家犬粪便中的细粒棘球绦虫DNA PCR检测方法的建立

目的 建立检测家犬粪便中细粒棘球绦虫DNA的PCR方法，为开展流行病学监测提供检测手段。方法 犬粪经液氮反复冻溶后提取DNA，PCR扩增编码细粒棘球绦虫12srDNA检测该靶DNA片段（255bp）。结果 10只细粒棘球绦虫感染犬，8只（体内成虫数〉80条）阳性，2只（体内成虫数分别为4条和5条）阴性。4只未感染家犬粪样及其他3种绦虫DNA样本均为阴性。结论 初步建立了灵敏、特异的检测家犬粪便中细粒棘球绦虫的PCR方法。     

PCR诊断犬感染细粒棘球绦虫方法检出日期的确定

目的确定犬细粒棘球绦虫感染PCR检测的窗口期。方法家犬8只,口服喂饲细粒棘球绦虫原头节,感染后40 d,收集犬粪,用PCR方法检测粪便中的目的DNA。结果6只犬获得细粒棘球绦虫重度感染,感染后21 dPCR检出目的DNA片段。结论犬重度感染细粒棘球绦虫后粪便PCR检测的窗口期为20 d。     

巢式PCR在鉴别多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫基因亚型中的应用

目的 探索巢式PCR在鉴别多房棘球绦虫及细粒棘球绦虫基因亚型中的应用价值.方法 将水泡带绦虫、犬弓首蛔虫、多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫羊株和骆驼株等样本的DNA用巢式PCR扩增.结果 巢式PCR可以扩增出多房棘球绦虫和水泡带绦虫,而对细粒棘球绦虫羊株和骆驼株及其他寄生虫均不能扩增出.结论 在鉴别细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫方面,巢式PCR有一定的诊断意义,但不能用于鉴别细粒棘球绦虫基因亚型.     

新疆克孜勒苏柯尔克孜自治州家犬棘球绦虫感染和家畜棘球蚴病流行病学调查

目的  了解新疆克州家犬和家畜棘球蚴病的流行范围和程度,为棘球蚴病防治提供依据。 方法  克州境内的1市3县（阿图什市、阿克陶县、乌恰县和阿合奇县）,每市（县）按照东西南北方位分层随机抽取农业区、牧业区和城镇共27个调查乡/镇,每户仅采集1条犬,每市（县）至少采集320份的粪样。在屠宰季节,每个市（县）选取当地繁育的2齿龄以上的家畜1 000头（包括羊、牛、马等）进行调查。 结果  共检测犬粪样2 219份,阳性率为3.33%（74/2 219）。乌恰县阳性率（7.50%）与阿克陶县（5.94%）、阿图什市（2.14%）与阿合奇县（1.25%）差异无统计学意义(χ2=0.62和1.06,P>0.05）;乌恰县和阿克陶县阳性率高于阿图什市和阿合奇县（χ2=23.41~10.15,P<0.05）。共调查屠宰家畜3 796头,包虫包囊携带率为7.67%;其中羊、马、牦牛和黄牛携带率分别为3.08%、1.92%和1.04%;山羊未查出包囊。羊与马、马与牦牛和黄牛的携带率差异无统计学意义(χ2=2.51、0.28和1.57,P>0.05）;羊携带率高于牦牛和黄牛（χ2=8.85和20.82,P<0.05）。 结论  克州棘球蚴病的犬粪抗原阳性率和家畜包囊携带率比以前相对较低,但流行状况仍然比较严重。建议对农（牧）区和城镇居民开展卫生宣传教育,加强家犬管理,提高人群防病意识,有效降低人群感染率。     

细粒棘球绦虫DNA探针PHD5特异性的研究

从构建的细粒棘球绦虫基因库中〔１〕我们筛选到一个细粒棘球绦虫特异的ＤＮＡ片段ｐＨＤ５，该片段长约３．６ｋｂ，亚克隆于ｐｈａｇｅｍｉｄ载体ｐＢＳＳＫ〔２〕，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析表明它不与多房棘球绦虫ＤＮＡ杂交〔３〕。本文对此探针是否与其他绦...     

细粒棘球绦虫基因库的构建

细粒棘球绦虫DNA经Sau3AI部分水解,并用电洗脱方法从琼脂糖凝胶中回收15-23kb大小的片段。得到的片段与λ噬菌体置换载体EMBL3 DNA重组,采用体外包装系统构建了细粒棘球绦虫的基因库,获得了1.2×10~6个重组子。通过与探针的分子杂交,从库中分离到6个细粒棘球绦虫γDNA基因的阳性克隆。     

影响细粒棘球绦虫病传播动力学的因素分析

细粒棘球绦虫的生活史包括两种宿主和一个自由牛存的卵期,其传播动力学取决于细粒棘球绦虫、两种宿主、生态环境等三者的相互作用,主要包括细粒棘球绦虫的生物潜能、聚集性,宿主的免疫激活能力,虫卵的散播、分布、活力,环境温度、湿度、地理景观,肉类检疫、死亡动物及其内脏处理、犬驱虫和流浪宿主处理,人群生活卫生习惯和生产方式等.了解它们的相互关系及其对传播动态的影响,对制定和评价防治措施至关重要.该文重点就细粒棘球绦虫的生物因素、两种宿主、生态环境和防治手段埘其传播动力学的影响进行讨论.     

犬体内细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的混合感染

目的 证实家犬体内是否存在细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫混合感染。方法 从新疆和静县巴音布鲁克草原现场收购的30条牧羊犬,经麻醉后处死解剖,在1只雌性牧羊犬小肠内发现棘球绦虫成虫1万条以上,经显微镜观察,疑为细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫混合感染。用Eg1f/r和EM-15/17EM引物分别对两种棘球绦虫的线粒体DNA特异目的片段进行序列分析鉴定。结果 形态学观察:细粒棘球绦虫孕节长大,生殖孔偏后,位于节片一侧中部。子宫有不规则的分支和侧突(侧囊),内含虫卵200~800个。多房棘球绦虫较短小,4~5体节。孕节中子宫呈简单的囊状,无侧囊。生殖孔开口于侧缘的前半部。线粒体12S RNA序列鉴定,扩增样本DNA经同源序列比较发现,与细粒棘球绦虫G1型具有相同的序列;扩增样本与多房棘球绦虫具有相同的序列。分别确定为细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫两种虫种。结论 首次证实家犬体内存在细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的混合感染。     

两种致病人体棘球绦虫动物宿主感染及影响因素研究进展

棘球蚴病是由棘球绦虫幼虫感染所致的一种危害严重的人兽共患寄生虫病。棘球绦虫生活史可涉及多种动物宿主,如有蹄类动物、啮齿类动物等中间宿主和食肉类动物终末宿主。自然界动物宿主间细粒棘球绦虫及多房棘球绦虫生活史循环与人体棘球蚴病传播密切相关。本文综述了近年来国内外有关细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫主要动物宿主分布及感染的影响因素研究进展,旨在为开展棘球蚴病精准防治提供参考。     

细粒棘球绦虫基因型的微卫星分析

目的利用细粒棘球绦虫微卫星序列为分型标记,建立高效、快速、简便的鉴定细粒棘球绦虫基因型技术。方法采用FAM和HEX两种不同荧光染料分别标记细粒棘球绦虫的Sca、Emsk、C106微卫星序列引物,利用荧光PCR-基因扫描技术鉴定新疆不同地区CE病人细粒棘球绦虫分离株的基因型。结果44例CE病人的66个分离株标本经PCR及微卫星标记鉴定均为细粒棘球绦虫,其中43例病人的65个细粒棘球绦虫分离株标本为G1基因型;1例病人的1个细粒棘球绦虫分离株标本为G6基因型。结论微卫星标记能够从基因水平快速、精确地鉴定新疆细粒棘球绦虫分离株的基因型,对细粒棘球绦虫的流行病学和致病性研究有重要价值。     

细粒棘球绦虫EG95基因的克隆和序列分析

目的：获得细粒棘球蚴EG395基因序列资料，进行序列分析，为研究包虫病疫苗候选抗原基因奠定基础。方法：从包囊内获取细粒棘球蚴原头蚴(protoscoleces)，提取RNA和DNA，用特异引物分别以基因组DNA和cDNA为模板扩增EG95基因；并将其克隆到T载体后进行序列测定和分析。结果：以基因组为模板获得一个基因。长度为1253bp，以cDNA为模板获得两个基因，长度分别为1121bp和833bp；同源性比较结果表明：来自新疆羊源EG95基因序列和澳大利亚羊源EG395-2基因同源性为98％，有13个碱基变异；从cDNA获得的EG95基因(EG95-like)和DNA来源的EG95相同，只是EG95序列的一部分；从cDNA获得的另一个EG95基因(mEG95)和澳大利亚源EG395-2同源性为99％，有2个碱基不同。分析表明EG95是一个基因家族，可能是虫体发育到六沟蚴阶段特定表达的基因。结论：EG95是一个基因家族，进一步研究该基因家族的结构和功能对包虫病的免疫预防具有重要意义。     

犬细粒棘球绦虫感染LAMP检出日期的确定

目的确定犬细粒棘球绦虫感染环介导等温扩增技术(LAMP)最早检出日期。方法家犬8只,口服喂饲细粒棘球绦虫原头节,建立细粒棘球绦虫感染动物模型。感染后40d收集犬粪,用LAMP检测粪便中细粒棘球绦虫目的基因并与传统的PCR比较。结果 8只犬均获得细粒棘球绦虫感染,感染后第18dLAMP法检查犬粪中细粒棘球绦虫目的基因均阳性,较普通PCR法提早2d。结论 LAMP法简便、快捷、灵敏,有望成为早期诊断犬细粒棘球绦虫感染的重要手段。     

细粒棘球绦虫原头蚴发育调控基因Ral基因的克隆及序列分析

目的克隆和分析细粒棘球绦虫原头蚴发育调控基因Eg Ral基因。方法根据多房棘球绦虫Em Ral基因序列设计引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴中克隆Eg Ral基因并将其克隆至pMD19-T载体,经测序后,与线虫、多房棘球绦虫、果蝇和人类等物种Ral基因进行比对分析。结果从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆获得Eg Ral基因,长度为603 bp,编码200个氨基酸,等电点为8.85。经比对,Eg Ral与Em Ral同源性为99%,与线虫、果蝇和人等其他种类Ral基因同源性在47.89%～50.72%之间。进化树分析表明Eg Ral与Em Ral相聚集,与其他物种同源性较低。结论成功从细粒棘球绦虫原头蚴中克隆出Eg Ral基因,其序列具有较高的保守性。     

囊型包虫病流行区犬只细粒棘球绦虫感染季节性规律研究

目的了解犬只感染细粒棘球绦虫(Eg)的时间规律,探索更加易行的犬驱虫策略。方法采取整群抽样的方法,在马尔康和松潘各抽取了1个乡,初始纳入398只犬,使用吡喹酮进行每3个月1次的驱虫,ELISA检测驱虫前犬粪感染情况。结果在3月和6月连续两次驱虫后,9月两县犬只感染水平已分别降至1.25%和1.18%,下降率分别为94.21%和91.23%。但在12月,犬只感染率大幅却上升。犬只感染主要发生在9月至次年3月。原因可能是初冬(11、12月)是屠宰季节,而初春时寒冷及草料缺乏导致牲畜大量死亡,犬进食较多感染性内脏,从而导致感染机会大幅增加。结论马尔康县初冬、初春为主要感染季节,松潘主要感染季节为冬季;应根据实际感染季节有针对性地优化防治策略。