虾青素对兔骨性关节炎软骨细胞增殖与凋亡影响的研究

目的通过观察虾青素对新西兰兔骨性关节炎模型的软骨细胞增殖与凋亡基因表达的影响,初步探索其干预软骨细胞代谢的作用机制。方法取5月龄新西兰兔骨性关节炎模型的膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,分别采用MTT法、TUNEL法、免疫组化法对细胞增殖、凋亡及细胞周期调控基因Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53 mRNA的表达进行检测。结果不同剂量组虾青素可显著促进软骨细胞体外增殖,并可通过减弱软骨细胞Bax、Caspase-3、p53 mRNA的表达,增强Bcl-2 mRNA的表达来减缓软骨细胞凋亡进程。结论虾青素可有效调控兔骨性关节炎软骨细胞代谢,增强细胞活性,延缓凋亡,具有研发成为骨性关节炎治疗药物的潜能。     

刺老苞根皮黄酮对抗骨性关节炎软骨细胞氧化损伤及炎性的影响研究

目的研究刺老苞根皮黄酮对骨关节炎软骨细胞氧化损伤及炎性的逆转作用。方法选15只5月龄新西兰兔,采用内侧副韧带、前后交叉韧带切断并切除内侧半月板的Hulth骨性关节炎动物模型制作方法,分离培养软骨细胞,其中模型组分别加入10,20,30μg/ml刺老苞根皮黄酮低、中、高剂量处理。从第9周开始,采用DCFH-DA法检测细胞内活性氧水平,Griess法测定细胞培养上清中NO、SOD和GSH-Px含量,RT-PCR法检测各组细胞相关炎性因子IL-1β、诱导型一氧化氮合酶iNOS、转录调节因子p53基因mRNA的表达。结果与模型组比较,刺老苞根皮黄酮各剂量组细胞内活性氧水平、NaNO2含量、IL-1β/GAPDH表达水平、iNOS/GAPDH表达水平、p53/GAPDH表达水平均有所降低,且差异均有统计学意义(P<0.01),而SOD、GSH-Px均有所升高,且差异均有统计学意义(P<0.01)。结论刺老苞根皮黄酮对骨关节炎软骨细胞的氧化损伤及炎性有逆转作用,具有研发成为骨性关节炎治疗药物的潜能。     

透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨透骨消痛胶囊含药血清影响软骨细胞线粒体凋亡通路的作用机制。方法:SD大鼠膝关节软骨建立体外培养的软骨细胞,Ⅱ型胶原原位杂交鉴定。第3代软骨细胞培养72h,SNP诱导软骨细胞凋亡,采用含药血清干预凋亡软骨细胞,Hocehst 33342染色检测软骨细胞的凋亡率,Real time RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达。结果:干预24h,软骨细胞的OD值,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bcl-2mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显高于空白组(P<0.05);软骨细胞Bax、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达,对照组、实验2组、实验3组明显低于空白组(P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊含药血清能下调软骨细胞促凋亡基因Bax、Caspase-9、Caspase-3表达,上调抗凋亡基因Bcl-2表达,抑制软骨细胞线粒体凋亡通路的信号转导。     

膝关节骨性关节炎病变与细胞凋亡及相关基因表达关系

软骨细胞凋亡在骨性关节炎的发病中具有重要作用,其凋亡的途径有NO途径和Fas途径;主要受Bcl-2基因家族、Bax、P53、和ICE基因家族调控;软骨细胞外基质的降解,可诱导软骨细胞凋亡。     

化痰除湿祛瘀剂膝痹康对膝骨关节炎患者软骨细胞凋亡调控基因表达的影响

目的研究化痰除湿祛瘀剂膝痹康对人骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞调控基因表达的影响。方法取全膝关节置换手术膝骨关节炎患者的软骨组织,采用酶消化培养法培养人软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色鉴定细胞来源。将软骨细胞分为对照组、膝痹康0.016、0.08、0.4、2.0、10.0 mg/m L组,培养24 h后,应用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测各组细胞的增殖情况。根据增殖结果将软骨细胞分为对照组、膝痹康低、中、高剂量组(0.05、0.1、2.0 mg/m L),用TUNEL法检测各组细胞凋亡情况,以实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组细胞Bcl-2、Bcl-2同源水溶性相关蛋白X(Bax)及p53 mRNA表达。结果本研究成功建立了人骨关节炎软骨细胞有限细胞系,细胞生长状态良好;甲苯胺蓝染色证明所培养的细胞为来自中胚层的软骨细胞。膝痹康在0.016~10.0 mg/m L范围内对OA软骨细胞波长=450 nm处24 h的光密度(OD)有影响。与对照组相比,膝痹康低剂量组细胞凋亡率无明显变化(P0.05),膝痹康中、高剂量组下降(P0.05,P0.01)。膝痹康低、中、高剂量组间比较显示,两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,膝痹康低剂量组Bcl-2、Bax及p53 mRNA相对表达量无明显变化(P0.05),膝痹康中、高剂量组Bcl-2 mRNA表达量明显上调(P0.05),Bax及p53 mRNA表达量明显下调(P0.05,P0.01);与膝痹康低剂量组相比,膝痹康中、高剂量组Bcl-2 mRNA表达量明显上调(P0.05),Bax及p53 mRNA表达量明显下调(P0.05,P0.01);与膝痹康中剂量组相比,膝痹康高剂量组Bax mRNA表达量明显下调(P0.05)。结论化痰除湿祛瘀剂膝痹康调控细胞凋亡基因的表达,抑制软骨细胞过度凋亡,这可能是抑制软骨破坏的重要机制之一。     

补肾壮骨胶囊对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的：通过观察补肾壮骨胶囊对兔膝OA软骨细胞凋亡的影响,探讨其治疗膝OA的作用机理。方法：将40只雄性新西兰大白兔随机分为4组：A正常组、B模型组、C治疗组、D对照组,用改良Hulth法制造兔膝OA模型,C组给予补肾壮骨胶囊,D组给予壮骨关节丸。给药8周后,将兔处死后用TUNEL法观察补肾壮骨胶囊对实验性兔膝OA软骨细胞凋亡的影响,RT-PCR检测Bax、Bcl-2在mRNA水平表达的变化。结果：研究显示A组凋亡指数最小,B组凋亡指数最高,C、D组凋亡指数明显小于B组,高于A组。Bax/Bcl-2比值在B组明显高于A组,C、D组与B组比较,比值下降;C组和D组比较,比值无明显差异。结论：补肾壮骨胶囊可以抑制Bax,促进Bcl-2表达,提高Bcl-2/Bax比值,抑制关节软骨细胞的凋亡。     

电针后血清对TNF-α诱导凋亡软骨细胞MAPK信号通路的影响

目的观察电针后血清对肿瘤坏死因子α诱导凋亡软骨细胞MAPK信号通路的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶消化法分离3周龄SD大鼠膝关节软骨细胞,用10μg/L的肿瘤坏死因子α诱导体外培养软骨细胞的凋亡,同时给予正常大鼠血清、骨性关节炎大鼠血清、透明质酸钠治疗的骨性关节炎大鼠血清,及电针内、外膝眼5、15、30 min治疗的骨性关节炎大鼠血清进行干预,观察软骨细胞MAPK信号通路关键调控因子p38、Fas mRNA的变化。结果电针内、外膝眼15、30 min治疗的骨性关节炎大鼠血清干预24 h,干预后各组软骨细胞p38、Fas mRNA的表达,实验2组、实验3组、对照组明显低于正常组（P〈0.01,P〈0.05）,对照组、实验2组、实验3组明显低于模型组（P〈0.01）。结论电针后血清能有效抑制凋亡调控基因p38、Fas mRNA,降低MAPK信号通路的表达,从而抑制软骨细胞凋亡。     

动态温热疏密波对软骨细胞凋亡调控基因表达的影响

目的：探讨动态温热疏密波对骨性关节炎软骨细胞凋亡调控基因表达的影响。方法：大白兔60只,随机分为2组．即：正常组（10只）和手术组（50只）。手术组采用改良Hulth法复制膝骨性关节炎模型,术后随机分为5组,模型组造模后常规饲养,对照组微波治疗仪,实验1组电（疏密波）治疗,实验2组热（热软膜）治疗,实验3组电热（治疗型护膝动态温热疏密波）治疗,分别对应治疗16周后,观察关节软骨的组织形态学,检测软骨细胞的凋亡率及p21、p53、Bcl-2 mRNA的表达。结果：16周时,骨性关节炎模型成功建立,经治疗后各组关节软骨组织形态学病理变化程度明显轻于模型组（P〈0．01,P〈0．05）;各组软骨细胞的凋亡率、p53 mRNA表达,模型组、对照组、实验1组、实验2组、实验3组明显高于正常组（P〈0．01）,对照组、实验2组、实验3组明显低于模型组、实验1组（P〈0．01,P〈0．05）,实验3组明显低于对照组、实验2组（P〈0．01,P〈0．05）;软骨细胞p21、Bcl-2 mRNA表达,模型组、对照组、实验1组、实验2组、实验3组明显低于正常组（P〈0．01）,对照组、实验2组、实验3组明显高于模型组、实验1组（P〈0．01,P〈0．05）,实验3组明显高于对照组、实验2组（P〈0．01,P〈0．05）。结论：动态温热疏密波能有效下调软骨细胞p53 mRNA表达,上调p21、Bcl-2 mRNA表达,从而抑制软骨细胞的凋亡,延缓关节软骨退变。     

刺老苞根皮黄酮类化合物对破骨细胞分化的影响

目的：研究刺老苞根皮黄酮类化合物对体外破骨细胞分化的影响。方法：建立由骨保护素配体（RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）共同细胞因子的小鼠破骨细胞骨髓诱导体系,将不同浓度的刺老苞根皮黄酮类化合物作用于破骨细胞。受试细胞分为对照组、刺老苞根皮黄酮类化合物低剂量组（10-8mol·L^-1）、刺老苞根皮黄酮类化合物中剂量组（10^-7mol·L^-1）和刺老苞根皮黄酮类化合物高剂量组（10^-6mol·L^-1）,并设立空白对照组。7天后取细胞玻片进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色,观察破骨细胞并计数;测量抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性以及破骨细胞表面NF—kB活化受体（RAVK）mRNA表达量。结果：诱导培养的破骨细胞形态特征明显;刺老苞根皮黄酮类化合物中、高剂量组在细胞数量、TRAP活性上与对照组相比有明显统计学差异（P〈0．05）;刺老苞根皮黄酮类化合物各剂量组在（RANK）mRNA表达量上与对照组相比有明显统计学差异（P〈0．05）,且呈量效关系。结论：刺老苞根皮黄酮类化合物可以抑制体外培养的破骨细胞分化。     

透骨消痛胶囊对兔骨性关节炎软骨细胞MAPK信号通路表达的影响

目的研究透骨消痛胶囊对兔骨性关节炎软骨细胞MAPK信号通路表达的作用机制。方法成年健康6月龄新西兰兔40只,采用抽签法随机分为正常组、造模组,造模组用4%木瓜蛋白酶双膝关节腔注射建立骨性关节炎模型;造模成功后造模组采用抽签法随机分为模型组、对照组、实验组,实验组用透骨消痛胶囊水溶液100 mL/d灌胃,对照组用壮骨关节胶囊水溶液100 mL/d灌胃,Western Rlot检测MAPK信号通路p—ERK1/2、p—JNK的蛋白表达。结果实验组治疗后,关节软骨中p-ERK1/2蛋白表达高于模型组、对照组(P0.05),p—JNK蛋白表达低于模型组、对照组(P0.05)。结论透骨消痛胶囊可通过上调兔骨性关节炎软骨细胞p—ERK1/2蛋白的表达,下调p-JNK蛋白的表达,促进软骨细胞增殖、分化,抑制其凋亡。     

刺老苞根皮黄酮对骨折模型大鼠骨质代谢的影响研究

目的研究刺老苞根皮黄酮对胫骨骨折模型大鼠骨质代谢变化的影响。方法将50只6周龄SD（雌雄各半）大鼠随机分成5组,即对照组（A组）、模型组（B组）、刺老苞根皮黄酮低剂量组（C组）、刺老苞根皮黄酮中剂量组（D组）、刺老苞根皮黄酮高剂量组（E组）,每组10只。其中刺老苞根皮黄酮低、中、高剂量组给予刺老苞根皮黄酮相应剂量灌胃（分别为10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg）,对照组和模型组以等量的0.9%NaCl溶液灌胃。观察各组灌胃第4天、7天、14天、21天、28天不同时间点其他骨代谢相关参数（碱性磷酸转移酶、骨钙素、羟脯氨酸以及骨盐）变化情况。结果与对照组比较,模型组不同时间点的骨碱性磷酸转移酶（ALP）、骨钙素、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。与模型组比较,刺老苞根皮黄酮各剂量组除骨折第4天外其他时间点的ALP、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均升高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;而刺老苞根皮黄酮各剂量组骨钙素的含量在骨折第14天、第21天及第28天升高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。与低剂量组比较,中、高剂量组除骨折第4天外其他时间点的骨碱性磷酸转移酶（ALP）、骨钙素、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均升高,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。与中剂量组比较,高剂量组除骨折第4天外其他时间点的骨碱性磷酸转移酶（ALP）、骨钙素、羟脯氨酸、骨钙、骨磷含量均升高,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论刺老苞根皮黄酮可以改善胫骨骨折大鼠骨代谢状况,有利骨折愈合修复。     

刺老苞根皮黄酮类化合物抗去势雌性大鼠骨质疏松症实验研究

目的探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对去卵巢骨质疏松模型大鼠的影响。方法将72只15周龄SD大鼠随机分为空白组、模型组、尼尔雌醇组及刺老苞根皮黄酮类化合物高、中、低剂量组,每组12只。空白组行假手术,其余5组行卵巢切除术,术后用药12周后处死,测定右侧股骨骨密度、骨矿含量、血清雌二醇、碱性磷酸酶含量及子宫湿重。结果与模型组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物高、中、低剂量组、尼尔雌醇组能对抗骨密度、骨矿含量、血清雌二醇的下降、血清碱性磷酸酶的升高（P〈0.05）,对抗子宫指数的减轻（P〈0.05）。结论刺老苞根皮黄酮类化合物可以改善骨质量,抑制大鼠去卵巢骨质疏松的发生,具有类雌激素的效应。     

刺老苞根皮黄酮类化合物对抗大鼠泼尼松性骨质疏松的作用研究

目的 研究刺老苞根皮黄酮类化合物对泼尼松致大鼠骨质疏松的对抗作用.方法 将50只大鼠随机分成正常对照组、泼尼松模型组和刺老苞根皮黄酮类化合物高、中、低(10,20,30 mg/kg)剂量组,每组10只.分别灌胃相应药物,1次/d,连续8周后取血清检测生化指标,对骨进行组织切片检查,长度、宽度以及骨质的测量.结果 泼尼松模型组大鼠股骨重量、尺骨骨羟脯氨酸和骨钙含量比正常对照组明显降低,胫骨骨髓腔中脂肪组织增多(P<0.01),血浆胆固醇(TG)含量上升、碱性磷酸酶(ALP)和高密度脂蛋白(HDL)含量下降(P<0.01).刺老苞根皮黄酮类化合物组能有效提高骨的重量和骨质的含量(P<0.01),减少骨髓腔中脂肪的含量,升高碱性磷酸酶和高密度脂蛋白含量(P<0.01).结论 泼尼松可抑制大鼠的骨生长及引起骨丢失,而刺老苞根皮黄酮类化合物可有良好的对抗作用.     

刺老苞根皮黄酮类化合物对MC31E-E1成骨细胞OPG和RANKL mRNA基因表达影响的实验研究

目的:探讨刺老苞根皮黄酮类化合物对MC3T3-E1成骨细胞骨保护素(OPG)和核因子κB受体激活因子配体(RANKL)mRNA基因表达的影响.方法:体外培养MC313-E1成骨细胞,分别加入含0mol·L-1、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1、10-6mol·L-1刺老苞根皮黄酮类化合物的培养液,48h及96h后分别提取细胞总mRNA,用RT-PCR方法分析OPG/RANKL的mRNA的表达,进行半定量分析.结果:培养48h后,与对照组比较,刺老苞根皮黄酮类化合物增强了OPGmRNA的表达,有显著性差异(P<0.05或P<0.01),VOPG/VRANKL比值增大;96h后,刺老苞根皮黄酮类化合物明显增强了OPG mRNA的表达,各浓度组与对照组相比,均有显著性差异(P<0.05或P<0.01),各浓度组VOPG/VRANKL比值增大,有显著性差异(P<0.05或P<0.01).结论:刺老苞根皮黄酮类化合物可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,从而抑制骨吸收,达到治疗骨质疏松症的目的.     

龟鹿二仙胶汤及其拆方对大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响,比较龟鹿二仙胶汤中各药物组成在全方中的作用。方法:取1月龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,采用实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53mRNA表达。结果:龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角、人参、枸杞、盐酸氨基葡萄糖均可显著抑制大鼠软骨细胞Bax、Caspase-3、P53的表达;龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角与盐酸氨基葡萄糖效果相当,人参、枸杞弱于盐酸氨基葡萄糖。结论:龟甲和鹿角是龟鹿二仙胶抑制凋亡的主要物质。龟甲、鹿角峻补阴阳以生气血精髓的作用可以一定程度上从抑制软骨细胞凋亡来体现。人参大补元气、枸杞滋补肾阴,抑制凋亡有效,但效果明显不如龟鹿二仙胶;而4味药共同作用,具有填补精髓、益气壮阳之功,人参、枸杞可以在一定程度上加强龟甲、鹿角抑制软骨细胞凋亡基因的表达。     

桔梗皂苷D诱导人肺癌细胞A549的凋亡及机制

目的:研究桔梗皂苷D(platycodin,PD)抑制人肺癌A549细胞株增殖和诱导凋亡的分子机制.方法:体外培养人肺癌细胞株A549,PD作用终浓度分别为5～ 20μmol·L-1.MTF法测定PD对细胞的增殖抑制作用,显微镜观察细胞的形态学变化,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,JC-1检测线粒体膜电位的变化,Western blot方法检测PD对Caspase-3,Caspase-9,PARP的剪切片段和Bax,Bcl-2,Bak,Bcl-xl蛋白表达的影响.结果:PD抑制A549细胞的增殖,并随药物浓度的增加和作用时间的延长,作用更显著;与对照组相比,不同浓度的PD作用24 h后,细胞凋亡率增加,线粒体膜电位降低,且差异显著.蛋白电泳检测结果显示蛋白Caspase-3,Caspase-9均出现剪切片断,并随着时间的增加断裂更明显.PD处理A549细胞后,Bax和Bak蛋白表达升高,Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达下降.结论:PD具有明显的细胞毒作用,能诱导A549细胞凋亡,通过对Bax,Bak和Bcl-2,Bcl-xl表达的调控,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase最终导致肺癌细胞死亡.