lncRNA在肝细胞癌中的研究现状

lncRNA是长度大于200 bp的RNA分子,不翻译成蛋白质,通过多种机制影响蛋白质稳定性 和完整性,进而影响机体的健康,现研究已证实lncRNA和恶性肿瘤的关系密切。肝癌是最常见的消化 道恶性肿瘤之一,肝细胞癌是最常见的肝癌组织学类型,肝细胞癌相关lncRNA的异常表达已被证实,如 HOTAIR、HULC、MALAT-1、MDIG、ZEB1-AS1、PVT-1、UC200mbe.2、UCA1、WRAP53、MVIH、lncRNA-LET、TP73-AS1等在肝细胞癌中的表达是上调的,而H19、MEG3、GAS5、Dreh、UC.134、ATB、 lncRNA-LET等的表达是下调的,这些异常表达的lncRNA与肝细胞癌的发生、转移、预后和诊断密切相关。 故本文将对lncRNA在肝细胞癌中的研究现状进行综述。     

长链非编码RNA MLK7-AS1在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

背景与目的:长链非编码RNA(lncRNA)MLK7-AS1是一种新发现的与多种肿瘤发生发展密切相关的lncRNA,但其在结肠癌中的表达及其作用尚未见报道。因此,本研究旨在探讨lncRNA MLK7-AS1在结肠癌中的表达以及其对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法:用qRT-PCR检测lncRNA MLK7-AS1在21对结肠癌组织与相对应的癌旁组织手术标本以及在不同结肠癌细胞系(SW480、HCT116、SW620、DLD1、HT29、LOVO)与正常结肠上皮细胞(NCM460)中的表达。将结肠癌细胞转染lncRNA MLK7-AS1过表达质粒后,分别用MTS、平板克隆试验、流式细胞术、Western blot及qRT-PCR分别检测细胞活力、克隆形成能力、细胞周期以及细胞周期相关蛋白表达水平的变化。结果:lncRNA MLK7-AS1在结肠癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织;在各结肠癌细胞株中表达水平明显高于正常结肠上皮细胞(均P<0.05)。将lncRNA MLK7-AS1表达量相对较低的SW480与HCT116转染lncRNA MLK7-AS1过表达质粒后,两种细胞的细胞活力和克隆形成能力均显著增强(均P<0.05);G1期细胞比例明显减少,S期细胞比例明显增加(均P<0.05);细胞周期相关蛋白cyclin D1和CDK6的表达水平均明显上升(均P<0.05)。结论:lncRNA MLK7-AS1在结肠癌中高表达,其高表达可以促进结肠癌细胞增殖,其机制可能与上调细胞周期相关蛋白cyclin D1及CDK6表达有关。     

长链非编码RNA GAS8-AS1与微小RNA 135b在肝细胞癌中的表达及临床意义

背景和目的：大量研究表明,长链非编码RNA (lncRNA)与微小RNA (miRNA)及其靶基因之间内源性竞争的调控模式与恶性肿瘤的发生发展密切相关。笔者团队前期通过软件预测发现,lncRNA GAS8-AS1和miR-135b之间存在结合位点,但两者在肝细胞癌（HCC）中是否存在竞争关系及其作用尚不清楚。因此,本研究探讨lncRNA GAS8-AS1和miR-135b在HCC组织中的表达及其临床意义。方法：收集2017年2月—2019年2月在青海大学附属医院行手术切除的110例HCC患者的癌组织及癌旁组织标本,通过qRT-PCR检测lncRNA GAS8-AS1和miR-135b的表达,分析两者与患者临床病理特征及预后的关系。结果：lncRNA GAS8-AS1在HCC组织中的表达明显低于癌旁组织,而miR-135b在HCC组织中的表达明显高于癌旁组织（均P<0.05）。两者的表达水平均与HCC患者的Edmondson分期、TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况有关（均P<0.05）。lncRNA GAS8-AS1低表达患者与miR-135b高表达患者的3年总生存率分别明...     

长链非编码RNA CBR3-AS1在胆管癌中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA CBR3-AS1(lncRNA CBR3-AS1)在胆管癌(CCA)中表达状态及其临床意义。方法:用qRT-PCR检测lncRNA CBR3-AS1在CCA组织与癌旁组织以及CCA细胞与正常胆管上皮细胞中的表达,分析lncRNA CBR3-AS1表达与CCA患者临床病理参数及生存率的关系。将胆管癌细胞分别转染lncRNA CBR3-AS1过表达质粒(过表达组)、阴性对照质粒(对照组)及lncRNA CBR3-AS1沉默序列(沉默组),用MTT实验与Transwell实验检测各组细胞的增殖与侵袭能力。结果:lncRNA CBR3-AS1的表达在胆管癌组织中明显高于癌旁组织,在胆管癌细胞系中明显高于正常胆管上皮细胞(均P0.01)。lncRNA CBR3-AS1表达与CCA患者淋巴结转移、TNM分期和术后复发明显有关(P0.05)。lncRNA CBR3-AS1高表达患者总生存率明显低于lncRNA CBR3-AS1低表达患者(P=0.004)。lncRNA CBR3-AS1表达(P=0.020)与TNM分期(P=0.014)是影响CCA患者总生存率的独立危险因素。与对照组CCA细胞比较,过表达组CCA细胞增殖与侵袭能力明显增高,沉默组CCA细胞增殖与侵袭能力明显降低(均P0.05)。结论:lncRNA CBR3-AS1在胆管癌中表达升高,升高的lncRNA CBR3-AS1与CCA的恶性临床病理特征及患者的不良预后密切相关。     

长链非编码RNA作为竞争性内源RNA及其靶向技术在胰腺癌中的研究进展

目的 总结长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)作为竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)及其靶向技术在胰腺癌中的最新研究，为lncRNA靶向干预或作为胰腺癌早期诊断标志物提供新思路。方法 检索国内外有关lncRNA作为ceRNA及其靶向技术在胰腺癌中的相关研究的文献并予以综述。结果 目前越来越多的证据表明，在肿瘤等病理状态下，细胞内lncRNA的丰度可引发ceRNA串扰，lncRNA通过miRNA应答元件与miRNA不完全碱基互补结合发挥类似于“海绵”的作用而吸附miRNA，从而改变miRNA的活性和有效性，同时调节下游靶基因的表达。目前已有大量研究鉴定了lncRNA介导的ceRNA调控网络即lncRNA/miRNA/mRNA轴，通过多种细胞功能在胰腺癌的发生和进展中发挥促癌或抑癌作用。此外，较多靶向lncRNA的技术如小干扰RNA、反义寡核苷酸、成簇规律间隔的短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR）...     

甲状腺乳头状癌细胞中长链非编码RNA FoxP4-AS1的表达及其生物学功能

背景与目的 笔者前期研究发现,长链非编码RNA FoxP4-AS1（lncRNA FoxP4-AS1）在甲状腺乳头状癌（PTC）组织中异常表达,其低表达是PTC区域淋巴结转移的独立危险因素,但其功能及作用机制尚不清楚。因此,本研究探讨lncRNA FoxP4-AS1在PTC细胞中的表达,初步分析其对PTC细胞生物学行为的影响。方法 用qRT-PCR检测PTC细胞系（TPC-1、K1细胞）和正常甲状腺滤泡上皮细胞（Nthy-ori3-1细胞）中lncRNA FoxP4-AS1的表达;将TPC-1、K1细胞分别转染FoxP4-AS1过表达慢病毒载体和空载病毒载体（阴性对照）后,并分别用CCK-8实验、克隆形成实验、EdU、Transwell实验、流式细胞术分析细胞生物学功能的变化;通过GEPIA数据库和LncTar网站预测FoxP4-AS1的靶基因,并用Western blot进行验证。用以上转染后的细胞构建小鼠皮下移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况,免疫组化检测瘤组织Ki-67的表达。通过KEGG数据库初步分析FoxP4-AS1可能影响的信号通路。结果 qRT-PCR结果显示,与正常甲状腺滤泡上皮细胞比较,lncRNA FoxP4-AS1在两种PTC细胞中的表达水平均明显降低（均P<0.05）。细胞功能实验显示,转染FoxP4-AS1过表达慢病毒载体的TPC-1、K1细胞增殖活力明显减弱、侵袭和迁移能力均较阴性对照组细胞明显降低,且细胞周期阻滞在G₀/G₁期（均P<0.01）。GEPIA数据库和LncTar网站预测FoxP4-AS1与CDK4存在潜在的相互作用靶点,Western blot结果显示,转染FoxP4-AS1过表达慢病毒载体两种细胞的CDK4/cyclinD1表达水平较各自阴性对照组细胞明显降低（均P<0.05）。皮下移植瘤实验结果显示,转染FoxP4-AS1过表达慢病毒载体的PTC细胞较转染空载病毒载体的PTC细胞在小鼠体内生长慢,形成的瘤体小,且瘤组织中Ki-67表达减少。KEGG通路富集分析显示,FoxP4-AS1低表达主要富集于PI3K-Akt-mTOR通路、细胞周期、细胞凋亡、免疫调节相互作用,FoxP4-AS1高表达主要富集于DNA甲基化、氧化应激通路等。结论 lncRNA FoxP4-AS1在PTC细胞中表达下调,且与PTC细胞的恶性生物学行为密切相关,FoxP4-AS1可能通过抑制CDK4/cyclinD1表达抑制PTC细胞增殖,作为保护性因素发挥作用。     

外泌体lncRNA CCAT1在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)CCAT1在胰腺癌血清外泌体中的表达及临床意义。方法术前收集66例胰腺癌患者及66例正常健康者的血清,采用差速离心法收集患者外周血中的外泌体。以病变组织病理诊断结果为金标准,统计外泌体中lncRNA CCAT 1诊断胰腺癌的敏感性,特异性和诊断准确率。收集患者的临床病理特征,分析IncRNA CCAT1与临床相关因素的关系。结果外泌体中lncRNA CCAT1检测胰腺癌的敏感度、特异性和准确性分别为89.4%、87.9%和89.4%,显著高于CA19-9(P0.05); Kaplan-Meier分析提示外泌体lncRNA CCAT1表达与胰腺癌患者总体预后有关;Cox回归分析提示外泌体lncRNA CCAT1是影响胰腺癌患者不良预后的独立因素(P0.05)。结论 LncRNA CCAT1在胰腺癌外泌体中显著高表达,对于早期诊断胰腺癌具有很高的敏感度、特异性和准确性,可作为预测胰腺癌患者不良预后的独立因素。     

长链非编码RNA在胰腺癌转移中的研究进展

胰腺癌侵袭程度高,初诊即有局部淋巴结和远处转移。长链非编码RNA(IncRNA)最初被认为是基因转录组的"噪音"而未受到重视。但随着研究的深入,学者们发现lncRNA在人类基因组普遍被转录且起着重要的调控作用,与肿瘤的发生发展及转移密切相关。胰腺癌中有大量的lncRNA表达失调,其根据自身的亚细胞定位和结构不同,在胰腺癌转移中参与不同的生物学调控,涉及到上皮-间质转化(EMT),自噬,肿瘤代谢,关键驱动基因等多方面。研究lncRNA在肿瘤转移中的作用及其分子机制,有望为胰腺癌提供新的防治策略和新的治疗靶点。     

胰腺癌组织中p21 WAF1的表达及其与临床病理因素的关系

目的：研究p21WAF1在胰腺癌中的表达及其与胰腺癌临床病理因素的关系,了解p21WAF1在胰腺癌进展中的作用.方法:用免疫组织化学方法检测30例胰腺癌患者癌组织中p21WAF1的表达,所有数据用卡方检验.结果:30例中有10例p21WAF1蛋白表达阴性,在中、低分化癌、淋巴结转移、血管侵犯和Ⅲ、Ⅳ期胰腺癌中p21表达显著降低(P<0.05).结论:p21WAF1在胰腺癌中的表达下降与肿瘤的进展有关,可作为提示胰腺癌恶性程度的标志.     

长链非编码RNA 909靶向调控miR-194-5p/DACH1轴对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

背景与目的:长链非编码RNA 909(LINC00909)是一个新发现的长度约为2 kb的长链非编码RNA(lncRNA),在胶质瘤和白血病中被报道发挥癌基因的作用.然而LINC00909在胰腺癌中的作用鲜有报道.本研究旨探讨LINC00909在胰腺癌中的表达及其对患者预后的影响,以及LINC00909与其调控网络对胰...     

lncRNA FOXP4-AS1通过miR-507调控甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的作用机制研究

背景与目的 长链非编码RNA（lncRNA）可通过结合mircoRNA（miRNA）来间接调控下游mRNA的转录及降解,从而调控肿瘤发生与发展。lncRNA FOXP4-AS1是近年来发现的一种新的肿瘤相关生物标志物,在不同的肿瘤中发挥着不同的调控作用,笔者前期研究发现,FOXP4-AS1在甲状腺乳头状癌（PTC）中呈低表达,发挥抑癌作用。此外,笔者通过数据库预测miR-507可与FOXP4-AS1互补结合。因此,本研究探讨FOXP4-AS1通过调控miR-507及其下游靶mRNA抑制PTC细胞的生长的作用与机制。方法 通过TCGA数据库分析miR-507在甲状腺癌（TC）中的表达水平及其在TC中的临床意义。qRT-PCR检测PTC细胞系（TPC-1、K1）和正常甲状腺滤泡上皮细胞（Nthy-ori3-1）中miR-507的表达水平,以及过表达及敲低FOXP4-AS1后检测miR-507表达水平的变化。用双荧光素酶报告基因实验验证FOXP4-AS1与miR-507靶向关系。分别在FOXP4-AS1过表达及敲低稳转株上转染miR-507的模拟物、抑制物,并分别用CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验、划痕愈合实验以及流式细胞术检测细胞功能的变化。用生物信息学方法分析miR-507下游靶点并用qRT-PCR验证。结果 TCGA数据库分析结果显示,miR-507在TC中高表达,且其表达水平TC患者与临床病理分期、T分期、腺外浸润等临床病理特征有关（均P<0.05）。qRT-PCR结果显示,与Nthy-ori3-1细胞比较,miR-507在两种PTC细胞中呈高表达,且过表达和敲低FOXP4-AS1后,两种PTC细胞中miR-507的表达水平随之反向改变（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,FOXP4-AS1与miR-507靶向结合,并抑制miR-507的表达。细胞功能实验及功能回复实验显示,FOXP4-AS1过表达后,PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显减弱,同时加入miR-507的模拟物后,PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）;敲低FOXP4-AS1后,PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显升高,同时加入miR-507的抑制物后,PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）。数据库预测与GO、KEGG富集分析结果显示,miR-507下游可能涉及CAMK4,qRT-PCR验证结果显示,CAMK4的表达水平随FOXP4-AS1表达水平的上调、下调呈同向改变,且其表达水平随miR-507模拟物和抑制物的加入而反向改变（均P<0.05）。结论 FOXP4-AS1可以靶向结合miR-507,并可能通过海绵作用抑制miR-507表达水平调控PTC细胞的增殖、迁移及细胞凋亡。CAMK4可能是FOXP4-AS1/miR-507通路发挥抑癌作用的下游靶点之一。     

长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(lncRNA OSER1-AS1)对肾癌ACHN细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其对微小RNA(microRNA,miR)-612的调控作用。方法2017年1月至2020年3月,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肾癌组织、癌旁组织中OSER1-AS1、miR-612的表达量;体外培养肾癌细胞ACHN,分别将OSER1-AS1小分子干扰RNA(si-OSER1-AS1)及其阴性对照(si-NC)、miR-612寡核苷酸模拟物(miR-612 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-612)转染至ACHN细胞;采用RT-qPCR法检测细胞中OSER1-AS1、miR-612的表达量;采用噻唑蓝(MTT)、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测OSER1-AS1、miR-612的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21蛋白表达量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果肾癌组织OSER1-AS1的表达水平(1.00±0.08比3.37±0.28)高于癌旁组织(t=52.113,P<0.05),miR-612的表达水平(1.00±0.06比0.47±0.04)低于癌旁组织(t=47.062,P<0.05);si-OSER1-AS1组细胞活力(0.66±0.05比0.31±0.03)与Cyclin D1(0.63±0.05比0.25±0.02)、MMP-2(0.82±0.07比0.35±0.03)、MMP-9(0.76±0.06比0.28±0.03)蛋白水平低于si-NC组(t=18.007、21.169、18.514、21.466,P<0.05),si-OSER1-AS1组迁移细胞数[(115.56±9.52)个比(55.99±5.59)个]、侵袭细胞数[(93.41±6.09)个比(46.05±4.35)个]低于si-NC组(t=16.188、18.984,P<0.05),si-OSER1-AS1组p21蛋白水平(0.15±0.02比0.57±0.05)高于si-NC组(t=23.398,P<0.05);miR-612组细胞活力(0.68±0.05比0.39±0.03)与Cyclin D1(0.66±0.05比0.28±0.03)、MMP-2(0.85±0.06比0.46±0.03)、MMP-9(0.78±0.05比0.34±0.02)蛋白水平低于miR-NC组(t=14.920、19.551、17.441、24.512,P<0.05),miR-612组迁移细胞数[(118.76±9.87)个比(64.39±4.65)个]、侵袭细胞数[(99.65±9.12)个比(53.57±3.67)个]低于miR-NC组(t=14.950、14.062,P<0.05),miR-612组p21蛋白水平(0.14±0.02比0.51±0.04)高于miR-NC组(t=24.820,P<0.05);双荧光素酶报告实验证实OSER1-AS1可靶向结合miR-612;抑制miR-612表达可明显逆转干扰OSER1-AS1对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论干扰OSER1-AS1可通过上调miR-612的表达从而抑制肾癌ACHN细胞增殖、迁移及侵袭。     

Hypoxia induces the overexpression of microRNA-21 in pancreatic cancer cells

BackgroundPancreatic cancer cells exist in a hypoxic microenvironment containing numerous factors that impact tumor survival, proliferation, and metastasis. MicroRNAs (miRs) are differentially expressed in cancer but also altered by hypoxia. We hypothesized that hypoxia could induce expression of miR-21, an oncomir in pancreatic cancer cells.Materials and methodsWe examined how hypoxia regulates miR-21 expression in pancreatic cancer cell lines (BxPC-3, AsPC-1) by stem-loop RT-PCR. Chromatin immunoprecipitation assays were used to study how hypoxia alters hypoxia-inducible factor (HIF)-1α binding to the hypoxia response element of miR-21. BxPC-3 and AsPC-1 cells were transfected with a constitutively stable HIF-1α subunit or vector control (pcDNA3.1) to determine the influence of miR-21 in normoxia. The effect of mature miR-21 sense and antisense oligonucleotides on proliferation and apoptosis in hypoxic and normoxic conditions was assessed via WST-1 assay and flow cytometry.ResultsMiR-21 levels increased in all cell lines grown in hypoxic conditions versus normoxia, whereas siRNA targeting HIF-1α reduced miR-21 expression. Hypoxic conditions resulted in direct binding of HIF-1α to the predicted binding site in miR-21. Transfection with a constitutively stable HIF-1α expression plasmid in normoxia resulted in upregulated miR-21, similar to that seen in hypoxia. Cells transfected with antisense constructs targeting miR-21 had reduced proliferation and increased apoptosis in normoxia, whereas miR-21 overexpression abrogated hypoxia-associated reductions in proliferation.ConclusionsMiR-21 is induced by hypoxia in pancreatic cancer cells via HIF-1α upregulation. MiR-21 overexpression allows cells to avoid apoptosis in a hypoxic microenvironment. Inhibition of miR-21 expression may increase cellular susceptibility to hypoxia in pancreatic cancer.     

Long non-coding RNA HOXA11-AS contributes to the formation of keloid by relieving the inhibition of miR-182-5p on ZNF217

BackgroundLong non-coding RNA (lncRNA) dysregulation is demonstrated to be associated with disease progression. Mounting studies show that lncRNA promotes or inhibits the development of keloid. We aimed to disclose the role of homebox A11 antisense RNA (HOXA11-AS) in the formation of keloid.MethodsQuantitative real-time PCR (qPCR) was adopted for expression analysis of HOXA11-AS, miR-182-5p and zinc finger protein 217 (ZNF217) mRNA, and the expression of ZNF protein and marker proteins was detected by western blot. Cell proliferation, cell migration and cell apoptosis were investigated using CCK-8 assay, wound healing assay and flow cytometry assay, respectively. The potential interplay between miR-182-5p and HOXA11-AS or ZNF217 was verified by dual-luciferase reporter assay, RIP assay and pull-down assay. The role of HOXA11 in vivo was studied by establishing animal models.ResultsHOXA11-AS was highly expressed in tissues and fibroblasts of keloid. Deficiency of HOXA11-AS blocked the proliferation and migration of keloid fibroblasts and induced fibroblast apoptosis. HOXA11-AS directly combined to miR-182-5p whose downregulation reversed the effects of HOXA11-AS knockdown. ZNF217 was a target of miR-182-5p, and HOXA11-AS indirectly promoted ZNF217 expression by binding to miR-182-5p. MiR-182-5p enrichment also blocked keloid fibroblast proliferation, survival and migration, while further ZNF217 overexpression abolished these effects. HOXA11-AS knockdown also hindered the growth of keloid in mouse models.ConclusionHigh expression of HOXA11-AS promoted the formation and growth of keloid through the upregulation of ZNF217 by targeting miR-182-5p, and the inhibition of HOXA11-AS might be a novel strategy to prevent keloid development.     

miR-145 inhibits invasion of bladder cancer cells by targeting PAK1

ObjectivesMicroRNAs play important roles in cancer. In many cancers, miR-145 acts as a tumor suppressor, and it is down-regulated in bladder cancer. In the present study, we explored the modulation of oncogenic gene PAK1 by miR-145 in bladder cancer.Material and methodsExpression of miR-145 was detected in bladder cancer tissues and cell lines by quantitative real-time polymerase chain reaction. Through the bioinformatics approach, PAK1 has been predicted to be a direct target of miR-145 and was confirmed by the PAK1 messenger RNA 3′-untranslated region luciferase activity assay. To investigate whether miR-145 regulates PAK1 expression, it was overexpressed in J82 and T24 bladder cancer cells. In 10 paired bladder normal and tumor tissues, we determined the relationship between miR-145 and PAK1 through quantitative real-time polymerase chain reaction and western blot. By using transwell invasion assay and western blotting analysis, we investigated the effects of miR-145 and PAK1 on bladder cancer cell invasion and expression of invasion marker genes.ResultsThe level of miR-145 decreases and PAK1 protein expression up-regulates in bladder cancer tissue, as compared with the paired normal bladder tissue. Moreover, miR-145 directly targets PAK1 in bladder cancer cells. The level of miR-145 negatively correlates with PAK1 protein expression in bladder cancer. In addition, PAK1 promotes invasion and enhances the expression and activity of MMP-9, whereas miR-145 inhibits bladder cancer cell invasion and expressions of PAK1 and MMP-9.ConclusionsOur results indicate that miR-145 inhibits bladder cancer cell invasion, at least partly through targeting PAK1. Restoration or replacement of miR-145 could be an efficient approach to inhibit PAK1 and bladder cancer development in the tumor therapy.     

长链非编码RNA RUSC1-AS1对肝细胞癌恶性生物学行的影响及其与微小RNA-326的关系

背景与目的:有研究表明长链非编码RNARUSC1-AS1(lnc RNARUSC1-AS1)与肿瘤的恶性生物学行为密切相关,但其对肝细胞癌(肝癌)的影响尚不清楚。笔者前期研究显示,lnc RNARUSC1-AS1与微小RNA-326(mi R-326)存在结合位点,因此本研究探讨lnc RNARUSC1-AS1在肝癌中的表达,以及是否通过靶向mi R-326调控肝癌细胞生物学行为。方法:用q RT-PCR检测41例肝癌组织和对应癌旁组织中lnc RNARUSC1-AS1与mi R-326的表达。以lnc RNARUSC1-AS1表达抑制质粒/阴性对照质粒、mi R-326模拟物/阴性对照序列、mi R-326抑制物/阴性对照序列为工具,采用MTT法、Transwell法、流式细胞术、Westernblot法观察接受不同转染处理的MHCC97-H细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力、凋亡以及相关蛋白表达的变化。采用荧光素酶报告实验分析lnc RNARUSC1-AS1和mi R-326的靶向关系,并用q RT-PCR验证。结果:与癌旁组织比较,肝癌组织中lnc RNARUSC1-AS1表达水平明显升高,mi R-326表达水平明显降低(均P0.05)。转染lnc RNARUSC1-AS1表达抑制质粒或mi R-326模拟物后,肝癌MHCC97-H细胞的增殖能力以及迁移与侵袭能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,cyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达水平明显降低,P21、Bax蛋白表达水平明显升高(均P0.05)。MHCC97-H细胞转染lnc RNARUSC1-AS1表达抑制质粒的同时mi R-326抑制物,前者对MHCC97-H细胞以上作用被取消(均P0.05)。双荧光素酶报告实验及q RT-PCR验证结果显示,mi R-326为lnc RNARUSC1-AS1的靶分子。结论:lnc RNARUSC1-AS1在肝癌中表达上调,其可通过靶向调控mi R-326的表达促进肝癌细胞的恶性生物学行。     

Inverse Association between miR-194 Expression and Tumor Invasion in Gastric Cancer

Background

MiR-194 has been shown to be specifically expressed in the human gastrointestinal tract and may play an antimetastatic role in primary liver cancer cells. However, the role of miR-194 in gastric cancer is still unclear.

Methods

Total RNA was extracted from tissues of 119 patients with gastric cancer and three gastric cancer cell lines (SGC-7901, MGC-803, and BGC-823). Expression levels of miR-194 were determined by real-time polymerase chain reaction (PCR). Moreover, a MTT proliferation assay and transwell cell invasion assay were performed to study the effect of miR-194 on SGC-7901 cell proliferation and invasion. Finally, we used real-time PCR and western blot to verify which gene was the target of miR-194 in gastric cancer.

Results

Though there was no significant difference between cancerous and matching noncancerous tissues, we found patients with lower expression of miR-194 tended to have larger tumor size (P = 0.002) and more advanced pT stage (P = 0.028) in gastric cancer. Moreover, the expression of miR-194 was significantly lower in Borrmann IV type gastric cancer than in Borrmann I, II, and III types (P = 0.019). Furthermore, an in vitro invasion assay indicated that the penetrated cell intensity after miR-194 mimics transfection was significantly lower than the control. However, overexpression of miR-194 had little effect on the SGC-7901 cell cycle and proliferation. The results of real-time PCR and western blot highlighted that miR-194 interacted with N-cadherin and negatively regulated its expression at the translational level.

Conclusion

These findings imply that miR-194 might play an important role in gastric cancer invasion and progression.

     

circRAD18/miR-516b/PDK1轴调节葡萄糖代谢重编程与结直肠癌增殖的关系

背景与目的 环状RNA circRAD18被发现在乳腺癌和甲状腺癌的进展中起了促进作用,但其在其他恶性肿瘤的表达及作用尚未被充分揭示。笔者前期通过生物信息学软件预测circRAD18可与miR-516b互补结合,而葡萄糖代谢关键调节酶丙酮酸脱氢酶激酶1（PDK1）可能是miR-516b的靶基因。因此,本研究初步探讨circRAD18在结直肠癌细胞中的表达及作用,及其对靶miRNA及下游靶基因的调控关系。方法 用qRT-PCR检测不同结直肠癌细胞系（SW480、SW620、HT-29）及正常结直肠上皮细胞（NCM460）中circRAD18的表达;用si-circRAD18沉默结直肠癌细胞中circRAD18的表达后,分别用CCK-8实验和相应的试剂盒检测细胞的增殖情况以及葡萄糖摄取量和乳酸产生量。用双荧光素酶报告基因实验与RNA免疫沉淀（RIP）实验分析circRAD18、miR-516b及PDK1之间的结合关系;最后,采用过表达/敲低实验进一步验证三者之间的关系。结果 与正常结直肠上皮细胞比较,circRAD18在各结直肠癌细胞系中的表达均明显上调（均P<0.05）;转染si-circRAD18后,结直肠癌细胞增殖能力、葡萄糖摄取及乳酸产生量均明显降低（均P<0.05）;双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实circRAD18可与miR-516b结合,而PDK1是miR-516b的下游靶基因。miR-516b模拟物及si-circRAD18的转染可明显抑制细胞葡萄糖摄取、乳酸产生及PDK1蛋白表达,且补充PDK1可逆转该抑制作用（均P<0.05）。结论 circRAD18在结直肠癌细胞中表达上调,并与结直肠癌细胞增殖能力的增强密切相关,作用机制可能与circRAD18通过海绵样吸附miR-516b后,上调PDK1表达,从而导致结直肠癌细胞葡萄糖代谢重编程有关。