作用,可促进HLFs的早期凋亡,对细胞周期可产生G2/M期阻滞,增加HLFs的Bax蛋白的表达。结论姜黄素可抑制HLFs的增殖并能诱导其凋亡,其机制可能与细胞的G2/M期阻滞及凋亡相关蛋白的表达增强有关。     

FTY720对人乳腺癌MCF-7细胞、喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的:探讨FTY720抑制人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖作用。方法:将人乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞用不同浓度FTY720作用48 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡率的影响。结果:MTT结果显示,FTY720对乳腺癌MCF-7细胞和喉癌Hep-2细胞增殖均有抑制作用,而且对喉癌Hep-2细胞抑制作用的浓度依赖性高于对乳腺癌细胞的作用;流式细胞术检测结果显示,FTY720可将乳腺癌MCF-7细胞阻滞于G1期,将喉癌Hep-2细胞阻滞于G2/M期,并明显促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡。结论:一定浓度的FTY720能明显抑制体外培养的乳腺癌和喉癌细胞增殖,调节其细胞周期,诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用及影响因素的研究

目的:研究塞来昔布(Celecoxib)对人宫颈癌HeLa细胞放射增敏作用以及给药顺序对放射增敏作用的影响。方法:采用MTT法测定塞来昔布作用于HeLa细胞的半数抑制浓度(IC50),应用克隆形成和单击多靶数字模型检测塞来昔布的放射增敏作用及不同给药顺序的细胞存活率及放射增敏比(SER)。结果:塞来昔布对宫颈癌Hela细胞株增殖有抑制作用,其作用呈现剂量-效应和时间-效应依赖性,塞来昔布对Hela细胞的IC50为44μmol/L,取40μmol/L塞来昔布联合X射线照射作用于Hela细胞,先给药后照射组SER为2.46,给药中照射组SER为1.91,先照射后给药组SER为1.44;免疫化学实验证实塞来昔布可下调Hela细胞VEGF的表达。结论:塞来昔布对Hela细胞具有放射增敏作用,其增敏作用有顺序依从性;其机制可能是通过下调人宫颈癌Hela细胞的VEGF表达而实现。     

NaHS抑制宫颈癌细胞增殖的初步机制

目的:探讨NaHS对子宫颈癌细胞增殖的影响及其机制。方法:首先将子宫颈癌HeLa细胞分成对照组和不同剂量的NaHS处理组,并采用MTT法检测细胞存活率和流式细胞仪检测细胞凋亡率。使用不同浓度的格列本脲预先处理HeLa细胞30 min,再用400μmol/L的NaHS处理24 h,探讨NaHS抑制子宫颈癌细胞增殖的初步机制。结果:不同剂量的NaHS处理组能明显抑制HeLa细胞增殖而促进HeLa细胞凋亡;格列本脲预先处理可以部分阻断这种作用。结论:NaHS抑制子宫颈癌细胞增殖可能与ATP敏感性钾通道有关。     

人参皂甙Rg3作用PI3K/AKT通路诱导人子宫内膜癌Hec-1-B细胞凋亡的研究

目的:探讨人参皂甙Rg3(ginsenoside Rg3,GS-Rg3)作用PI3K/AKT通路对Hec-1-B细胞的诱导凋亡作用。方法:采用MTT法观察GS-Rg3对Hec-1-B细胞生长的抑制作用;流式细胞术观察GS-Rg3作用Hec-1-B细胞后对Hec-1-B细胞凋亡的影响;Transwell小室分析细胞体外的侵袭力;Western blotting检测PI3K、AKT的表达。结果:GS-Rg3对Hec-1-B细胞的体外增殖有明显的抑制作用(P<0.05),并随着药物浓度和时间增加其抑制作用更加明显,在一定浓度范围内呈剂量、时间依赖性。GS-Rg3能够诱导Hec-1-B细胞凋亡,细胞端粒酶PI3K、AKT表达水平及活性显著降低。结论:GS-Rg3能够通过诱导人子宫内膜癌Hec-1-B细胞发生凋亡而发挥抑制细胞生长作用,抑制PI3K、AKT的活性是GS-Rg3体外诱导人子宫内膜癌Hec-1-B细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

STAT3信号转导通路调控人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的机制

目的:探讨信号传导和转录激活因子3(Stat3)通路与人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的关系,明确以Stat3为靶向的信号传导通路调控Hela细胞增殖、凋亡的分子机制。方法:人宫颈癌Hela细胞用酪氨酸激酶(JAK)抑制剂AG490处理,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡及细胞周期;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JAK2、Stat3、磷酸化Stat3(p-Stat3)、CyclinD1、Survivin的表达。结果:人宫颈癌Hela细胞中Stat3、p-Stat3、JAK2呈阳性表达。AG490呈时间和剂量依赖的方式抑制Hela细胞的增殖,促进其凋亡(P<0.05)。Western blot检测显示p-Stat3、CyclinD1、Survivin的表达水平随作用剂量的增大而逐渐下降(P<0.05),Stat3的表达未见明显变化(P≥0.05)。结论:Stat3信号转导通路与宫颈癌Hela细胞的增殖、凋亡密切相关,可能通过其下游靶基因蛋白CyclinD1、Survivin发挥作用。阻断Stat3信号通路可能为宫颈癌的防治提供一种新的策略。     

PI3K/Akt/mTOR信号传导通路在肿瘤的研究进展

PI3K/Akt/mTOR信号传导通路是哺乳动物细胞内非常重要的信号传导通路之一,它通过影响其下游多种效应分子的活化状态,发挥在细胞内抑制凋亡、促进增殖的作用.最新研究表明PI3K/Akt/mTOR信号传导通路与包括肝癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤的发生发展密切相关,且PI3K/Akt/mTOR信号传导通路的研究在肿瘤的治疗中同样发挥着重要的作用.因此文章将PI3K/Akt/mTOR信号通路的组成、分子机制、功能、及其在肿瘤治疗中的应用前景等方面的研究进展作一综诉.     

4-HPR通过内质网应激途径诱导宫颈癌细胞凋亡

目的探索芬维A胺（4-HPR）对宫颈癌细胞的抗肿瘤作用及其机制。方法应用MTT法检测4-HPR对宫颈癌细胞的生长抑制作用。Annexin V—FITC和碘化丙锭（PI）双染检测细胞凋亡。用对氧化敏感的荧光染料DCFH—DA检测细胞内活性氧。Western blot检测Bcl-2和CHOP蛋白表达。结果4-HPR以浓度依赖方式抑制宫颈癌HeLa细胞的生长,其IC50约为5μM。4-HPR以浓度依赖方式诱导HeLa细胞凋亡,同时伴随Bcl-2蛋白表达下调。4-HPR短暂处理能升高细胞内活性氧水平。4-HPR还激活内质网应激凋亡途径,表现以活性氧依赖方式升高CHOP蛋白表达。结论4-HPR对宫颈癌具有抗肿瘤作用,其机制为诱导产生细胞内活性氧和内质网应激通路的激活。     

Inotodiol对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的:研究桦褐孔菌单体(Inotodiol)对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法:采用MTT法检测Inotodiol对HeLa细胞的增殖抑制率;通过倒置显微镜、HE染色观察HeLa细胞形态学改变;通过免疫细胞化学法检测核增殖抗原Ki-67表达。结果:随着Inotodiol浓度增加及作用时间延长,抑制率明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。Inotodiol作用于Hela细胞后,形态学观察示细胞凋亡。Inotodiol组Ki-67表达明显降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Inoto-diol对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用。     

奈达铂对宫颈癌Hela及Siha细胞的作用

目的:比较奈达铂(NDP)体外对人宫颈腺癌细胞Hela细胞及鳞癌细胞Siha的抑制作用并探讨其作用机制。方法:以2.5～40μg/ml NDP分别作用于Hela及Siha细胞24 h,48 h,72 h,MTT法检测抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);利用流式细胞术(FCM)观察细胞凋亡率及周期变化;半定量PCR法分析基因半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3,Caspase 9)及基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达变化。结果:NDP对宫颈癌Hela细胞及Siha细胞均有抑制作用,呈时间-剂量依赖性,NDP对Hela细胞的抑制率大于Siha细胞;FCM显示,随时间、浓度增加,Hela及Siha细胞凋亡率增加,相同浓度和作用时间下,Hela细胞的凋亡率大于Siha细胞(P<0.05),S期细胞的比例增加,G0/G1期比例减少,G2/M期比例变化不明显;与对照组相比,Caspase 3,Caspase 9表达增加,MMP-2表达减少。结论:NDP可抑制宫颈腺癌细胞Hela及鳞癌细胞Si-ha的增殖,NDP体外对Hela细胞的抑制作用更强。NDP的作用机制与诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞、上调Caspase3和Caspase9的表达有关;下调MMP-2的表达可能有利于降低宫颈癌细胞的侵袭力。     

苯丁酸钠对宫颈癌Hela细胞增殖及p21WAF1/CIP1和CDK7表达的影响

目的:探讨苯丁酸钠(SPB)在体外诱导宫颈癌Hela细胞生长抑制和细胞周期阻滞以及对p21WAF1/CIP1和CDK7基因表达的影响。方法:体外培养Hela细胞,应用MTT法检测苯丁酸钠对Hela细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期的变化,半定量RT-PCR法检测细胞p21WAF1/CIP1和CDK7基因表达水平。结果:苯丁酸钠明显抑制Hela细胞增殖,呈时间-剂量依赖性;苯丁酸钠诱导Hela细胞周期阻滞于G0/G1期,使S期细胞数减少;苯丁酸钠促进抑癌基因p21WAF1/CIP1的表达,对CDK7基因的表达有抑制作用。结论:苯丁酸钠在体外抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,使之阻滞于G0/G1期,可能与上调p21WAF1/CIP1基因表达、下调CDK7基因表达有关。     

Induction of apoptosis by epigallocatechin-3-gallate via mitochondrial signal transduction pathway

PURPOSE: To elucidate the apoptosis induction of Epigallocatechin-3-gallate (EGCG) on nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells via mitochondrial signal transduction pathway regulated by EB-virus-encoded latent membrane protein 1 (LMP1). METHODS: The survival rates of pTet-on-LMP1 HNE2 cells after the EGCG treatment were determined by MTT assay. Induction of apoptosis in pTet-on-LMP1 HNE2 cells after the EGCG treatment was analyzed by agarose gel electrophoresis. The activity of caspase-9 was determined by ApoAlert Caspase-9 Fluorescent Assay kit after the EGCG treatment. The protein expressions of cytochrome c and Bcl-2 were analyzed by Western blotting after the EGCG treatment. RESULTS: EGCG inhibited the survival rates of pTet-on-LMP1 HNE2 cells and induced apoptosis of pTet-on-LMP1 HNE2 cells. EGCG raised the activities of caspase-9, enhanced the releasing of cytochrome c from the mitochondria, and suppressed the protein expression of Bcl-2. These are the key targets on the mitochondrial signal transduction pathway in apoptosis. CONCLUSIONS: EGCG inhibited the survival rate of NPC cells and induced apoptosis of NPC cells via the mitochondrial signal transduction pathway. This study suggests that the interference effect of EGCG on targets of the mitochondrial signal transduction pathway plays an important role in the anticancer function.