姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响

目的 探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制。方法 将HepG2细胞分3组：正常对照组、氯化钴（CoCl2）组和CoCl2加10 μmol/L姜黄素组。采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测缺氧诱导因子－1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白（epithelial-cadherin,E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。3组HIF-1α mRNA表达比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关。     

常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞增殖及HIF-1α mRNA表达的影响

目的:研究常氧条件下姜黄素对Hep1细胞的增殖及HIF-1α mRNA表达的影响。方法CCK-8法检测常氧条件下不同浓度姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)对肝癌Hep1细胞增殖的影响;用终浓度为15μmol/L姜黄素对体外肝癌细胞系Hep1细胞进行干预,流式细胞术分析Hep1细胞凋亡的变化;常氧条件下不同浓度姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)对肝癌Hep1细胞作用24h后,RT-PCR检测Hep1细胞HIF-1α mRNA表达水平的变化。结果:5、10、15、20μmol/L的姜黄素在作用1周后,呈浓度依赖性抑制肝癌Hep1细胞增殖;流式分析显示15μmol/L的姜黄素使Hep1细胞凋亡率增高,差异具有统计学意义(P0.05);与空白对照组相比,10μmol/L姜黄素处理组的HIF-1α mRNA的表达水平升高,差异具有统计学意义(P0.05),15、20μmol/L姜黄素处理组的HIF-1α mRNA的表达水平升高更为显著(P0.01)。结论:常氧条件下,姜黄素呈浓度依赖性抑制肝癌Hep1细胞的增殖,促进Hep1细胞的凋亡和HIF-1α mRNA的表达,常氧条件下姜黄素抑制肝癌Hep1细胞增殖的机制可能与缺氧条件下姜黄素的抑瘤机制有所不同。     

加减驻景方含药血清对CoCl_2诱导ARPE-19细胞表达VEGF及HIF-1α的影响

目的探讨加减驻景方含药血清对二氯化钴(CoCl_2)诱导后人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞系)中血管内皮生长因子(VEGF)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达的影响。方法 1.体外培养ARPE-19细胞,取对数生长良好的细胞用于实验,分为正常组,缺氧模型组,阳性对照组、含药血清组,并设立不同时间点。2.酶联免疫吸附试验(ELISA)观察CoCl_2诱导后不同时间、各组细胞上清液中HIF-1α的表达。3.蛋白质印迹法(Western blot)观察CoCl_2诱导后不同时间、各组细胞中VEGF、HIF-1α的表达情况。结果缺氧损伤后可诱导ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α蛋白的表达增加;与正常组比较,缺氧模型组VEGF及HIF-1α的表达高于正常组,差异具有统计学意义(P0.05);含药血清组与模型组比较,VEGF及HIF-1α的表达低于模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论加减驻景方含药血清对缺氧损伤后ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α蛋白的表达有抑制作用。     

缺氧诱导星形胶质细胞HIF-1α、SDF-1α的表达及其相关性研究

目的:观察氯化钴诱导缺氧离体星形胶质细胞HIF-1α、SDF-1α的表达情况及相关性。方法:用不同终浓度氯化钴培养离体星型胶质细胞4小时,以未加入氯化钴培养组作为对照组;50μmoml/L氯化钴培养星形胶质细胞不同的时间,以未加入氯化钴培养组作为对照组;RT-PCR检测各组缺氧模型HIF-1αmRNA和SDF-1αmRNA的表达。结果:对照组HIF-1α表达很弱甚至不表达,而SDF-1α有一定的表达;50μmoml/L氯化钴培养的星型胶质细胞不同时间组:不同时间点HIF-1α、SDF-1α的表达较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α和SDF-1α表达时相一致,具有正相关性;不同浓度氯化钴培养星型胶质细胞4小时组:不同浓度HIF-1α、SDF-1α的表达较对照组差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α和SDF-1α表达时相一致,具有正相关性。结论:缺氧可诱导星形胶质细胞HIF-1α、SDF-1α的表达增高,两者间存在明显正相关。     

黄连提取物对角质形成细胞增殖活性的影响

目的探讨黄连提取物对角质形成细胞株HaCaT增殖的影响及其机制。方法将不同浓度的黄连提取物作用于培养的HaCaT细胞,采用台盼蓝染色法检测细胞活力;光镜观察细胞的形态变化;MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响;RT-PCR半定量检测角蛋白K6和原癌基因Bcl-2的mRNA表达水平变化。结果不同浓度(10.46～167.3μg/mL)黄连提取物处理HaCaT细胞24～72h后,细胞增殖受到明显抑制,抑制率最高达75.5%,且呈现一定的浓度依赖性和时间依赖性。黄连提取物可以下调HaCaT细胞内的角蛋白K6和Bcl-2 mRNA转录水平,随着浓度的增高,诱导其表达水平降低的趋势越明显,呈现一定的浓度依赖性。结论黄连提取物可以明显抑制HaCaT细胞的增殖,其机制可能与下调角蛋白K6和原癌基因Bcl-2的表达有关。     

温清饮对HaCaT细胞增殖和分化的影响

目的 观察温清饮对HaCaT细胞增殖和分化的影响.方法 用细胞体外培养技术检测温清饮对Ha-CaT细胞增殖和分化的影响.结果 温清饮对HaCaT细胞的增殖具有抑制作用,最小抑制浓度为5 mg/mL,呈现剂量依赖的关系.温清饮影响HaCaT细胞FLG基因的表达,经温清饮处理48 h后的HaCaT细胞其FLGmRNA的表达水平明显高于对照组.结论 温清饮对HaCaT细胞的增殖具有抑制作用并上调HaCaT细胞FLG mRNA的表达.     

姜黄素对细胞外基质蛋白1影响HaCat细胞肿瘤坏死因子α分泌研究

目的 研究姜黄素时细胞外基质蛋白1(ECM1)影响HaCat细胞肿瘤坏死因子α分泌研究.方法 分空白时照组、ECM1组及不同浓度姜黄素组(10、20、40 mol/L).将转染pEGFP-N2-ECM1的含有ECMl的MCF-7细胞上清液作用于HaCaT细胞,采用ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,与空白...     

HIF-1α基因沉默联合丹参酮ⅡA抑制低氧人肝癌HepG2细胞增殖及其机制

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默联合丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法依据人HIF-1α基因信息筛选RNAi有效靶序列,设计慢病毒载体引物并构建质粒,包装慢病毒表达载体,转染HepG2细胞,沉默低氧条件下HepG2细胞株中HIF-1α基因表达。将细胞分为正常对照组(野生型HepG2细胞)、干扰对照组(HepG2细胞转染NC-shRNA)、干扰组(HepG2细胞转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl_2)加入培养液模拟肿瘤细胞低氧微环境,采用Western Blot检测各组细胞HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,采用CCK-8检测5 mg/L TanⅡA处理对低氧条件下各组细胞增殖活性的影响,采用Western Blot检测TanⅡA处理对各组细胞内p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白表达的影响。结果 (1)HIF-1α-shRNA慢病毒载体包装成功且转染效率高,低氧培养各组细胞24 h后,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中HIF-1α蛋白表达明显降低(P0.01)。(2)TanⅡA能时间依赖性抑制低氧条件下各组细胞增殖,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞增殖明显活性下降(P0.01,P0.05)。(3)低氧培养各组细胞24 h,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白表达水平明显增高(P0.05)。结论 HIF-1α基因沉默可增强TanⅡA对低氧HepG2细胞的增殖抑制作用,其机制可能与p53和p21~( CIP1/WAF1)蛋白水平上调有关。     

姜黄素对人肾癌Caki-2细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的:观察姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法:应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞12、24、36、48、72、96 h,采用MTT法评价姜黄素对Caki-2细胞的生长抑制作用;应用不同浓度的姜黄素分别作用于人肾癌Caki-2细胞36、48、72、96 h,采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒评价姜黄素对Caki-2细胞的凋亡诱导作用;Western blot检测姜黄素对Caki-2细胞H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、ERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,β-actin作为内参蛋白。结果:不同浓度的姜黄素能显著抑制Caki-2细胞生长,36、48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;不同浓度的姜黄素能显著诱导Caki-2细胞凋亡,48、72、96 h呈剂量、时间依赖关系;姜黄素作用后,Caki-2细胞中H-Ras、p-Raf-B、p-MEK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达显著增加,ERK1/2、β-actin蛋白表达与空白组相比无统计学差异。结论:姜黄素对体外培养的人肾癌Caki-2细胞有显著的生长抑制作用,其机制可能与通过抑制H-Ras蛋白表达、直接或间接下调ERK信号通路蛋白表达相关;同时,姜黄素对Caki-2细胞有显著的凋亡诱导作用,其机制可能与上调促凋亡蛋白Bax表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达相关。     

大黄素对低氧环境下SGC7901细胞HIF-1α和E-cadherin的影响

目的:探讨大黄素对低氧环境下胃癌SGC7901细胞增殖及缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。方法:低氧环境培养胃癌SGC7901细胞,应用不同浓度的大黄素干预12,24,36,48 h,设实验组(10,20,40,80,160μmol/L)和对照组(含DMSO的培养基)。MTT实验检测细胞增殖情况;倒置显微镜下动态观察细胞数量及形态变化;免疫组织化学方法检测癌细胞中HIF-1α和E-cadherin的表达。结果:低氧环境下,大黄素可明显抑制胃癌细胞SGC7901的增殖,且呈现浓度和时间依赖性(P﹤0. 05);细胞数目不断减少;细胞形态由原多边形逐渐变成小圆形;细胞与细胞之间的距离增大,连接消失,但细胞表面的突起逐渐变得粗大、延长;免疫组化结果显示HIF-1α的表达随大黄素浓度增加而降低,而E-cadherin的表达则呈上升趋势,两者呈负相关(r=-0. 646,P=0. 023 0. 05)。结论:低氧环境下,大黄素可通过抑制HIF-1α的表达、促进E-cadherin的表达来阻止肿瘤细胞增殖。     

雷公藤内酯醇联合HIF-1α抑制剂对人乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:本研究基于雷公藤内酯醇对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)-血管内皮生长因子(VEGF)-细胞致瘤基因(c-MYC)信号通路的调控作用，探讨其与HIF-1α抑制剂联用对人乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:不同浓度雷公藤内酯醇处理人乳腺癌细胞MCF-7不同时间，CCK-8法检测细胞增殖活力。将MCF-7细胞分为模型对照组、雷公藤内酯醇0.05μmol/L组、HIF-1α抑制剂20μmol/L组和雷公藤内酯醇0.05μmol/L+抑制剂20μmol/L组，CCK-8法检测细胞增殖活力；Transwell小室检测细胞侵袭能力；划痕试验评估细胞迁移能力；qRT-PCR法检测细胞Cmyc、Hif1a和Vegf mRNA表达；Western blot法检测细胞中兔抗基质金属蛋白酶-2抗体(MMP-2)、MMP-9、c-MYC、HIF-1α和VEGF蛋白表达。结果:随着雷公藤内酯醇处理浓度的升高及作用时间的延长，细胞增殖活力逐渐降低，雷公藤内酯醇最佳浓度为50 nmol/L,最佳作用时间为48 h。与模型对照组相比，雷公藤内酯醇组与HIF-1α抑制剂组细胞增殖和侵袭能力均明显下...     

红景天对低氧条件下内皮细胞HIF-1α、HIF-1β和VEGF表达的影响

目的:观察红景天对低氧条件下人脐静脉内皮细胞表达低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、低氧诱导因子-1β(HIF-1β)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:采用XTT比色法检测红景天不同干预时间、浓度对细胞增殖的影响,以确定最佳干预条件;采用SYBRGreenI荧光染料实时定量PCR法检测mRNA表达水平;WesternBlot法检测蛋白表达水平。细胞分3组:正常氧对照组,低氧对照组,红景天干预组。结果:红景天干预的最佳条件为24h、10μg/mL。与正常氧相比,低氧条件下内皮细胞HIF-1α、HIF-1β和VEGF蛋白表达均升高(P<0.01);红景天促进了低氧条件下内皮细胞HIF-1α和VEGF的基因和蛋白表达(P<0.01),而对HIF-1β的基因和蛋白表达没有影响。结论:红景天促进低氧条件下内皮细胞HIF-1α及VEGF的表达可能是红景天抗缺氧和促血管新生作用的机制之一。     

止血化瘀利水方对缺氧诱导ARPE-19细胞VEGF及HIF-1α表达的影响

目的探讨止血化瘀利水方含药血清对CoCl_2诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞)血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白及mRNA表达的影响。方法体外培养ARPE-19细胞,用CoCl_2诱导构建缺氧模型,将RPE细胞分为正常组、缺氧模型组、空白对照组、阳性对照组、中药组,以CCK-8法检测细胞增殖活性,ELISA法检测VEGF蛋白浓度,应用荧光定量PCR检测HIF-1α和VEGF的mRNA表达水平。结果 200μmol/LCoCl_2对RPE细胞吸光度值(OD值)影响最大,设立为缺氧细胞模型浓度。与正常组比较,缺氧模型组细胞增殖活性增强,VEGF蛋白浓度增高,HIF-1α及VEGF的m RNA表达水平上调。与缺氧模型组比较,中药组、阳性对照组在24 h、48 h、72 h细胞VEGF蛋白均含量减少,差异均有统计学意义(中药组:t_(24 h)=4.242,P_(24 h)0.001;t_(48 h)=3.430,P_(48 h)0.001;t72 h=2.501,P72 h=0.006;阳性对照组:t_(24 h)=2.897,P_(24 h)=0.001;t_(48 h)=2.308,P_(48 h)=0.013;t72 h=4.748,P72 h0.001),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。中药组、阳性对照组在48 h细胞HIF-1αmRNA表达下调,与缺氧模型组比较,差异有统计学意义(中药组:t=15.358,P0.001;阳性对照组:t=14.918,P0.001),24 h、72 h差异无统计学意义(P0.05)。中药组、阳性对照组在24 h、48 h细胞VEGF m RNA表达受到抑制,与缺氧模型组比较,差异均有统计学意义(中药组:t_(24 h)=3.084,P_(24 h)=0.003;t_(48 h)=14.837,P_(48 h)0.001;阳性对照组:t_(24 h)=3.437,P_(24 h)=0.001;t_(48 h)=13.554,P_(48 h)0.001)。结论缺氧损伤可诱导ARPE-19细胞增殖,VEGF蛋白表达量增加,HIF-1α和VEGF mRNA表达水平上调;止血化瘀利水方对缺氧RPE细胞的增殖及VEGF蛋白、HIF-1α和VEGF mRNA的表达有抑制作用。与对照组复方血栓通胶囊比较,止血化瘀利水方对RPE细胞增殖的抑制作用更持久,在24 h、48 h控制VEGF蛋白表达水平更接近正常组;而二者在抑制VEGF和HIF-1αmRNA表达方面作用相似。     

黄芩苷对胃癌SGC-7901细胞TLR8、HIF-1α、PDGFβ和pten表达的影响

目的:探讨不同浓度的黄芩苷对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用,以及对pten和survivin基因的影响。方法:以不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol/L)的黄芩苷处理胃癌SGC-7901细胞后,采用MTT法测定细胞活力;80、120、160μmol/L的黄芩苷处理胃癌SGC-7901细胞后,采用RT-q PCR法检测Toll样受体8(TLR8)、低氧诱导因子(HIF-1α)、血小板衍生生长因子β(PDGF-β)和第10号染色体上磷酸酶和张力白同源缺失性基因(pten)的表达,Western-blot法分别检测胃癌细胞TLR8、HIF-1α、PDGF-β和pten蛋白的表达。结果:不同浓度的黄芩苷均能抑制细胞增殖,RT-q PCR法检测显示TLR8、HIF-1α、PDGF-β基因表达下调,pten基因表达上调。结论:不同浓度的黄芩苷可抑制胃癌细胞增殖,并能上调pten和下调TLR8、HIF-1α、PDGF-βm RNA及蛋白的表达。     

姜黄素通过调控微管系统干扰HepG2细胞周期研究

目的 研究姜黄素对人肝癌HcpG2细胞周期的影响及微管系统在其中的作用.方法 MTT法检测姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析姜黄素对HepG2细胞周期分布的影响;激光共聚焦显微镜观察姜黄素对HepG2细胞微管结构变化的影响;Westem blotting检测姜黄素对微管蛋白α-tubulin表达的影响;在离体条件下,观察姜黄素对微管蛋白聚合和解聚活性的影响.结果 姜黄素对HepG2细胞增殖具有抑制作用且与时间和剂量相关;随着姜黄素浓度的升高,HepG2细胞阻滞于G2/M期的比例也逐渐增加;激光共聚焦显微镜观察可见姜黄素明显破坏细胞微管结构,改变细胞微管蛋白聚合状态的发生;Western blotting检测发现细胞内α-tubulin蛋白表达的减弱与试药浓度相关.姜黄素还可影响微管蛋白聚合和解聚活性.结论 姜黄素通过破坏HepG2细胞的微管结构及下调微管蛋白α-tubulin的表达,将HepG2细胞阻滞于G2/M期,从而抑制肝癌HepG2细胞的生长.     

清热凉血汤含药血清对HaCaT细胞PKM2介导的糖酵解和细胞增殖、凋亡的调节作用

目的 探讨清热凉血汤（QRLXD）含药血清基于M2型丙酮酸激酶（PKM2）及其下游缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）介导糖酵解的信号通路,对活化的HaCaT细胞增殖、凋亡和炎症因子分泌的影响。方法 制备QRLXD含药血清与空白血清,构建肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导HaCaT细胞银屑病模型,使用compound 3k（C3K）特异性抑制HaCaT细胞PKM2通路。原代培养HaCaT细胞,使用CCK-8法检测不同浓度（1、5、10、20、50、100μg/mL）QRLXD的含药血清对HaCaT细胞增殖的影响,并由此选择合适剂量用于后续实验。将HaCaT细胞分为空白对照（C）组、模型（M）组、C3K组、QRLXD低剂量（QRLXD-L）组、QRLXD中剂量（QRLXD-M）组、QRLXD高剂量（QRLXD-H）组,流式细胞术检测各组细胞的凋亡水平,蛋白质印迹法（Western Blot）检测PKM2、HIF-1α、GLUT1蛋白表达,实时荧光定量 PCR （RT-PCR）检测细胞PKM2、HIF-1α、GLUT1 mRNA 表达, 发光法检测细胞的细胞内丙酮酸激酶（PK）活性、葡萄糖含量、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）水平及分泌乳酸水平,酶联免疫吸附测定法检测细胞白细胞介素-17（IL-17）和TNF-α分泌水平。结果 根据CCK-8结果,选择1、5、10μg/mL QRLXD含药血清设置为低、中、高剂量组,并干预24 h进行后续实验。与C组比较,M组细胞活力比值增加、凋亡率减少（P<0.01）;PKM2、HIF-1α、GLUT1蛋白及mRNA表达升高（P<0.05,P<0.01）;糖酵解相关指标葡萄糖含量、PK活性、乳酸及ATP含量均显著升高（P<0.01）;炎症因子IL-17和TNF-α也明显增加（P<0.01）。与M组比较,C3K组及QRLXD-L、M、H组均能抑制细胞增殖且使细胞凋亡率增加（P<0.01）,下调细胞中PKM2、HIF-1α、GLUT1蛋白及mRNA表达（P<0.05,P<0.01）,细胞内PK活性、葡萄糖含量、ATP水平及培养液中乳酸水平均降低（P<0.05,P<0.01）,细胞分泌的炎症因子IL-17、TNF-α显著减少（P<0.05,P<0.01）,且含药血清的作用呈现剂量依赖性关系。与C3K组比较,各含药血清组抑制PKM2通道的作用不及C3K,但是其促进细胞凋亡的作用更强。结论 QRLXD含药血清改善活化的HaCaT细胞糖酵解及过度增殖水平,其机制与调控PKM2及其下游HIF-1α、GLUT1信号通路,进而抑制丙酮酸有关。     

siRNA沉默HIF-1α在缺氧状态下对鼻咽癌细胞VEGF表达的影响

目的观察体外乏氧培养条件下鼻咽癌细胞系CNE-Ⅱ中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨HIF-1α在低氧条件下对鼻咽癌血管生成的调控作用。方法CoCI2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,RT-PCR、免疫印迹法(Western blot)分别检测缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达。采用化学合成小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰技术(RNAi)转染CNE-Ⅱ细胞。观察转染后HIF-1α沉默效果。结果低氧条件下,CNE-Ⅱ细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高,而VEGF mRNA和蛋白的表达均显著升高。siRNA转染CNE-Ⅱ后能够显著下调HIF-1α的基因表达,同时VEGF基因的表达也受到明显抑制。结论缺氧促使CNE-Ⅱ细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高,并通过转录激活VEGF的机制调控鼻咽癌血管生成。     

大鼠预缺氧模型的制备

目的 制备简单易行的大鼠预缺氧模型,并观察其对脑组织低氧诱导因子-1（HIF-1）α蛋白及mRNA表达的影响.方法 雄性SD大鼠12只,随机分为缺氧组和对照组.缺氧组在固定体积的容器中缓慢输入混合气体,调节氧气和氮气的流入速度,使测氧仪监测到的O2浓度始终保持在12%,然后放入大鼠,每天4 h;对照组大鼠在相同容器中通入空气,每天4 h.7 d后进行免疫组化和RT-PCR测定脑组织HIF-1α蛋白及mRNA表达.结果 缺氧组较对照组脑组织中HIF-1α蛋白和mRNA表达增多（P〈0.01）.结论 此模型简单易行,达到预缺氧的要求.     

低氧诱导因子介导胰岛素样生长因子促骨髓瘤增殖作用

目的:探讨胰岛素样生长因子(IGF-1)对多发性骨髓瘤细胞的作用是否与低氧诱导因子(HIF-1)有关,及其可能的机理.方法:检测IGF-1对多发性骨髓瘤细胞株KMM-1及U266增殖的影响,用免疫印迹法检测IGF-1对骨髓瘤细胞缺氧诱导因子HIF-1α表达的作用、并观察HIF-1拮抗剂Echinomycin对IGF-1作用下骨髓瘤细胞增殖的影响.此外,我们还用免疫印迹法检测IGF-1对HIF-1信号通路上游AKT的作用,并观察PI3-K/AKT的拮抗剂LY294002对IGF-1刺激下骨髓瘤细胞HIF-1α表达及骨髓瘤细胞增殖的影响,及LY294002和HIF-1拮抗剂Echinomycin对骨髓瘤细胞增殖的影响.结果:IGF-1上调骨髓瘤细胞HIF-1α的表达,从而促进骨髓瘤细胞增殖,用Echinomycin阻断HIF-1明显减弱IGF-1的促增殖作用;PI3-K/AKT通路是介导IGF-1上调HIF-1α表达的重要环节,阻断Pi3-K/AKT通路可逆转IGF-1对HIF-1α表达的作用.无论是阻断Pi3-K/AKT通路还是HIF-1都使IGF-1刺激骨髓瘤细胞增殖的作用显著减小.结论:IGF-1通过PI3-K/AKT通路上调骨髓瘤细胞HIF-1α的表达,从而促进骨髓瘤细胞的增殖.我们的研究提示,HIF-1在骨髓瘤的病理中起重要的作用,可能成为治疗骨髓瘤的新靶点之一.     

麻黄碱对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的研究麻黄碱对TNF-α诱导的永生化角质形成细胞HaCaT细胞的增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法倒置显微镜下观察细胞生长情况,MTT法检测TNF-α诱导下HaCaT细胞增殖情况、800μg/ml麻黄碱对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖的影响。在流式细胞仪上使用Annexin-V/PI和PI单标试剂盒分别检测HaCaT细胞的凋亡及细胞周期。结果 25ng/ml的TNF-α能明显促进HaCaT细胞的增殖。800μg/ml麻黄碱作用于TNF-α诱导增殖下的HaCaT细胞24 h后,悬浮细胞数目变多、贴壁细胞分布较前稀疏,细胞内空洞变多。MTT显示800μg/ml麻黄碱能够明显抑制TNF-α诱导的细胞增殖,与空白对照组比价有显著性差异(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示:麻黄碱使TNF-α诱导下的HaCaT细胞G1期明显延长,但对细胞凋亡未产生影响。结论一定浓度的麻黄碱可以抑制TNF-α对HaCaT细胞的促增殖作用,并使诱导后的细胞停滞在G1期。