免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生-高效液相色谱荧光法测定保和系列制剂中黄曲霉毒素

目的 研究建立光化学柱后衍生-高效液相色谱( HPLC) -荧光检测器测定保和系列制剂中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的方法.方法 70％甲醇提取样品,免疫亲和柱净化后,经高效液相色谱分离,由光化学柱后衍生,通过荧光检测器测定.结果 在优化条件下,黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1分别在0.064 6～3.230 ng、0.1992 ～9.960 ng、0.0684～3.420ng、0.1954～9.770 ng的范围内有良好的线性关系,r＞0.9996,回收率在85.5％ ～ 114.6％之间,RSD＞8.结论 该方法快速简便,灵敏度高、重现性好,对68个生产企业生产的3个剂型148批保和制剂进行了检测,结果表明该方法可作为保和系列制剂中黄曲霉毒素的检测,保和制剂黄曲霉毒素状况较好.     

IAC-HPLC-ESI-MS/MS法测定不同产地柏子仁中4种黄曲霉毒素

目的 建立 IAC-HPLC-ESI-MS/MS法测定不同产地柏子仁 Platycladus orientalis(L.)Franco中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量.方法 柏子仁70％甲醇提取物的分析采用HALO 90A C18色谱柱(2.1 mmx100 mm,2.7 μm);流动相0.1％甲酸-甲醇,梯度...     

远志黄曲霉毒素检测及其贮藏过程中黄曲霉菌变化研究

目的 研究不同产地远志中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂（AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂）的污染情况及贮藏过程中黄曲霉菌的变化。方法 收集12批不同产地的远志药材,采用性状、显微及DNA分子鉴定方法对其表面的黄曲霉菌进行鉴定;利用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定其黄曲霉毒素含量;通过稀释平板法观察远志在北京贮藏6个月以来其表面黄曲霉菌的变化情况。结果 12批远志药材表面均分离鉴定出了黄曲霉菌,且全部检出黄曲霉毒素,其中33.3%的样品超过《中华人民共和国药典》2020年版中远志项下黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素总量的限定标准。结合北京的气候条件分析,在温度、湿度较高的夏季,远志表面的黄曲霉菌数量最多,在温、湿度较低的秋冬季节,远志表面的黄曲霉菌数量较低。结论 远志表面黄曲霉毒素污染问题十分严重,贮藏条件的温度、湿度变化对远志表面的黄曲霉菌数量有很大影响,可作为优化远志贮藏条件的参考依据。     

免疫亲和柱净化柱后光化学衍生高效液相色谱-荧光检测法同时测定制马肾中4种黄曲霉毒素

目的:建立免疫亲和柱净化柱后光化学衍生高效液相色谱-荧光检测法同时测定制马肾中黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂的含量。方法:样品采用70%甲醇作为提取溶剂，经免疫亲和柱净化、高效液相色谱分离、光化学柱后衍生后，通过荧光检测器测定其中黄曲霉毒素的含量。结果:黄曲霉毒素B₁的线性范围为0.0104～0.0520 ng(r=0.999 9)、黄曲霉毒素B₂的线性范围为0.0038～0.0190 ng(r=0.999 8)、黄曲霉毒素G₁的线性范围为0.0108～0.0540 ng(r=0.999 8)、黄曲霉毒素G₂的线性范围为0.0038～0.0190 ng(r=0.9998),线性关系良好，回收率在89.68%～101.44%之间，RSD≤3.5%。结论:该方法操作简便，灵敏度高、重复性好、结果准确，可用于制马肾中黄曲霉毒素的测定。     

快速液相色谱-串联质谱法测定果实类药材中的黄曲霉毒素

目的 建立中药材中4种黄曲霉毒素测定的快速液相色谱-串联质谱方法。方法 样品经体积分数70%甲醇提取、免疫亲和柱净化,岛津Shim-pack XR-ODS色谱柱,用甲醇-乙腈（1∶1）和水为流动相,梯度洗脱,ESI扫描,多反应监测（MRM）。结果 黄曲霉毒素B₁在0.102 1~10.21 ng·mL内、黄曲霉毒素B₂在0.061 2~7.65 ng·mL内、黄曲霉毒素G₁在0.193~9.65 ng·mL内、黄曲霉毒素G₂在0.121~7.55 ng·mL内,线性关系均良好,r＞0.999 8;4种黄曲霉毒素回收率在77.0％~102.4％之间。结论 本方法准确可靠,适合中药材中4种黄曲霉毒素含量的测定。     

UHPLC-QqQ-MS测定蒲地蓝消炎口服液中12种成分的含量

目的:建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法同时测定蒲地蓝消炎口服液中汉黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩素、白杨素、木犀草素、咖啡酸、乙酰紫堇灵、紫堇灵、原阿片碱、水杨酸、尿嘧啶、腺苷的含量测定方法。方法:采用Agilent Extend C_(18)色谱柱(3. 0 mm×150 mm,3. 5μm);流动相甲醇-水(0. 1%甲酸),梯度洗脱;流速0. 3 m L·min~(-1)。采用三重四极杆质谱检测器,电喷雾离子化源(ESI),动态多反应监测(DMRM)模式,正、负离子交替模式检测。结果:12种对照品峰型良好具有良好专属性,汉黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩素、白杨素、木犀草素、咖啡酸、乙酰紫堇灵、紫堇灵、原阿片碱、水杨酸、尿嘧啶、腺苷分别在0. 062 24～16. 24,33. 95～530. 4,0. 013 64～3. 558,0. 001 157～0. 302 4,0. 001 199～0. 313 0,0. 014 64～3. 821,0. 000 739 5～0. 038 59,0. 060 83～3. 174,0. 002 443～0. 637 4,0. 021 80～1. 138,0. 022 99～6. 000,0. 006 046～1. 578μg·L~(-1)线性关系良好,精密度、稳定性、重复性良好。汉黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩素、白杨素、木犀草素、咖啡酸、乙酰紫堇灵、紫堇灵、原阿片碱、水杨酸、尿嘧啶、腺苷平均加样回收率分别为98. 9%,100. 2%,106. 9%,100. 8%,101. 7%,99. 3%,94. 6%,100. 0%,100. 5%,103. 4%,96. 8%,98. 1%。结论:该方法样品处理简便,专属性强,灵敏度高,检测结果可靠,为蒲地蓝消炎口服液的质量提升奠定了基础。     

UPLC-MS-MS测定不同厂家银杏叶提取物中4种萜内酯的含量

目的:建立超高效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-MS-MS),同时测定不同厂家银杏叶提取物中4种萜内酯的含量。方法:采用ACQUITYTMUPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相水-甲醇(70∶30),流速0.4m L·min-1,柱温30℃;Waters XevoTMTQ质谱仪以多反应离子监测(MRM)方式进行负离子检测。结果:所测成分在5.0 min内分离良好,在相应的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均0.992 3;加样回收率为98.13%~102.08%,RSD均3%。不同厂家生产的银杏叶提取物中总萜内酯的含量具有一定的差异,但均符合2010年版《中国药典》一部的要求。结论:该方法简便、快速、重复性好,专属性强,适用于银叶提取物中萜内酯类成分的快速定量分析。     

免疫亲和净化HPLC柱后光化学衍生荧光法测定动物药中黄曲霉毒素

目的采用免疫亲和净化HPLC柱后光化学衍生荧光检测法测定动物药中黄曲霉毒素,考察该方法在动物药黄曲霉毒素测定中的可行性。并对动物药中黄曲霉毒素污染情况进行筛查,为动物药的监管提供依据。方法样品经有机溶剂提取、免疫亲和柱净化后,利用高效液相色谱-光化学衍生-荧光检测器进行分析测定。对部分动物药,尤其是可能污染黄曲霉毒素的动物药进行加样回收率考察,测定动物药中黄曲霉毒素残留量,并对测定结果进行分析。结果动物药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的回收率均在70%~120%。16种64批动物药中有6种24批动物药检出了黄曲霉毒素,检出率为37.5%,其中4种13批动物药均出现了超过《中国药典》2015年版限度的现象,不合格率为20.3%。结论免疫亲和净化HPLC柱后光衍生荧光检测法适用于动物药中黄曲霉毒素的测定。动物药的个别品种黄曲霉毒素污染情况较为严重,应尽快完善动物药的质量标准,保障用药安全。     

UPLC-QQQ-MS测定中药材中马兜铃酸Ⅰ的含量

目的:利用UPLC-QQQ-MS建立复杂中药基质中马兜铃酸Ⅰ的定性定量测定方法。方法:以马兜铃科中药材及其易于混淆的中药材为研究对象,色谱分离使用Agilent ZORBAX XDB-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),流动相0.2%甲酸水溶液-甲醇梯度洗脱,流速0.2 m L·min~(-1),柱温35℃,采用电喷雾离子源(ESI源),正离子模式下,多反应监测模式(MRM)检测,以吲哚美辛为内标计算浓度。结果:马兜铃酸Ⅰ质量浓度在21.65~1 732μg·L~(-1)线性关系良好(r=0.997 2),加样回收率为82.87%~89.22%,平均加样回收率86.07%(n=6),RSD 2.5%,精密度及方法重复性均良好。基于这个方法笔者将从全国各地收集来的中药材进行定向马兜铃酸Ⅰ含量的检测,结果精准可信。结论:该方法简便,快速,灵敏度高,专属性强,可以用于含有或者可能含有马兜铃酸Ⅰ成分中药材的检测。结果表明,不同种类药材中马兜铃酸Ⅰ的含量差异明显,尤以朱砂莲中马兜铃酸Ⅰ含量最高。同时,该检测结果也可为马兜铃科中药材中马兜铃酸Ⅰ的限量及其合理使用提供实验基础和参考依据。     

免疫亲和柱净化HPLC柱后光化学衍生法测定34批中药材中黄曲霉毒素G_2、G_1、B_2、B_1

目的建立HPLC柱后光化学衍生法检测中药材中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1方法。方法样品经过70%甲醇提取、免疫亲和柱净化后,采用HPLC柱后光化学衍生-荧光检测器检测中药材黄曲霉毒素含量。对疑似成分进行液质确认。结果黄曲霉毒素G2和B2,G1和B1分别在0.75～22.5 pg和5～75pg线性关系良好,方法准确稳定。检测的34批次药材中,3批酸枣仁检出黄曲霉毒素,其中1批酸枣仁黄曲霉毒素B1超过5μg·kg-1。结论该方法简便、准确,适用于中药材黄曲霉毒素的检测。     

RP-HPLC同时测定天麻中4种成分的含量

目的：建立RP-HPLC同时测定天麻药材中天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛的含量。方法：采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇-0.1%醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长270 nm,柱温35 ℃。结果：天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛分别在19.1～383 μg·mL^-1(r=0.999 9),0.620～12.4 μg·mL^-1(r=0.999 9),2.45～49.0 μg·mL^-1(r=0.999 9),0.280～5.63 μg·mL^-1(r=0.999 6)与峰面积线性关系良好;平均加样回收率(n=9)均在96.7%～97.7%,RSD均小于1.6%。结论：本法准确可靠,分离度好,适用于天麻药材中天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛的含量测定。     

RP-HPLC同时测定天麻中4种成分的含量

目的:建立RP-HPLC同时测定天麻药材中天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛的含量.方法:采用Kromasil C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.1%醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min~(-1),检测波长270 nm,柱温35℃.结果:天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛分别在19.1～383(r=0.999 9),0.620～12.4(r=0.999 9),2.45～49.0(r=0.999 9),0.280～5.63 mg·L~(-1)(r=0.999 6)与峰面积线性关系良好;平均加样回收率(n=9)均在96.7%～97.7%,RSD均小于1.6%.结论:本法准确可靠,分离度好,适用于天麻药材中天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛的含量测定.     

天麻饮片等级研究

探讨天麻饮片等级分类方法。在文献研究及产地调研的基础上,结合传统评价和现代评价方法综合评价天麻饮片,并对其进行等级分类。根据调研,天麻药材已有等级分类,饮片大都以统货形式销售;所调查的中药饮片生产企业、医院及药房销售的天麻饮片并未分级;对已分级的饮片一般只有一级和统货2个等级,而只有冬麻加工的饮片有分级。天麻饮片等级的综合评价有助于提高饮片质量,实现"优质优价",该研究可为其他中药饮片的等级划分提供思路和借鉴。     

基于主成分分析的天麻矿质元素含量研究

目的:研究不同来源天麻矿质元素含量,分析天麻特征元素及评价药材质量。方法:采用ICP法对不同来源的天麻药材必需的磷(P),钾(K),钙(Ca),镁(Mg),铁(Fe),锌(Zn),硼(B),锰(Mn),铜(Cu)等10种矿质元素含量进行测定,用主成分分析法分析天麻特征元素并对药材质量进行评价。结果:天麻药材中K元素含量最高,平均为15.31 g·kg-1;其次是N元素,平均含量为8.99 g·kg-12元素变异系数小;Mn元素含量的变异系数最大,为51.39%;N,P,K元素间达极显著正相关;主成分分析选择3个主成分对药材质量进行评价,发现天麻药材特征元素为P,B,N,K,Cu,Mn,Fe,Mg等8种元素。结论:天麻K和N元素含量高,且相对稳定;Mn元素含量差异大;其中P,B,N,K,Cu,Mn,Fe,Mg等8种元素是天麻特征元素;从矿质元素角度分析30份天麻资源中贵州、云南天麻药材质量较好。     

不同产地和规格等级天麻矿质元素分析与评价

目的:研究不同产地和规格(变型)等级天麻中矿质元素的分布特征及分类鉴定依据.方法:采用原子吸收分光光度法、钼锑抗比色法和姜黄比色法对31批次不同产地和规格(变型)等级天麻样品中14种矿质元素进行测定,运用相关性分析、判别分析与主成分分析对测定结果进行系统分析与评价.结果:天麻中K,N,P元素含量高,为影响天麻生长的营养...     

天麻种植对土壤微生物群落结构的影响分析

目的:分析不同生境种植天麻前后土壤微生物的群落结构变化,探讨土壤微生物对种植天麻的响应程度。方法:对贵州大方和安徽金寨未种植天麻土壤(CK1和CK2),采收前天麻块茎周围土壤(GE1和GE2)和蜜环菌菌索周围土壤(AGE1和AGE2)进行ITS和16S rDNA测序分析。结果:PCA主成分分析说明与对照土壤相比,种植天麻后土壤微生物发生较大改变。测序结果分析发现种植天麻使得土壤中真菌和细菌OTUs数目均有一定的增加。与对照土壤相比,贵州大方种植天麻后的土壤真菌和细菌群落的多样性及丰度均呈增加的趋势;安徽金寨种植天麻后的土壤真菌的多样性及丰度变化不大,土壤细菌群落丰度增加。二者土壤中土赤壳属Ilyonectria,硝化螺菌属Nitrospira的相对丰度显著升高,红菇属Russula的相对丰度显著降低;贵州大方土壤中镰刀菌属Fusarium,被孢霉属Mortierella的相对丰度显著增加。结论:种植天麻后土壤微生物平衡被打破,并且土赤壳属Ilyonectria,镰刀菌属Fusarium等病原微生物丰度增加,推测与天麻病虫害有一定的相关性。     

天麻褐腐病与土壤微生物菌群结构的关联分析

目的:研究褐腐天麻与土壤微生物菌群的组成及变化,阐述天麻种植过程中天麻褐腐病与土壤微生物菌群之间的关系,为揭示天麻褐腐病的原因提供理论基础。方法:采用内转录间隔区(ITS)和16S rDNA高通量测序技术,分别对健康、褐腐天麻及其周际土壤中真菌和细菌的微生物多样性、群落组成结构、群落结构相似性进行分析。结果:与健康组相比,褐腐天麻及其土壤中真菌和细菌分类单元(OTUs)数目均有增加,且土壤中真菌、细菌丰富度和多样性显著增高,褐腐天麻真菌多样性显著降低,细菌多样性显著增高。在属分类水平上,健康天麻及其周际土壤中的优势真菌属为被孢霉属Mortierella,该属在褐腐天麻及其土壤中分别减少7.62%和15.75%,优势细菌属为慢生根瘤菌属Bradyrhizobium和Burkholderia-Paraburkholderia;褐腐天麻及其周际土壤中的优势真菌属为土赤壳属Ilyonectria,优势细菌属分别为沙雷氏菌属Serratia和慢生根瘤菌属Bradyrhizobium。结论:褐腐天麻与其周际土壤中真菌菌群具有极高相似度,说明土壤微生物真菌群落变化在一定程度上造成天麻褐腐病的发生,其中褐腐天麻真菌群落组成中致病真菌土赤壳属Ilyonectria成为优势菌属,推测该菌属可能含有天麻褐腐病的致病菌。     

不同产量下天麻根际土壤微生物多样性分析

目的 分析不同产量下天麻根际微生物的多样性,探讨土壤微生物对天麻产量的影响。方法 该试验采用16S DNA和内转录间隔区（ITS）序列高通量测序对天麻根际土壤中高产土样（GC）和低产土样（DC）下的细菌和真菌群落多样性进行分析。结果 天麻根际土壤中细菌占主导地位的有变形杆菌门Proteobacteria、厚壁菌门Firmicutes和其他不明细菌unidentified Bacteria,真菌占主导的为子囊菌门Ascomycota、担子菌门Basidiomycota、被孢霉门Mortierellomycota;高产和低产天麻根际土壤中微生物群落丰度没有差异,仅在群落组成上存在显著差异,高产天麻根际土壤中慢生根瘤菌Bradyrhizobium、施氏乳酸杆菌属Schleiferilactobacillus、古根菌属Archaeorhizomyces等38属微生物大量聚集,低产天麻根际土壤中则镰刀菌属Fusarium、鬼伞属Coprinellus、氨氧化古菌属Nitrosotalea等30属微生物大量聚集;在属和种的水平上,发现6个差异物种,绒紫红菇Russula mariae、古根菌属Archeaeorhizomyces、土赤壳属Ilyonectria偏向集中于高产天麻根际土壤中,氨氧化古菌属Nitrosotalea、簇生鬼伞Coprinellus disserminatus、镰刀菌属Fusarium则偏向集中于低产天麻根际土壤中。结论 在不同产量下,天麻根际土壤中的真菌群落和细菌群落中均存在差异微生物,推测这些微生物与天麻产量高低有关,研究结果可为后续天麻的高产研究提供重要的理论基础。     

基于转录组测序初步揭示天麻生长代谢的分子机制

目的 以箭麻(天麻Gastrodia elata的一个生长阶段)和共生天麻(白麻与蜜环菌共生的天麻)为实验材料,通过转录组测序分析初步揭示箭麻和共生天麻生长代谢特征.方法 采用Trizol Reagent(Invitrogen)提取天麻样品中的RNA,建立测序文库并利用Illumina HiseqTM2000进行测序,...     

天麻花茎的化学成分研究

目的 研究天麻Gastrodia elata花茎的化学成分。方法 利用硅胶、Sephadex LH-20等各种色谱技术进行分离纯化,通过核磁图谱、IR、UV、质谱等多种方法并结合文献对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果 从天麻花茎95%乙醇提取物的醋酸乙酯萃取物中分离得到13个化合物,分别鉴定为(S)-6,12-二羟基-9-甲氧基-3,3-二甲基-8,9-二氢-3H,7H-苯并[2,3]氧杂?并[4,5-b]吡喃并[2,3-h]苯并吡喃-7-酮（1）、2-(2,4-二羟基苯基)-5-羟基-3-(2-羟基-3-甲基丁-3-烯-1-基)-8,8-二甲基-4H,8H-吡喃并[2,3-f]苯并吡喃-4-酮（2）、桑黄酮C(3)、黑桑素H(4)、新环桑色烯（5）、morusin hydroperoxide(6)、桑辛素（7）、licofavone C(8)、环桑素（9）、交链孢酚（10）、3,4-dihydroxy-benzoic(11)、对羟基苯甲醇（12）、N-trans-grossamide(13)。结论 化合物1为新化合物,命名为降环桑色烯;化合物2～9为首次从该植物中分离得到。