子宫肌瘤基因芯片的研究

基因芯片是一种能快速检测大量基因表达的分子生物学研究工具.子宫肌瘤基因芯片的研究发现,肌瘤中与细胞生长、增殖、凋亡、代谢、细胞运动性、血管发生、细胞外基质形成、细胞分化和免疫相关的基因表达发生了改变.文章综述子宫肌瘤基因芯片的研究进展,从分子水平探讨子宫肌瘤的发病机制.     

基因表达谱芯片筛查子宫内膜癌相关基因的研究

目的 应用基因芯片技术研究子宫内膜癌的基因表达谱,探讨子宫内膜癌的发生、发展与肿瘤相关的基因群及其功能.方法 应用TRIZOL一步法抽提11例子宫内膜癌患者的子宫内膜和3例子宫肌瘤患者的正常增殖期子宫内膜组织的总RNA,并纯化mRNA,将等量的子宫内膜的mRNA反转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA链做探针,混合后在含有8 064条双点人类全长基因的芯片上进行杂交,再经芯片扫描、图像分析处理后,分析子宫内膜癌组织及其与正常增殖期子宫内膜基因表达谱的差异.结果 11例子宫内膜癌组织和3例正常增殖期子宫内膜组织比较,含8 064个基因的基因芯片中共筛选出差异基因274条,其中上调92条,下调182条.结论 子宫内膜癌的子宫内膜组织和正常增殖期子宫内膜组织的基因表达谱存在差异,这些差异基因涉及细胞外基质调节基因、细胞因子、促癌基因/抑癌基因、细胞周期、细胞凋亡等,提示这些基因与子宫内膜癌的发生和发展有关.     

基因芯片技术在中医实验研究中的应用

基因芯片技术已成为现代分子生物学实验研究新技术之一.基因芯片技术已应用于中医的实验研究领域,其应用基因检测肾阳虚鼠脑基因、检测健脾益气、清热解毒、活血化瘀等中医对金属硫蛋白IE( MT1E)基因在肝癌细胞中表达的影响、观察理气活血法对萎缩性胃炎癌前病变大鼠胃黏膜组织基因表达谱的影响、研究小鼠胸膜间皮细胞免疫相关基因表达谱的状况及采用基因芯片技术研究虚寒证与虚热证大鼠肝全基因表达谱的差异,利用基因芯片技术筛选出寒体与热体的特征性基因等.     

实时荧光定量RT-PCR和cDNA基因芯片方法分析食管癌组织中基因的表达

目的:采用实时荧光定量RT-PCR和cDNA基因芯片2种技术分析食管癌细胞基因表达的特征。方法:应用cDNA基因芯片筛选15例食管癌基因表达谱,用实时荧光定量RT-PCR验证其中16个基因的表达变化。结果:实时荧光定量RT-PCR和cDNA基因芯片技术对16个基因的检测结果一致,不仅变化方向相同,而且表达值非常接近。结论:cDNA基因芯片和实时荧光定量RT-PCR分析基因表达变化都是可信的,基因芯片筛选基因表达谱具有高通量大规模的特点,而实时荧光定量RT-PCR则适合单个基因表达变化的研究,两者互为补充和印证。     

基因芯片技术在脓毒症分子机制研究中的意义

基因芯片技术是指将许多特定的DNA片段或cDNA片段作为探针固定于支持物表面,与待测的标记样品进行杂交,通过对杂交信号的检测分析,得出靶基因的遗传信息,具有高通量、高集成、快速灵敏等优点,可在一次试验中对成千上万个基因同时进行检测研究.脓毒症的发生、发展涉及众多细胞因子和趋化因子,利用基因芯片技术可筛选在炎性细胞活化过程中的多个环节上起作用的分子和起关键性调控作用的基因,揭示炎性细胞活化在脓毒症发生、发展过程中的作用.已有国内、外学者利用小鼠盲肠结扎-穿孔术(CLP)或腹腔内注射脂多糖(LPS)制备的小鼠脓毒症模型,采用基因芯片技术对其肺、肝、脾等组织及血白细胞的基因表达进行了研究,其结果 初步显示了这些组织中部分基因表达的特异性改变,主要包括多种与全身炎症反应、信号传导、细胞凋亡有关的基因表达出现上调或下调.基因芯片技术必将对人们认识脓毒症本质、改善脓毒症治疗效果产生越来越显著的积极影响.     

喉鳞状细胞癌基因表达特点初探

目的对与喉鳞状细胞癌关联的基因表达变化的轮廓特征进行描述。方法从相同患者体内检取正常喉上皮和喉鳞状细胞癌应用基因芯片进行分析。结果基因芯片包括4096条,基因表达变化显著差异的有369条,228条上调,141条下调。结论与喉鳞状细胞癌关联的基因涉及原癌基因和抑癌基因、细胞信号和传递蛋白、细胞周期蛋白、细胞骨架、细胞凋亡、免疫等,这些基因反映了喉鳞癌细胞的代谢、生长、信号传递等变化特点。基因芯片技术是基因表达分析有应用前景的技术。     

基因芯片筛选喉鳞状上皮细胞癌相关基因的初步研究

目的:应用基因芯片技术进行喉鳞状上皮细胞癌相关基因表达谱差异分析,筛选喉鳞状上皮细胞癌相关基因.方法:从4例喉鳞状上皮细胞癌中相同患者体内取喉鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织,应用含有人类全基因组的基因芯片进行分析.结果:在4例喉鳞状上皮细胞癌中共同基因表达显著差异的有349条,其中112条表达上调,237条表达下调.结论:基因芯片能提供大量喉癌相关基因表达谱的信息,分析这些差异表达的基因能够阐明喉鳞状上皮细胞癌复杂的生物学特性与基因表达之间的内在联系,并识别肿瘤的标记物,为进一步研究喉鳞状上皮细胞癌发生、发展相关基因打下基础.     

5-Fu对人结肠癌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨5-氟尿嘧啶（5-Fu）对人结肠癌细胞凋亡及其相关基因表达的影响。方法:Hct/8细胞分为5-Fu组和对照组，通过凋亡细胞数量、形态、基因组DNA片段化及流式细胞仪检测观察5-Fu对人结肠癌细胞凋亡情况的影响，并通过基因芯片测定相关基因改变。结果：吖啶橙染色及基因组DNA电泳显示5-Fu组凋亡细胞数量明显多于对照组（P<0.01）；基因芯片检测显示，5-Fu致多种基因表达发生改变，尤其是与DNA损伤修复相关基因出现表达下调。结论：5-Fu具有致人结肠癌细胞凋亡的作用，其原因是由于多种基因表达改变相互作用影响所致，尤其是DNA损伤修复相关基因的改变致不能及时修复受损的基因，最终致癌细胞发生凋亡。     

毫米波对人角质形成细胞基因表达的影响

目的:研究低强度毫米波对人角质形成细胞(HaCaT)基因表达的影响。方法:采用30.16 GHz、强度为1.0和3.5 mW/cm2的毫米波分别每天连续辐照HaCaT细胞30 min。细胞经不同次数辐照后,用基因芯片技术筛选毫米波反应基因,并以RT-PCR验证基因芯片筛选得到的结果。结果:经基因芯片筛选和RT-PCR证实,30.16 GHz、3.5 mW/cm2的毫米波辐照4次后,人角质形成细胞PAR-2、ERGIC-53基因表达明显上调(相对值分别为1.72±0.11 vs 1.24±0.09、1.52±0.21 vs 0.86±0.09,P均<0.01),而经1次毫米波辐照的细胞,均未见上述基因表达上调;30.16GHz、1.0 mW/cm2的毫米波辐照4次后,ERGIC-53基因表达亦明显上调(相对值为1.49±0.19 vs0.84±0.09,P<0.01),而PAR-2基因表达未见明显改变。结论:毫米波辐照影响基因的表达,基因表达的改变与辐照功率密度的大小和次数有关。     

利用基因芯片技术筛选不同转移能力骨肉瘤细胞差异表达基因

目的：运用基因芯片技术研究骨肉瘤转移相关基因表达．方法：提取具有不同转移特性的骨肉瘤细胞总RNA，反转录制备杂交探针，应用基因芯片筛选与骨肉瘤转移相关的基因．杂交信号用ScanArray3000扫描，结果用ImaCene3．0软件分析．结果：对原位及转移骨肉瘤细胞基因表达诺分析，发现两种肿瘤细胞中存在差异表达基因，其中有抑癌基因、转移相关蛋白基因、细胞周期蛋白基因等，与肿瘤发生发展密切相关．结论：基因芯片技术对肿瘤转移机制研究有重要意义。     

重度宫腔粘连相关基因的生物信息学分析

目的 从分子水平探讨重度宫腔粘连（intrauterine adhesion,IUA）的发生机制。方法 重度宫腔粘连组织及正常子宫组织每组13例标本,各组取3例用于芯片分析,10例用于RT-PCR验证芯片结果。应用芯片检测两组中差异表达的基因,采用GO数据库及京都基因与基因组大百科全书数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）对差异表达的基因进行基因功能分析与信号传导通路分析（pathway analysis）。结果 筛选出1 425个差异基因,其中上调基因731个,下调基因694个,对其进行生物信息学分析发现,差异表达基因功能主要包括：信号传导、多种细胞有机体发育、细胞粘连、细胞分化、单核细胞活化等。对部分差异表达基因COL16A1、ADAM-9,CDH2、LOX进行RT-PCR验证,结果表明其表达趋势与芯片结果一致。结论 利用生物信息学分析能有效挖掘基因芯片内在数据,对部分差异表达基因进一步分析表明,宫腔粘连发生发展中可能存在通过调节细胞外基质的表达与功能的机制,调节宫腔粘连的形成。     

子宫肌瘤致病相关基因的筛选与克隆

【目的】 研究子宫肌瘤与正常子宫肌组织中的基因表达差异,筛选及克隆子宫肌瘤的致病相关基因。【方法】 应用荧光标记的mRNA差异显示技术,比较11例子宫肌瘤及其正常子宫肌组织基因表达的差异,对获得差异片段进行克隆、测序及同源性分析,并对其中5条差异片段在子宫肌瘤及正常子宫肌组织中的表达情况进行RT-PCR分析。【结果】 差异片段NO.3,5,11,12在子宫肌瘤正常及异常组织中的表达均存在差异。其中NO.3差异片段在8例子宫肌瘤组织中有表达,而相应的正常组织中仅2例有表达。NO.5,11,12差异片段在子宫肌瘤中的表达水平高于正常子宫肌组织中的表达水平。【结论】 在子宫肌瘤的发生和发展过程中存在多个基因的表达异常,其中ulap8基因有可能在子宫肌瘤组织中呈特异性的表达,ulap14,ulap25,ulap26基因在子宫肌瘤组织中存在表达差异,推测这些基因有可能与子宫肌瘤的发病有关。     

平消胶囊抗肿瘤分子的生物学机制

目的 探讨平消胶囊抑瘤乳腺癌细胞MCF-7的分子机制及其作用靶点。方法 平消胶囊按照每只大鼠1．656g／d灌胃给药，连续7d。末次灌胃1h后，动物乙醚吸入麻醉，心脏采血，无菌分离血清，经56℃，30min灭活处理后，再以0．22μm微孔膜过滤除菌，置-70℃保存备用。以5％、10％、15％三种不同体积分数的平消胶囊含药血清培养人乳腺癌细胞MCF-7，然后以MTT技术及基因芯片技术，体外检测平消胶囊对人乳腺癌细胞生长的抑制作用和对人肿瘤信号传导基因表达的影响。结果5％、10％、15％的平消胶囊含药血清对人乳腺癌细胞的抑瘤率分别为28．2％、29．16％、31．12％；10％平消胶囊含药血清处理乳腺癌细胞后，对人肿瘤信号传导基因芯片表达下调和上调的基因分别为34个和22个。不同体积分数的平消胶囊混悬液对人乳腺癌细胞均有一定的抑制作用，其中以15％的混悬液抑瘤率最高，但三种不同体积分数混悬液间的抑瘤率差别无统计学意义。结论 平消胶囊对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的部分信号传导基因具有显著的调节作用，这种调节作用总的趋势是有利于抑制人乳腺癌细胞MC-7细胞生长、有利于降低其耐药性和浸润及转移潜力。     

小鼠胸膜间皮细胞免疫相关基因表达谱与中医藏象理论相关性研究

目的:研究小鼠胸膜间皮细胞(pleural mesothelial cell,PMC)免疫相关基因表达谱的状况。从而探索用现代免疫及基因芯片技术评价解释中医藏象理论的新方法。方法:取8只BALB/c小鼠胸膜组织块剪切成碎块,提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图象采集与数据分析等过程获得基因表达谱。结果:共筛选出小鼠胸膜间皮细胞免疫相关表达基因204条。其中主要有免疫应答及调节基因56条;炎性反应基因32条;非特异性免疫基因14条;T细胞增殖、活化、调节等相关基因23条,B细胞活化、分化、调节等相关基因9条;急性反应期基因5条;抗原加工与提呈基因4条;Ⅱ型超敏反应正向调节基因5条。结论:胸膜间皮细胞既表达免疫相关的正向调节基因亦表达负向免疫相关的调节基因。提示胸膜可能为一免疫协调器官,这对丰富中医藏象理论与肺气的实质将提供分子生物学的基础研究依据与新的思路。     

Expression and Bioinformatics Analysis of SPACA4 in Human and Mice

Objective To analyze the expression of SPACA4 in human and mice. Methods Testes cRNA samples from Balb/c mice of different postnatal days were performed with mouse affymetrix chip to screen the expression of SPACA4 in mice. Sub-quantitative RT-PCR and bioinformatic tools were used here to describe the expression profile of SPACA4 in mice and human. Results The results of gene chip analysis indicated that the expression of mSPACA4 began after d 35 of postnatal testis in mice. Sub-quantitative RT-PCR assay showed that SPACA4 gene expressed exclusively in mouse and human testis, and mouse mSPACA4 gene expressed after d 35 of postnatal testis that was consistency with the results of gene chip analysis. By bioinformatics analysis, mSPACA4 is located in cell membrane （34.8%） or plasma membrane （34.8%）, the signal peptide cleavage site between position 19 and 20 amino acids, transmembrane region between 2-20 and 101-126 amino acids, respectively, on mSPACA4 protein. Conclusion mSPACA4 and hSPACA4 were testis-specific genes, and the expression of mSPACA4 begins after d 35 of postnatal testis in mice. SPACA4 is a candidate for targeting in a sperm-based contraceptive vaccine.     

原发性肾病综合征的分子肖像

目的比较原发性肾病综合征患儿和健康儿童外周血单个核细胞基因表达谱的差异，筛选原发性肾病综合征相关基因，绘制原发性肾病综合征的分子肖像，系统阐明原发性肾病综合征发生的分子机制。方法分离6例原发性肾病综合征患儿和6例与之匹配的健康儿童的外周血单个核细胞，用TRIzol一步法提取外周血单个核细胞的总RNA，再用逆转录-PCR法以Cy5和Cy3分别标记原发性肾病综合征患儿和健康儿童的mRNA而成为cDNA探针。将两种探针混合后与点有8096条基因的芯片杂交。经严格洗涤后用GenePix4000B扫描仪扫描杂交信号，用GenePix Pro 3．0软件分析扫描结果。结果8096条被检基因中共有418条在PNS患儿和健康儿童的PBMC中存在差异表达，其中128条基因在PNS患儿的PBMC中表达升高，290条基因表达降低，102条基因在本研究的6对PNS患儿和健康儿童配伍对照中均存在差异表达。这102条基因根据功能可分为10类：免疫相关基因、细胞骨架相关基因、信号转录相关基因、细胞周期及增殖凋亡相关基因、癌基因和抑癌基因、基因复制和表达相关基因、离子通道和转运蛋白相关基因、受体相关基因、代谢相关基因及其它功能尚不清楚的基因。结论原发性肾病综合征的发生、发展是许多相互作用的基因共同作用的结果。     

抗衰汤对血瘀证大鼠肾脏衰老相关基因表达的影响

[目的]探讨血瘀与衰老的相关性、抗衰汤抗衰老的分子生物学机制,以利中药抗衰老制剂的开发。[方法]使用基因芯片技术,确定血瘀影响的衰老基因表达,并考核抗衰汤对血瘀证大鼠衰老相关基因表达谱的影响。[结果]确定16个基因为与血瘀相关的衰老基因,但其表达水平受到抗衰汤用药的影响。[结论]抗衰汤对与血瘀相关的衰老基因有明显地调控作用,血瘀是导致衰老的关键因素之一。     

基因芯片在筛选食管鳞癌相关基因中的应用

目的研究人食管鳞状细胞癌与癌旁正常组织的基因表达谱,通过对比基因表达的差异,寻找与人食管鳞癌发展相关的基因。方法提取人食管鳞癌与正常食管鳞状上皮的mRNA,逆转录成cDNA,并用Cy3-dUTP标记正常食管组织,用Cy5-dUTP标记食管鳞癌组织,制成探针,与基因芯片进行杂交,经扫描仪扫描后,对获取的信号数据进行软件分析、对比。筛选出差异表达的基因。结果在4例新鲜标本的芯片杂交检测中,共发现4329条基因发生差异表达,其中2293条上调,2036条下调,将这些基因按GO（gene ontology）分子功能（function term）进行分类,发现与细胞分化、成熟,分子定位、连接,信号传导,酶活性调节,以及基因转录、翻译调节有关的基因最多。结论①食管鳞癌的发生发展与多条基因的异常表达有关。②应用基因芯片技术可以对食管鳞癌的基因表达谱进行分析,以筛选食管鳞癌相关基因。     

基因芯片技术在糖尿病研究中的应用

基因芯片技术是近年来兴起的一种分子生物学技术。它通过对个体在不同生长发育阶段或不同生理状态下大量基因表达的平行分析,研究相应基因在生物体内的功能,阐明不同层次多基因协同作用的机理,进而在糖尿病的发病机理、诊断治疗、药物开发等方面的研究中发挥巨大的作用。     

14-3-3γ表达载体的构建及其对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 ：构建一种稳定、高表达的14-3-3γ基因真核表达质粒载体,并探索其抗子宫肌瘤的作用。方法：提取子宫肌瘤细胞总RNA,反转录后通过RT-PCR扩增14-3-3γ,并将扩增的目的基因片段插入pCMV-N-Flag真核表达质粒,构建重组质粒14-3-3γ-pCMV-N-Flag,重组体经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术导入子宫肌瘤细胞。应用Western Blot法检测14-3-3γ蛋白的表达,应用CCK-8检测细胞增殖变化,应用Annexin V-FITC/PI双染色法经流式细胞术检测细胞凋亡。结果：①构建的14-3-3γ-pCMV-N-Flag真核表达载体经酶切后电泳和DNA测序,显示载体构建正确;②子宫肌瘤细胞转染重组体后的14-3-3γ表达明显高于转染前（P＜0.05）;③子宫肌瘤细胞转染重组体后,细胞增殖抑制率为52.90%（P＜0.05）;④转染重组体后肌瘤细胞的凋亡率明显高于转染前（P＜0.05）。结论：本研究成功构建14-3-3γ-pCMV-N-Flag真核表达质粒载体,14-3-3γ在子宫肌瘤细胞内高表达后可抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡。