经修饰的重组梅毒螺旋体膜蛋白及其应用

目的　寻找高灵敏度、高特异性、检测结果定量、简便易行的梅毒螺旋体抗体酶联免疫检测方法。　方法　采用重组技术 ,在现有已公布的梅毒螺旋体基因组中筛选出公认抗原性最强的三个基因片段 Tpp1 5、Tpp1 7、Tpp47进行克隆。为了获得水溶性高、特异性强、可标记性好的重组抗原蛋白 ,有针对性地设计引物以便对表达的梅毒螺旋体膜蛋白进行修饰和改造 ,同时在收获高效表达的目的蛋白后采取了一系列针对性切割和高特异性纯化。以纯化的重组梅毒螺旋体膜蛋白 (r-KTp1 5 ,r-KTp1 7及 r-KTp47)为抗原 ,建立了诊断梅毒螺旋体抗体的双抗原夹心酶联检测方法 (DAGS ELISA)。　结果　在大肠杆菌中获得了重组梅毒螺旋体膜蛋白的高效表达 ,经修饰纯化之后的目标蛋白水溶性提高 ,特异性增强 ,可标记性优于常规不修饰的重组蛋白。应用该三种蛋白为抗原建立的双抗原夹心法血清学诊断试剂盒共检测各期梅毒阳性患者 2 1 0例 ,灵敏度达 98.6% (2 0 7/2 1 0 ) ,检测正常献血者 1 3 2 7例 ,特异性达 1 0 0 .0 % (1 3 2 7/1 3 2 7) ,优于常规梅毒血清学初筛诊断方法 RPR及 TRUST法 ,与 TPHA法的符合率为 1 0 0 .0 %。　结论　以双抗原夹心法酶联免疫诊断试剂盒在梅毒血清学初筛实验室进行梅毒螺旋体抗体的筛查 ,在灵敏度、特异     

ELISA双抗原夹心法在血液检测中的应用

梅毒是由密螺旋体属苍白球细菌引起的传染性疾病 ,可经血液途径传播。梅毒螺旋体侵入机体后 ,产生两种抗体 :一种是特异性抗体 ,另一种是非特异性抗体。目前 ,国内各采供血机构大多采用血清学非特异性试验检测献血者梅毒抗体 ,主要有 TRUST法和RPR法。由于非特异性试验检测结果敏感性高而特异性较低 ,常出现假阳性和漏检[1] 。本站于 2 0 0 1年 6月～ 2 0 0 2年 1 0月 ,对 1 3465例街头无偿献血者应用 ELISA双抗原夹心法作为献血者血液的梅毒抗体复检试剂 ,初检试剂仍用TRUST法 ,并以梅毒螺旋体血凝试验 ( TPHA)作为确证试验 ,现将…     

3种血清学特异性抗体检测在梅毒螺旋体检测中的比较研究

梅毒(syphilis)属于一种性传播疾病,病原体为苍白密螺旋体(TP)苍白亚种,又称梅毒螺旋体.近年来,TP 的感染率仍持高不下,虽然用于检测 TP特异性抗体的检测方法越来越多,梅毒血清学诊断仍具有挑战性,而且两次检测结果的不一致使临床决策变得困难[1 ].因此,本研究选择了 3 种 TP 特异性抗体的检测与TPPA...     

梅毒螺旋体低分子量多肽基因的克隆表达及临床应用

梅毒是由苍白螺旋体(Ｔ)感染引起的一种严重危害人类健康的性传染性疾病。血清学非特异性试验是目前诊断梅毒的主要方法,例如快速血浆反应素试验(ＲＰＲ)、不加热血清反应素试验(ＵＳＲ);应用梅毒螺旋体抗原检测梅毒患者体内的特异性抗体,已被用于确诊梅毒感染,例如荧光螺旋体抗体吸收试验(ＦＡＴＡＢＳ)、梅毒螺旋体血凝试验(ＴＰＨＡ)等,但使用的均为全抗原,由于可能存在的非特异性交叉反应,使上述方法受到一定的限制。因此,研制一种先进且实用的梅毒诊断及普查的方法已成为当务之急。近年来,由于分子生物学技术的普及,几种梅毒螺旋体的主…     

干燥综合征患者TPPA和TRUST检测梅毒抗体假阳性1例

梅毒是由梅毒螺旋体(又称苍白螺旋体)感染引起的一种慢性疾病,可引起多器官感染,严重危害患者的生命健康[1].梅毒的诊断主要根据流行病学史、临床表现和实验室检查.目前血清学检查包括非梅毒螺旋体血清学试验和梅毒螺旋体血清学试验,其中梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)是实验室血清学检测梅毒螺旋体的重要方法,该方法准确度和...     

梅毒螺旋体抗体明胶凝集试验测定梅毒特异性抗体室间质量评价结果分析

梅毒特异性抗体检测方法较多,国际上通用的试验是梅毒螺旋体血凝试验和荧光密螺旋体抗体吸收试验[1].梅毒螺旋体抗体明胶凝集试验(TPPA)是国内检测梅毒特异性抗体的常用方法,也是确诊梅毒的标准方法[2],其特异性和敏感性均较高,因此,也是卫生部临床检验中心推荐的检测梅毒的方法之一.     

TP-IgM检测在新生儿梅毒早期诊断中的临床意义

目的探讨梅毒螺旋体IgM抗体(TP-IgM)的检测在新生儿梅毒的早期诊断及治疗中的意义。方法以70例产前临床确诊梅毒阳性的孕妇所产新生儿的脐血(UCB)或外周血(PB)作为标本来源,联合使用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)3种方法检测TP-IgM。结果通过血清学检查,TRUST阳性26例,TPPA结果70例全部阳性,ELISA阳性18例。结论检测TP-IgM抗体是新生儿先天梅毒诊断及疗效判断的可靠方法。     

580例梅毒患者实验室检测结果分析

目的：对580例梅毒患者的实验室检测结果进行了回顾分析，探讨梅毒血清学试验对梅毒各期患者的诊断评价。方法：采用梅毒非特异性抗体检测快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)和梅毒特异性抗体检测梅毒螺旋体明胶凝集试验(IPPT)，对580例早期梅毒患者进行血清学检测，并采用RPR追踪观察驱梅药物的疗效。结果：Ⅰ期梅毒患者血RPR滴度为1：4者最多62例(23．6％)，Ⅱ期梅毒患者血RPR滴度为1：32者最多77例(31．0％)，潜伏梅毒患者血RPR滴度为1：16者最多13例(33．3％)。580例梅毒患者TPPA检测均为阳性、，结论：TPPA及RPR实验对于梅毒的诊断具有重要参考意义。     

化学发光免疫分析法与梅毒螺旋体明胶凝集试验检测梅毒螺旋体特异性抗体的比较

梅毒实验室诊断目前主要依靠血清学试验,国内大部分实验室开展的梅毒螺旋体特异性试验主要以梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)为主.而近20年快速发展的化学发光免疫分析法(CLIA)已广泛应用于各领域,但在梅毒的实验室诊断中的临床应用较少.为此,我们与本市3家实验室,对CLIA法检测梅毒螺旋体抗体结果进行了比对分析,现报告如下.     

莱芜市无偿献血者梅毒血清学检测结果分析

梅毒是由密螺旋体属苍白球菌传染引起的疾病 ,梅毒螺旋体侵袭人体后 ,血清中可产生非特异性反应素抗体和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体 ,它可以通过输血传播。笔者对本市 1 993～ 2 0 0 0年无偿献血者的梅毒血清学检测情况进行调查分析 ,报告如下。材料与方法1　对象　为莱芜市 1 8～ 5 5周岁的健康公民42 2 3 0人。无偿献血组织形式为 :单位组织的集体献血、个体无偿献血 (其中包括街头采血车献血及个人主动来血站献血 )。2　方法　TRUST法 ,试剂由上海荣盛公司提供 ,均经批批检并在有效期内使用。3　统计学方法　 χ2检验。结　　果不同…     

两种方法检测梅毒的比较

梅毒是严重危害人类健康的疾病之一，近年来梅毒的发病率呈上升趋势，在一些高危人群中尤为严重。人体受梅毒螺旋体侵袭后，血清中可产生非特异性反应素抗体和特异性抗体，目前广泛用于临床筛查的血清学方法是检测非特异性抗体，主要试验有甲苯胺红血清试验(TRUST)和快速血浆反应素试验(RPR)法；而梅毒螺旋体抗原血清学试验如梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)法等，大多作为确证试验。由于TRUST试验具有较高的假阳性率，近年来国内外开始采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清梅毒螺旋体抗体，笔对两种实验方法进行了对比分析，现将结果报告如下。     

3种方法诊断梅毒的临床应用价值研究

目的探讨3种方法诊断梅毒的临床应用价值。方法对比分析研究甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、梅毒螺旋体抗体的酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)及梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)诊断梅毒的临床应用价值。结果TP-ELISA法与TPPA法的符合率为97.4%,TPPA法与TP-ELISA法两组间无显著性差异(χ2=0.093,P0.05),TRUST法与TPPA法两组间有显著性差异(χ2=6.321,P0.05)。结论 TP-ELISA法作为梅毒诊断、治疗的首选方法,并辅以TRUST法等非梅毒螺旋体血清学试验,对临床诊疗梅毒进行合理的指导,而TPPA法是检测梅毒血清中的特异性抗体,在梅毒的诊断、治疗上,其特异性好,灵敏度高,但试剂昂贵,操作过程烦琐,时间长,不宜作为梅毒筛查试验方法。     

梅毒常用的实验室诊断方法?

答 :梅毒螺旋体暗视野显微镜检查 :取溃疡基底的分泌物 ,主要适用于有活动性溃疡的 1期梅毒患者 ,特别是血清学反应阴性者 ,阳性有确诊意义。但应注意 ,正常口腔黏膜表面有非梅毒螺旋体寄生 ,暗视野显微镜检查不适用于口腔黏膜溃疡。血清学检查是最常用的梅毒实验诊断方法 ,包括非梅毒螺旋体抗原试验和梅毒螺旋体抗原试验。非梅毒螺旋体抗原试验以心磷脂为抗原常用快速血浆试验 (RPR)、梅毒性病试验 (VDRL)等 ,此类方法敏感性高但特异性稍差 ,尤其对于自身免疫性疾病患者和老年患者假阳性率较高 ,多用于梅毒的筛查。有效治疗后此类抗体的…     

三种梅毒螺旋体抗体检测方法比较

梅毒是由苍白螺旋体引起的性传播疾病,梅毒血清学诊断方法为非梅毒螺旋体血清试验和梅毒螺旋体血清试验,这两类血清学方法埘梅毒的诊断具有特异性强、敏感性高等特点,但对早期梅毒螺旋体感染（4周前）的硬下疳患者敏感性较差,对神经梅毒和梅毒孕妇所生新生儿是否感染梅毒的早期诊断,以及经正规抗梅治疗的判愈等尚待研究。国内广泛应用的筛查试验主要为梅毒快速血浆反应素诊断试验（RPR）,梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验TP—Ab（ELISA）的方法检测梅毒螺旋体抗体,梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（treponema pallidum particle assay,TP—PA）,此法敏感度和特异度高,操作方法简单,是TPHA的升级产品,适用于潜伏梅毒及非特异性梅毒螺旋体试验阴性而又高度怀疑为梅毒的患者。     

梅毒胶体金法和TPPA诊断梅毒的比较研究

目前,国内外常用的检测梅毒螺旋体特异性血清试验中,主要有19s-IgM检测、TPHA、TPPA和FTA-ABS等[1].19s-IgM检测具有敏感性和特异性高,便于早期诊断及区别活动期感染或治愈判断[2],但由于IgM分离系统难购且价格贵,尚难在临床广泛使用;梅毒螺旋体荧光抗体吸收试验(FFA-ABS)也有较好的敏感性和特异性[3],但因其实验条件高,需要荧光显微镜设备,故不易普遍推广;TPHA和TPPA是目前最常用的检测梅毒螺旋体抗体的方法.梅毒胶体金(ACON SYP)检测法是一种新的检测梅毒螺旋体特异性抗体的方法,它比TPHA和TPPA操作简便、省时,可在1h内出结果.作者应用TPPA和(ACON SYP),对309例血清样本进行了比较,现报道如下.     

微粒子化学发光法检测梅毒抗体的临床应用

梅毒螺旋体是梅毒的病原体,很难培养,可通过垂直传播和性传播感染.依靠临床症状、黏膜或皮肤破损样本直接查找病原体和血清学结果是诊断梅毒的主要方法.因为损伤材料只在发病早期可以获得,加之梅毒感染的自然病程存在临床症状不明显的潜伏期[1],故对晚期阶段和潜伏期梅毒主要诊断依据是检测其特异性抗体.     

胶乳凝集试验检查梅毒螺旋体抗体

梅毒的诊断标准需依据病史、临床表现、血清学检测和损伤部位的梅毒螺旋体鉴定,其中以血清学检测最为重要。临床上常用的方法有梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)、荧光抗体吸收试验(FTA-ABS)和血浆快速反应素试验(RPR)。前两种试验以梅毒螺旋体作为抗原,而后者无梅毒螺旋体参与。RPR试验操作简单,但不能用于自动分析仪,且假阳性反应     

梅毒血清学试验方法的比较评价

[目的]比较常用4种梅毒血清学试验方法,观察各种方法阳性率,为检验与临床提供参考。[方法]采用目前临床实验室检测梅毒最常用的血浆反应素环状卡片试验（RPR）、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、梅毒酶联免疫吸附试验（TP—ELISA）、梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）4种方法对757例门诊患者及50例健康体检者分别进行检验。[结果]RPR和TRUST这两种方法对梅毒检山率明显低于ELISA和TPPA法。[结论]TP—ELISA和TPPA法检测梅毒特异性抗体,应作为临床梅毒确诊的主要检测手段;RPR法和TRUST法检测梅毒非特异性抗体,应作为临床梅毒的筛查实验以及梅毒复发、再感染和治疗的监测手段。     

聚合酶链反应在梅毒诊断中的应用

梅毒的各种血清学试验因敏感度和特异性尚不能达到早期和准确的要求，给临床诊断带来一定困难。我们应用PCR技术快速检测梅毒螺旋体，得到满意的结果。材料和方法一、标本来源40例可疑梅毒患者血清和分泌物标本均来自本院皮肤科与妇产科门诊。二、试剂Taq酶、dNTP、购自Promega公司．梅毒螺旋体抗体血凝试验（TPHA）试剂盒由日本富士株式会社生产，快速血浆反应素测定（RPR）试剂由兰州生物制品研究所生产。三、方法1．引物设计根据Burstain等[Clin．Microbi－ol．1991；29（1）62]，选择梅毒螺旋体39kD基底膜蛋白基因序列，扩增片…     

梅毒特异性抗体和非特异性抗体同时检测的临床意义

目的：探讨同时检测梅毒血清学特异性抗体及非特异性抗体的临床意义。方法以化学发光分析法(CLIA)检测血清梅毒特异性抗体,以梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)半定量检测血清梅毒非特异性抗体。结果 TRUST结果弱阳性、阳性原倍、1：2、1：4、1：8、≥1：16分别对应于 CLIA 结果 R/CO：20.13±10.94、22.41±13.89、18.57±12.50、15.67±10.92、9.72±6.92、6.41±5.13;梅毒特异性抗体R/CO越低,梅毒非特异性抗体滴度越高的几率越大;梅毒特异性抗体R/CO低、梅毒非特异性抗体滴度高的初诊患者血清学转阴时间小于梅毒特异性抗体R/CO高、梅毒非特异性抗体滴度低的初诊患者。结论初诊患者的梅毒血清特异性抗体和非特异性抗体同时检测对梅毒的诊断、预后均有一定的意义。