Smac类似物LCL161对肝癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨Smac类似物LCL161对肝癌HepG2,SMMC7721细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法：MTT法检测LCL161对肝癌细胞增殖的影响,克隆形成实验观察低浓度LCL161对肝癌细胞增殖的影响,PI染色流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位的变化,Western印迹检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP],磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)、细胞凋亡抑制蛋白1(cellular inhibitor of apoptosis protein 1,cIAP1)、X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)的蛋白表达。结果：LCL161在1~16 μmol/L浓度范围内对肝癌HepG2,SMMC7721细胞具有显著的增殖抑制作用(P<0.01),48 h的IC50值分别为4.3,4.9 μmol/L。低浓度的LCL161能明显抑制肝癌细胞克隆的形成。LCL161可诱导肝癌细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),2,4,8 μmol/L 的LCL161作用于HepG2细胞48 h的凋亡率分别为(15.2±2.8)%,(28.7±3.0)%,(34.6±2.3)%,对照组的细胞凋亡率为(1.5±0.8)%;作用于SMMC7721细胞的凋亡率分别为(12.2±2.4)%,(22.4±2.7)%,(30.2±2.4)%,对照组的细胞凋亡率为(1.8±0.6)%。JC-1染色结果表明,LCL161作用后HepG2和SMMC7721细胞的线粒体膜电位降低。LCL161处理肝癌细胞后促进PARP的剪切,下调p-Akt的蛋白表达以及降解cIAP1。结论：LCL161对肝癌细胞HepG2,SMMC7721具有显著的增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与降低线粒体膜电位、下调p-Akt的蛋白表达以及降解cIAP1相关。     

姜黄素对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制和诱导凋亡的初步研究

目的:观察姜黄素对人肝癌细胞SM MC - 7721生长抑制和诱导凋亡的影响.方法:以不同浓度(10μmol/L、30μmoL/L、90μmol/L)的姜黄素作用于体外培养的SMMC - 7721细胞48h,MTT法检测姜黄素对细胞的生长抑制率;基于AnnexinV - FITC/PI双染的流式细胞方法检测不同浓度姜黄...     

姜黄素氧化损伤线粒体诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的探讨姜黄素诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的机制。方法 80μmol/L姜黄素作用于肝癌细胞后,用流式细胞仪检测细胞过氧化氢(H2O2)、线粒体膜电位和细胞亚二倍体凋亡峰情况;比较姜黄素组和预处理组(姜黄素联合过氧化氢酶)线粒体膜电位和细胞亚二倍体凋亡峰变化情况。结果 80μmol/L姜黄素作用于肝癌细胞1、2、3h后检测H2O2分别为(13.49±3.23)%、(52.43±6.04)%、(48.21±7.18)%,以2h时间点最高。细胞线粒体膜电位在6、12h分别为(59.68±4.47)%、(29.83±6.22)%,差异有统计学意义(P<0.01)。细胞亚二倍体凋亡峰在24、48h分别为(26.53±4.28)%、(39.50±6.14)%,差异有统计学意义(P<0.01)。过氧化氢酶均能抑制上述2项指标改变,差异有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素作用肝癌细胞后产生H2O2,H2O2损伤细胞线粒体,呈时间依赖性诱导肝癌细胞凋亡。     

新型姜黄素纳米粒对Lewis肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨一种新型的姜黄素纳米粒(curcumin nanoparticles,Cur-NPs)对Lewis肺癌细胞LLC增殖与凋亡的影响。方法游离姜黄素(curcumin,Cur)和Cur-NPs分别作用于LLC细胞24 h,MTT检测其对LLC细胞的增殖抑制作用。20μmol/L的药物作用于细胞24 h后,流式细胞术检测Cur-NPs对细胞周期、细胞凋亡、细胞内活性氧、细胞内钙离子浓度、细胞线粒体膜电位的影响,并与Cur进行对照。结果 Cur-NPs可以明显增强Cur对LLC细胞的增殖抑制,IC50从34.91μmol/L降为10.65μmol/L(P<0.05)。Cur-NPs明显提高了Cur诱导LLC细胞凋亡(P<0.05)、抑制细胞周期于S期(P<0.05)、升高细胞内钙离子浓度(P<0.05)、升高细胞活性氧浓度(P<0.05)、降低细胞线粒体膜电位(P<0.05)的能力。结论新型姜黄素纳米粒可明显提高游离姜黄素对LLC细胞的体外增殖抑制作用,可能与其促进细胞凋亡有关。     

羟基喜树碱通过线粒体途径诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的观察

目的:研究羟基喜树碱是否可通过线粒体途径诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡. 方法: 将不同浓度的羟基喜树碱作用于肝癌细胞SMMC-7721,用MTT法检测细胞增殖,光镜观察细胞形态;用荧光染料MitocaptureTM检测线粒体跨膜电位、用Western blot法检测细胞色素C从线粒体的释放;用Annexin Ⅴ-FITC,hoechst法及电镜检测细胞的凋亡状况. 结果:羟基喜树碱对肝癌细胞SMMC-7721的增殖有明显的抑制作用,IC50约是80 mg/L. 当用80 mg/L羟基喜树碱作用不同时间后:线粒体膜跨电位下降并伴随有细胞色素C从线粒体至细胞质的释放;细胞膜的磷脂酰丝氨酸外翻;细胞核染色质固缩,呈致密浓染的凋亡状态. 结论:羟基喜树碱通过线粒体途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一.     

3-溴丙酮酸增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用

目的探讨3-溴丙酮酸（3-BP）增强肝癌细胞对顺铂敏感性的作用及其可能机制。方法MTT法检测3-BP、顺铂对HepG2、
SMMC7721细胞的增殖抑制作用。选择低于半数抑制浓度（IC50）的100 μmol/L的3-BP和8 μmol/L的顺铂单独或联合处理细
胞,PI 单染流式细胞术检测细胞凋亡,caspase 3 活性检测试剂盒测定caspase-3 的活性变化,ATP检测试剂盒测定细胞内ATP
水平,Western blot 检测XIAP、PARP蛋白的表达。结果3-BP 在50~400 μmol/L 浓度范围内对HepG2、SMMC7721 细胞具有
明显的增殖抑制作用（P<0.01）,作用48 h 的IC50分别为238.9±13.9 μmol/L、278.7±11.7 μmol/L;顺铂在2~32 μmol/L 浓度范围
内对HepG2、SMMC7721细胞具有明显的增殖抑制作用（P<0.01）,作用48 h的IC50分别为16.4±0.9 μmol/L、20.9±1.8 μmol/L。
100 μmol/L 3-BP与8 μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h 的增殖抑制率分别为（60.6±2.2）%、（56.8±2.3）%,明
显高于对照组和单独用药组（P<0.01）。100 μmol/L 3-BP与8 μmol/L顺铂联合作用于HepG2、SMMC7721细胞48 h 的凋亡率
分别为（51.1±4.3）%、（46.5±3.9）%,较单用3-BP、顺铂的凋亡率明显提高（P<0.01）。结论3-BP 能增强肝癌细胞HepG2、
SMMC7721对顺铂诱导的凋亡的敏感性,其机制可能是通过引起细胞内ATP缺乏、下调XIAP蛋白的表达以及增加caspase-3的
活性。     

薯蓣皂苷对肝癌细胞Bel-7402和正常人肝细胞LO2增殖和凋亡的影响

目的研究薯蓣皂苷(dioscin)对肝癌细胞Bel-7402及正常人肝细胞LO2增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法将0.5~16μmol/L薯蓣皂苷干预Bel-7402肝癌细胞和LO2肝细胞24 h,使用MTT法检测细胞增殖抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化,JC-1染色法检测线粒体膜电位水平变化;Western blot蛋白质印迹法观察薯蓣皂苷对两种细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果与阴性对照组比较,薯蓣皂苷各剂量组可显著抑制Bel-7402肝癌细胞和LO2肝细胞增殖,并呈剂量依赖性,其作用于Bel-7402肝癌细胞的IC50为2.04μmol/L,作用于LO2肝细胞的IC50为2.76μmol/L;与阴性对照组比较,1μmol/L、2μmol/L薯蓣皂苷组Bel-7402肝癌细胞及LO2肝细胞分布密度降低,细胞出现变圆脱落死亡,细胞边界模糊,并诱导细胞发生凋亡。JC-1染色结果显示,薯蓣皂苷作用于两种细胞后线粒体膜电位均显著降低(P<0.01)。Western blot蛋白质印迹法检测结果显示,薯蓣皂苷均可抑制两种细胞中Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论薯蓣皂苷能够抑制Bel-7402肝癌细胞和LO2肝细胞的体外增殖,其机制可能是降低线粒体膜电位,抑制Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白的表达,诱导细胞发生凋亡。提示薯蓣皂苷在发挥抗肝癌作用的同时亦对肝细胞具有损伤作用。     

姜黄素对氧化型低密度脂蛋白诱导的大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达、细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1表达、增殖和凋亡的影响。方法分离SD大鼠血管平滑肌细胞进行培养传代,采用不同浓度的姜黄素作用于氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）诱导的大鼠平滑肌细胞,根据作用药物浓度进行分组,对照组（不加任何药物）,Ox-LDL 100μg/mL组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素20μmol/L组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素40μmol/L组,Ox-LDL 100μg/mL＋姜黄素80μmol/L组。分析姜黄素对大鼠血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达、对细胞的增殖的影响。按照加入药物浓度进行分组,对照组（不加任何药物）,姜黄素50μmol/L组,姜黄素100μmol/L组,姜黄素120μmol/L组,分析姜黄素对细胞凋亡的影响。结果 Ox-LDL 100μg/mL组MCP-1分泌[（812.6±78.7）ng/L]及MCP-1 mRNA表达水平[（1.18±0.11）]较对照组[（91.3±6.1）ng/L,（0.16±0.04）]显著升高,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。姜黄素对OxLDL诱导的大鼠血管平滑肌细胞MCP-1分泌及MCP-1 mRNA表达、细胞增殖具有显著的抑制作用,对细胞凋亡有诱导作用,并且随着姜黄素浓度的增加,作用越明显（P〈0.01）。结论姜黄素能够抑制Ox-LDL诱导的大鼠细胞平滑肌细胞MCP-1表达以及细胞增殖,诱导大鼠细胞平滑肌细胞凋亡。     

姜黄素对耐格列卫人慢性粒细胞白血病细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨姜黄素对格列卫耐药人慢性粒细胞白血病细胞株K562/Glv的促凋亡作用及其机制.方法 采用cck-8的方法检测姜黄素对K562/Glv细胞的剂量-效应曲线及时间-效应曲线,台盼蓝染色观察细胞存活率;流式细胞仪检测姜黄素作用K562/Glv细胞的周期、凋亡变化、线粒体膜电位(Ψm △);比色法检测Caspase-3酶活性变化.结果姜黄素对K562/Glv细胞的生长抑制作用呈剂量依赖性,1.0 μmol/L即有明显作用,5.0 μmol/L增殖抑制率为(45.60±2.23)%,10.0 μmol/L为(77.95±3.84)%;姜黄素作用于K562/Glv细胞,细胞周期阻滞于G2/M 期,线粒体膜电位Ψm △在1 h时显著升高,12 h时恢复至正常水平,24 h时下降至其79%,Caspase-3酶活性增加.结论姜黄素通过使线粒体膜电位Ψm △异常,并激活Caspase-3,诱导耐格列卫人慢性粒细胞白血病细胞K562/Glv的凋亡.     

干扰素-α对肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究干扰素-α对人肝癌SMMC7721细胞的增殖及迁移的抑制作用,探讨其抗肿瘤作用的机制。方法:常规培养的人肝癌SMMC7721细胞,加入干扰素-α孵育24 h后,以MTT法检测干扰素-α对肿瘤细胞增殖的影响;Boyden小室法检测肝癌细胞侵袭能力的变化,通过Annexin V-FITC检测干扰素-α诱导SMMC7721细胞组的凋亡情况。结果:干扰素-α可以明显抑制体外SMMC7721细胞的增殖,诱导细胞凋亡,导致Boyden小室穿膜的肿瘤细胞数明显下降。结论:干扰素-α可以直接抑制体外肝癌细胞SMMC7721的增殖和迁移并诱导细胞凋亡。     

Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

联用维甲酸及氟脲嘧啶脱氧核苷治疗肝癌的实验研究

【目的】比较全反式维甲酸(ATRA)和氟脲嘧啶脱氧核苷(FUDR)单独作用或联合作用肝癌细胞的效应，为临床治疗肝癌的用药方案提供理论依据。【方法】以ATRA和FUDR分别及联合作用于培养的肝癌SMMC7721细胞，以Hoechst33342／PI双荧光活染技术、琼脂糖凝胶电泳，流式细胞光度术(FCM)检测细胞凋亡。【结果】单独作用时，ATRA诱导的凋亡细胞数比FUDR组少，联用FUDR和ATRA时，引起的凋亡细胞数增加，染成红色的细胞数也增加，FCM检测结果与染色观察结果相符。【结论】多种方法检测结果表明，ATRA和FudR对肝癌SMMC7721细胞的作用以诱导细胞凋亡的形式为主，可能是其抗癌的重要机制之一，且联合用药比单独用药的药效强，具协同增效作用，为肝癌的临床治疗提供了新思路。     

NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721增殖的影响

目的研究NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721生长增殖的影响。方法常规培养SMMC7721细胞,采用SN50（36μmol/L）阻断NF-κB信号通路,Western blot检测核内p65蛋白水平,MTT比色法检测细胞生长增殖,计算肿瘤细胞生长抑制率,PI染色、流式细胞仪分析细胞周期与凋亡,观察NF-κB信号通路阻断对肝癌细胞SMMC7721细胞周期及凋亡的影响。结果肝细胞癌SMMC7721细胞核内存在较高水平的p65蛋白。经SN50阻断后,MTT测定显示细胞的增殖受到明显抑制,并随时间的延长而愈渐明显,24、48、72h后细胞增殖抑制率分别为22.77%、33.33%和38.89%,与阻断前相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。流式细胞仪检测发现实验组G1期细胞比例高于对照组差异有统计学意义（69.5% vs 56.5%,P〈0.05）,S期细胞比例明显降低,与阻断前相比差异有统计学意义（11.1% vs 28.6%,P〈0.05）,而细胞凋亡率在实验组为38.3%,对照组仅为23.2%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论NF-κB信号通路阻断诱导细胞周期于G1期停滞和细胞凋亡,从而抑制了SMMC7721细胞生长与增殖,提示NF-κB信号通路组成性激活参与了肝细胞癌的生长增殖与发展,以NF-κB信号通路作为治疗的靶点可能给肝细胞癌带来新的治疗选择。     

尼美舒利对肝癌SMMC-7721细胞增殖、凋亡的干预作用

目的 :研究尼美舒利对肝癌SMMC 772 1细胞增殖、凋亡的干预作用。方法 :研究对象为SMMC 772 1肝癌细胞系 ,细胞增殖采用MTT比色法检测 ,细胞凋亡采用电镜观察、流式细胞仪和TUNEL法检测。结果 :尼美舒利显著抑制体外培养的SMMC 772 1细胞增殖 ,随着药物剂量的增加和时间的延长 ,SMMC 772 1的生长、增殖明显抑制 ,呈剂量和时间依赖性。流式细胞术、TUNEL法检测示 ,使用不同浓度尼美舒利作用于SMMC 772 1细胞 72h后 ,可诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,随着药物浓度增加 ,凋亡率和凋亡指数均显著增加 ,差异有显著性。结论 :选择性COX 2抑制剂尼美舒利可以显著抑制SMMC 772 1细胞增殖 ,且呈明显的时间、剂量依赖关系 ,同时诱导SMMC 772 1细胞凋亡 ,且具有剂量依赖性     

亚砷酸对人肝癌细胞凋亡及Caspase-3活性的影响

目的探讨亚砷酸对人肝癌细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3活性的影响。方法采用细胞培养技术,以肝癌细胞系SMMC7721为靶细胞,以不同浓度的药物处理细胞72h后,利用WST-8法测定亚砷酸对细胞增殖的影响;利用荧光染料Hoechst33258染色,荧光显微镜观察细胞核碎片;以流式细胞仪分析细胞周期的变化;采用CaspasebE色法检测Caspase-3活性。结果亚砷酸（10umol／L）对SMMC7721细胞有明显抑制作用,可诱导SMMC7721细胞凋亡,并能增强Caspase-3基因的活性。结论亚砷酸能够诱导SMMC7721细胞凋亡,其机制与Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对人肝癌细胞株SMMC7721增殖及DAPK mRNA表达的影响

目的:探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC7721细胞增殖以及对死亡相关蛋白激酶(Death-associated protein kinase,DAPK)基因mRNA表达水平的影响。方法:用不同浓度(0.5,5.0,50.0μmol/L)的5-Aza-CdR对SMMC7721细胞处理后,采用MTT法检测细胞的增殖情况;半定量RT-PCR法检测各组细胞DAPK mRNA的表达水平。结果:5-Aza-CdR对肝癌细胞株SMMC7721生长有明显抑制作用,并且存在剂量依赖性反应关系(F=242.40,P<0.01);半定量RT-PCR结果显示,MMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平很弱,采用不同浓度5-Aza-CdR处理SMMC7721细胞72h后,SMMC7721细胞中DAPK mRNA表达水平呈剂量依赖性逐渐升高(F=360.41,P<0.01)。结论:5-Aza-CdR可诱导MMC7721细胞DAPK mRNA表达,并抑制SMMC7721细胞增殖。     

siRNA介导的新趋化因子VCC-1沉默对人SMMC7721肝癌细胞生长的影响

 目的 探讨siRNA靶向抑制VCC-1表达对人肝癌细胞株SMMC27721生长的影响。方法 采用脂质体法将siRNA质粒导入SMMC7721细胞,建立VEGF相关的趋化因子1（(VEGF correlated chemokine 1,VCC-1）)VCC-1基因表达沉默的肝癌细胞系,用Western blot检测细胞中VCC-1的表达水平,用MTT法、软琼脂克隆形成实验等研究siRNA靶向抑制VCC-1表达对SMMC7721细胞生长的影响。结果 Western blot 结果显示RNA干扰组（shVCC1-1组）细胞VCC-1蛋白表达水平明显低于对照组（P<0.01）; ,MTT法结果显示shVCC1-1组细胞增殖速度、克隆形成率均低于对照组（P<0.05）。结论 siRNA靶向抑制 VCC-1表达可以抑制人SMMC7721肝癌细胞增殖能力及克隆形成能力。     

反义端粒酶RNA抑制肝癌细胞生长的机制

目的：观察反义端粒酶RNA对SMMC－7721肝癌细胞系的作用,探讨抗端粒端治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法：采用脂质体介导的方式将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212/hTP转入SMMC7721细胞中,经潮霉素筛选,克隆细胞株扩增鉴定后,采用TRAP－PCR－ELISA,FCM及电镜检测反义端粒酶RNA对转染细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响;同时进行裸鼠荷瘤生长实验观察。结果：TRAP－PCR－ELISA法检测细胞端粒酶活性的结果为：实验组吸光度值为0．980,对照组吸光度值为2．861;FCM检测细胞凋亡结果为：实验组13．8％,对照组未见有凋亡峰形成,电镜观察发现转染细胞表现出典型的凋亡细胞形态。裸鼠移植瘤生长实验发现,转染细胞生长明显受到抑制作用,说明反义端粒酶RNA显抑制SMMC7721细胞的端粒酶活性,并且对其有显的促凋亡作用。结论：反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性,同时显促进癌细胞凋亡。     

核酶对肝癌SMMC-7721细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的:观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine介导,将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS212Rz及空载质粒pBBS212转染肝癌SMMC-7721细胞,采用TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果:重组质粒pBBS212Rz转染的肝癌SMMC-7721细胞的端粒酶活性明显下降,细胞生长速度明显变慢,凋亡加速。结论:端粒酶核酶对肝癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用,可望成为肝癌基因治疗的方法。