重组人内抑素的抗肿瘤活性

目的观察重组人内抑素抗肿瘤活性及对血管内皮细胞增殖的抑制作用。方法用人癌裸鼠移植性肿瘤及小鼠移植性肿瘤模型对重组人内抑素进行抗肿瘤药效学观察,用MTT法观察其对血管内皮细胞及肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果重组人内抑素,可明显抑制人胃癌BGC803和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤的生长,对小鼠肝癌H22实体瘤亦呈一定的抑制作用。MTT试验结果显示重组人内抑素可抑制人胎脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖,对人结肠癌HCT-8等肿瘤细胞的增殖无影响。结论重组人内抑素具有较强的抗肿瘤作用,其作用机理可能与抑制血管内皮细胞增殖、抑制肿瘤新生血管形成有关。     

重组人内抑素诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的研究

目的以弗氏完全佐剂诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠为动物模型,观察重组人内抑素诱导AA大鼠滑膜细胞凋亡的作用。方法分离、培养滑膜细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测重组人内抑素体内用药对滑膜细胞增殖的影响;用缺口末端标记法(TUNEL)及流式细胞仪检测重组人内抑素对AA滑膜细胞凋亡的影响。结果AA大鼠表现为滑膜细胞异常增殖,rh-End(1.25、2.5、5.0mg·kg-1)体内治疗给药及rh-End6.25～50mg·L-1浓度范围体外给药可抑制AA大鼠成纤维样滑膜细胞的增殖反应。rh-End体内用药可诱导AA大鼠滑膜组织及细胞的凋亡,rh-End体外用药作用48h,AnnexinV/PI双染色法观察到大鼠AAFLS凋亡率为1.77%,rh-End(25mg·L-1)可诱导AA大鼠FLS的凋亡,其凋亡率为6.67%。结论rh-End可不同程度抑制FLS的增殖反应,并诱导其凋亡的发生,减轻AA大鼠增生性滑膜炎。上述结果提示炎症增生的滑膜细胞可能是rh-End的另一个作用靶点。     

重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞增殖及产生细胞因子的影响

目的观察重组人内抑素对体外培养佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖功能及产生细胞因子的影响,探讨其治疗佐剂性关节炎的作用机制。方法采用弗氏完全佐剂(CFA)诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠模型,用足容积法测量关节肿胀度;采用collagenasetypeⅡ消化法分离、培养滑膜细胞,MTT法检测重组人内抑素体内用药对滑膜细胞增殖的影响;放免法检测滑膜细胞上清液中IL-1β、TNF-α的含量。结果CFA致炎后d10,AA大鼠出现继发性炎症,此时皮下注射重组人内抑素(1·25,2·5,5mg·kg-1),连续7d,对照组于d10给予MTX(1·0mg·kg-1)。各剂量组能明显抑制AA大鼠的继发性足肿胀;重组人内抑素体内用药可明显减少AA大鼠滑膜细胞数量,抑制滑膜细胞的增殖,并呈剂量依赖关系;各剂量组均可明显抑制AA大鼠滑膜细胞产生过高的IL-1β和TNF-α。结论重组人内抑素抑制AA大鼠滑膜细胞过度的增殖及过高的细胞因子是其治疗AA的途径之一。     

重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织凋亡相关基因表达的影响

目的:观察重组人内抑素(rh-end)对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织p53、fas和bcl-2基因表达的影响。方法:采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,定量检测该药对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织p53、fas和bcl-2 mRNA表达的影响。结果:与模型组相比,rh-end治疗组大鼠滑膜组织fas和bcl-2 mR- NA表达水平增加,p53 mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:rh-end可经fas介导诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡,且不依赖于p53,不能被bcl-2所抑制。     

重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:观察重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮细胞生长因子(vascular endo-thelial cell growth factor,VEGF)的表达及其作用。方法:采用弗氏完全佐剂(Freund’s complete adjuvant,CFA)诱导的佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthri-tis,AA)大鼠模型,用足容积法测量关节肿胀度;免疫组织化学法检测血管内皮细胞生长因子的表达及其对微血管密度的影响。结果:弗氏完全佐剂致炎后d 10,佐剂性关节炎大鼠出现继发性炎症,皮下注射给予不同剂量的重组人内抑素(1.25、2.5、5 mg.kg-1),连续7 d,对照组于d 10给予氨甲喋呤(Methotrexate,MTX,1.0 mg.kg-1)。重组人内抑素各剂量组能明显抑制AA大鼠的继发性足肿胀,重组人内抑素各剂量组可不同程度减少AA大鼠关节滑膜组织高表达的VEGF,还可使滑膜组织的微血管密度减少。结论:重组人内抑素可显著抑制AA大鼠滑膜组织VEGF的表达及微血管密度,该作用可能与抑制血管翳的生成及减少滑膜细胞表面VEGF的表达有关。     

盐诱导法高效表达重组人内抑素

内抑素是 1996年底由Ｆｏｌｋｍａｎ研究组首次发现的一种血管生成抑制剂 ,1997年 1月 ,Ｃｅｌｌ杂志报道 :内抑素特异性抑制内皮细胞增殖 ,并对血管生成与肿瘤生长具有很强抑制作用〔3〕。 1997年 11月 ,Ｎａｔｕｒｅ〔6〕 杂志又相继报道了Ｆｏｌｋ ｍａｎ研究组的内抑素研究的新成果 ,内抑素多次使用不引起小鼠副作用 ,说明这是一种反复用药后动物不产生耐药性的药物。由于内抑素具有广谱抗瘤效应、低毒性、可直接针对内皮细胞并且不产生药物耐受性 ,内抑素可能有着较大的临床应用前景。通过基因工程方法大量获取重组人内抑素将对该新型…     

重组人内皮抑素的氨基酸组成分析

目的:应用 Hitachi L-8800型氨基酸分析仪对重组人内皮抑素(rh-endostatin)进行氨基酸组成分析,以为其结构确认提供依据。方法:采用酸水解,以外标法测定样品的氨基酸含量及其组成。结果:测定了 rh-endostatin 样品中15种氨基酸的组成,与其理论值相符,误差在15%以内。结论:以氨基酸自动分析仪对样品进行氨基酸组成分析,重复性好,误差较小,能够为样品的结构确认提供一定的依据。     

重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠关节软骨酸敏感离子通道的影响及其保护作用

目的观察重组人内抑素(rh-End)对佐剂性关节炎大鼠关节软骨酸敏感离子通道(ASICs)表达的影响,探讨其对关节软骨的作用。方法将大鼠随机分成正常组、AA模型组、rh-End 1.25、2.5、5.0mg·kg-1组和阿司匹林50mg·kg-1阳性对照组。弗氏完全佐剂(CFA)致佐剂性关节炎(adjuvant-induced arthritis,AA)后d10,大鼠出现继发性炎症,此时皮下注射重组人内抑素,连续7d,对照组灌胃给阿司匹林;正常组与模型组给予等容量的无菌注射用水。光学显微镜观察关节病理变化,半定量RT-PCR方法检测rh-End对AA大鼠关节软骨ASICs和蛋白聚糖体mRNA的影响,Western blot方法检测rh-End对AA大鼠关节软骨ASICs蛋白的影响,免疫组织化学技术测定rh-End对AA大鼠关节软骨中的Ⅱ型胶原蛋白合成的影响。结果rh-End各剂量组能明显抑制AA大鼠关节软骨组织中的ASICs表达,并升高关节软骨基质成分Ⅱ型胶原蛋白和蛋白聚糖体mRNA表达量。结论重组人内抑素通过抑制ASICs的表达进而保护AA大鼠关节软骨。     

XELOX 方案联合重组人血管内皮抑素治疗中晚期大肠癌的疗效观察

目的：探讨XELOX方案联合重组人血管内皮抑素治疗晚期大肠癌的的临床疗效。方法将64例中晚期大肠癌患者随机分为观察组和对照组各32。对照组给予XELOX方案治疗,观察组在对照组基础上联合应用重组人血管内皮抑素。治疗后评价2组临床疗效及不良反应。结果观察组临床获益率为75．00％高于对照组的50．00％,病情控制率为84．38％高于对照组的62．50％,差异均有统计学意义（P＜0．05）。2组不良反应比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 XELOX方案联合重组人血管内皮抑素治疗中晚期大肠癌安全、有效,值得推广应用。     

重组人血管内皮抑制素对人胃癌MGC-803细胞株VEGF表达的影响

目的探讨重组人血管内皮抑制素(rhEndo)对人胃癌细胞株MGC-803血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法免疫组化法观察MGC-803细胞株VEGF的蛋白表达。rhEndo处理MGC-803后,用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白水平检测VEGF表达量的变化。结果 MGC-803细胞高表达VEGF蛋白,经rhEndo处理后VEGF mRNA和蛋白表达量明显减低(P<0.05)。结论 rhEndo能抑制MGC-803细胞中VEGF的表达。     

重组人血管内皮抑制素联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞VEGF基因表达、增殖及侵袭力的影响

目的 观察重组人血管内皮抑制素(rhEndo)联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞VEGF基因表达、增殖及侵袭力的影响.方法 顺铂、rhEndo、rhEndo联合顺铂分别处理MG-63细胞,采用RT-PCR和Western blot检测细胞VEGF mRNA和蛋白表达量,CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室体外迁移实验检测细胞侵袭和迁移能力.结果 rhEndo联合顺铂组对VEGF mRNA和蛋白表达量、细胞增殖、侵袭迁移的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用均显著高于rhEndo、顺铂单药组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 重组人血管内皮抑制素联合顺铂能够在抑制骨肉瘤MG-63细胞VEGF表达、细胞增殖和侵袭力、促进细胞凋亡方面发挥协同作用.     

Biophysical and biological characterization of PEGylated recombinant human endostatin

Recombinant human endostatin (MES), showing potent inhibition on angiogenesis and tumour growth, has great potential as a therapeutic agent for tumours. The aim of this study was to evaluate the biophysical and biological characterization of PEGylated recombinant human endostatin (M₂ES). Recombinant human endostatin was mono‐PEGylated by conjugation with methoxy polyethylene glycol aldehyde (mPEG‐ALD), and the modification site was identified by digested peptide mapping and matrix assisted laser desorption/ionization–time of flight–mass spectrometry (MALDI–TOF–MS). The purity was assessed by SDS‐PAGE, high‐performance liquid chromatography (HPLC), and capillary zone electrophoresis. The physicochemical property was analyzed through fluorescence spectroscopy, and circular dichroism. The bioactivity and anti‐tumour efficacy of M₂ES were evaluated using an in vitro endothelial cell migration model and a null‐mouse xenograft model of a prostatic cancer, respectively. M₂ES molecules contain a single 20 kDa mPEG‐ALD molecule conjugated at the N‐terminal portion of MES. The purity of M₂ES was greater than 98%. The physicochemical analysis demonstrated that PEGylation does not change the secondary and tertiary structure of MES. Notably, M₂ES retards endothelial cell migration and tumour growth when compared to control group. These biophysical and biological characterization study data contribute to the initiation of the ongoing clinical study.     

重组人血管内皮抑素治疗小鼠恶性腹腔积液疗效及作用机制研究

目的：研究重组人血管内皮抑素（恩度）治疗小鼠恶性腹腔积液的疗效及作用机制。方法：用小鼠H22细胞系建立小鼠恶性腹水瘤模型。120只ICR小鼠随机分为5组：对照组（0．9％NS）,恩度组1（恩度8mg／kg）,恩度组2（造模后24h开始给予恩度8mg／kg）,联合组（顺铂1mg／kg＋恩度8mg／kg）,顺铂组（顺铂1mg／kg）,恩度组2从造模后24h开始给药,其余各组从第6天开始给药,顺铂5d,恩度6d,均为1次／d。记录各组小鼠体重、腹水体积、生存期和明显不良反应;测定小鼠腹水伊文思蓝的吸光度值间接反映小鼠腹膜通透性;采用ELISA法测定小鼠血清、腹水中血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）浓度。结果：与对照组比较,各实验组均能抑制小鼠腹水生成、延长小鼠生存期,降低小鼠腹膜通透性及小鼠血清、腹水中VEGF、MMP-2水平（P〈0．05）,以联合组较明显。结论：恩度联合顺铂治疗小鼠恶性腹腔积液疗效优于恩度、顺铂单药,其作用机制可能为联合用药进一步降低了小鼠血清、腹水中VEGF、MMP-2水平。     

重组人血管内皮抑制素注射液联合化疗治疗老年晚期非小细胞肺癌的效果观察

目的探讨重组人血管内皮抑制素注射液联合化疗治疗老年晚期非小细胞肺癌的临床效果。方法选择患者80例,分为两组,每组各40例,对照组化疗方案：多西他塞75mg／m2联合吉西他滨1000mg／m2,观察组在对照组的基础上使用重组人血管内皮抑制素注射液,比较两组患者治疗前后的生活质量KPS评分,并统计两组的近期疗效。结果治疗后观察组的生活质量KPS评分显著高于对照组（P〈0．05）,观察组的有效率为35．0％,显著高于对照组的10．0％（P〈0．05）。结论重组人血管内皮抑制素注射液联合化疗应用于晚期非小细胞肺癌患者,能显著提高患者的生活质量,延长生存时间,值得临床推广。