丁酸钠诱导人肝癌SMMC-7721细胞分化及其作用机理的初步探讨

研究了丁酸钠对人肝癌 SMMC-772 1细胞的诱导分化作用。透射电镜观察可见丁酸钠能诱导肝癌细胞的形态结构向正常方向转变 ;微粒子酶免疫技术 (MEIA)定量检测显示实验组细胞 AFP的分泌量减少 ,与对照组有显著性差异 ;流式细胞仪分析表明丁酸钠引起细胞发生 G0 /G1期阻滞 ;RT-PCR检测结果显示 p2 1WAF1表达随丁酸钠处理时间延长逐渐升高。以上结果表明丁酸钠能逆转肝癌细胞的恶性性状 ,诱导其发生分化。上调 p2 1WAF1的表达可能是丁酸钠诱导肝癌细胞分化的关键因素之一。     

苦参碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的实验研究

目的研究不同浓度的苦参碱对人肝癌SMMC-7721细胞诱导凋亡的作用。方法将不同浓度的苦参碱作用于培养的SMMC-7721肝癌细胞,通过四氮噻唑蓝(MTT)比色法检测各浓度的药物对细胞的抑制增殖作用;光学显微镜、荧光显微镜下形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪(FCM)研究分析其对肝癌细胞的诱导凋亡作用。结果浓度为2.01,4.02,6.04和8.05mmol·L-1苦参碱对SMMC-7721肝癌细胞都有不同程度的抑制增殖作用,抑制增殖作用随药物浓度的增加及作用时间的延长而加强(P<0.001)。光学显微镜、荧光显微镜下观察,发现细胞凋亡现象;DNA琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯形条带;流式细胞仪(FCM)检测分析出现凋亡亚二倍体峰。结论苦参碱对肝癌细胞具有诱导凋亡作用,诱导作用具有明显的量效和时效关系。     

莲房花青素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

目的研究莲房花青素对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响,探讨其抗癌机制。方法以不同浓度的莲房花青素(LSPC)与人肝癌细胞株SMMC-7721细胞共培养,MTT法测定细胞增殖。结果 LSPC可体外抑制肝癌细胞生长,抑制率呈浓度和时间依赖性并随浓度增加而增高。结论莲房原花青素(LSPC)可能通过诱导细胞凋亡抑制人肝癌细胞增殖。     

10-羟基喜树碱诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的探讨

目的：为筛选新的凋亡诱导剂，并对其机制进行研究。方法：用10－羟基喜树碱（10－hydroxycamp-tothecin,10-HCPT）以不同终浓度（0－150μm），不同作用时间（0－24h)诱导体外培养的SMMC－7721人肝癌细胞，按设计时间（24－140h）收集悬浮细胞，贴壁细胞和对照组进行各组间凋亡率，残存率、克服形成率观察。结果：当10－HCPT终浓度＞2．0μm时，部分细胞出现典型凋亡特征，随浓度及作用时间增加，凋亡率也随之升高，残存率下降，克隆形成率明显下，当10＝HCPT浓度＞50μm时，大量凋亡细胞中出现坏死，结论：10－HCPT能诱导SMMC－7721细胞凋亡，其效果与剂量和时间密切相关。     

富硒蚕蛹氨基酸诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

目的　研究富硒蚕蛹氨基酸对人肝癌细胞SMMC 772 1的作用。方法　以人肝癌细胞SMMC 772 1为模型 ,采用原子荧光分光光度计测定蚕蛹硒含量 ,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长及活力 ,用倒置荧光显微镜观察细胞形态学变化 ,流式细胞仪研究细胞的凋亡及细胞周期变化。结果　①陕西紫阳县蚕蛹中硒的含量为普通蚕蛹硒含量的 2 15倍 ,②富硒蚕蛹氨基酸在 0 5、1 5和 2 5 μmol·L-1硒浓度下能显著性抑制肝癌细胞生长 ,并具有浓度和时间依赖性。亚硒酸钠对细胞生长的抑制作用不如富硒蚕蛹氨基酸。相反 ,普通蚕蛹氨基酸促进细胞的生长。③富硒蚕蛹氨基酸作用于细胞后 ,倒置荧光显微镜观察到细胞形态学变化及细胞存活率降低。④流式细胞仪检测到 0 5、1 5和2 5 μmol·L-1富硒蚕蛹氨基酸所致细胞凋亡及细胞周期的变化 ,该氨基酸能阻滞SMMC 772 1的细胞周期于G2 /M期 ,使G2 /M期细胞比例增加 ,而G0 /G1期细胞比例下降。结论　富硒蚕蛹氨基酸能诱导SMMC 772 1细胞的凋亡 ,其抗癌机制可能与其改变细胞周期进而诱导细胞凋亡相关联。     

对甲氧基肉桂醛左氧氟沙星酰腙诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用

目的探讨喹诺酮酰腙类化合物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用。方法用不同浓度的对甲氧基肉桂醛左氧氟酰腙(FQ-10)与SMMC-7721细胞体外培养。MTT法检测FQ-10对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;Hoechst33258/PI双染荧光染色法、TUNEL法及琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡变化;高内涵活细胞成像系统测定细胞线粒体膜电位(△ψm)变化;Western blot方法测定caspase-9、caspase-8、caspase-3、p53、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 FQ-10在0.625～10.00μmol.L-1的浓度范围能抑制细胞增殖,呈时间、浓度依赖性;作用于细胞24 h的IC50值是4.40μmol.L-1;各组FQ-10作用24 h后,细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状DNA条带,并伴有线粒体膜电位降低。荧光染色观察细胞形态学变化,显示凋亡细胞染色质凝集,细胞核碎裂成碎片等典型细胞凋亡特征性变化,晚期凋亡细胞可见特异性PI染色。与对照组比较,FQ-10作用后p53、Bax、caspase-9、caspase-3蛋白表达量增加,其中caspase-9、caspase-3活性裂解片段明显增加,caspase-8无变化,而Bcl-2蛋白表达水平下降。结论对甲氧基肉桂醛左氧氟酰腙能够激活线粒体凋亡通路,诱导人肝癌细胞凋亡。     

亚硝酸钠诱导人肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化

探讨亚硝酸盐诱导人肝癌SMMC-7721细胞发生上皮-间质转化(EMT)的作用。0.25～25 mmol·L-1亚硝酸钠处理细胞48 h后,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中的TGF-β1、IL-6和IL-8水平,相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞移动和侵袭能力,同时采用Western blotting方法检测EMT相关标记蛋白和p-AKT及下游信号分子的蛋白表达水平。结果表明,亚硝酸钠处理人肝癌细胞48 h,可以引起TGF-β1的分泌显著升高,并呈现剂量依赖性。亚硝酸钠对IL-8及IL-6的分泌也具有一定的增加作用,但不具有剂量依赖性。0.25 mmol·L-1亚硝酸钠作用48 h,诱导细胞形态向间质转化,增强波形蛋白和p-AKT及其下游信号蛋白的表达,抑制E型钙黏素蛋白的表达,促进细胞迁移和侵袭能力。结果提示,亚硝酸钠可能通过促进细胞分泌TGF-β1和IL-8,诱导人肝癌SMMC-7721细胞上皮-间质转化。     

没食子酸诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡机制的探讨

目的探讨没食子酸(gallic acid,GA)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其促凋亡的相关分子机制。方法体外培养人肝癌细胞SMMC-7721,MTT法观察细胞在GA作用24、48、72 h后的增殖情况;用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;透视电镜观察细胞内部结构变化;Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;采用RT-PCR技术研究p53 mRNA的变化;应用Western blot法检测p53蛋白水平的表达。探讨GA对人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用及机制。结果剂量为6.25⁵0μmol·L-1GA作用SMMC-7721细胞48 h有明显的增殖抑制活性,引起核固缩、凝聚、碎裂,诱导细胞凋亡,并呈剂量依赖性;RT-PCR和Western blot结果显示,GA能升高p53 mRNA水平和p53蛋白表达。结论 GA可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,诱导凋亡,可能与其上调肿瘤相关抑癌基因p53有关。     

酒精诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡的作用研究

目的 体外观察不同浓度的酒精对肝癌细胞BEL-7402诱导凋亡的作用,为寻求肝癌的治疗提供新思路.方法 不同浓度的酒精与肝癌细胞BEL-7402通过体外培养,MTT法检测细胞增殖的变化;Hoechst 33258/PI 荧光双染色观察细胞形态学变化;蛋白质免疫印迹(Western blotting)半定量分析Caspase-3和p53和Bax的表达变化.结果 药物浓度在100～300 mmol/L的范围显著抑制肝癌细胞增殖,且抑制率随浓度和时间呈依耐性,Caspase-3,Bax和p53的蛋白表达量明显增加.药物浓度在100～300 mmol/L作用48 h,肝癌细胞皱缩,呈现凋亡各期改变,细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05).结论 不同浓度的酒精对肝癌细胞BEL-7402有诱导凋亡的作用,其抑制作用呈浓度和时间依赖性.     

玉米须多糖诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的:观察不同浓度的玉米须多糖(stigma maydis polysaccharide SMPS)对肝癌SMMC-7721细胞作用的影响.方法:将玉米须多糖以不同浓度和时间作用于肝癌SMMC-7721细胞,采用 MTT比色法观察细胞毒性;应用HE染色法观察凋亡细胞的形态;原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡率.结果:玉米须多糖以剂量依赖和时间依赖的方式抑制SMMC-7721细胞的生长.HE染色观察到凋亡细胞的形态学改变.结论:玉米须多糖抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导细胞凋亡.为临床治疗肝癌提供理论依据.     

人肝癌耐药细胞系的建立及生物学特性的研究

目的:培养建立耐药肝癌细胞模型QGY7703/DDP,分析人肝癌耐药细胞系生物学特性的改变.方法:应用人肝癌细胞株QGY7703,采用顺铂(DDP)逐步提高加间歇诱导历时6个月在体外建立QGY7703/DDP细胞系模型.观察该细胞的生长规律,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分析暴露前后细胞的增殖和药物对细胞毒性的差异.结果:经过将QGY7703持续暴露,细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)、DDP、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)的敏感性发生了改变.QGY7703/DDP对5-FU的耐药性是亲代细胞的1.533倍,对DDP的耐药性是亲代细胞的2.181倍,对ADM的耐药性是亲代细胞的7.080倍,对MMC的耐药性是亲代细胞的9.461倍.结论:化疗药物能够诱导培养的肿瘤细胞产生耐药性.     

SUMO-1基因siRNA抑制肝癌细胞SMMC-7721生长的研究

目的:研究SUMO-1基因siRNA沉默人肝癌细胞SMMC-7721中SUMO-1基因表达的效果及对SMMC-7721生长的影响.方法:将人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA片段转染体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721,采用RT-PCR、Western blot方法在mRNA及蛋白水平检测siRNA沉默肝癌细胞中SUMO-1基因的效果.通过MTT、流式细胞仪及TUNEL试验检测SUMO-1基因沉默后对肝癌细胞生长的影响.结果:人工合成的针对SUMO-1基因的siRNA片段能显著地抑制SMMC-7721 中SUMO-1基因的表达,48 h抑制率可达73.43%.MTT结果显示肝癌细胞SMMC-7721转染SUMO-1 siRNA后生长明显受到抑制,流式细胞仪检测G_2期细胞明显增加,但TUNEL试验未发现凋亡细胞.结论:SUMO-1 siRNA沉默肝癌细胞SMMC-7721 中SUMO-1基因效果良好,SUMO-1基因控制SMMC-7721的生长,SUMO-1基因是肝癌生长的一个重要的调控因素.     

原白头翁素衍生物诱导人乳腺癌细胞的凋亡机制

目的:探讨原白头翁素衍生物诱导MCF-7人乳腺癌细胞株凋亡的作用机制。方法:采用体外培养方法培养MCF-7人乳腺癌细胞;应用免疫组织化学技术检测实验组和对照组中死亡受体蛋白(Fas),天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Caspase-8,细胞核转录因子(NF)-κB的表达。结果:对照组中Fas、Caspase-3和Caspase-8蛋白低表达于细胞质或细胞核,呈弱阳性;实验组细胞这些蛋白表达增高,呈强阳性;2组3种蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。对照组细胞中NF-κB高表达于细胞浆和细胞核,而实验组NF-κB表达较对照组下降,呈弱表达于细胞质。结论:原白头翁素衍生物通过外源性途径即死亡受体通路完成凋亡的启动和执行,抑制NF-κB信号转导途径可能是促进MCF-7细胞凋亡的原因。     

铭铂诱导人卵巢癌细胞A2780凋亡

目的：观察铭铂诱导的人卵巢癌细胞A2780凋亡,探讨其抗肿瘤作用机理。方法：用MTT法测定了铭铂对A2780的细胞毒作用;荧光显微镜从形态学上观察凋亡发生,琼脂糖DNA电泳检测程序性细胞死亡特征的DNA降解。结果：铭铂对A2780细胞有细胞毒作用,半数抑制浓度具有药物接触细胞时间依赖性;铭铂处理的A2780细胞形态学上显示出凋亡细胞特性,琼脂糖凝胶电泳显示出特征性程序性细胞死亡DNA梯形图谱。结论：铭铂能够诱导A2780细胞凋亡,诱导肿瘤细胞凋亡是其一个抗肿瘤作用机理。     

紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对相关基因表达的影响

目的：探讨紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对bcl-2和bax基因的影响。方法：用浓度为5ug·ml-1的紫杉醇处理肝癌SMMC7721细胞后,利用DNA琼脂糖凝胶电泳,TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,测定紫杉醇诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡抑制基因bcl-2和凋亡促进基因bax的mRNA和蛋白表达。结果：紫杉醇作用一定时间后,SMMC7721细胞产生凋亡、bcl-2显著下降、bax表达显著增高。结论：紫杉醇通过调节细胞凋亡抑制基因bcl-2和细胞凋亡促进基因bax的作用,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。     

旱生香茶菜总二萜对人肝癌细胞株增殖、荷人肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的:研究旱生香茶菜总二萜(IXD)对人肝癌细胞株(CA)增殖、荷CA裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:体外试验采用磺酰罗丹明B(SRB)法测试IXD对CA的IC50值,体内试验测定IXD不同剂量对荷CA裸鼠移植瘤增殖的抑制率。结果:IXD对CA的IC50值为6·17μg/ml,其在剂量为100、200(mg·kg)/d应用12d时抑制率分别为33·52%、38·19%,与生理盐水阴性对照组比较具有显著性差异(P<0·05)。结论:IXD对CA有较强的细胞毒活性,对荷CA裸鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用。     

乙酰氧基胡椒酚乙酸酯对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与侵袭的影响

目的:研究乙酰氧基胡椒酚乙酸酯(ACA)对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与侵袭的影响。方法:通过RT-PCR法检测ACA对人乳腺癌MCF-7细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达的影响,免疫细胞化学法检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达。结果:MCF-7细胞经50、100、150μmol·L-1ACA干预后,Bcl-2 mRNA表达显著下降,Bax mRNA表达显著升高(P<0.01);50、100、150μmol·L-1ACA作用后细胞中MMP-2和MMP-9的蛋白表达显著减少(P<0.01)。结论:ACA诱导的Bcl-2 mRNA表达的下调和Bax mRNA表达的上调可能参与了其诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用。ACA能抑制人乳腺癌MCF-7细胞中MMP-2和MMP-9的蛋白表达从而抑制其侵袭。     

丹酚酸A诱导HepG2细胞凋亡及抑制c-Met表达

目的通过研究丹酚酸A（salvianol acid A,SalA）对肝癌HepG2细胞株c-Met蛋白表达的影响,探讨SalA抑制肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的可能作用机制。方法以肝癌HepG2细胞株为研究对象,采用MTT法及流式细胞术检测SalA作用后细胞存活、增殖及凋亡情况;同时运用Westernblot法及PCR法检测HepG2细胞c-Met及其下游信号通路中关键蛋白和基因表达的改变。结果肝癌HepG2细胞经SalA处理后,其细胞增殖显著抑制,细胞凋亡比例亦升高,且呈浓度依赖性;同时HepG2细胞中c-Met及其下游信号分子AKT的磷酸化水平显著下调,凋亡相关蛋白Bax、caspase-3和caspase-9的表达亦明显上调。结论SalA能有效抑制肝癌HepG2细胞的增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制HepG2细胞中c-Met蛋白及其下游信号通路中AKT蛋白的磷酸化水平有关。     

秦皮乙素的制备及对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖的影响

目的制备秦皮乙素并探讨其对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。方法采用聚酰胺柱层析法分离纯化秦皮乙素,采用薄层色谱法进行定性鉴别,高效液相色谱法进行纯度检测。采用MTT比色法观察秦皮乙素对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响。采用流式细胞仪分析秦皮乙素对SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响。结果高效液相色谱法检测秦皮乙素的纯度为95%。MTT结果显示,IC50为2.24mmol·L^-1,并呈现时间-剂量依赖关系。流式细胞仪（FCM）检测表明,G2/M期细胞的比例减少,S期细胞的比例增加,与对照组相比差异显著（P〈0.05）。结论秦皮乙素可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,阻滞于S期,诱导肝癌细胞凋亡。