肾组织石蜡切片免疫荧光技术中抗原修复方法的探讨

目的 比较多种抗原修复方法在肾组织石蜡切片免疫荧光技术中的应用,探讨最佳抗原修复法.方法 选取2018年6月至2019年6月期间郑州大学第一附属医院肾脏病理中心的45例肾活检组织标本为研究对象,其中狼疮肾炎、膜性肾病、IgA肾病各10例及淀粉样变性肾病15例.分别用5种抗原修复法处理各组肾组织石蜡切片.按照标本来源和抗原修复方法分为6组:对照组(冰冻切片标本)、高压热修复联合胰蛋白酶消化双修复(高压热联合胰酶)组、微波热修复联合胰蛋白酶消化双修复(微波热联合胰酶)组、高压热修复(高压热)组、微波热修复(微波热)组、胃蛋白酶消化(胃蛋白酶)组.分析和比较5种热修复抗原方法的石蜡切片与冰冻切片免疫荧光染色和半定量评分的差异.结果 高压热联合胰酶、微波热联合胰酶组肾组织石蜡切片的免疫荧光染色结果与对照组一致,与对照组比较,两组免疫荧光半定量评分的差异无统计学意义(均P> 0.05).高压热组、微波热组和胃蛋白酶组石蜡切片免疫荧光染色结果较对照组假阴性率高,免疫荧光半定量评分的差异有统计学意义(均P< 0.05).结论 高压热修复联合胰蛋白酶消化双修复法与微波热修复联合胰蛋白酶消化双修复法为石蜡切片的最佳抗原修复方法.     

微波石蜡切片免疫荧光染色在肾活检病理诊断中的应用

冰冻切片免疫荧光染色在肾活检病理诊断中起着重要作用.由于冰冻切片需要价格昂贵的冷冻切片机,在很大程度上限制了该技术的广泛应用,我们利用微波抗原修复技术,对肾活检组织石蜡切片进行免疫荧光染色,取得了良好的效果.     

甲醛固定石蜡包埋肾组织做免疫荧光染色在病理诊断中的应用

目的探讨甲醛同定、石蜡包埋的肾穿刺组织做免疫荧光染色的可行性。方法选择10例膜性肾病、25例IgA肾病及10例狼疮肾炎患者的肾穿刺组织。对石蜡切片进行脱腊、修复抗原及直接免疫荧光染色，并将染色结果与冰冻切片染色结果进行比较。结果在本实验条件下，二甲苯浸泡30min、胃蛋白酶消化10min为最适脱蜡及抗原修复条件，抗体稀释至特异荧光强度足够及非特异荧光背底最弱为当。应用上述条件对石蜡切片进行直接免疫荧光染色，其结果与冰冻切片染色的诊断符合率达100％，而石蜡切片具有组织结构保存好、免疫沉积物清晰、易于判断结果及免疫荧光淬灭时间长等优点。结论石蜡切片免疫荧光染色可作为冰冻切片免疫荧光染色的补充手段，它无需低温保存即能转运肾组织至肾脏病理诊断设备及水平较好的医院做免疫荧光检查，于国内推广具有现实意义。     

双重修复石蜡切片免疫荧光染色在肾活检组织中的应用

目的：探讨常规10%福尔马林固定的肾穿刺活检组织进行石蜡切片免疫荧光染色在病理诊断中应用的可行性。方法：采用隔水微波修复及胰蛋白酶双重修复抗原。结果：经过双重修复的石蜡切片免疫荧光染色与冰冻切片免疫荧光染色结果基本一致。结论：双重修复石蜡切片免疫荧光染色为病理诊断提供了多一种方法,且为使用石蜡切片进行回顾性免疫荧光诊断和研究提供了技术保障。     

IgA肾病肾小球内IgG及IgM沉积的意义

检测肾小球内各类抗体的沉积情况是肾活检免疫病理检查的常规项目.为阐明肾小球内IgG及IgM的沉积与IgA肾病的临床与病理关系,我们进行了以下回顾性研究. 资料与方法 1对象与方法144例经肾活检确诊的IgA肾病并排除继发因素者,男85例,女59例,平均年龄(32.7±6.9)岁.肾活检组织切片予常规光镜染色,冰冻切片予免疫荧光检查(使用FITC荧光素标记的兔抗人IgG,IgA,IgM及C3等),强度为+～++++,组织学按照修订过的NIH标准(美国国家卫生署为SLE制定)进行评分,共分0～3分,分别进行活动指数(AI)及慢性指数(CI)评分.血尿为离心尿镜检RBC≥5个/HP.肾衰指血肌酐≥133μmol/L.高血压按1999年世界卫生组织/国际高血压联盟高血压治疗指南的诊断标准达一级高血压以上者.大量蛋白尿指尿蛋白》3.0g/24h.     

乙肝病毒血症与原发性肾炎患者肾组织内乙肝抗原沉积的相关性研究

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染与原发性肾小球肾炎（肾炎）发病的联系。方法：用间接免疫荧光法检测230例原发性肾炎 患肾活检冰冻切片组织内HBsAg和HBcAg的沉积情况。按血清HBV感染标志物检测情况分血清阳性和阴性两组进行分析,以及按发病年龄和病理类型进行分析。结果：在230例原发性肾炎中,肾组织内HBsAg和HBcAg的阳性率分别为18．7％和16．8％,乙肝肝炎抗原（HBAg)总阳性率为20％。血清HBV感染标志物阳性率为39．6％。血清阳性组的肾组织内HBAg阳性率明显高于血清阴性组,有统计学意义。分析显示,这种相关性在小儿组和成人组中同样存在,相关的病理类型见于膜性肾病。结论：血清HBV感染与原发性肾炎（包括成人原发性肾炎 ,特别是原发性膜性肾病）的发病有密切联系。     

68例伴有肾组织乙肝病毒抗原沉积的肾炎患者临床和病理分析

目的：探讨血清乙肝病毒（HBV）标志物与肾组织HBV抗原沉积、肾病理之间的关系，了解乙肝病毒相关性肾炎（HBV—GN）的临床和病理特点。方法：收集成人肾组织中检测到HBsAg和／或HBcAg沉积的肾炎患者68例（以下称沉积阳性组）。随机抽取同期肾穿合并有慢性乙型肝炎但肾组织中不伴HBsAg和／或HBcAg沉积的肾炎患者24例作为对照组（以下称沉积阴性组）。两组均采用间接免疫荧光法检测肾活检组织冰冻切片中HBsAg和HBcAg，荧光定量PCR法检测血清HBV—DNA水平。结果：（1）两组患者在血压、血尿和蛋白尿程度以及肾功能水平均无统计学差异；（2）沉积阳性组肾病理以IgA肾病（IgAN，占51．5％）和不典型膜性肾病（MN，占38．2％）为主；沉积阴性组则以系膜增生性肾炎（MsPGN，占50％）为主；（3）68例患者中13例血清HBV标志物阴性或仅有HBsAb阳性，血HBV—DNA病毒载量〈100拷贝／ml的患者肾组织中检测到HBsAg和俄HBcAg沉积，且免疫荧光显示免疫球蛋白和补体沉积均在3种以上，满堂亮者7例（53．8％）：光镜显示不典型MN9例（69．2％），IgAN3例，MPGN1例。结论：对于成年人依据临床难作出HBV—GN诊断。成人HBV—GN病理表现具有多样性，以IgAN和不典型MN为主，其次为MPGN和MsPGN，FSGS少见；肾组织HBV抗原沉积现象可以出现在血清HBV标志物阴性或仅HBsAb阳性的患者，提示应重视肾组织HBV抗原检测，尽可能降低HBV—GN的漏诊率，尤其是血清HBV标志物阴性的患者。     

IgA肾病的巨细胞病毒抗原肾内沉积

IgA肾病系病因未明的局灶系膜增殖性肾小球肾炎,作者们在IgA肾病患者的肾活检标本中调查研究了与三种不同的抗巨细胞病毒的异源抗血清起反应的抗原在肾小球的沉积。作者于1985年2月～1987年3月间对IgA肾病,SLE.Henoch—Schǒnlein紫癜(HSP)及肝性肾小球硬化症患者的非移植肾标本检查了肾小球中巨细胞病毒或单疮病毒抗原的证据。并同时对其它肾小球疾病患者的37份对照作了检查。活检肾标本均经常规法进行仔细的光镜、电镜和免疫荧光检查,并用巨细胞病毒抗血清染色。每例切片均用三种不同的抗巨细胞病毒的异源抗体之一进行染色。结果 86份标本中组织学诊断为IgA肾病31     

肾穿刺活检石蜡组织切片DNA的提取和PCR扩增

目的建立从肾穿刺活检石蜡组织切片提取DNA并进行PCR扩增的方法。方法肾脏病理诊断为乙肝病毒相关性肾小球肾炎、原发性IgA肾病和膜性肾病各2例的肾活检组织蜡块，包埋时间1个月-5年。提取方法包括清洁切片、融蜡、消化及DNA的提取。紫外分光光度计测定DNA浓度。应用聚合酶链反应（PCR）扩增血管紧张素转换酶（ACE）和乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）基因片段。结果2张2Ixm厚石蜡切片获取的DNA总量为10-30μg。ACE基因的PCR扩增结果显示，6例标本均在490bp和（或）190bp处显示清晰条带。HBcAg的PCR扩增结果显示，2例乙肝病毒相关性肾小球肾炎标本在132bp处显示清晰条带，其余4例阴性。结论本方法可以从肾穿刺活检石蜡切片中获取足够高质量DNA并进行PCR扩增，方法简便，结果稳定，不受包埋时间长短的限制，为肾脏疾病的辅助诊断、肾活检组织的大宗遗传学分析提供了可能。     

肾病综合征1009例病理类型及流行病学分析

目的探讨肾活组织病理检查（下称肾活检）在肾病综合征诊治中的意义。方法选择近10年诊断为肾病综合征患者1009例,分析肾活组织穿刺检查术后的病理结果。结果原发性肾小球肾炎占71．9％,病理类型以非IgA系膜增生性肾炎、IgA肾病及膜性肾病多见;继发性肾病综合征占28．1％,其中居前3位的是狼疮性肾炎、过敏性紫癜性肾炎和乙肝病毒相关性肾炎。结论肾活检对肾病综合征的诊断、治疗及评估预后有重要意义。     

IgA肾病患者血浆褪黑素水平与氧化应激的关系

目的：探讨 IgA 肾病肾功能正常患者血浆褪黑素水平与氧化应激的关系,为褪黑素用于治疗 IgA 肾病提供科学依据。方法：分为健康对照组（n =22）及 IgA 肾病肾功能正常组（n =48）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组血浆褪黑素水平及分光光度法测定各组血浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果：与正常对照组相比,IgA 肾病肾功能正常组患者血浆褪黑素降低[（64．05±29．23）ng/ L vs．（80．54±35．12）ng/ L,P 〈0．05],而血浆 MDA 水平升高[（45．17±26．47）U/ ml vs．（31．14±26．00）U/ ml,P 〈0．05],血浆 SOD 水平下降[（76．25±19．34）U/ ml vs．（86．71±18．55）U/ ml,P 〈0．05）。进一步分析结果显示,IgA 肾病患者血浆褪黑素水平与 MDA 水平呈负相关（r =-0．308,P 〈0．05）,与 SOD 水平呈正相关（r =0．321,P 〈0．05）。结论：IgA 肾病肾功能正常患者血浆褪黑素水平较健康人降低,血浆 MDA 水平随血浆褪黑素水平降低而升高,血浆 SOD 水平随血浆褪黑素水平降低而降低。提示血浆褪黑素水平的降低引起机体抗氧化能力的下降,进而参与了 IgA 肾病的进展。补充外源性褪黑素可能为治疗 IgA 肾病具有潜力的方法。     

肾功能不全的IgA肾病患者临床表现与病理特点分析

目的分析肾脏活体组织检查（简称：肾活检）时肾功能异常的IgA肾病患者的临床表现与病理特点。方法选择我院经肾活检确诊的190例IgA肾病患者为研究对象,以其患者血肌酐（SCr）130μmol／L为界分为2组：肾功能正常组（SCr〈130μmol／L）128例和肾功能异常组（SCr≥130μmol／L）62例。同时对其肾脏病理进行半定量评分,比较2组患者的临床病理特点,并且通过回归分析与其肾功损害相关的因素。结果与肾功能正常组相比,肾功能异常组男性比例明显增高（72．6％1;L28．9％,P〈0．01）,年龄更大[（34±10）岁比（30±9）岁,P〈0．01],病程更短[（11±17）]个月比（20±41）个月],同时收缩压更高[（141±19）比（123±17）mmHg,P〈0．01],24h尿蛋白定量增多[（3．31±2．70）g比（2．25±2．19）g,P〈0．01]。同时其患者肾脏病理反映慢性病变的指数均明显增高。多因素分析还显示,与肾活检时肾功能异常密切相关的危险因素包括男性,年龄增大,收缩压增高,24h尿蛋白定量增多,以及肾小管萎缩和间质纤维化指数增高。结论肾活检时肾功能异常的IgA。肾病患者临床表现和肾脏病理改变均明显加重,肾小管萎缩和间质纤维化指数增高与IgA肾病患者肾活检时肾功能异常独立相关。     

芪蓟肾康颗粒对IgA肾病大鼠肾组织IL-13及血清CIC的影响

目的:观察芪蓟肾康颗粒对IgA肾病大鼠肾组织IL-13的表达及血清循环复合物(CIC)浓度的影响,探讨芪蓟肾康颗粒治疗IgA肾病的机制。方法:采用口服牛血清白蛋白(BSA)制备实验性IgA肾病大鼠模型。芪蓟肾康颗粒及替米沙坦于实验第8周开始灌胃给药,每日1次,连续5周,至实验12周末取血检测CIC含量,取肾脏组织检测IL-13表达。结果:与模型组比较:芪蓟肾康颗粒中、高剂量组IL-13表达下降(P<0.01),芪蓟肾康颗粒各剂量组血清CIC浓度均下降(P<0.01)。与替米沙坦组比较:芪蓟肾康颗粒中、高剂量组IL-13表达差异有统计学意义(P<0.01),中药各剂量组血清CIC浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论:芪蓟肾康颗粒有调节IgA肾病大鼠肾组织IL-13表达及血清CIC浓度的作用。     

不同性别原发性IgA肾病随增龄的临床病理特点

目的：了解不同性别原发性IgA肾病（IgAN）患者随增龄的临床病理特点。方法：回顾性分析我科2003年1月～2006年12月经肾活栓确诊的757例原发性IgAN患者的临床病理资料，根据年龄分成四组：A组（青年组，≤24岁，n=172例）、B组（中青年组，25岁～39岁，n=318）、C组（中年组，40岁～54岁，n=189）及D组（中老年组，≥55岁，n=78），分别比较不同性别组随增龄及同一年龄段男性与女性的临床病理特点。结果：A、B、C组男性多于女性，而D组女性多于男性。男、女性原发性IgAN中肾功能中度受损（eGFR〈60 ml／min）、高血压、高甘油三酯血症的比例均与年龄有关（P〈0．05）。A组最低，男性中B、C、D组均显著高于A组（P〈0．007），而女性中仅D组显著高于A组（P〈0．007），B、C组与A组无差异。另外，B、C组中男性肾功能中度受损、高血压及高甘油三酯血症的比例均显著高于女性（P〈0．05），而A、D组均无此趋势。B、C组男性的肾小管间质病变、肾内血管病变及血管壁透明样变性程度均重于同年龄段的女性（P〈0．05），而A、D组均无此趋势。女性患者肾功能中度受损的独立相关因素有年龄、高尿酸血症、肾小管间质损害、蛋白尿〉1g／d、肾内动脉病变5个参数。男性的独立相关因素为年龄、高尿酸血症、肾小管间质损害、全球硬化这4个参数。结论：中青年及中年女性IgAN患者的临床表现、慢性化病理改变显著轻于同年龄段男性，而55岁以上及24岁以下女性多个临床病理预后指标与同年龄段男性基本一致。     

尿足细胞阳性IgA肾病患者不同蛋白尿水平临床病理分析

目的：探讨尿足细胞阳性的IgA肾病患者不同蛋白尿水平的临床病理特点.方法：选取原发性IgA肾病尿足细胞阳性患者41例,收集患者临床病理资料,根据尿蛋白水平分成3组：组1（≤0.5 g/24 h）（n=9）,组2（〉0.5 g/24 h,〈1.0 g/24 h）（n=14）,组3（≥1.0 g/24 h）（n=18）,比较3组临床病理特点.结果：（1）临床特点：组1患者收缩压、eGFR、UA均较组3差异有统计学意义（P〈0.05）,且这些指标在三组间随蛋白尿水平呈现递进表现.组2和组3仅在收缩压、UA方面差异有统计学意义（P〈0.05）;（2）病理特点：组1在节段性肾小球病变比例及间质炎细胞浸润方面较组3轻,差异有统计学意义（P〈0.05）;组1在节段性肾小球病变比例及节段损伤积分方面较组2轻,差异有统计学意义（P〈0.05）;组2和组3两组病理改变差异无统计学意义（P〉0.05）.结论：尿足细胞阳性的IgA肾病患者中,尿蛋白水平仍然是肾脏病轻重的一个指标,与临床病理关系密切.     

中西医三环治疗IgA肾病蛋白尿的临床研究

目的：观察中西医三环治疗IgA肾病（IgAN）蛋白尿的临床疗效及其对肾功能的影响。方法：234例患者按病理Lee氏分级进行分组,Lee氏分级〈Ⅲ级为A组,随机分为治疗组（A1组32例）和对照组（A2组35例）;Lee氏分级〉Ⅲ级为B组,随机分为治疗组（B1组102例）和对照组（B2组65例）。A1组使用中医药三环＋中医新辨证方案,A2组使用ACEI/ARB＋中医原辨证方案;B1组使用中西医结合三环（中医药三环＋中医新辨证方案＋ACEI/ARB＋免疫抑制剂）,B2组使用激素＋中医原辨证方案。观察项目包括24h尿蛋白、肾功能、血白蛋白（Alb）、肝功能、血常规、尿常规及不良反应。观察时间6～8个月。结果：A1组蛋白尿、血肌酐（Scr）及血红蛋白（Alb）的改善好于A2组,A1组的总缓解率（完全缓解率＋基本缓解率）为75%,高于A2组的48.6%（P〈0.05）;B1组降蛋白尿的速度及幅度均强于B2组,B1组的总缓解率为80.4%,高于B2组的64.6%,两组比较（P〈0.05）。且B组在治疗前肾功能已下降（Scr〉133μmol/L）18例患者,其肾功能改善的程度B1组（12例）好于B2组（6例）。结论：中西医三环治疗能有效减少IgAN患者的蛋白尿,稳定并改善肾功能。     

IgA肾病肾病综合征临床病理特点及肾脏病理危险因素

目的：探讨IgA肾病肾病综合征患者临床病理特点及肾脏病理损害的危险因素。方法：选择1987年～2006年经肾活检确诊IgA肾病并表现为肾病综合征的患者118例，分析其临床病理特点，按肾脏病变轻重分为A组（n=34，包括Lee氏分级Ⅰ级、Ⅱ级）、B组（n=84，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ级），比较两组临床指标，并多因素分析影响肾脏病理损害的危险因素。结果：A、B两组高血压分别占11．8％ vs 63．1％；肾衰竭分别占15％ vs 41．7％；A、B两组尿蛋白≥6g／24h者分别占58．8％ vs 32．1％；尿红细胞满视野分别为14．7％ vs 50％。A组高血压、肾衰竭、镜下尿红细胞满视野发生率显著低于B组（P〈0．01），尿蛋白≥6g／24h发生率显著高于B组（P〈0．01）。A组平均动脉压、血肌酐明显低于B组（P〈0．01）；而尿蛋白定量、血红蛋白显著高于B组（P〈0．05）。多因素分析显示IgA肾病肾病综合征患者肾脏病理损害重的危险因素有平均动脉压、尿蛋白〈6g／24h、镜下尿RBC〉5．0×10^7／L（0R值分别为1．048，3．227，6．578；P值分别为0．034，0．047，0．002），血红蛋白是保护性因素（OR=0.723，P=0．035）。随着平均动脉压的升高、血红蛋白的降低、镜下尿红细胞数的增多，肾脏病理损害程度加重（P〈0．01）。结论：IgA肾病肾病综合征患者临床、病理表现存在差异，高血压、血红蛋白水平、24h尿蛋白排泄量、镜下尿红细胞程度有助于判断肾脏病理损害轻重。     

123例原发性IgA肾病患者临床特点与病理分析

目的：探讨原发性IgA肾病患者临床表现、病理特点及其相关性。方法：回顾性总结分析123例经肾活检病理确诊为原发性IgA肾病的临床和病理资料。结果：123例IgA肾病患者在21岁～40岁年龄段发病率最高（占65.8%）;临床表现以发作性肉眼血尿最多见（占36.6%）;病理类型分级以Ⅱ级（56.1%）,Ⅲ级（20.3%）为主;病理类型与临床表现呈正相关（P〈0.01）;随着Lee氏病理分级程度的增高,血肌酐、血尿酸、血脂有不同程度的升高（P〈0.05）。结论：IgA肾病临床类型多样,其组织形态学改变轻重不一,宜尽早做肾活检以明确诊断,指导治疗。     

氯沙坦在大鼠IgA肾病小管间质损伤中的保护作用

目的应用氯沙坦对大鼠IgA肾病模型进行干预,观察其对IgA肾病小管间质损害的影响。方法采用牛血清白蛋白（BSA）＋脂多糖（LPS）＋四氯化碳（CCl4）方法建立IgA肾病大鼠模型,设立正常对照组（A组）、IgA模型组（B组）、氯沙坦治疗组（C组）,每组6只,实验前后进行相关生化指标的测定,光学显微镜观察肾脏的组织形态学改变;免疫组织化学法观察各组转化生长因子β1（TGF-β1）、α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达;逆转录聚合酶链（RT-PCR）方法检测TGF-β1、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）变化。结果B组尿蛋白量增高,C组则有所降低（P〈0．05）;实验前、后,B组肾功能改变显著,C组变化无统计学意义（P〉0．05）;B组大鼠肾脏组织中存在不同程度的系膜细胞增生,肾小管上皮细胞肿胀、空泡变及间质炎细胞浸润,而C组上述变化减轻;免疫组织化学法及RTPCR检测显示TGF-β1、α-SMA及MCP-1在A组肾小管及间质中微量表达,B组高表达,C组表达减少。结论IgA肾病存在肾小管间质的损伤;氯沙坦减少IgA肾病大鼠尿蛋白的排泄,抑制炎症及纤维化因子的表达,对IgA肾病小管间质的损伤起保护作用。