^99mTc标记卵巢癌单抗片段F（ab‘）2放射免疫显像的实验研究

目的：为了改进放射免疫显像（ＲＩＩ），进行＾９９ｍＴｃ标记卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ－Ｆ（ａｂ’）２ＲＨ的研究。方法：采用无茶果酶制单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２片段（ａｂ’）２，改进ＳｎＣｌ２法进行＾９９ｍＴｃ标记片段Ｆ（ａｂ’）２及正常鼠ＩｇＧ（ＮＭＩｇＧ）；＾９９ｍＴｃ－ＣＯＣ１８３Ｂ２或＾９９ｍＴｃ－ＮＭＩｇＧ标记物分别经腹腔注入荷入卵巢癌裸鼠体内，１８ｈ进行ＲＩＩ。显像后测定并计算肿瘤与非肿瘤     

卵巢癌预定位放射免疫显像的实验研究

目的：提高放射免疫显像（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｉｍａｇｉｎｇ,ＲＩＩ）质量,建立卵巢癌预定位放射显像技术。方法：将合成的环二乙基三胺五乙酸（ｃｙｃｌｉｃｄｉｅｔｈｙｌｅｎｅｔｒｉａｍｉｎｅｐｅｎｔａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ,ｃＤＴＰＡ）与卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２进行偶联,Ｓｅｐｈａｄｅｘ分离纯化后,采用免疫组织化学染色及细胞放射自显影对偶联物进行活性测定。将偶联的ＣＯＣ１８３Ｂ２ｃＤＴＰＡ或ＩｇＧ分别经腹腔注入荷人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型体内,４８ｈ后,将还原９９ｍＴｃ淋洗液经腹腔注入体内,６ｈ后进行ＲＩＩ。显像后,体外称重并测量瘤及其他正常组织放射性活性,计算瘤与非瘤放射性比值（Ｔ／ＮＴ）。结果：（１）ＣＯＣ１８３Ｂ２ｃＤＴＰＡ与浆液性卵巢癌组织免疫组化染色呈阳性;细胞放射自显影结果可见卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞膜周围呈环状显影,提示偶联后单抗仍保留了较好的免疫活性。（２）注射还原９９ｍＴｃ６ｈ后ＲＩＩ,可见实验组荷瘤裸鼠腹腔有特异放射性聚集;而对照荷瘤裸鼠腹腔无特异放射性聚集。实验组各器官Ｔ／ＮＴ值高于对照组,两者差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论：ｃＤＴＰＡ偶联ＣＯＣ１８３Ｂ２单抗进行卵巢癌预定位放射免疫显像     

肿瘤探测仪研制及其在卵巢癌放免导向手术中的应用

目的：进行自制肿瘤探测仪（ＧＤＰ）体内、外测试，为肿瘤导向手术提供帮助。方法：（１）体外用１３１Ｉ或９９ｍＴｃ核素及模拟的肿瘤放射性结节进行ＧＤＰ灵敏度和空间定位力测试；（２）建立荷人卵巢癌裸鼠模型，随机将其分为３组，分别经腹腔注入９９ｍＴｃＣＯＣ１８３Ｂ２Ｆ（ａｂ′）２（Ａ、Ｂ组）或ＩｇＧ（Ｃ组），进行ＧＤＰ裸鼠体内瘤及邻近组织探测，并与井型探测仪比较。结果：（１）ＧＤＰ探测核素最小活性１８５Ｂｑ，可探测１０ｍｍ厚度及３ｍｍ范围内放射性结节；（２）ＧＤＰ探测体内最小肿瘤为０．３ｃｍ×０．１ｃｍ，分辨瘤与组织最小间距为０．２ｃｍ；单抗组Ｔ／ＮＴ值大于２∶１，与对照组相比差异有显著性；与探测仪结果呈线性相关。结论：自制肿瘤探测仪具有较好的探测灵敏度和空间分辨力，可用于肿瘤导向手术探测     

肿瘤探测仪研制及其在卵巢癌放免导向手术中的应用

目的：进行自制肿瘤探测仪（ＧＤＰ）体内，外测试，为肿瘤导向手术提供帮助，方法：（１）体外用＾１３１Ｉ或＾９９ｍＴｃ核素及模拟的肿瘤放射性结节进行ＧＤＰ灵敏度和空产定位力测试；（２）建立荷人卵巢癌裸鼠模型，随机将其分为３组，分别经腹腔注入＾９９ｍＴｃ－ＣＯＣ１８３Ｂ２－Ｆ（ａｂ’）２（Ａ，Ｂ组）或ＩｇＧ（Ｃ组），进行ＧＤＰ裸鼠体内瘤及邻近组织探测，并与井型探测仪比较，结果：（１）ＧＤＰ探测核素最小活     

^99mTc标记抗癌胚抗原单抗C50片段Fab‘及其生物分布研究

目的：研究克服＾９９ｍＴｃ示记抗癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ,ＣＥＡ）单抗体内生物半衰期长、血液廓清速度慢、晚时相放射性信号弱等缺点的方法,用直接标记法进行了＾９９ｍＴｃ标记抗ＣＥＡ抗体Ｃ５０片断Ｆａｂ’的研究。方法：经胃蛋白酶切得的Ｃ５０片段Ｆ（ａｂ’）２用适量的２－巯基乙醇还原,Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ５０柱分离获得纯度大于９０％的Ｆａｂ’片断。取０．６～１．０ｍｇ纯化的片段Ｆａｂ’（体积〈１．０ｍｌ）,加入０．４～０．８ｍｇ葡庚糖酸钠及新鲜配制的ＳｎＣｌ２溶液５～１０μｇ,然后加入新鲜淋洗的Ｎａ＾９９ｍＴｃＯ４淋洗液,反应１０～１５ｍｉｎ。用高压液相色谱监测放化纯度和抗体纯度。荷ＣＬ－１８７（结肠癌）裸鼠静脉注射＾９９ｍＴｃ－Ｆａｂ’,观察标记抗体片段在不同时相的体内分布。结果：     

99mTc标记抗CEA单抗放射免疫显像的临床研究

目的：采用放射性核素９９ｍＴｃ标记抗癌胚抗原（ＣＥＡ）抗体Ｃ５０进行放射免疫显像（ＲＩ）以探讨其临床应用价值。方法：①对１５２例临床怀疑为各种肿瘤的患者做了ＲＩ检查,包括卵巢肿瘤１１５例,肠道肿瘤２６例和肺肿瘤１１例。②用２巯基乙醇还原法标记９９ｍＴｃＣ５０,其标记率达９０％以上,单抗用量１～１５ｍｇ。③静注地塞米松防过敏,９９ｍＴｃＣ５０静脉注射后４～６ｈ采集平面或断层图像。④以病灶处有放射性浓聚或Ｔ／ＮＴ比值大于１２为阳性判断标准。⑤全部病例均做了病理检查,其中卵巢肿瘤组同时进行了Ｂ超诊断,肠道肿瘤组做了免疫组化实验。结果：９９ｍＴｃＣ５０在恶性病变灶中有较多的滞留,诊断敏感性８８２％,特异性８３２％,准确性为８４９％,转移灶的检出率达８４４％,其诊断效能明显优于Ｂ超。而ＲＩ的质量与血清ＣＥＡ水平无关,与肿瘤的大小、肿瘤细胞ＣＥＡ反应及肿瘤细胞分泌的ＣＥＡ在组织中的分布有关。结论：认为９９ｍＴｃＣ５０ＲＩ对肿瘤的定性诊断和转移灶的检出有价值,是一种安全、简便和实用的影像诊断新方法     

抗甲状腺素抗体Fab‘片段的制备与鉴定

目的：制备抗甲状腺素抗体Ｆａｂ’片段，并达到符合酶标记的要求，以期可用于夹心酶联免疫方法（ＥＬＩＳＡ）测定血清中游离甲状腺素的浓度。方法：用硫酸钠ＤＥＡＥ纤维素层析法从兔抗Ｔ４的抗血清中提纯相应的ＩｇＧ，用胃蛋白酶将ＩｇＧ消化为Ｆ（ａｂ’）２片段，后者再用巯基乙醇还原为Ｆａｂ’。结果：用ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）鉴定纯化的ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’均为单一条带，分子量分别为１５ＫＤ、９７ＫＤ、４９ＫＤ；纯化后得到的ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’的回收率分别为６２．２％、６７．０％、７１．２％；用放免法检测均具有免疫活性；Ｆａｂ’每分子中的巯基数为１．０６。结论：用本文方法制备的Ｆａｂ’片段经鉴定，合乎酶标记和酶免工作的要求。     

卵巢癌预定位放射免疫显像的实验研究

目的：提高放射免疫显像质量,建立卵巢癌预定位放射显像技术。方法：将合成的环二一胺五乙酸与卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２进行偶联,Ｓｅｐｈａｄｅｘ分离纯化后,采用免疫组织化学染色及细胞放射自显影对偶联物进行活性测定。将偶联的ＣＯＣ１８３Ｂ２￣ｃＤＴＰＡ或ＩｇＧ分别经腹腔注入荷人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型体内,４８ｈ后,将还原＾９０ｍＴｃ淋洗液经腹腔注入体内,６ｈ后进行ＲＩＩ。显像后,体外称重并测量瘤及其他正常     

利用PCR技术构建GM—CSF／Fcγ2融合蛋白载体

目的：构建 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ／ Ｆｃγ２ 融合蛋白载体。方法：利用 Ｐ Ｃ Ｒ技术,将人 Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ基因与人免疫球蛋白 Ｉｇ Ｇ２ 的 Ｆｃ 段基因联接,构建融合基因ｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ Ｈ Ｖ２;并将此片段定向克隆到真核表达质粒ｐ Ｒｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ２ 载体。结果：琼脂糖凝胶电泳结果显示 Ｐ Ｃ Ｒ扩增出了 １．３ ｋｂ 的融合基因片段;限制性内切酶图谱分析,成功地完成了 Ｇ Ｍ  Ｃ Ｓ Ｆ／ Ｆｃγ２ 融合蛋白载体的构建。结论：（１）经 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增技术由质粒 Ｐ Ｃ Ｄｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ和 Ｐ Ｓ Ｖ Ｖ Ｎ Ｐ Ｈ Ｖ２ 分别扩增到了所需的ｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段和 Ｉｇ Ｇ２ 从绞链区到 Ｃ Ｈ３ 的基因组 Ｄ Ｎ Ａ 片段。（２）利用 Ｐ Ｃ Ｒ介导,扩增出了融合基因片段ｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ Ｈ Ｖ２。（３）构建了真核细胞表达载体ｐ Ｒｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ２／ｈ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ Ｈ Ｖ２ 。     

抗人卵巢癌单克隆抗体COC183-B2重链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

目的：分离抗人卵巢癌单克隆抗体ＣＯＣ１８３Ｂ２重链可变区（ＶＨ）基因并测定其序列。方法：用反转录ＰＣＲ扩增抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２ＶＨ基因，将其克隆入ＰＵＣ１９载体，重组子用Ｓａｎｇｅｒ’ｓ双脱氧链终止法测定序列，将序列与ＧｅｎｅＢａｎｋ及已发表的抗体序列比较。结果：ＶＨ基因全长３５４ｂｐ，属鼠免疫球蛋白重链混杂亚类（ｓｕｂｇｒｏｕｐｍｉｓｃｅｌａｎｅｏｕｓ），由种系基因的ＶＨ，Ｄｓｐ２．５及ＭＵＳＪＨ４重排而来。该ＶＨ基因序列已被ＧｅｎｅＢａｎｋ收录（ａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏＡＦ０４５０２３）。结论：该ＶＨ基因为抗人卵巢癌单抗ＣＯＣ１８３Ｂ２功能性重链可变区基因。