华支睾吸虫重组蛋白应用于ABC-ELISA检测特异性循环抗体的研究

目的 评价重组蛋白在华支睾吸虫病诊断上的价值，探索以重组蛋白替代天然抗原用于ELISA等血清学方法诊断华支睾吸虫感染的可能性。方法 分别使用重组华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CysB)与华支睾吸虫成虫可溶性抗原(CAA)，以ABC-ELISA检测华支睾吸虫病、其它寄生虫感染及健康人血清特异性IgG．比较两种抗原用于检测的敏感性与特异性。结果 共检测了112份华支睾吸虫感染血清，使用重组抗原CysB与成虫粗抗原CAA的阳性检出率分别为92．9％(104／112)及94．6％(106／112)；分别检测健康人血清56例、日本血吸虫病血清20例及肺吸虫病血清10例．对于两种抗原，华支睾吸虫特异性IgG检测阴性率均相同．上述三类血清的阴性率分别为96．5％(54／56)、95％(19／20)及90％(9／10)。结论 华支睾吸虫重组蛋白CysB用于血清特异性抗体检测具有较高的敏感性及特异性，与成虫可溶性抗原(CAA)的诊断应用价值相近，有望成为应用于华支睾吸虫病诊断的替代抗原之一。     

华支睾吸虫特异性抗原的筛选

华支睾吸虫特异性抗原的筛选田海生苏畅张耀娟（南京医科大学寄生虫学教研室，南京２１００２９）关键词华支睾吸虫；电泳；特异性抗原华支睾吸虫、血吸虫、肺吸虫、肝片形吸虫和姜片虫成虫间存在着共同抗原，并引起交叉反应，已为多年来中外学者的工作所证实［１～４］...     

华支睾吸吸虫尿素溶解性抗原的临床应用

采用ＥＬＩＳＡ法，以华支睾吸虫成虫尿素溶解性抗原和该虫水溶性抗原检测９８份华支睾吸虫病人血清，阳性率分别为９２．８６％和９４．９８％。用这两种抗原检测日本血吸虫病人血清，假阳性率分别为１１．１１％和３３．３３％，肺吸虫病人血清的阳性率分别为０和２０％。结果表明，ＵＳＡ有与ＡＳＡ相似的敏感性，但特异性显著高于后者，具有更好的实用价值。     

华支睾吸虫尿素溶解性抗原的临床应用

采用ＥＬＩＳＡ法，以华支睾吸虫成虫尿素溶解性抗原（ＵＳＡ）和该虫水溶性抗原（ＡＳＡ）检测９８份华支睾吸虫病人血清，阳性率分别为９２．８６％和９４．９８％。用这两种抗原检测日本血吸虫病人血清，假阳性率分别为１１．１１％和３３．３３％，肺吸虫病人血清的阳性率分别为０和２０％。结果表明，ＵＳＡ有与ＡＳＡ相似的敏感性，但特异性显著高于后者，具有更好的实用价值。     

三种吸虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应性及其表位研究

采用免疫标记技术（ＴＥＳ一ＩＥＳＴ、ＡＷＡ一ＩＥＳＴ和ＴＥＳ一ＩＦＡＴ）及酶联免疫印渍技术（ＥＬＩＢ）对卫氏并殖吸虫，华支睾吸虫和姜片虫成虫可溶性抗原与日本血吸虫卵和成虫可溶性抗原之间的交叉反应性及其表位分子基础进行了研究。７１０份上述３种吸虫病人血清与日本血吸虫抗原之间的交叉反应率分别为３．９％（１０／２５９），４．２％（１１／２６１）和３．２％（６／１９０）．用ＥＬＩＢ对上述吸虫组分抗原分析结果表明，卫氏并殖吸虫、华支睾吸虫和姜片虫抗原与日本血吸虫抗原之间的交叉反应表位分子量分别为９７～７６ｋｕ，４０～１４．５ｋｕ和１０６～１４ｋｕ，华支睾吸虫和姜片虫成虫抗原之间显示６７～１４ｋｕ，范围的交又反应表位分子量。本研究为今后纯化抗原，提高血清学方法的特异性和敏感性，提供了重要依据。     

免疫球蛋白检测在华支睾吸虫病诊断上的应用价值

华支睾吸虫病是我区主要寄生虫病之一。以往诊断此病主要依靠粪检,近年来,血清学检测技术已应用于华支睾吸虫病的诊断。为了评价各类免疫球蛋白在华支睾吸虫病诊断中的应用价值,1990年5月,我们应用ELISA法同时检测华支睾吸虫病人血清中的特异性IgG、IgM和IgA抗体.现将结果报告如下。材料、方法和结果一、可溶性蛋白抗原的制备:从实验感染的家兔肝胆管内获取华支睾吸虫成虫,用     

湖北钉螺与日本血吸虫、斯氏狸殖吸虫及华枝睾吸虫共同抗原的研究

本文研究了湖北钉螺与日本血吸虫、斯氏狸殖吸虫、华枝睾吸虫的共同抗原。对流免疫电泳和免疫电泳均发现抗湖北钉螺血清可与日本血吸虫15天龄、18天龄童虫,42天龄成虫,斯氏狸殖吸虫成虫,华枝睾吸虫成虫抗原反应。而中和血清和正常兔血清则不能与这些抗原反应。说明这些吸虫与湖北钉螺确有共同抗原。作者认为不宜用钉螺抗原取代血吸虫抗原诊断血吸虫病。目前对共同抗原在吸虫幼虫免疫逃避中的作用下定论还为时过早,但吸虫与螺类在发展进化史上似有亲缘关系。     

应用免疫荧光法检测华枝睾吸虫病特异性抗体的研究

用华枝睾吸虫成虫冰冻切片做抗原,以间接免疫荧光法检测了46份华枝睾吸虫病人血清中特异性IgG抗体。当血清1:10和1:20稀释时,阳性率分别为89.1%(41/46)和60.9%(28/46)。提示本法可能成为华枝睾吸虫病辅助诊断和流行病学调查的一种新方法。     

抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步应用

本文用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫的BALB/c小鼠与SP_2/o骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆化后获得4株抗华支睾吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞。该4株荜克隆抗体与华支睾吸虫成虫抗原作ELISA,结果均为阳性。经交叉试验(ELISA法)证明与日本血吸虫成虫抗原,虫卵抗原和卫氏并殖吸虫成虫抗原均呈阴性反应。4株单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定除3F_7株为IgG_1外,其余3株均属IgM。初步试用3F_7株单克隆抗体作ELISA双抗体法检测人体华支睾吸虫循环抗原。     

台山市华支睾吸虫病基线调查

目的调查台山市华支睾吸虫病流行现况，为大规模开展华支睾吸虫病防治工作和评价防治效果提供科学依据。方法以随机抽样方法抽取台山市台城镇、大江镇作为调查点，采用改良加藤氏厚片法粪便检查人群华支睾吸虫卵。并开展中间宿主和保虫宿主调查；对华支睾吸虫住院慢性病人进行危害性调查。结果华支睾吸虫总感染率为6．8％；男性感染率为7．0％，女性感染率为6．5％，以20～49岁年龄组最高。解剖淡水鱼、猫、狗、老鼠没发现华支睾吸虫囊幼和成虫，但9份猫肝中均发现华支睾吸虫卵。结论华支睾吸虫已对当地居民的健康造成较严重的危害，应采取综合措施减少华支睾吸虫感染。     

Comparison of Dot-ELISA with Sandwich ELISA in detecting circulating antigen in patients with bancroftian filariasis.

Dot-ELISA assay was compared with standard Sandwich ELISA in detecting parasite antigen in sera from patients with bancroftian filariasis. The same monoclonal antibody and the same serum samples were used in both assays. With Dot-ELISA, 67 of 70 serum samples from microfilaremic patients were positive at a dilution of 1:50. End titers ranged from 1:80 to 1:1 280. While with Sandwich ELISA, 64 of the 70 serum samples were positive at a dilution of 1:10. End titers ranged from 1:10 to 1:320. The specificity of both assays was over 91%, but their sensitivity was markedly different. Dot-ELISA could detect as little as 0.055 ng/ml microfilarial antigen added to normal human serum, whereas the lower limit of detection by Sandwich-ELISA was 10 ng/ml parasite antigen. An additional advantage of Dot-ELISA is that it does not require radioactivity or sophisticated equipment and, therefore, can be performed in virtually all filariasis-endemic areas.

     

人旋毛虫病血清与诊断抗原的检测方法的比较研究

以旋毛虫肌肉期幼虫的分泌排泄抗原（ES）和纯化ES中46～58KD抗原（P－ES）为诊断抗原，用Dot－ELISA同时检测34份旋毛虫病人血清，阳性检出率分别为91．18％和94．12％（P＞0．05）．而100份正常人血清均为阴性；检测其它4种蠕虫病人血清62份，交叉反应率分别为29．3％和0％，P－ES的特异性明显优于ES（P＜0．05）。另外，以P-ES为珍断抗原，比较Dot-ELISA和间接ELISA用于诊断旋毛虫病人的检测效果，实验表明：Dot-ELISA不仅有间接ELISA相似的敏感性和特异性，而且简便、快速、经济，更适合于推广应用。     

斑点ELISA筛选单克隆抗体的研究

在抗日本血吸虫单克隆抗体的制备过程中，探索了用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）作为筛选方法，成功地获得了一株针对血吸虫循环抗原的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。初步结果表明：该株单抗３Ｃ２在ＰＶＦ－环卵沉淀试验中呈阳性；其检测４０例急性血吸虫病患者血清中循环抗原均呈阳性反应，２０例健康人对照血清无假阳性反应。Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ用作筛选具有操作简单、快速，无需特殊仪器等优点。     

斑点酶联免疫吸附试验检测伤寒特异性抗体

目的　验证斑点酶联免疫吸附试验 (Dot -ELISA)检测伤寒抗体的敏感性和特异性。方法　采用Dot -ELISA测定伤寒沙门菌包膜抗原V、菌体抗原O和鞭毛抗原Hd 的特异性抗体 ,并与肥达氏反应相比较。结果　肥达氏反应均为阴性 ,而经Dot -ELISA试验 ,疑似伤寒患者血清中检出 3种抗体阳性 1例 ,非伤寒发热病人血清中检出单项Hd 抗体阳性1例。Dot -ELISA法比肥达氏反应敏感 10倍以上 ,且无交叉反应。结论　该法有较高的特异性和敏感性 ,且操作简单、快速、无需特殊设备 ,宜于临床推广应用。     

斑点免疫金银染色试验与斑点ELISA诊断血吸虫病的比较

以日本血吸虫成虫抗原，应用斑点免疫金银染色法（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断日本血吸虫病，５５例粪检阳性病人血清抗体检出率均为１００．０％，５０例正常人血清阴性符合率均为９８．０％，与５０例肝吸虫病人的交叉反应分别为２．０％和４．０％，两法未见显著性差异（Ｘ１１＝０．３４４Ｐ＞０．０５）。但进一步研究显示金标法的混合阳性血清最终滴度较酶法高４～５倍；使用抗原节省；２０份阳性血清抗体检出阳性终点也较酶法高２～４个滴度。     

斑点酶联免疫吸附试验检测血吸虫病

用成虫、卵及尾蚴抗原做斑点酶联免疫吸附试验(Dot—ELISA)检测96份血吸虫患者血清,阳性率分别、为70.8%、91.7%及81.3%。三种抗原 Dot—ELISA 的互补阳性率为93.8%。而对50份献血员及38份肺吸虫患者血清进行检测都是阴性。Dot—ELHSA 的重现性及稳定性好,抗原用量少、简单、出结果快。     

日本血吸虫成虫67kD抗原模拟表位的筛选及其免疫原性

目的：筛选日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位，对其免疫学活性予以鉴定。方法：用粗提日本血吸虫成虫67kD抗原的抗体IgG作配体筛选噬菌体12肽库，随机挑取三轮筛选后的噬菌体克隆，Dot-ELISA检测其特异性：用混和阳性噬菌体克隆免疫小鼠3次，攻击感染后45d剖杀，计数虫荷。结果：经三轮筛选，特异噬菌体得到富集，挑取的11个噬菌体克隆经Dot-ELISA鉴定均与67kD抗原免疫血清呈阳性反应。混合噬菌体克隆的免疫血清可识别67kD抗原，并具有一定的抗血吸虫的免疫保护效果。结论：利用噬菌体随机肽库技术获得了日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位，这些表位具有良好的免疫原性。     

斑点-ELISA与平板-ELISA诊断脑囊虫病的敏感性比较观察

应用斑点-ELISA和平板-ELISA对52例脑囊虫病患者的血清进行抗体检测。结果显示,两种免疫方法诊断脑囊虫病的敏感性近似(阳性率分别为92.3%与90.4%);与40例正常人血清均无假阳性反应。但斑点-ELISA具有节省抗原,操作简便,不需特殊仪器设备等优点,适用于临床诊断及流行病学调查。     

斑点-ELISA与平板-ELISA诊断脑囊虫病的敏感性比较观察

应用斑点-ELISA 和平板-ELISA 对52例脑囊虫病患者的血清进行抗体检测。结果显示,两种免疫方法诊断脑囊虫病的敏感性近似(阳性率分别为92.3%与90.4%);与40例正常人血清均无假阳性反应。但斑点-ELISA 具有节省抗原,操作简便,不需特殊仪器设备等优点,适用于临床诊断及流行病学调查。     

班氏丝虫宿主循环抗原的检测

应用兔抗牛丝虫抗体ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法检测安徽流行区人体班氏丝虫循环抗原。微丝蚴血症者血清总阳性率９６％（２４／２５），尿液总阳性率为６０％（１５／２５），４份乳汁阳性率均为１００％。１５份尿液阳性和４份乳汁阳性者与血清阳性结果的符合率分别为１００％（１５／１５）和７５％（３／４）。检测江苏非流行区正常人血清、尿液、乳汁共４３份，全部阴性。１１份肠道线虫感染者尿液全为阴性，血清Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ阴性。１０份肺吸虫感染者血清Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ阴性。结果表明，班氏丝虫循环抗原不仅存在于血清而且存在于尿液和乳汁中。