二级处理出水中伤寒沙门菌的定量PCR检测

目的 建立城市污水二级处理出水中伤寒沙门菌的定量PCR检测方法.方法 以构建的伤寒沙门菌重组质粒作为标准品,采用whatman2号(孔径为8μm)定性滤纸对水样预过滤,硝酸纤维素膜浓缩水样,选用伤寒沙门菌特异性引物ST3和ST4进行实时荧光定量PCR(quantitative PCR,QPCR)检测.结果 在2.8x1...     

食品中沙门菌检测方法的比较

目的 建立快速准确的沙门菌检验方法.方法 采用TecraTM微孔板法对样品进行沙门菌检测,用国标法进行验证,计算该法的灵敏度和特异度.结果 微孔板法检出阳性样品13份,国标法检出阳性样品10份.进行两两配对比较,国标法阳性者微孔板法均阳性,灵敏度为100％.国标法阴性的样品为247份,微孔板法和国标法均阴性的样品为244份,特异度为98.79％.结论 微孔板法有较高的灵敏度和特异度,实验时间短,具有较高的应用价值.     

检测沙门菌的微量半固体氯化镁孔雀绿最可能数方法研究

目的 改良检测沙门菌的微量半固体氯化镁孔雀绿最可能数(mini-MSRV MPN)方法.方法 在mini-MSRV MPN方法的基础上,将缓冲蛋白胨水(BPW)改为一步增菌液,MSRV培养基改为改良MSRV培养基,进行沙门菌加标回收试验.分别采集154份生鸡肉、48份鸡舍环境涂抹物和48份鸡粪样品,对比分析改良mini-MSRV MPN法、mini-MSRV MPN法和常规最大可能数(MPN)方法检出沙门菌的情况.结果 改良mini-MSRV MPN方法加标回收试验结果:0.9 CFU/g加标菌量组回收菌量均＜2.7 MPN/g;9.0、90.0 CFU/g加标菌量组平均回收菌量分别为10.1、94.0 MPN/g,平均回收率分别为112％ 、104％.改良mini-MSRV MPN方法、mini-MSRV MPN方法和常规MPN方法沙门菌检出率分别为18.4％ (46/250)、5.2％ (13/250)和6.0％ (15/250),改良mini-MSRV MPN方法检出率高于其他两种方法(x2值分别为19.68和17.82,P值均＜0.05);检出沙门菌的量(中位数)分别为21.0、＜2.7、＜3.0 MPN/g,改良mini-MSRV MPN方法检出沙门菌的量(中位数)高于其他两种方法(Z值均为5.71,P值均＜0.05).结论 改良mini-MSRV MPN方法可以对食源性沙门菌进行准确检测.     

荧光定量PCR快速检测沙门菌方法的建立及应用

目的:建立沙门菌实时荧光PCR的快速检测方法,探讨其可行性和应用价值。方法:根据沙门菌的特异性DNA作为靶序列,以沙门菌菌株提取核酸DNA作为模板进行荧光检测。结果:本研究在7种相关菌株的检测中,除沙门菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性;在纯菌条件下,定量检测低限为30 cfu/ml;同一样品检测3次Ct值的变异系数均小于5%;对模拟标本与分离培养对比,二者符合率为100%。结论:该方法的建立,不仅为食源性沙门菌污染及食物中毒的快速检测提供依据,而且还可直接用于临床粪便标本的检测。     

沙门菌invA基因荧光定量PCR检测

沙门菌是引起食源性感染的常见致病菌^[1],常规检测方法有分离培养、生化鉴定、血清学试验等.由于沙门菌有2 000多种血清型,因而监测工作多繁琐、费时、费力.实时荧光定量PCR检测技术是近年来的新方法,已经愈来愈多地用于病原体诊断^[2].研究表明,沙门菌侵袭基因invA高度保守,几乎存在于沙门菌所有血清型中,其编码吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白,决定沙门菌对肠粘膜细胞的侵袭力,与其致病性显著相关^[3].根据这一特点,为探讨快速、敏感、稳定的沙门菌检测方法,本研究应用沙门菌侵袭基因invA设计引物和探针序列,建立沙门菌荧光定量检测方法并研制沙门菌检测试剂盒.     

GoldEIA、BAX筛选和GENE—TRAKDLP法快速检测苜蓿苗及其处理水中沙门菌的比较

本研究采用ＧｏｌｄＥＩＡ、ＢＡＸ筛选和ＧＥＮＥ ＴＲＡＫＤＬＰ 3种快速检测法 ,分析检测模拟污染及自然污染的苜蓿苗及其灌溉水样品中沙门菌 ,并与细菌学分析手册 (ＢＡＭ)中官方培养法进行比较。细菌和培养基 :4种沙门菌血清型为Ｓ .ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ、Ｓ .ｍｕｅｎｃｈｅｎ ,Ｓ .ｍｂａｎｄａｎｋａ和Ｓ .ｃｕｂａｎａ ,脑浸液肉汤 (ＢＨＩ)于 3 5℃培养 18～ 2 4ｈ ,平板计数法 (ＰＣＡ)测定细胞数。Ｄｉｆｃｏ实验室和ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ提供培养基。苜蓿苗的培育 :将苜蓿种子加入无菌玻璃罐 ,用 50 0ｍｌ无菌自来水…     

沙门菌耐药性及检测方法研究进展

随着抗菌药物的广泛使用,沙门菌的耐药性日趋普遍,对沙门菌耐药机制进行深入研究,加快新型、快速检测方法的开发尤为迫切。该文综述了沙门菌耐药机制,包括抗菌药物作用的靶位基因突变、灭活酶和钝化酶、生物被膜等,并对沙门菌的常规培养法、免疫检测技术、分子生物等检测方法和耐药性检测方法进行了综述。     

水中亚硫酸还原菌的检测

亚硫酸还原厌氧菌于环境中分布很大，存在于人和动物粪便，废水和土壤中，它对化学和物理因素作用的抗性较植物类细菌大，因而孢子在水中存活时间长，因此它们可间接或间歇性指示出水的污染，根据美国《水和废水标准检验法》19版提出的标准。用滤膜法对饮用水水源中的亚硫酸还原菌进行检测，确定了饮用水中亚硫酸还原菌的检测方法。此法简单、准确。     

改良分子信标-实时荧光PCR同时检测猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌

目的 建立猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,应用于食品和食物中毒病人标本的猪霍乱沙门菌检测以及沙门菌属C群的鉴别诊断.方法 根据GenBank公布的猪霍乱沙门菌和丙型副伤寒沙门菌的保守序列(CP000857.1),设计引物和改良分子信标探针,优化PCR程序和PCR成分,以11种细菌为对照,建立...     

沙门菌检测方法的循证确定

目的将循证医学的研究方法应用于卫生检验，寻找沙门菌快速检测的最佳方案。方法通过检索多个数据库，全面查找沙门菌检测方法的文献，并对找到的文献进行评估和筛选，找到符合要求的文献确定检测方法。结果从5256篇检索到的文献中，共找到相关Ⅱ级文献4篇，Ⅲ级综述文献1篇用于确定沙门菌快速检测的最佳方案。结论在沙门菌的快速检测中，宜采用以139-141为引物的PCR检测法。     

污水沙门氏菌定量检验方法的改进

为提高污水沙门氏菌的检出率，对污水沙门氏菌二步增菌定量检测法进行了改进，对２０份污水样检测表明，本法定量结果的对数均数为１．３０４９，原法为０．６５；对数转换后（ｔ＝６．４７２７，Ｐ〈０．０１）两种方法定量结果差异有显著性，本法优于原法。该法操作简便，不需特殊设备及培养基且平均检验周期缩短。     

两种沙门氏菌定量计数方法的比较

目的为了准确计数生鲜肉中的沙门氏菌的数量,为微生物危险性评估提供精确的数据支持,探索一种实用性、准确性和选择性的沙门氏菌计数方法。方法将污染不同数量沙门氏菌的样品分别稀释,同时用平板计数法和MPN法分别计数,比对两方法的准确度、灵敏度和可操作性。平板计数选用CHROMagar显色培养基平板和XLD琼脂平板作分离平板,挑取可疑菌落经鉴定后,计算沙门氏菌数。MPN法选用TTB、MM和SC增菌液分别于(36±1)℃、(42±1)℃增菌后,接种CHROMaagar显色培养基平板和XLD琼脂平板,挑取可疑菌落鉴定后查MPN表。结果样品中污染沙门氏菌量在1~500cfu/g时,平板计数法不能将沙门氏菌很好地区分;MPN法采用SC增菌液(42±1)℃培养效果最好,检出限10cfu/g,检测值和理论值(在500cfu/g)的符合率为92.0%。结论MPN法无论从可操作性或是检出的灵敏度都要优于平板计数法。     

内痔套扎治疗方法改进的探讨

目的　比较改进后的内痔套扎法和传统套扎法治疗内痔的有效性和安全性。方法　对参与研究的 86例病人采用随机、双盲的方法进行研究。传统套扎法采用套扎痔体的方法治疗内痔 ,改进套扎法采用套扎痔体根部上方直肠黏膜的方法治疗内痔。结果　改进后的套扎治疗方法治疗效果优于传统痔体套扎治疗方法 ,各种内痔临床症状体征改善明显 ,P <0 0 5。且并发症少、安全性好。结论　改进后的内痔套扎治疗方法有效性、安全性较好 ,值得推广应用     

改进和普通SC.SS培养基分离沙门氏菌的比较

目的探讨改进SC.SS培养基检测沙门氏菌中应用价值。方法8 229例标本来自疫区伤寒患者、健康体检肛拭子采集。经增菌后分离鉴定。并将作40份标本在同一型沙门氏菌进行增菌、分离鉴定。并将结果进行比较分析。结果1999～2004年检出率分别为0.13%、0.17%、0.33%、1.15%、1.83%、2.40%。原总阳性率为0.20%,改后总阳性率为1.89%。经卡方检验(χ2=52.78,P<0.01)差别有高度显著性。结论改后和原SC.SS相比,检测阳性率明显提高,且平板上菌落,硫化氢明显增多。平板颜色鲜艳,保留时间又长,省时又省力。为基层检测工作提供新方法以及厂家生产培养基提供新的配方。     

SPA协凝试验法快速检验肉中沙门氏菌

采用A—F沙门氏菌多价抗血清致敏金黄色葡萄球菌SP NO.:1800株,制备成SPA诊断液,直接用凝集法检测肉中沙门氏菌,快速、准确、灵敏度高、特异性强、检出率高、节省费用。     

改良型高举平台法在门诊患者尿管固定中的应用

目的：观察经过改良后的高举平台法对于门诊留置尿管患者的实用性。方法：选取2013年3月-2014年3月本科门诊98例留置尿管的患者,按照随机数字表法将其分为对照组和观察组各49例,对照组采用传统固定方法,观察组采用经改良后的高举平台法,观察比较两组患者的管道牢固性、管道脱出率、患者舒适度。结果：观察组的固定方法牢固性明显优于对照组,管道脱出率和对尿道的损伤率均明显低于对照组,患者平均舒适度评分明显高于对照组,且管道平均使用天数明显多于对照组,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论：改良型高举平台法既方便于门诊患者的日常打理,又不易脱落,增加了患者的舒适度,值得临床推广使用。     

应用免疫层析法检测食品中的沙门菌

〔目的〕建立一种简便快速的胶体金免疫层析法 (GICA)用于检测食品中的沙门菌。〔方法〕抗沙门菌多抗用抗原吸收法封闭与其他肠道杆菌的交叉反应 ,标记胶体金溶胶制成探针 ,采用多膜复合的方法制备免疫层析条。〔结果〕该层析条可检出人工染菌的畜禽肉、牛奶和米饭等食品中的沙门菌 ,灵敏度为 2 .1× 10 6cfu/ml,用常见溶液和自来水处理染菌食品样品 ,检测结果无异。〔结论〕该方法简便快速 ,无需特殊仪器设备 ,适合现场检测之用。     

沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒的研制与应用

[目的]建立一种快速、灵敏、准确的检测方法,预防沙门菌食物中毒。[方法]根据沙门菌保守基因序列fimY基因设计合成了引物和TaqMan探针,建立快速检测沙门菌的实时荧光定量方法,并对反应条件进行了优化,组装成快速检测试剂盒。[结果]其检测灵敏度达到4．5efu,比常规PER高100倍,而且稳定性良好,冷冻至少可以保存9个月。[结论]通过临床样品的检测,该试剂盒具有操作简便快速、灵敏度高、特异性强、重复性好、稳定性强等优点,很适合大量样品的检测。     

应用DNA探针检测食品等标本中的沙门氏菌

我们采用缺口翻译技术,以放射性32~p标记来自鼠伤寒沙门氏菌23566的染色体DNA 8.0kb片段,作为特异性探针,对从食品、污水标本中分离出的13种(型)16株沙门氏菌及1株亚利桑那菌进行了菌落杂交检测,同时对17株非沙门氏菌进行了检测。结果表明:该特异性探针可100％地检出实验沙门氏菌而不与非沙门氏菌发生交叉。接种的菌量在10~2时,经培养就可得到良好的杂交结果。