Stathmin基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的 观察stathmin基因和蛋白质在喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)中的表达情况,探讨stathmin基因与喉鳞癌生物学行为的关系及临床意义,进一步认识喉鳞癌发生和发展的分子机制.方法选取2005年3月至2006年4月的38例喉鳞癌患者,术中从肿瘤中心部位取癌组织(实验组),在肿瘤边缘外1.0cm部位取癌旁正常组织(对照组).应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析38例患者的喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin基因mRNA的表达水平,冰冻切片免疫组织化学方法检测喉鳞癌组织和癌旁正常组织中stathmin蛋白的表达情况.结果 RT-PCR结果显示,stathmin基因mRNA在38例喉癌患者的喉癌组织和癌旁正常组织均呈阳性表达;经半定量分析,stathmin mRNA在喉癌组织中的表达水平明显高于在癌旁正常组织的表达水平(t=9.655,P＜0.05).免疫组织化学发现,stathmin蛋白在26例(26/38,68.4%)患者的喉癌组织呈阳性表达,在13例(13/38,34.2%)患者的癌旁正常组织呈弱阳性表达;stathmin蛋白在喉癌组织中的阳性表达率明显高于在癌旁正常组织的阳性表达率(x2=8.901,P＜0.05).同时发现,stathmin mRNA的表达水平和stathmin蛋白的阳性表达率在Ⅲ期和Ⅳ期喉癌组明显高于Ⅰ期和Ⅱ期病例组(t=6.284,x2=5.810,P＜0.05),有颈部淋巴转移组明显高于无转移组(t=9.350,x2=6.923,P＜0.05).结论 stathmin基因和蛋白在喉鳞癌中的表达明显高于癌旁正常组织,在中晚期喉鳞癌中的表达明显高于早期喉鳞癌,并且与颈淋巴转移有关.stathmin基因与喉鳞癌的发生和发展均有密切关系,并可能与喉癌的预后有关.     

DNMT1基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因在喉鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理因素的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测96例喉鳞状细胞癌中DNMT1基因蛋白的表达,其中66例喉癌组织同时进行实时定量PCR,并分析其DNMT1 mRNA的表达与临床病理因素的关系.结果:DNMT1 mRNA在喉鳞状细胞癌组织中表达上调(P<0.05).96例喉癌鳞状上皮细胞中DNMT1蛋白表达全部为阳性(96/96),36%(8/22)癌旁组织的鳞状上皮细胞中DNMT1蛋白表达为阳性,二者差异有统计学意义(P<0.05).DNMT1 mRNA在喉癌组织中表达上调,和患者年龄、性别、临床分期、淋巴结转移情况无关,但与患者吸烟史有显著相关性(P<0.05).结论:DNMT1可能在喉癌中表达增高从而引起肿瘤的发生,吸烟可能诱导DNMT1的表达增高.     

葡萄糖转运蛋白1在人喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:观察葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)在人喉鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理学的关系.方法:应用免疫组织化学的方法以及RT-PCR法检测57例喉鳞状细胞癌患者的肿瘤组织、癌旁喉组织以及远离肿瘤的正常喉组织中GLUT1的蛋白和mRNA的表达,并结合喉癌患者的临床病理特征进行分析.结果:①免疫组织化学:GLUT1在喉癌组织中的表达高于癌旁喉组织和正常喉组织(P<0.01);在低分化喉癌中的表达高于高分化喉癌(P<0.05);Ⅲ期+Ⅳ期喉癌较Ⅰ期+Ⅱ期喉癌有高表达GLUT1的趋势(P<0.01);有淋巴转移的喉癌的表达高于无淋巴转移者(P<0.05);在直径≥3 cm的肿瘤中的表达高于直径＜3cm者(P<0.05).②RT-PCR结果:GLUT1在喉癌组织中的表达高于癌旁喉组织和正常喉组织(P<0.01);在低分化喉癌中的表达高于中分化和高分化喉癌(P<0.05);Ⅲ期+Ⅳ期喉癌较Ⅰ期+Ⅱ期喉癌有高表达GLUT1的趋势(P<0.05);有淋巴转移的喉癌的表达高于无淋巴转移者(P<0.05);在直径≥3 cm的肿瘤中的表达高于直径＜3 cm者(P<0.05).结论:GLUT1与喉癌发生、发展、分化、淋巴转移和转归等密切相关,可以作为喉癌的诊断、治疗和预后指标之一.     

喉鳞状细胞癌P16和增殖细胞核抗原表达

目的探讨p16基因及增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学技术SP法检测抑癌基因p16蛋白及PCNA在40例喉鳞状细胞癌中的表达,并与癌旁组织和正常喉组织对比,结合喉鳞状细胞癌的临床病理特征进行分析。结果在喉鳞状细胞癌中p16阳性率(50.0%)明显低于癌旁组织(76.0%)和正常组织(100.0%,P<0.05);Ⅰ、Ⅱ期喉癌中p16阳性率明显高于Ⅲ、Ⅳ期。喉鳞状细胞癌中PCNA阳性率为55.0%,明显高于癌旁组织(32.0%)和正常组织(10.0%,P<0.05);Ⅰ、Ⅱ期喉鳞状细胞癌中PCNA表达明显低于Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)。p16阳性与阴性患者生存期≥5年的比率分别为66.7%和33.3%,P<0.05;PCNA阳性与阴性患者生存期≥5年的比率分别为37.5%和62.5%,P<0.05。结论p16和PCNA分别是喉鳞状细胞癌进展及预后判断的独立指标;p16和PCNA联合检测对喉鳞状细胞癌的预后评估可能更有价值。     

喉癌肿瘤组织HIF-1α与COX-2蛋白和mRNA的表达及意义

目的:探讨喉鳞状细胞癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白质和mRNA的表达,以期有助于喉鳞状细胞癌发生、发展和转移机制的进一步阐明。方法:用免疫组织化学和RT-PCR方法检测76例喉鳞状细胞癌组织和9例癌旁正常组织中HIF-1α、COX-2蛋白和mRNA的表达,并按T分期、病理分级分别探讨HIF-1α、COX-2蛋白和mRNA的表达与各临床病理参数的关系。结果:①HIF-1α、COX-2蛋白表达在喉癌标本的表达量明显高于癌旁正常组织(P<0.05),随T分期的增加而增高;中、低分化的喉癌组织中HIF-1α表达显著高于高分化喉癌;COX-2蛋白表达与病理分级无关。②HIF-1α与COX-2mRNA在喉癌组织中的阳性表达率分别是67.11%和75.00%,明显高于癌旁正常组织(P<0.05),癌旁正常组织未检测到COX-2mRNA表达。HIF-1α与COX-2mRNA在喉癌组织中的阳性表达率与T分期有关(P<0.05),标本的表达量随T分期的增加而增高,但是与病理分级无关(P>0.05)。③HIF-1α蛋白表达阳性病例中,COX-2的阳性率为78.72%。结论:HIF-1α与COX-2在喉鳞状细胞癌组织的表达增高并密切相关,可能是喉癌发生发展的原因之一。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ受体和蛋白激酶C在喉鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:探讨胰岛素样生长因子-I受体(IGF-IR)和蛋白激酶C(PKC)在喉鳞状细胞癌中的表达情况及临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法及Westernblot技术检测60例喉鳞状细胞癌组织、25例癌旁组织及10例正常喉部组织中IGF-IR及PKC的表达情况。结果:IGF-IR及PKC在喉鳞状细胞癌中的表达阳性率较正常喉部组织及癌旁组织明显增高(P<0.05)。IGF-IR在TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、颈淋巴结转移及高分化癌患者中的表达水平分别较Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移及中低分化癌患者表达增强(P<0.05)。PKC的阳性表达与喉癌临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05)。喉鳞状细胞癌组织中IGF-IR与PKC蛋白的表达呈正相关(rs=0.338,P<0.05)。结论:IGF-IR及PKC在喉鳞状细胞癌中表达增高且两者密切相关,可能参与了喉癌的发生、发展过程,检测IGF-IR和PKC的表达对喉癌的早期诊断及治疗具有重要指导意义。     

信号转导和转录激活因子3及其靶基因c-myc在喉鳞状细胞癌中的表达与意义

目的:检测喉鳞状细胞癌中信号转导和转录激活因子3(STAT3)基因及其靶基因c-myc的表达,探讨其临床意义及相关性.方法:采用原位杂交技术和免疫组织化学技术,在mRNA和蛋白2个水平检测STAT3和c-myc基因在56例喉鳞状细胞癌和30例喉全(或近全)切除者癌旁(>2.0 cm)正常黏膜中的表达,应用显微图像分析系统测定阳性表达的平均吸收度值,并进行统计分析.结果:在喉鳞状细胞癌组织中存在STAT3和c-myc基因的mRNA和蛋白高表达;STAT3和c-myc基因的mRNA表达与喉鳞状细胞癌的临床分期、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01);STAT3和c-myc基因的蛋白表达与喉鳞状细胞癌的临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05或P<0.01);在喉鳞状细胞癌组织中STAT3和c-myc基因的高表达呈正相关(r=0.622 4、0.7012,均P<0.01).结论:STAT3基因及其靶基因c-myc的表达与喉鳞状细胞癌的发生、发展和转移等生物学行为有关,两者的表达呈正相关.     

喉癌组织中程序性细胞死亡因子4的表达及临床意义

目的:探讨程序性细胞死亡因子4(PDCD4)基因在喉鳞状细胞癌中的表达情况及PDCD4蛋白表达水平与喉癌临床病理学特征的关系。方法:应用Westernblot检测8例喉鳞状细胞癌患者喉癌组织及癌旁正常鳞状上皮组织中PDCD4蛋白的表达水平。应用免疫组织化学SP法检测PDCD4蛋白在54例喉癌组织及部分癌旁正常组织中的表达情况及PDCD4蛋白在这些组织中的细胞定位,观察PDCD4蛋白表达情况与喉癌临床病理学参数之间的关系。结果:PDCD4蛋白在癌旁正常组织中呈高表达,在喉癌中呈低表达或缺失(P<0.05)。PDCD4蛋白在喉正常鳞状上皮细胞核、细胞质表达,在喉癌组织中呈细胞质表达甚至缺失。PDCD4蛋白表达水平在喉癌病理分级各组间不相等(P<0.05),肿瘤分化程度越高,PDCD4蛋白表达越高(P<0.05)。结论:PDCD4基因是抑癌基因,其表达和缺失与喉癌的发生、肿瘤细胞的分化有关,有望成为喉癌基因治疗的新靶点。     

CXCR4在喉鳞状细胞癌中的表达及与微血管形成的相关性研究

目的:检测CXCR4的mRNA及其蛋白在喉鳞状细胞癌中的表达情况,分析CXCR4的表达与喉鳞状细胞癌的临床病理特征的关系,探讨CXCR4在喉鳞状细胞癌的发生、发展、转移中的作用;分析CXCR4与肿瘤微血管形成的关系,探讨CXCR4在喉鳞状细胞癌的肿瘤血管形成中的作用。方法:应用RT-PCR及免疫组织化学技术,分别对42例新鲜喉癌组织及远离肿瘤组织的正常喉黏膜的CXCR4的mRNA和蛋白表达情况进行测定,并与肿瘤患者的临床病理特征(性别、年龄、病变部位、T分期、病理分级、颈淋巴结转移)相比较;对肿瘤再生血管用免疫组织化学方法对抗Ⅷ因子相关抗原抗体进行测定。应用Image-pro-plus软件进行肿瘤细胞光吸收度的定量分析。结果:CXCR4在喉癌组织中呈过度表达,而自身正常喉黏膜弱表达或不表达,在2种组织中差异有统计学意义(P<0.01);在肿瘤组织中,CXCR4的表达与患者的性别、年龄、病变部位、T分期无关(P>0.05);而与病理分级相关(P<0.01),与是否有颈淋巴结转移相关(P<0.01)。蛋白表达水平情况与基因表达水平相一致。肿瘤再生微血管数与喉鳞状细胞癌的mRNA及蛋白表达水平呈显著正相关(R=0....     

荧光定量PCR技术检测喉鳞状细胞癌标本中Skp2基因表达

目的:探讨细胞S相激酶相关蛋白(Skp2)基因在喉鳞状细胞癌发生、发展中的作用.方法:应用荧光定量逆转录PCR(FQ-PCR)技术检测40例喉鳞状细胞癌及10例癌旁正常组织中Skp2 mRNA拷贝数,并分析其与临床相关因素的关系.结果:40例喉鳞状细胞癌Skp2 mRNA中位拷贝数为6 622.54 copy/μg RNA,10例癌旁正常组织为0 copy/μg RNA,两组差异有统计学意义(P<0.01);喉鳞状细胞癌和癌旁正常组织Skp2mRNA阳性表达率分别为50%和0,差异有统计学意义(P<0.01).喉鳞状细胞癌中颈淋巴结转移组Skp2mRNA中位拷贝数为617 138.4 copy/μg RNA,颈淋巴结无转移组为0 copy/μg RNA,两组差异有统计学意义(P<0.05);喉鳞状细胞癌中颈淋巴结转移组和颈淋巴结无转移组Skp2 mRNA阳性表达率分别为100.00%和35.48%,差异有统计学意义(P<0.01).结论:Skp2基因可能与喉鳞状细胞癌颈淋巴结转移有关,FQ-PCR为一精确检测喉鳞状细胞癌Skp2 mRNA表达的方法,Skp2 mRNA表达水平可能成为预测喉鳞状细胞癌颈淋巴结转移的更加灵敏的指标.