神经营养因子修复神经组织机制的研究:脑细胞生长肽对豚鼠耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的影响

背景脑细胞生长肽(cerebrocellular growth peptide,CCGP)对庆大霉素引起的耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)的变化是否有影响?对受损耳蜗组织是否有促进修复的作用?目的观察CCGP对庆大霉素引起的耳中毒豚鼠ACP的影响.设计随机对照研究.地点和材料实验地点泰山医学院听觉研究室.选用健康杂色豚鼠40只,对照组10只,肌肉注射生理盐水1 mL/(kg·d);庆大霉素组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素80 mg/(kg·d);CCGP组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素同庆大霉素组,并肌肉注射CCGP 1 mg/(kg·d).各组用药25d.方法用脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential,BAEP)和组织化学方法检测动物听阈的变化和耳蜗毛细胞ACP显色变化.主要观察指标各组动物BAEP反应阈值和ACP显色变化.结果用药前BAEP反应阈值[dB(peSLP)]生理盐水组32.62±2.33,庆大霉素组31.87±2.63,CCGP组32.56±2.39.用药后BAEP反应阈值均有不同程度的升高,用药后25 d BAEP反应阈值生理盐水组32.81±2.48,庆大霉素组56.73±17.21,CCGP组42.87±9.95,庆大霉素组、CCGP组与生理盐水组比较,差异均有显著性意义(t=3.113,4.335,P均＜0.01),CCGP组与庆大霉素组比较,差异有显著性意义(t=2.700,P＜0.05).ACP显色变化生理盐水组毛细胞ACP染色呈棕褐色,毛细胞排列整齐.庆大霉素组ACP变化显著,毛细胞显色失明显;CCGP组ACP显色变化较轻,两组铺片显示有明显差别.结论CCGP能降低庆大霉素的耳毒性,减轻由于溶酶体的破坏溢出的ACP引起的毛细胞的损伤.     

加减味耳聋左慈丸对庆大霉素耳毒性的防治及其机制研究

目的：观察耳鸣、耳聋的传统中药方剂“耳聋左慈丸”加减味对庆大霉素耳毒性的防治作用，并探讨其作用机制。方法：选用耳郭反射正常，体质量为300～350g的健康杂色豚鼠，雌雄兼用，随机分成3组，对照组15只，肌肉注射生理盐水2mL／(k&;#183;d)，生理盐水4mL／(kg&;#183;d)灌胃；庆大霉素组15只，肌肉注射硫酸庆大霉素80mg／(kg&;#183;d)，生理盐水4mL／(k&;#183;d)灌胃；中药组15只，肌肉注射硫酸庆大霉素同庆大霉素组，中药煎剂浓缩液4mL／(kg&;#183;d)灌胃。各组连续用药均25d。用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠听阈的变化；用组织化学的方法检测耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的变化。结果：用药前对照组、庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值分别为：32．28&;#177;2．55，32．34&;#177;2．52和32．32&;#177;2．54；用药后第27天分别为：32．30&;#177;2．73，54．95&;#177;18．62和41.76&;#177;9．36。用药后27d庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值升高，差异有显著性意义(t=3．466，P&;lt;0．01)。耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶染色的变化：耳蜗铺片在光镜下观察：正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞酸性磷酸酶染色呈棕褐色，显色分布均匀，毛细胞排列整齐；庆大霉素致耳聋的豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶显色变化依动物耳聋程不同，出现染色缺失程度亦不同；庆大霉素组酸性磷酸酶染色缺失显著，中药组酸性磷酸酶染色缺失变化轻，两组耳蜗铺片显示有明显差别。结论：该中药方剂能降低庆大霉素的耳毒性；保护耳蜗毛细胞溶酶体的完整性，降低庆大霉素对溶酶体的损坏而造成的毛细胞自溶性损伤，是该方剂降低庆大霉素耳毒性的机制之一。     

川芎嗪对豚鼠耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的影响

目的：探讨活血祛淤中药制剂成分川芎嗪对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的保护作用。方法：实验于2004-12／2005-01在泰山医学院听觉研究室进行。选用耳耳郭反射正常的健康杂色豚鼠30只4月龄，体质量为250-300g．雌雄不拘。随机分成3组，每组10只。对照组给予肌肉注射生理盐水2mL／（ks&;#183;d）；庆大霉素组给予肌肉注射硫酸庆大霉素80ms／（ks&;#183;d）：川芎嗪组给予腹腔注射川芎嗪6mg／（kg&;#183;d），同时肌肉注射硫酸庆大霉素80mg／（kg&;#183;d）。各组连续用药20d。用电位仪检测用药前及用药后脑干听觉诱发电位反应阈值（与用药前比较，其值升高可提示听觉受损）；用组织化学方法检测耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的变化（酸性磷酸酶染色缺失越明显，提示毛细胞损害程度越重）。结果：所有动物均进人结果分析。①脑干听觉诱发电位反应阈值结果：用药前对照组、庆大霉素组、川芎嗪组脑干听觉诱发电位反应阈值差异无显著性意义[（36．12&;#177;0．25，35．72&;#177;2．08，35．22&;#177;1．07）dB peSLP，P〉0．051：用药20d三组脑干听觉诱发电位反应阈值分别为（37．27&;#177;0．13,69．06&;#177;24．73，40．46&;#177;10．34）dBpe SLP，即庆大霉素组与对照组和川芎嗪组相比较脑干听觉诱发电位反应阈值明显偏高，（t=5．75，t=4．773,P〈0．01），川芎嗪组与对照组比较无显著性差异（t=1．38,P〉0．05）。②耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的染色变化结果：光镜下观察耳蜗铺片显示对照组豚鼠耳蜗毛细胞排列整齐，酸性磷酸酶染色均匀，呈棕褐色；庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶染色变化依动物耳聋程度不同而呈现不同的表现，出现显色变淡、消失；川芎嗪组酸性磷酸酶染色变化较轻。结论：川芎嗪能明显降低庆大霉素对听觉系统的损伤，其机制可能与川芎嗪能维持溶酶体的完整性、防止毛细胞溶酶体内的水解酶逸出造成的毛细胞自溶性损伤有关。     

丹参提取制剂对耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的影响

目的：观察具有活血化淤，扩张耳蜗血管，改善内耳微循环之功效的丹参提取制剂对豚鼠庆大霉索耳中毒引起的耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶变化的影响。方法：实验于2004-09／12在泰山医学院生理听觉研究室完成。选用耳郭反射正常、体质量为250—300g的健康杂色豚鼠，雌雄不拘，排除耳郭反射的声刺激强度超过正常&;#177;2．5dB的实验豚鼠。将动物随机数分成3组：正常对照组动物15只，肌肉注射生理盐水2mL／（kg&;#183;d）；庆大霉索组动物15只，肌肉注射庆大霉素80mg／（kg&;#183;d）；丹参注射液组动物15只，腹腔注射丹参注射液（含生药量1．5kg／L）6mg／（kg&;#183;d），然后肌肉注射庆大霉索同庆大霉素组。各组动物连续注射药物均20d。用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠的听闽变化；用组织化学方法检测耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的变化。结果：在实验过程中无动物死亡，进入结果分析3组动物其45只。①用药22d后，庆大霉素组、丹参注射液组豚鼠的脑干听觉诱发电位反应阈值与正常对照组比较，差异有显著性[（71.25&;#177;24．730），（41．05&;#177;10．930）．（34．65&;#177;1.321）dB；t=8．097．3．184，P〈0.01]；丹参注射液组与庆大霉素组比较，差异有显著性（f=6．118，P〉O．01）。②耳蜗铺片毛细胞内琥珀酸脱氢酶染色在光镜下观察，正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞琥珀酸脱氢酶染色呈紫蓝色；显色分布均匀，毛细胞排列整齐；在庆大霉素组耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶显色出现明显消失，耳蜗毛细胞破坏明显；丹参注射液组琥珀酸脱氢酶染色变化较轻，庆大霉素组与丹参注射液组耳蜗铺片显示有明显差异。结论：丹参注射液能降低庆大霉素对耳蜗毛细胞的损害作用，保护耳蜗线粒体呼吸酶的活性，维持毛细胞的能量代谢以供给细胞需要能量的功能活动，可能是丹参注射液降低庆大霉素耳毒性的机制之一。     

电针对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的保护作用

目的：探讨电针预防庆大霉素对耳蜗螺旋神经节细胞(cochlear spiral ganglion cells，SGC)损伤的作用。方法：选用耳郭反射正常，体质量为300～350g的健康杂色豚鼠，雌雄兼用，随机分成3组：对照组10只，肌肉注射生理盐水2mL／(kg&;#183;d)；庆大霉素组15只，肌肉注射硫酸庆大霉素80mg／(kg&;#183;d)；电针组15只，给予电针(针刺双侧“听宫、翳风、肾俞”穴)1次／d；针刺后再给予庆大霉素同对照组，各组用药均25d。用脑干听觉诱发电位(BAEP)检测动物BAEP反应阈值；用组织学方法检测耳蜗SGC的形态学变化。结果：在用药前对照组组、庆大霉素组和电针组BAEP反应阚分别为：(31．85&;#177;2．19)，(32.23&;#177;2.26)，(32．19&;#177;2．24)dB peSLP；用药后27d检测分别为：(32.27&;#177;2．21)，(59．58&;#177;17.74)，(45．67&;#177;9.35)dB peSLP。庆大霉素组、电针组分别与对照组组比较，差异均有显著性意义(t=6．809，4．435，P&;lt;0．01)；庆大霉素与电针组比较差异亦有显著性意义(t=3，800，P&;lt;0．01)。在放大倍数为400倍光镜下平均在80μm&;#215;80μm视野内SGC存活数为：对照组(14.08&;#177;0．79)个，庆大霉素组(9．16&;#177;2．55)个，电针组(11．17&;#177;2．08)个；庆大霉素组与电针组比较差异有显著性意义(t=2．367，P&;lt;0.05)。结论：电针对庆大霉素引起的耳蜗螺旋神经节细胞损伤有明显的预防作用。     

脑细胞生长肽对螺旋神经节细胞损伤的预防作用

目的：探讨脑细胞生长肽是否有预防庆大霉素对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的损害的作用。方法：实验在泰山医学院生理听觉研究室进行。选用45只豚鼠，随机分为3组：对照组动物肌肉注射生理盐水2mL／(k&;#183;d)；庆大霉素组动物肌肉注射硫酸庆大霉素80nag／(k&;#183;d)；脑细胞生长肽组肌肉注射庆大霉素同庆大霉素组，并肌肉注射脑细胞生长肽1mg／(k&;#183;d)。各组均用药25d。分别用脑干听觉诱发电位[brainstem auditory evoked potential，BAEP)和组织化学方法检测动物的BAEP反应阈、波峰潜伏期及耳蜗螺旋神经节细胞的形态学变化。结果：用药后BAEP波峰潜伏期延长。用药后第27天对照组、庆大霉素组和脑细胞生长肽组BAEP反应阈值分别为：(32．57&;#177;2．26)，（58．49&;#177;18．43)和（44．63&;#177;8．74)dB peSLP；后两组高于对照组，差异均有非常显著性意义(t=7.646，4．439，P均&;lt;0．01)；脑细胞生长肽组高于庆大霉素组(t=3．725，P&;lt;0．01)。用药后第27天，对照组、庆大霉素组和脑细胞生长肽组耳蜗螺旋神经节细胞数分别为：(14．45&;#177;0．95)，(9.53&;#177;3.16)和(11．84&;#177;2．63)个；后两组少于对照组，差异有非常显著意义(P均&;lt;0．01)；脑细胞生长肽组多于庆大霉素组(P&;lt;0．01)。结论：脑细胞生长肽有明显保护耳蜗螺旋神经节细胞对抗庆大霉素耳毒性的作用。     

加减味耳聋左慈丸对庆大霉素耳毒性的防治及其机制研究

目的:观察耳鸣、耳聋的传统中药方剂耳聋左慈丸加减味对庆大霉素耳毒性的防治作用,并探讨其作用机制。方法:选用耳郭反射正常,体质量为300～350g的健康杂色豚鼠,雌雄兼用,随机分成3组,对照组15只,肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d),生理盐水4mL/(kg·d)灌胃;庆大霉素组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d),生理盐水4mL/(kg·d)灌胃;中药组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素同庆大霉素组,中药煎剂浓缩液4mL/(kg·d)灌胃。各组连续用药均25d。用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠听阈的变化;用组织化学的方法检测耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的变化。结果:用药前对照组、庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值分别为:32.28±2.55,32.34±2.52和32.32±2.54;用药后第27天分别为:32.30±2.73,54.95±18.62和41.76±9.36。用药后27d庆大霉素组和中药组的脑干听觉诱发电位反应阈值升高,差异有显著性意义(t=3.466,P<0.01)。耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶染色的变化:耳蜗铺片在光镜下观察:正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞酸性磷酸酶染色呈棕褐色,显色分布均匀,毛细胞排列整齐;庆大霉素致耳聋的豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶显色变化依动物耳聋程不同,出现染色缺失程度亦不同;庆大霉素组酸性磷酸酶染色缺失显著,中药组酸     

庆大霉素中毒后豚鼠耳蜗毛细胞的再生

背景：以往一直认为损伤的毛细胞不具有修复能力。近年研究表明，哺乳动物前庭毛细胞破坏后也保持一定的修复能力。那么，哺乳类动物耳蜗毛细胞破坏后是否具有再生能力？ 目的：应用扫描电镜技术并结合听性脑干反应测试，观察庆大霉素中毒后不同时间豚鼠耳蜗毛细胞情况和昕性脑干反应阈值变化，以观察哺乳动物耳蜗毛细胞受损后能否再生。 设计：随机对照动物实验。 单位：沈阳医学院生理教研室。材料：实验于2001-11／2002-05在中国医科大学听力研究室完成。选用清洁级耳郭反射灵敏的健康成年白色红目豚鼠60只，随机分为庆大霉素组、正常对照组，每组30只。 方法：庆大霉素组每日腹腔注射庆大霉素100mg／kg。正常对照组每日腹腔注射与庆大霉素等量的生理盐水2．5mL／kg，各组皆连续用药10d。每日测量体质量调整药量。在用药前和停药后1，3，30d分别检测听性脑干反应阈值；停药处死后应用扫描电镜技术观察各组豚鼠耳蜗毛细胞情况。 主要观察指标：①听性脑干反应阈值。（爹庆大霉素中毒后不同时间豚鼠耳蜗毛细胞变化。 结果：实验动物60只中途无脱落，全部进入结果分析。①庆大霉素组停药后1，3，30d其听性脑干反阈值显著高于正常对照组，差异有显著性[（38.00&;#177;3.75），（2．22&;#177;3.63）dBnHL，t=30．651,P〈0．001]；[（39.09&;#177;4．22），（2．50&;#177;3．54）dBnHL，t=29．708，P〈0．001]；[（14．50&;#177;3．69），（1.50&;#177;2．42）dBnHL，t=13．175,P〈0．001]。30d时听性脑干反应阈值有明显恢复，但未达到正常水平。②庆大霉素组停药后1d豚鼠耳蜗第二转外毛细胞静纤毛显示融合、扭曲、倒伏、缺失或残缺不全等病理改变，尤其是第三排外毛细胞更为严重，且内毛细胞静纤毛外侧有囊状突出物；停药后3d豚鼠耳蜗第二转外毛细胞静纤毛融合、缺失、倒伏等病理改变仍然存在，内毛细胞静纤毛仍有倒伏现象，而其外侧囊状突出物减少；停药后30d豚鼠耳蜗第二转外毛细胞静纤毛融合、缺失、倒伏等病理改变，明显弱于庆大霉素停药1d和3d，同时耳蜗第三转有新生的静纤毛出现。 结论：庆大霉素耳中毒后豚鼠耳蜗毛细胞损伤后存活30d者其耳蜗毛细胞形态上有所恢复，且听性脑干反应阈值也有一定程度的恢复，说明庆大霉素耳中毒后豚鼠耳蜗毛细胞具有再生修复能力。庆大霉素损伤后的毛细胞可以再生。     

马来酸桂哌齐特对噪声性听力损失的保护作用

目的：探讨马来酸桂哌齐特对豚鼠噪声性听力损失的保护作用。方法：实验于2003-10／11在河北医科大学第三医院耳鼻喉科实验室进行。取22只豚鼠随机分成3组：马来酸桂哌齐特组、生理盐水组各10只，正常组2只。马来酸桂哌齐特组及生理盐水组豚鼠分别腹腔注射马来酸桂哌齐特20mg／(kg&;#183;d)，生理盐水4mL／(k&;#183;d)，注射后15min行白噪声(110dB)暴露，60min／d，连续9d，正常组豚鼠用以制备观察耳蜗螺旋器毛细胞正常形态的电镜标本，无需任何处理。前两组在暴露后不同时间(1，3，5，7，9d)分别测试听脑干反应，并用扫描电镜观察耳蜗毛细胞的结构变化。结果：22只动物全部进入结果分析。①扫描电镜观察显示，正常组豚鼠耳蜗内、外毛细胞形态正常；生理盐水组耳蜗内、外毛细胞均有听毛紊乱、融合及缺失；马来酸桂哌齐特组耳蜗病变比生理盐水组轻，听毛仅有轻微倾倒、融合现象。②无论任何时段马来酸桂哌齐特组豚鼠听脑干反应阈移小于生理盐水组(P&;lt;0．01)；马来酸桂哌齐特组豚鼠在噪声暴露后第7天听脑干反应阈值已接近正常[(9．18&;#177;3．47)，[6．93&;#177;3．24)dB，P&;gt;0．05]，而生理盐水组豚鼠在噪声暴露后第9天听脑干反应阈值与正常组相比仍有显著差异[(16．84&;#177;3．78)．(7．82&;#177;3．01)dB，P&;lt;0．05]。结论：马来酸桂哌齐特能够减轻噪声对耳蜗毛细胞的损害，对噪声性听力损伤具有较明显的保护作用。     

川芎嗪对豚鼠耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的影响

目的:探讨活血祛淤中药制剂成分川芎嗪对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶的保护作用。方法:实验于2004-12/2005-01在泰山医学院听觉研究室进行。选用耳耳郭反射正常的健康杂色豚鼠30只4月龄,体质量为250～300g,雌雄不拘。随机分成3组,每组10只。对照组给予肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d);庆大霉素组给予肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d);川芎嗪组给予腹腔注射川芎嗪6mg/(kg·d),同时肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d)。各组连续用药20d。用电位仪检测用药前及用药后脑干听觉诱发电位反应阈值(与用药前比较,其值升高可提示听觉受损);用组织化学方法检测耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的变化(酸性磷酸酶染色缺失越明显,提示毛细胞损害程度越重)。结果:所有动物均进入结果分析。①脑干听觉诱发电位反应阈值结果:用药前对照组、庆大霉素组、川芎嗪组脑干听觉诱发电位反应阈值差异无显著性意义([36.12±0.25,35.72±2.08,35.22±1.07)dBpeSLP,P>0.05];用药20d三组脑干听觉诱发电位反应阈值分别为(37.27±0.13,69.06±24.73,40.46±10.34)dBpeSLP,即庆大霉素组与对照组和川芎嗪组相比较脑干听觉诱发电位反应阈值明显偏高,(t=5.75,t=4.77,P<0.01),川芎嗪组与对照组比较无显著性差异(t=1.38,P>0.05)。②耳蜗毛细胞内酸性磷酸酶的染色变化结果:光镜下观察耳蜗铺片显示对照组豚鼠耳蜗毛细胞排列整齐,酸性磷酸酶染色均匀,呈棕褐色;庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞酸性磷酸酶染色变化依动物耳聋程度不同而呈现不同的表现,出现显色变淡、消失;川芎嗪组酸性磷酸酶染色变化较轻。结论:川芎嗪能明显降低庆大霉素对听觉系统的损伤,其机制可能与川芎嗪能维持溶酶体的完整性、防止毛细胞溶酶体内的水解酶逸出造成的毛细胞自溶性损伤有关。     

丹参注射液对庆大霉素耳蜗毒性的防护

背景：丹参可有效减轻卡那霉素对CBA小鼠的耳毒性效应；然而，其是否也能防护庆大霉素对豚鼠的耳蜗毒性，目前尚不明确。目的：研究丹参注射液对庆大霉素耳蜗毒性的防护作用。设计：完全随机对照的实验研究。地点和对象：实验在中国医科大学听力研究室进行。选用清洁级健康纯白红目豚鼠40只，雌雄不限，体质量250～300g，耳郭反射灵敏，鼓膜及外耳道正常，由中国医科大学第二医院动物中心提供。干预：动物随机分成4组，即对照组、庆大霉素组、庆大霉素+丹参注射液组和丹参注射液组，每组各10只。庆大霉素组每日腹腔注射硫酸庆大霉素100mg／kg；丹参注射液组每日腹腔注射丹参注射液6g／kg；庆大霉素+丹参注射液组同时注射硫酸庆大霉素100mg／kg和丹参注射液6g／kg；对照组则每日腹腔注射等量生理盐水。4组皆连续用药10d。用药期间每天监测体质量以调整药量。全部实验由作者和另一名硕士研究生完成。主要观察指标：应用听脑干反应(auditory brainstem respoilse，ABR)测试，观察用药前后听阈变化。应用透射及扫描电镜技术，观察豚鼠耳蜗形态学变化。结果：用药10d后，庆大霉素组ABR阈值(36．00&;#177;5．48)dBSPL明显升高，与对照组(17．00&;#177;4．47)dBSPL比较差异有显著性意义(t=6．008．P&;lt;0．01)；庆大霉素+丹参注射液组ABR阈值(27．00&;#177;4．47)dBSPL较庆大霉素组(36．00&;#177;5．48)dB SPL明显降低，差异有显著性意义(t=2．846，P&;lt;0．05)。电镜观察显示庆大霉素+丹参注射液组耳蜗结构损害明显轻于庆大霉素组。结论：丹参注射液能有效防护庆大霉素的耳蜗毒性。     

脑细胞生长肽对螺旋神经节细胞损伤的预防作用

目的:探讨脑细胞生长肽是否有预防庆大霉素对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的损害的作用。方法:实验在泰山医学院生理听觉研究室进行。选用45只豚鼠,随机分为3组:对照组动物肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d);庆大霉素组动物肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d);脑细胞生长肽组肌肉注射庆大霉素同庆大霉素组,并肌肉注射脑细胞生长肽1mg/(kg·d)。各组均用药25d。分别用脑干听觉诱发电位(brainstemauditoryevokedpo-tential,BAEP)和组织化学方法检测动物的BAEP反应阈、波峰潜伏期及耳蜗螺旋神经节细胞的形态学变化。结果:用药后BAEP波峰潜伏期延长。用药后第27天对照组、庆大霉素组和脑细胞生长肽组BAEP反应阈值分别为:(32.57±2.26),(58.49±18.43)和(44.63±8.74)dBpeSLP;后两组高于对照组,差异均有非常显著性意义t=7.646,4.439,P均<0.01);脑细胞生长肽组(高于庆大霉素组(t=3.725,P<0.01)。用药后第27天,对照组、庆大霉素组和脑细胞生长肽组耳蜗螺旋神经节细胞数分别为:(14.45±0.95),(9.53±3.16)和(11.84±2.63)个;后两组少于对照组,差异有非常显著意义(P均<0.01);脑细胞生长肽组多于庆大霉素组(P<0.01)。结论:脑细胞生长肽有明显保护耳蜗螺旋神经节细胞对抗庆大霉素耳毒性的作用。     

庆大霉素中毒性耳聋豚鼠耳蜗热休克蛋白70的表达及川芎嗪的保护作用

背景：川芎嗪具有降低庆大霉素的耳毒性作用，但川芎嗪能否通过增加耳蜗热休克蛋白70表达，从而拮抗庆大霉素的耳蜗毒性作用。目的：应用免疫组化及图像分析技术并结合听性脑干反应测试，观察川芎嗪对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达的影响。设计：随机对照实验，直线相关分析。单位：沈阳医学院生理教研室和中国医科大学听力研究室。材料：选用清洁级耳郭反射灵敏的健康白色红目豚鼠40只，体质量200～250g，雌雄不拘。随机分为庆大霉素组、川芎嗪＋庆大霉素组、川芎嗪组、正常对照组，每组10只。方法：川芎嗪＋庆大霉素组每日左侧腹腔注射川芎嗪注射液140mg／kg，同时在右侧腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100mg／ks。庆大霉素组：每13腹腔注射硫酸庆大霉素注射液100mg／kg。川芎嗪组每日腹腔注射川芎嗪注射液140mg／kg。正常对照组每日腹腔注射生理盐水2．5mL／kg，各组皆连续用药10d。各组动物混合饲养，每13测量体质量调整药量。在用药前和停药后分别检测各组大鼠听性脑干反应阈值，停药处死后应用SABC免疫组化和图像分析技术，观察各组豚鼠耳蜗热休克蛋白70表达情况。主要观察指标：①各组大鼠听性脑干反应阈值。②各组大鼠耳蜗热休克蛋白70表达。结果：①豚鼠听性脑干反应阈值：川芎嗪＋庆大霉素组、庆大霉素组均明显高于正常对照组[（21．09&;#177;4．50）dBnHL，（36．55&;#177;6．13）dBnHL，（2．50&;#177;2．75）dBnHL，t=15．764-22．665，P〈0．001]。川芎嗪＋庆大霉素组明显低于庆大霉素组（t=9．092，P〈0．001）。②豚鼠耳蜗各部位热休克蛋白70表达：庆大霉素组耳蜗Corti＇s器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值低于正常对照组[（88．24&;#177;4．34，96．85&;#177;1．05；121．24&;#177;0．92，128．76&;#177;1．59；96．15&;#177;1．10，98．78&;#177;0．54；117．73&;#177;1．18，120．51&;#177;0．80），（t=6．097～18．307，P〈0．001）]。川芎嗪＋庆大霉素组耳蜗Corti＇s器、血管纹和螺旋韧带、螺旋缘、螺旋神经节4个部位细胞热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值明显高于庆大霉素组（92．53&;#177;2．25，88．24&;#177;4．34；125．20&;#177;1．43，121．24&;#177;0．92；98．71&;#177;0．91，96．15&;#177;1．10；118．91&;#177;0．46，117．73&;#177;1．18，t=3．925～10．415，P〈0．001）。③各组各部位热休克蛋白70阳性反应产物平均灰度值与听性脑干反应阈值高度相关（r=-0．8141--0．9841，P〈0．001）。结论：应用川芎嗪注射液可降低听性脑干反应阈值和庆大霉素中毒耳蜗热休克蛋白70的表达，以减轻庆大霉素的耳毒性损伤，从而改善听功能。     

丹参提取制剂对耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的影响

目的:观察具有活血化淤,扩张耳蜗血管,改善内耳微循环之功效的丹参提取制剂对豚鼠庆大霉素耳中毒引起的耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶变化的影响。方法:实验于2004-09/12在泰山医学院生理听觉研究室完成。选用耳郭反射正常、体质量为250～300g的健康杂色豚鼠,雌雄不拘,排除耳郭反射的声刺激强度超过正常±2.5dB的实验豚鼠。将动物随机数分成3组:正常对照组动物15只,肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d);庆大霉素组动物15只,肌肉注射庆大霉素80mg/(kg·d);丹参注射液组动物15只,腹腔注射丹参注射液(含生药量1.5kg/L)6mg/(kg·d),然后肌肉注射庆大霉素同庆大霉素组。各组动物连续注射药物均20d。用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠的听阈变化;用组织化学方法检测耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的变化。结果:在实验过程中无动物死亡,进入结果分析3组动物共45只。①用药22d后,庆大霉素组、丹参注射液组豚鼠的脑干听觉诱发电位反应阈值与正常对照组比较,差异有显著性犤(71.25±24.730),(41.05±10.930),(34.65±1.321)dB;t=8.097,3.184,P<0.01犦;丹参注射液组与庆大霉素组比较,差异有显著性(t=6.118,P>0.01)。②耳蜗铺片毛细胞内琥珀酸脱氢酶染色在光镜下观察,正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞琥珀酸脱氢酶染色呈紫蓝色;显色分布均匀,毛细胞排列整齐;在庆大霉素组耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶显色出现明显消失,耳蜗毛细胞破坏明显;丹参注射液组琥珀酸脱氢酶染色变化较轻,庆大霉素组与丹参注射液组耳蜗铺片显示有明显差异。结论:丹参注射液能降低庆大霉素对耳蜗毛细胞的损害作用,保护耳蜗线粒体呼吸酶的活性,维持毛细胞的能量代谢以供给细胞需要能量的功能活动,可能是丹参注射液降低庆大霉素耳毒性的机制之一。     

听力阈值变化与卡那霉素耳慢性中毒豚鼠耳蜗细胞凋亡

目的：探讨卡那霉素耳慢性中毒后豚鼠耳蜗细胞凋亡现象及其在听力损伤中的作用。方法：实验于2003-01／12在第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。75只豚鼠随机分为正常对照组(n=15)，卡那霉素耳慢性中毒组(n=60)。卡那霉素耳慢性中毒组进行硫酸卡那霉素200mg／(kg&;#183;d)连续肌肉注射14d，根据停药时间分为卡那霉素停药1，3，7，14d组，每组15只。分别处死正常对照组及卡那霉素停药1，3，7．14d组豚鼠，处死前检测其听脑干反应的变化，处死后以原位末端标记技术及耳蜗毛细胞核荧光染色计数等检测耳蜗细胞凋亡情况。结果：①豚鼠连续应用卡那霉素14d，停药1d耳蜗细胞即出现凋亡现象(原位缺口末端标记法阳性细胞数：柯蒂氏器0．69&;#177;0．57，螺旋神经节1．22&;#177;0．51．血管纹1．01&;#177;0．67)，随停药时间延长，耳蜗细胞凋亡数增多(14d组原位缺口末端标记法阳性细胞数：柯蒂氏器4．91&;#177;0．94，螺旋神经节8．84&;#177;1．35，血管纹7．39&;#177;1．63)，且愈近底回愈多，愈近顶回则愈少．对照组无凋亡现象。②豚鼠卡那霉素耳慢性中毒后，随停药时间延长，听脑干反应阈值14d组为43，20&;#177;6．73，正常对照组为5，60&;#177;1．78，14d组较正常对照组明显上升(P&;lt;0．01)。结论：①卡那霉素耳慢性中毒可引起耳蜗细胞发生凋亡，细胞凋亡是豚鼠耳蜗损伤的一条途径。②耳蜗细胞凋亡可能是卡那霉素耳慢性中毒听力损伤的形态学基础之一。     

电针对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞的保护作用

目的:探讨电针预防庆大霉素对耳蜗螺旋神经节细胞(cochlearspiralganglioncells,SGC)损伤的作用。方法:选用耳郭反射正常,体质量为300～350g的健康杂色豚鼠,雌雄兼用,随机分成3组:对照组10只,肌肉注射生理盐水2mL/(kg·d);庆大霉素组15只,肌肉注射硫酸庆大霉素80mg/(kg·d);电针组15只,给予电针(针刺双侧“听宫、翳风、肾俞”穴)1次/d;针刺后再给予庆大霉素同对照组,各组用药均25d。用脑干听觉诱发电位(BAEP)检测动物BAEP反应阈值;用组织学方法检测耳蜗SGC的形态学变化。结果:在用药前对照组组、庆大霉素组和电针组BAEP反应阈分别为:(31.85±2.19),(32.23±2.26),(32.19±2.24)dBpeSLP;用药后27d检测分别为:(32.27±2.21),(59.58±17.74),(45.67±9.35)dBpeSLP。庆大霉素组、电针组分别与对照组组比较,差异均有显著性意义(t=6.809,4.435,P<0.01);庆大霉素与电针组比较差异亦有显著性意义(t=3.800,P<0.01)。在放大倍数为400倍光镜下平均在80μm×80μm视野内SGC存活数为:对照组(14.08±0.79)个,庆大霉素组(9.16±2.55)个,电针组(11.17±2.08)个;庆大霉素组与电针组比较差异有显著性意义(t=2.367,P<0.05)。结论:电针对庆大霉素引起的耳蜗螺旋神经节细胞损伤有明显的预防作用。     

β-七叶皂甙钠对大鼠脊髓损伤后肢体运动功能的影响

目的：观察β-七叶皂甙钠治疗大鼠急性脊髓损伤后肢体运动功能的变化，探讨β-七叶皂甙钠对大鼠急性脊髓损伤的保护和促进修复作用。方法：实验于2003—12／2004—03在解放军第二军医大学长海医院骨科实验室完成。45只SD大鼠随机分为正常对照组11只，模型对照组12只，10mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组11只，20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组11只。按Allen改良法制备脊髓损伤动物模型，10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组分别在术后腹腔注射β-七叶皂甙钠注射液10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）&;#176;模型对照组和正常对照组在术后注射等量生理盐水，共持续10d。用斜板试验法和BBB评分法观察大鼠脊髓损伤后运动功能的变化。结果：1只10mg／kg β-七叶皂甙钠治疗组大鼠在术后第2天和1只正常对照组大鼠在术后第1天由于饲养不当死亡，其余43只大鼠均进入结果分析。①各组大鼠斜板试验临界角度：在术后第7，14，21天时10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组明显高于模型对照组[第7天：（37．88&;#177;1．76）&;#176;，（38．94&;#177;2、15）&;#176;，（35、48&;#177;1、23）&;#176;；第14天：（44、39&;#177;1．87）&;#176;．（45、96&;#177;1．81）&;#176;，（39．48&;#177;1．23）&;#176;；第21天：f44．75&;#177;2．11）&;#176;，（46．66&;#177;1-46）&;#176;，（41、42&;#177;0．98）&;#176;，t=2.27～4．67，P〈0．05～001]。20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组与10mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组基本一致。②各组大鼠BBB评分结果：在术后第7，14，21天时10mg／（kg&;#183;d）和20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组明显高于模型对照组[第7天：（7．20&;#177;0．98），（7．51&;#177;0．85），（4．46&;#177;0．90）分；第14天：（10．43&;#177;0．90），（10．98&;#177;0．59），（6．54&;#177;0．73）分；第21天：（10．78&;#177;0．96），（11．67&;#177;0．49），（7．90&;#177;0．54）分，t=2．54～8．6，P〈0．05～0．011。20mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组与10mg／（kg&;#183;d）β-七叶皂甙钠治疗组基本一致。结论：β-七叶皂甙钠可以增加大鼠实验性急性脊髓损伤后运动功能的恢复谏度及最终恢复稃唐．     

庆大霉素听力损伤后雏鸡ABR反应阈的变化

背景：氨基糖苷类抗生素(aminoglycoside antibiotics，AmAn)中毒后雏鸡听力恢复有所不同，其发生演变与形态改变相符。但各家对听力恢复时相确定存在分歧。目的：探讨雏鸡听性脑干反应检测方法和庆大霉素致聋雏鸡听力恢复时相。设计：随机对照实验研究。地点和对象：首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉-头颈外科。发育正常的10d龄纯种依沙褐种鸡48只，体质量45～50g，雌雄不限，华中科技大学同济医学院实验动物部提供。干预：雏鸡48只，随机数字表法分成对照组、庆大霉素组。庆大霉素组雏鸡肌注庆大霉素[100mg／(kg&;#183;d)]，连续10d，对照组雏鸡肌注等量生理盐水。分别检测停药后第1，3，7，14，21，28d组雏鸡听性脑干反应(Auditory Brain Response，ABR)反应阈值。主要观察指标：正常对照组、停药后第1，3，7，14，21，28天各组ABR反应阈。结果：正常对照组及停药后第1，3，7，14，21，28天ABR反应阈分别为(56．53&;#177;5．48)，(110．38&;#177;6．34)，(100．42&;#177;5．82)，(87．92&;#177;5．42)，(80．00&;#177;6．74)，(77．50&;#177;5．44)，(74．58&;#177;4．98)dBpeSPL9庆大霉素组停药后第1天，雏鸡ABR反应阈明显提高(t=3．250～3．346，P&;lt;0．01)，停药后14d内，快速恢复，停药后14～28d，缓慢恢复，至28d，雏鸡ABR反应阈尚未恢复正常水平。结论：庆大霉素致聋雏鸡听力可以恢复，停药后14d内是其恢复的关键时相，停药后28d，仍残留部分听力损失。     

谷氨酸钠不同用药时程对幼年豚鼠耳蜗螺旋神经节损伤的比较

目的：比较谷氨酸钠不同用药时程对幼年豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞及听力损伤的程度，以探索稳定而可靠的谷氨酸钠耳聋模型造模方案。方法：豚鼠单纯随机分成4组，按3g／(kg&;#183;d)，腹腔注射(ip)，给予谷氨酸钠(Glutamate)，每组(G7，G3，G1，G0)分别给予连续7，3，1，0d，停药后饲养10d。处死前测其耳郭反射以及脑干听觉诱发电位。后取耳蜗，纵向石蜡切片，焦油紫染色，光镜观察。结果：G7组听阈为(684&;#177;23．9)dBSPL，耳蜗螺旋神经节平均细胞密度为(2．34&;#177;1．24)&;#215;10^3个／mm^2；G3组听阈为(66．9&;#177;19．8)dBSPL细胞密度为(2．52&;#177;1．19)&;#215;10^3个／mm^2；G1组听阈为(65．8&;#177;21．5)dBSPL，细胞密度为(2．60&;#177;1．02)&;#215;l0^3个／mm^2；G0组听阈为(44．3&;#177;4．7)dBSPL细胞密度为(4．38&;#177;2．60)&;#215;10^3个／mm^2。经方差分析，F检验，听阈：F=21．8，细胞密度：F：18．5；G0组分别与G7，G3，G1组比较，差异显著意义，P&;lt;0．01，G7，G3，G1组之间，差异无显著性意义，P&;gt;0．05。结论：谷氨酸钠3g／(kg&;#183;d)，ip．不同用药时程(1～7d)均可引起幼年豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞明显变性甚或死亡，听力下降明显；谷氨酸钠一次件腹腔注射给药可以制作耳聋模型。     

血管紧张素1型受体拮抗剂对易感型自发性高血压大鼠脑卒中发生率的影响

背景：高血压是脑卒中最重要的危险因素之一，脑局部肾素血管紧张素系统在高血压和脑卒中的发生中都有重要作用。 目的：观察长期服用血管紧张素1型受体拮抗剂氯沙坦对脑卒中易感型自发性高血压大鼠的脑卒中发生率的影响。 设计：随机对照试验。 单位：武汉大学人民医院。 材料：实验于1999-07／2001-03在武汉大学完成。选取6周龄雄性脑卒中易感型自发性高血压大鼠26只和京都Wistar雄性大鼠8只。体质量（144．5-182．1）g。 方法：将26只6周龄雄性自发性高血压大鼠随机分为易感型自发性高血压组9只，以生理盐水5mL/d灌胃；氯沙坦10mg／（kg&;#183;d）组9只，以氯沙坦10mg／（kg&;#183;d）灌胃；氯沙坦30ms／（kg&;#183;d）组8只，以氯沙坦30mg／（kg&;#183;d）灌胃。3组均在人组时喂高蛋白饲料，入组第2周开始饮15g/L盐水5mL／d，1次／d。同期选取8只6周龄雄性Wistar大鼠作为正常组，生理盐水5mL／d灌胃，1次／d，饲普通饲料，饮自来水。所有大鼠生活在昼-夜节律为12h，饲养温度为18～20℃，湿度为40％～50％。实验18周后检测大鼠脑卒中发生情况，血压变化。脑卒中临床表现评分标准以1分为活动少，运动量轻度减少或轻度兴奋；2分为活动很少，运动量明显减少或激惹亢奋；3分为俯卧不动，不能行走，忧郁性症状；4分为瘫痪，不能站立，任何1侧或双侧肢体麻痹。利用透射电镜进行脑组织观察，检测脑组织的细胞凋亡情况。 主要观察指标：（1）观察18周断头后大鼠的脑组织结构。（2）TUNEL法检测大鼠的神经细胞凋亡情况。③记录大鼠体质量以及血压和脑卒中发生率及其变化。 结果：34只大鼠进入结果分析。①3组大鼠脑卒中发生率情况：易感型自发性高血压组、氯沙坦10mg／（kg&;#183;d）组及氯沙坦30mg／（kg&;#183;d）组分别为100％，22％，13％。②3组大鼠脑卒中评分：易感型自发性高血压组显著高于氯沙坦10mg／（kg&;#183;d）组和氯沙坦30mg／（kg&;#183;d）组[（3．50&;#177;0．55，0．67&;#177;1．12，0．38&;#177;0．74）分1。③3组大鼠脑组织电镜观察：易感型自发性高血压组大鼠坏死神经元电子密度增高，有的核膜失去双层结构，嵴断裂、减少甚至消失，呈空泡样改变；氯沙坦30mg／（kg&;#183;d）组和氯沙坦10mg／（kg&;#183;d）组大多数神经元染色质分布均匀，核膜规整，细胞形态基本正常；少数神经元核染色质较致密，部分嵴断裂、减少。④3组大鼠脑神经细胞凋亡情况：正常组明显低于氯沙坦30mg／（kg&;#183;d）组、氯沙坦10mg／（kg&;#183;d）组及易感型自发性高血压组[（2．5&;#177;0．8，13．9&;#177;4．3，14．0&;#177;4．4，52．0&;#177;16．7）％，P〈0．051。⑤3组大鼠血压变化：实验18周后正常组明显低于氯沙坦30mg／（kg&;#183;d）组、氯沙坦10mg／（kg&;#183;d）组和易感型自发性高血压组[（120．1&;#177;7．9，169.4&;#177;10．1,216．7&;#177;8．3225．5&;#177;6．8）mmHg（1mmHg=0．133kPa），P〈0．05]。⑥3组大鼠体质量变化：实验18周后正常组明显高于氯沙坦30mg／（kg&;#183;d）组、氯沙坦10mg／（kg&;#183;d）组和易感型自发性高血压组[（313.3&;#177;10．1，270．8&;#177;10．4，258．7&;#177;12．7，231．0&;#177;6．5）],P〈0．051。 结论：氯沙坦能降低自发性高血压大鼠的脑卒中发生率、减少其神经细胞凋亡，提示血管紧张素1型受体拮抗剂氯沙坦可通过拮抗血管紧张素1型受体的作用而预防和延缓脑卒中的发生，有脑保护作用。