免疫球蛋白基因的重组与表达的调控

免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是由B淋巴细胞产生的一类重要免疫识别因子,在机体的体液免疫中发挥重要作用。近年来,对Ig基因在B淋巴细胞中的结构变化,表达及表达的调控有了比较深入的了解。本文将对这方面的研究作介绍,重点是Ig基因表达的调控。     

草鱼出血病灭活疫苗上调草鱼脾细胞主要免疫分子的表达

目的探讨草鱼出血病灭活疫苗对草鱼脾脏中Ig M、主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)、1型干扰素(IFN1)、补体3(C3)、白细胞介素1β(IL-1β)、内凝集素(intelectin)相关基因表达的影响。方法用草鱼肾细胞系(CIK)培养草鱼呼肠孤病毒(GCRV),并制备草鱼出血病灭活疫苗,用生理盐水稀释成50倍和100倍,包括未稀释组及生理盐水对照共4组。分别腹腔免疫注射健康草鱼,各组分别于免疫后0、6、12、24、72 h,取脾脏并抽提总RNA,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测上述6种免疫相关基因mRNA表达。结果与生理盐水对照组相比,免疫注射不同剂量的草鱼出血病灭活疫苗均能刺激草鱼脾脏中6种主要免疫分子不同程度的表达上调,表明疫苗刺激草鱼机体启动了非特异性和特异性免疫应答。在3个疫苗免疫组中,intelectin、MHCⅠ、IL-1β、C3基因的相对表达量都随着时间的推移出现先表达上调,后表达下调;基因IFN1的相对表达量在免疫后6 h达到峰值,之后下降至正常水平;Ig M的相对表达量在所检测时间内呈逐渐上调的趋势。结论草鱼出血病灭活疫苗均能诱导草鱼脾脏中免疫相关分子基因的表达上调。     

抗bFGF McAb制备、鉴定及轻链可变区基因克隆和序列分析

目的以重组人碱性成纤维细胞生长因子为抗原免疫小鼠,建立多株稳定分泌bFGF单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞.并对bFGF单克隆抗体(McAb)可变区基因进行扩增及序列分析.方法采用Western blot法和免疫沉淀法对抗体特异性和Ig类型进行鉴定,同时,应用分子生物学技术,对Vk基因的DNA片段进行克隆,并对4a2Vk基因进行序列测定.结果bFGF单克隆抗体可特异性结合人重组bFGF抗原,且均为IgM.由杂交瘤4a2、3d3细胞株扩增Vk基因是由330个碱基组成,编码110个氨基酸残基.通过国际联机检索进行EMBL和Kabat基因库扫描发现,4a2VkDNA仅与Ig同源,符合小鼠Ig的Vk基因特征;同源性为90%～98%,应归属于Ig的Vk基因.结论杂交瘤4a2、3d3细胞株可稳定分泌bFGF单克隆抗体,并获得其轻链可变区基因,为进一步构建和表达单链Fv(ScFv)抗体打下良好的基础.     

亲和层析法纯化大鼠单克隆抗体

本文着重介绍Lou大鼠杂交瘤系统免疫亲和层析纯化法。该法简便易行,快速特异,能较好地解决宿主免疫球蛋白(Ig)污染问题,有推广价值。其原理是95％大鼠Ig轻链为k型,其k轻链恒定区有二个不同个体基因(1a、1b),定位稳定,利用小鼠抗大鼠k-1a型轻链     

腺病毒介导CTLA4Ig基因修饰骨髓间质干细胞体外抑制免疫应答的研究

目的:通过腺病毒载体介导CTLA4Ig在大鼠骨髓间质干细胞(MSC)中的表达,探讨MSC作为基因转移靶细胞的可行性和转染效率,研究其在体外对免疫应答的抑制作用。方法:构建含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体pAd-CTLA4Ig,按照不同的感染倍率(MOI)转染大鼠MSC,用荧光显微镜和流式细胞仪分析转染效率,流式细胞术、Westernblotting等方法检测目的蛋白CTLA4Ig在MSC中的表达。将转基因MSC加入混合淋巴细胞反应(MLR)体系,观察其抑制淋巴细胞增殖的生物学效应。结果:重组腺病毒载体pAd-CTLA4Ig对MSC的最大转染率为80.7%±4.7%,转基因MSC可检测到目的蛋白的表达。基因修饰的MSC能有效抑制MLR体系中淋巴细胞的增殖,4d达到最大抑制效率51.46％;再次MLR证实这种抑制作用是供者特异性的。结论:MSC是一种较理想的基因转移靶细胞,其表达的转基因产物CTLA4Ig可在体外特异性地抑制免疫应答。     

CML急变的Ig和TCR基因双重排

免疫球蛋自(Ig)和T细胞受体(TCR)基因重排可分别作为B细胞系和T细胞系的遗传学标记。约25%ALL,甚至AML,尤其是末端转脱氧核苷酸酶(TdT)阳性AML可有Ig和TCR基因双重排。CML急淋变多数源于有Ig基因重排的B细胞克隆,部分起源于有TCR基因重排的T细胞克隆。本文首次报告一例有IgH和TCR(β、δ)基因双重排,慢性期长达7年多的急淋变Ph~+CML。     

以TF为靶点的裸DNA疫苗脾内转染对结直肠癌的免疫抑制作用

目的:探讨以组织因子(tissue factor,TF)为靶点的裸DNA疫苗pγ1.Ig H.SPTT重组质粒脾内单次注射对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)的免疫抑制作用。方法:采用分子生物学技术构建携带TF靶向肽SPTT和免疫球蛋白H链基因的裸DNA质粒pγ1.Ig H.SPTT,质粒脾内单次注射后,检测外周血转基因产物SPTT-Ig H浓度,分析质粒脾内转染效率、特性及其对CRC的作用。结果:重组pγ1.Ig H.SPTT质粒脾内单次注射后第4周脾组织即有SPTT-Ig H融合基因强表达,12周强度开始下降,至16周消失;转染质粒后第2周外周血SPTT-Ig H浓度为7.2μg/L,后逐渐升高,第8周达高峰为13.11μg/L;质粒脾内注射后转录基因定向在脾组织表达,淋巴结、骨髓、肝、肾、等组织未发现目的基因转染;pγ1.Ig H.SPTT重组质粒脾内转染对结直肠癌具有抑制作用(P0.01)。结论:以TF为靶点的裸DNA疫苗pγ1.Ig H.SPTT单次脾内注射可以激发机体对结直肠癌的保护性免疫反应,是治疗CRC的一种安全有效的免疫方法。本课题研究为裸DNA疫苗抗肿瘤免疫治疗提供了新的思路。     

在台湾HLA-DPB1*0201等位基因与室内灰尘螨变应原特异免疫球蛋白E应答的负相关性

目的　室内灰尘螨 (HDM)在台湾是引起变态反应最重要的室内变应原来源 ,作者准确纯化了 HDM变应原以检测大量实验对象中变应原特异的 Ig E应答 ,从而调查 HL A- 类等位基因和 Ig E对 HDM的主要变应原应答的关系 ,健全的 HL A基因定型系统为针对 HDM的变应原应答研究提供了便利。方法　我们准确地纯化了 HDM变应原 (Derpl、 Derp2和 Derp5 ) ,选择 2 48个实验对象应用于 HLA关系的研究。血浆 HDM变应原特异的 Ig E和 Derp2特异的 Ig G抗体测定采用 ELISA法 ,HLA - 类基因多态性测定采用 PCR/SSOP法 ;对于血浆内含有和…     

BIOMED-2引物系统检测急性淋巴细胞白血病患者免疫球蛋白基因重排

目的 探讨BIOMED-2引物系统检测成人急性淋巴细胞白血病(ALL)患者Ig基因重排的敏感性,分析Ig基因重排方式、各胚系基因的利用频率等.方法 采用BIOMED-2引物系统扩增29例成人ALL患者Ig重链(IgH)和Ig轻链(IgL)重排基因.将PCR产物直接测序,使用IMGT/V-QUEST等生物信息资源分析B细胞-ALL(B-ALL)患者IgH和IgL基因重排类型、胚系基因片段利用及体细胞突变情况.结果 24例B-ALL患者中IgH完全重排阳性率为70.8%,不完全重排为12.5%,IgK VH-JH重排为29.2%,IgK删失元件(IgK-Kde)重排为25.0%,未检测出IgL阳性重排.所有B-ALL患者Ig基因重排检出率可达100%.5例T细胞-ALL(T-ALL)患者1例检测到IgH不完全重排阳性,2例IgK VH-JH重排阳性,2例未检测出Ig基因重排.B-ALL中IgH重排优先利用的V、D、J家族分别为VH3和VH4、DH3和JH6.5例IgK重排中4例利用了 Vκ1家族.重排基因中发生替代突变的基因占23.5%.替代突变零星散布于Ig基因全长,互补决定区中替代突变与静寂突变的比例<1.结论 BIOMED-2引物系统可以检测出绝大多数B-ALL患者的Ig基因重排,国内的临床检测资料亦然.这是一种有效的检测工具,为定量分析微小残留病(MRD)水平提供了基础资料.     

TREMs受体的研究新进展

TREMs(triggeringreceptorsexpressedonmyeloidcells)是免疫球蛋白超家族的新成员。迄今为止 ,人们已发现 5个TREM基因 ,位于人类 6号染色体 ,小鼠 17号染色体 ,其中TREM1 4编码有潜在功能的I型跨膜球蛋白。TREMs受体表达于髓细胞不同亚群表面 ,表现为单一的细胞外Ig样区域 ,已发现的TREMs受体均通过接头蛋白KARAP DAP12进行信号转导 ,对机体炎症反应及免疫应答起重要调节作用。     

MALToma Ig重链蛋白、IgH基因重排/断裂检测的临床意义

目的探讨Ig重链蛋白、IgH基因重排/断裂在黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma,MALToma)诊断中的应用价值。方法选取40例MALToma作为实验组,15例反应性淋巴组织增生(reactive lymphoid hyperplasia,RLH)作为对照组,应用免疫组化、PCR、FISH技术分别检测两组中Ig重链蛋白、IgH基因重排、IgH基因断裂情况。结果(1) Ig重链蛋白表达根据免疫组化结果可分为三种模式:单种Ig重链蛋白表达(模式Ⅰ)、Ig重链蛋白全阴性(模式Ⅱ)、多种Ig重链蛋白表达(模式Ⅲ)。实验组模式Ⅰ/Ⅱ的阳性率(87. 5%)显著高于对照组(0)(P 0. 01)。(2)实验组IgH基因重排、IgH基因断裂的阳性率分别为72. 5%(29/40)、32. 5%(13/40),而对照组未检出IgH基因重排、IgH基因断裂(P 0. 01,P 0. 05)。(3) Ig重链蛋白模式Ⅰ/Ⅱ和IgH基因重排联合检测以及Ig重链蛋白模式Ⅰ/Ⅱ、IgH基因重排和IgH基因断裂联合检测的阳性率均高达97. 5%。(4)在Ig重链蛋白模式Ⅱ中,有9例检出IgH基因断裂(90%);在模式Ⅰ/Ⅲ中,仅有4例检出IgH基因断裂(13. 3%),两组相比差异有统计学意义(P 0. 01)。Ig重链蛋白表达和IgH基因断裂呈正相关(rs=0. 323,P0. 05)。结论联合检测Ig重链蛋白表达模式和IgH基因重排可有效辅助鉴别MALToma和RLH; IgH基因断裂可能与Ig重链蛋白表达缺失高度相关。     

B细胞的分子免疫学

B细胞(B_C)是机体特异性体液免疫反应中的主要免疫活性细胞。在抗原刺激下,B_C分化成浆细胞并分泌Ig,参与病原微生物等异物的杀灭、清除作用,以维护机体的正常生理平衡。近来,对B_C的结构、功能,分化、成熟,以及激活、耐受等问题进行了大量研     

腺病毒载体介导的CTLA4-Ig基因转移促进异基因小鼠皮肤移植耐受

目的　探讨CTLA4 Ig重组腺病毒 (AdCTLA4 Ig)促进“脾细胞 (spleencells ,SP) 环磷酰胺 (cyclophosphamide ,CP)”系统诱导移植耐受的作用及其机制。方法　BALB c(H 2 d)小鼠经尾静脉注射C57BL 6(H 2 b,B6)小鼠脾细胞和AdCTLA4 Ig颗粒 ,48h后腹腔注射环磷酰胺 ,并同天进行皮肤移植 ,于耐受 2 5d时对受体小鼠进行混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)、迟发型超敏反应 (delayedtypehypersensitivity ,DTH)等耐受状态的检查。结果　B6小鼠的皮肤移植物在耐受的BALB c小鼠中存活期特异延长。MLR和DTH检验证明BALB c小鼠对B6小鼠的脾细胞产生特异性耐受 ,对无关第三者ICR小鼠的脾细胞仍表现出强烈免疫应答。结论　AdCTLA4 Ig颗粒可以明显促进“细胞 环磷酰胺”诱导的异基因皮肤移植耐受 ;克隆排除和克隆无能是耐受诱导的主要因素     

卵巢癌患者的免疫功能探讨

目的分析卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白的变化,监测卵巢癌患者的免疫功能水平。方法用流式细胞仪测定45例卵巢癌患者、35例卵巢良性肿瘤患者和30名健康对照组的外周血T淋巴细胞亚群,采用免疫比浊法测定3组样本血清Ig A、Ig G、Ig M含量。结果卵巢癌患者全血CD8+明显高于健康对照组(P<0.05),而血CD4+及CD4+/CD8+比值则显著低于健康对照组(P<0.05)。Ig G、Ig M水平均高于对照组(P<0.05),而Ig A水平两组无显著差异(P>0.05)。外周血T淋巴细胞亚群和免疫球蛋白的改变与卵巢癌病理分期有关,分期越晚,CD4+及CD4+/CD8+比值越低,CD8+、Ig G、Ig M水平越高,Ⅱ期与Ⅲ期、Ⅳ期之间有显著性差异(P<0.05)。结论卵巢癌患者细胞免疫功能降低,体液免疫功能增强。外周血T细胞亚群和免疫球蛋白的检测对判断卵巢癌患者的病情、预后以及机体的免疫功能的判断有一定意义。     

抗体独特型的分子定位

免疫应答的效应分子免疫球蛋白(Ig)是针对抗原分子的、具有抗体功能的蛋白质分子,但它本身也是一种抗原物质。Ig的结构比较复杂,不同的结构部分,各有特异的抗原性。一般将Ig的抗原性分为三种类型,即同种型(isotype)同种异型(allotype)和独特型(idiotype)。前二者易于理解,而独特型这一问题系统介绍不多,但在免疫学理论上是极为重要的。本文将介绍独特型的发现,并着重讨论其分子定位。     

第四届国际免疫学会议拾零——1980.7.21~26,巴黎

免疫化学在讨论免疫球蛋白的基因的座谈会上,Leder综合介绍了最新的观点。从有关Ig结构基因的氨基酸排列的资料提示下列各点: (1)Ig的V区的基因多存在于生殖系列(germ-Line)之中。 (2)Ig的1条多肽链接受复数结构基因的控制。 (3)V区基因与C区基因分别存存,在体细胞分化过程中两个基因相结合。     

IgG4 表达调控因素及在疾病发生与治疗中的作用

<正>人类免疫球蛋白G4(Immunoglobulin G4,Ig G4)是Ig Gs的亚型。Ig Gs在初次免疫应答中被较迟分泌,在二次免疫应答中被记忆B细胞大量分泌。Ig Gs依据重链序列、铰链区长度及链间二硫键连接位置和数目的差异,被分为Ig G1、Ig G2、Ig G3和Ig G4[1]。健康个体Ig G4血浆浓度仅为0.08~1.4mg/ml,Ig G4/Ig G比值为0.8%~11.7%。Ig G4因多个特点成为研究的热点。首先在体内,Ig G4能持续地和其他Ig G4进行半分子交换。     

免疫球蛋白轻链基因的结构及其表达

对免疫球蛋白(Ig)基因结构的探索,开始于对各种Ig多肽链氨基酸序列资料的分析。1965年Dreyer和Bennett在对K轻链分析的基础上,提出“两个基因、一个多肽”的假说,推测一条轻链是由分开的两个DNA片段——可变区(V)和恒定区(C)基因分别编码的,通过DNA重新排列,V和C基因连接,才表达出一条完整的多肽链。其后对Ig肽链结构和遗传学标志分析的大量资料,支持并发展了这一假说。1970年Gally和Edelman就进一步提出细胞中必定有许多不同的V基因,特定的Ig生成将涉及体     

细胞致癌基因与免疫球蛋白相碰撞的后果

基因重排(gene rearrangement)是B-淋巴细胞正常分化的基础,正常淋巴细胞是将一个静止的免疫球蛋白Ig可变区(V区)基因片段带到有转录活性的固定区(C区),造成染色体内的DNA断裂。由于观察到Burkitt氏淋巴瘤巾染色体8和小鼠浆细胞瘤中染色体15与带有免疫球蛋白基因的共他三条染色体之间易位的百分比很高,Klein于1981年提出     

两株双价痢疾工程菌苗不同粘膜免疫途径的免疫原性

目的探讨免疫途径、接种剂量及侵袭蛋白表达对两株双价痢疾工程菌苗免疫效果的影响。方法小鼠分为滴鼻、灌胃和对照组 ,分别以不同剂量免疫 3次 ,间隔 2周 ,3次免疫后 7d收集血清、小肠、鼻咽、肺、阴道冲洗液 ,EL ISA法检测其中特异性福氏、宋内氏 L PS- Ig A和 Ig G。结果 4× 10 7CFU菌苗经鼻途径免疫即可诱导多个粘膜部位以及血清双价特异性抗体显著增高 ;菌苗剂量增加 2 0、2 0 0倍时经灌胃免疫诱发较为局限的粘膜特异性抗体增高。结论鼻粘膜免疫不仅诱导多个粘膜部位 (特别是生殖道 )以及系统免疫的抗体反应 ,是一个安全有效的免疫途径。