白花蛇舌草对小鼠淋巴细胞增殖和抗体产生的影响

实验材料　白花蛇舌草 (购于山东滨州医学院附属医院中药房 )2 0 0g加水 2 0 0 0ml,温火煎煮 2h ,去渣浓缩为 2 0 0ml备用。美国Mult skan产全自动酶标仪 ;CO2 培养箱由美国Forma公司生产 ;美国产(IE .USA)冷冻离心机 ;超净工作台由苏州净化设备厂生产 ;ConA为美国Sigma产品 ;MTT为FLUKA公司产品 ;二甲基亚砜 (DMSO)为苏州化工研究所生产 ;RPMI-164 0为美国GIBCO公司产品。2　方法2 1　动物分组与给药　昆明小鼠 2 4只 ,体重 18～ 2 2g ,雌雄不限 ,由本院动物室提供。随机分为两组 ,每组 12只。Ⅰ组用生理盐水灌胃 ,0 5ml…     

中药白花蛇舌草对小鼠免疫功能影响的初步研究

目的　探讨白花蛇舌草对小鼠免疫功能的影响。方法　用 10 0 %白花蛇舌草水煎液定期给小鼠连续灌胃 15d ,1次 /d ,然后观察其对小鼠抗体产生能力、淋巴细胞增殖和IL - 2产生的影响。结果　白花蛇舌草对以上免疫学指标均有明显增强作用 ,与对照组比较有非常显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论　白花蛇舌草对小鼠免疫功能有一定增强作用。     

白花蛇舌草降血清丙氨酸氨基转移酶

笔者临床中以白花蛇舌革为主组方，治疗病毒性肝炎血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）升高者疗效颇佳。现简介如下。     

含黄芪血清对淋巴细胞增殖及IL—2产生的影响

黄芪煎剂浓缩液和含黄芪小鼠血清均对小鼠脾淋巴细胞增殖、混合淋巴细胞培养反应及ＩＬ２的产生有促进作用，且表现出剂量依赖性。表明黄芪煎剂在体内外均具有促进淋巴细胞增殖、混合淋巴细胞培养反应及ＩＬ２产生的作用。     

白花蛇舌草对类风湿关节炎滑膜细胞增殖的影响

白花蛇舌草（hedyotis diffusa,HD）为茜草科植物白花蛇舌草的全草,味酸,性寒,有收敛止血、清热解毒、利湿通淋的作用。目前多用于恶性肿瘤的治疗研究,但也有医家以HD组方治疗类风湿关节炎（RA）,并取得良好的疗效。为进一步研究HD治疗RA的机理,本实验研究了HD对RA滑膜细胞增殖的影响。     

黄芪-白花蛇舌草抑制肺癌A549细胞增殖机制

目的 从细胞水平观察黄芪-白花蛇舌草对人肺腺癌A549细胞增殖及白细胞介素-6（IL-6）,磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）,蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）,雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）,细胞周期蛋白D₁（Cyclin D₁）表达量的影响,并探讨其作用的分子机制。方法 设立空白组（完全培养基）,黄芪-白花蛇舌草低、中、高质量浓度组（20,40,60 mg·L^-1）,顺铂低、中、高质量浓度组（5,10,20 mg·L^-1）,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测黄芪-白花蛇舌草（0,20,40,60 mg·L^-1）和顺铂（0,5,10,20 mg·L^-1）干预A549细胞24,48,72 h后的细胞活性,计算各组细胞增殖能力,筛选出各药物组最佳浓度;分别用完全培养基,黄芪-白花蛇舌草（40 mg·L^-1）,顺铂（10 mg·L^-1）,联合药物（40 mg·L^-1+10 mg·L^-1）干预肺腺癌A549细胞,设置为空白组、黄芪-白花蛇舌草组、顺铂组、联合组,计算各组在24,48,72 h后对A549细胞增殖抑制影响;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测各组72 h后细胞培养上清中IL-6的水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组蛋白PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁表达的变化情况。结果 在作用细胞24 h后,各黄芪-白花蛇舌草组对细胞增殖未表现出明显抑制,作用48 h,与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草组对肿瘤细胞有明显增殖抑制作用（P<0.05）,表现出时间依赖性,在作用细胞72 h,黄芪-白花蛇舌草各浓度组未表现出明显差异,故选用40 mg·L^-1为中药最佳浓度组,用于后续实验。与空白组比较,经过不同浓度顺铂干预后,细胞增殖均受到不同程度抑制（P<0.05）,表现出明显的时间依赖性,基于细胞存活率考虑,选用顺铂10 mg·L^-1为最佳浓度。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草与顺铂联合应用明显抑制肺腺癌A549细胞增殖,增殖抑制率表现出明显的时间依赖性（P<0.05）,且药物作用72 h,联合组与其他两组比较差异更加显著（P<0.01）;与空白组比较,各用药组细胞培养液IL-6分泌显著降低（P<0.01）,以联合组下降更加突出。与空白组比较,黄芪-白花蛇舌草、顺铂均能降低HIF-1α,Cyclin D₁ mRNA水平（P<0.05,P<0.01）,且联合用药降低幅度更加明显;各用药组PI3K,p-Akt,mTOR,HIF-1α,Cyclin D₁蛋白均明显降低（P<0.05,P<0.01）,且联合组各蛋白表达量明显低于顺铂组（P<0.01）。结论 黄芪-白花蛇舌草对肺癌A549细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其抑制IL-6/PI3K/Akt/mTOR-HIF-1α轴的表达与分泌有关。     

白花蛇舌草治疗大鼠胶原诱导性关节炎的实验研究

目的探讨白花蛇舌草(HD)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型的抗炎效果及其免疫学机制。方法首先建立Wistar大鼠CIA模型,造模成功后随机分为正常对照组、CIA模型对照组、白花蛇舌草正常量组、白花蛇舌草高剂量组、雷公藤组并给予相应处理。每周观察各给药组的关节炎指数,于第6周处死大鼠检测各组血清的TNF-α、IL-6的水平。结果 HD组大鼠关节炎指数显著降低(P<0.05或0.01);免疫后第6周,2个HD组大鼠血清TNF-α及IL-6的水平较CIA模型组明显降低(P<0.05),与雷公藤组当。结论 HD能够缓解CIA大鼠症状、控制炎症,其机制是抑制TNF-α和IL-6的水平。     

白花蛇舌草注射液抗肿瘤和免疫调节作用实验研究

目的研究白花蛇舌草注射液抗肿瘤及对荷瘤小鼠的免疫调节作用。方法采用MTT比色法,检测白花蛇舌草注射液对肿瘤细胞株增殖的抑制作用,计算抑制率。测定荷瘤小鼠脾脏NK细胞活性、腹腔巨噬细胞吞噬功能、脾细胞增殖的影响、血清凝集素活性和脾脏IL-2活性5项指标。结果白花蛇舌草注射液对A549、SGC-7901、HEP-G2、Hela的增殖,剂量在100～20μg/mL范围时,均有不同程度的抑制作用。白花蛇舌草注射液能明显增强荷瘤小鼠脾NK细胞杀伤活性,增强处于IL-2活性严重低下状态下荷瘤小鼠的IL-2活性,增强荷瘤小鼠脾细胞增殖,增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能,提高荷瘤小鼠体液免疫血清中抗羊红细胞凝集素值。结论白花蛇舌草注射液具有体外抗肿瘤及提高荷瘤小鼠免疫功能的作用。     

白花蛇舌草对葡聚糖硫酸钠诱导的慢性溃疡性结肠炎小鼠的影响

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物(EEHDH)治疗慢性溃疡性结肠炎(UC)及抑制肠炎组织异常增生的作用。方法小鼠随机分为对照组,模型组,EEHDH低、中、高剂量(2.5、10.0、20.0 g/kg)组,葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导UC模型,每天记录小鼠体质量、便血、便形等症状改变,HE染色评估小鼠结肠黏膜组织病理改变,ELISA和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测血清及肠组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化,免疫组化分析肠上皮细胞中核抗原Ki67阳性率。结果与模型组比较,EEHDH中、高剂量组小鼠体质量下降相对缓慢,停止DSS刺激后恢复也较快;同时小鼠腹泻、便血症状改善明显,病理损伤和肠组织异常增生显著降低(P0.05、0.01);小鼠血清及肠组织中IL-6、TNF-α的表达及Ki67阳性率显著降低(P0.05、0.01)。结论 EEHDH能够有效改善DSS诱导的UC症状,并通过抑制IL-6等炎症因子表达降低肠组织的病理损伤、炎症浸润及异常增生,EEHDH对UC的治疗及肠炎相关肿瘤的预防具有重要的价值。     

白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤T淋巴细胞的影响

目的观察白花蛇舌草对H22肝癌细胞移植瘤鼠瘤体T淋巴细胞亚群的影响。方法将中药处理后的H22肝癌细胞,采用HSP70单抗封闭技术分为白花蛇舌草和党参未封闭、封闭及RPMI-1640空白对照共5组;观察各组CD4+、CD8+T淋巴细胞表达情况。结果与空白对照组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+、封闭组CD4+表达明显上调;党参封闭组CD4+表达也明显上调;与白花蛇舌草封闭组比较,白花蛇舌草未封闭组CD8+T淋巴细胞表达明显上调。结论白花蛇舌草诱导恶性肿瘤瘤体HSP70的高表达,增强机体对肿瘤的免疫作用,其机理可能与提高瘤体CD4+、CD8+CTL表达有关。     

白花蛇舌草与混淆品松叶耳草的生药鉴别

本文对白花蛇舌草与混淆品松叶耳草进行了药材性状、显微特征和薄层色谱比较鉴别,两者有明显区别,不应混用。     

白花蛇舌草诱导人肺巨细胞癌细胞株PG细胞凋亡的初步研究

目的研究白花蛇舌草诱导人肺巨细胞癌细胞株PG细胞凋亡的作用，以探讨其抗肿瘤的作用机制。方法用不同浓度的白花蛇舌草含药血清分别处理PG细胞，采用流式细胞仪分析白花蛇舌草对PG细胞在细胞周期各个时相不同DNA含量和细胞凋亡峰的影响。结果经白花蛇舌草含药血清作用的PG细胞在非凋亡细胞二倍体峰（G1）之前出现典型的凋亡细胞峰，不同浓度的含药血清对PG细胞的作用存在明显的量效关系，凋亡率分别为6．86％、9．77％、11．69％。结论诱导肿瘤细胞凋亡可能是白花蛇舌草抗肿瘤作用机理之一。     

白花蛇舌草对大肠癌耐药细胞microRNAs表达的影响

目的:探讨白花蛇舌草(Hedyotic Diffusa Wilid,HDW)对大肠癌5-FU耐药细胞miRNAs表达的调控作用,进一步揭示其逆转大肠癌多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)作用机制。方法:通过体外培养HCT-8/5-FU细胞,经HDW处理,采用MTT检测细胞活力、倒置显微镜观察细胞形态、microRNA(miRNA)表达谱芯片分析、QPCR验证差异miRNA表达、GO及Pathway分析预测差异miRNA调控的信号通路。结果:HDW可显著抑制大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞的活力,降低细胞密度;HDW调控57个miRNA差异表达,其中上调23个,下调34个;QPCR验证HDW上调miR-92b-5p、miR-1247-3p、miR-4800-5p的表达,下调miR-4454、miR-4443、miR-483-5p的表达;信号通路预测显示HDW可调控PI3K/Akt、TGF-β/Smad、MAPK、P53、Wnt、JAK-STAT等多条与细胞耐药、迁移、侵袭、增殖、凋亡有关的信号通路。结论:HDW对大肠癌5-FU耐药细胞HCT-8/5-FU具有显著的抑制作用,通过调控miRNAs表达是其逆转大肠癌耐药的作用机制之一。     

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中齐墩果酸的含量及其药动学研究

目的建立大鼠血浆中齐墩果酸的LC-MS/MS测定法,并应用于灌胃白花蛇舌草提取物齐墩果酸在大鼠体内的药动学研究。方法取大鼠血浆100μL,加入10μL内标甘草次酸(5μg·mL-1),依次用乙酸乙酯800μL提取两次,上清液用氮气流吹干,100μL流动相复溶,高速离心10 min,取上清液5μL进行LC-MS/MS测定。色谱条件:Agilent 1200高效液相色谱系统,色谱柱Phenomenex Gemini 110A C18色谱柱(50 mm×2.0mm,5μm);流动相:乙腈-0.01%甲酸水梯度洗脱;柱温为40℃;流速为0.3 mL·min-1。质谱:API4000负离子MRM模式,齐墩果酸和甘草次酸的选择检测离子质荷比分别为m/z 455.3→455.3,m/z 469.4→425.3。结果齐墩果酸血浆浓度线性范围0.5～250 ng·mL-1,线性关系良好(r=0.9979),最低检测限(LOQ)为0.1 ng·mL-1,提取回收率为62.76%～65.38%,日内精密度RSD为3.55%～7.45%,日间精密度RSD为2.34%～7.60%,稳定性均符合方法学测定要求,血浆无内源性基质干扰。结论该法简便,灵敏,重复性好,可应用于测定血浆中齐墩果酸的含量并应用于灌胃白花蛇舌草提取物大鼠体内齐墩果酸的药物动力学研究。     

白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤细胞凋亡的影响

目的 观察白花蛇舌草诱导HSP70表达对H22肝癌细胞移植瘤小鼠瘤组织细胞凋亡的影响.方法 以经过白花蛇舌草和党参处理后的小鼠活体腹水H22肝癌细胞免疫小鼠,用HSP70单抗封闭后分为白花蛇舌草未封闭组与封闭组、党参未封闭组与封闭组以及空白对照组,共5组,每组10只,然后再以培养的H22肝癌细胞攻击小鼠形成移植瘤;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法原位检测移植瘤小鼠瘤组织细胞凋亡的情况.结果 白花蛇舌草组移植瘤小鼠瘤组织细胞核中可见较多棕褐色阳性颗粒,与党参组相比,细胞凋亡数及染色强度明显增多、增强;白花蛇舌草及党参组细胞凋亡的情况与空白对照组比较,差异均具有显著性,尤以白花蛇舌草组更为明显.尽管白花蛇舌草和党参未封闭组与封闭组组间细胞凋亡的差异并无显著性,但白花蛇舌草未封闭组较封闭组具有凋亡数增多和染色强度增强的趋势.结论 白花蛇舌草可能通过诱导H22肝癌细胞移植瘤小鼠瘤组织HSP70表达,在一定程度上促进肝癌细胞凋亡而达到抗肿瘤的作用.     

白花蛇舌草水提部位体内外抗肿瘤实验研究

目的 探讨白花蛇舌草水提部位(HD-1)体内外抗肿瘤活性.方法体外实验采用MTT法检测HD-1对人肝癌细胞HepG2、人直结肠癌细胞株HCT-116的生长抑制作用;体内实验采用S180实体瘤小鼠动物模型评价HD-1不同剂量(100,50 mg· kg-1)对S180肉瘤的生长抑制作用及对荷瘤小鼠体重、抑瘤率、胸腺指数、脾指数等的影响.结果HD-1在体外可显著抑制HepG2、HCT-116肿瘤细胞的增值,其效果与剂量和作用时间相关;体内试验表明,与模型组比较,HD-1高、中剂量组(100,50 mg·kg-1)显著抑制S180肉瘤生长,平均抑制率分别为12.5％和33.1％,脾指数显著升高(P＜0.05);环磷酰胺(CTX)联合HD-1中剂量组与CTX(20mg· kg-1)组比较,联合组胸腺指数、脾脏指数、肝指数显著提高(P＜0.05),肺指数显著降低(P＜0.01).结论HD-1在体外能明显抑制HepG2、HCT-116细胞的增值,体内能抑制荷瘤小鼠S180肉瘤生长.     

白花蛇舌草方剂联合放疗对食道癌患者生活质量的影响及疗效分析

目的:研究以白花蛇舌草为主方剂配合放疗治疗食道癌的临床疗效,从而更好地指导食道癌的治疗。方法:80例食道癌患者随机分为对照组(放射性治疗)和观察组(白花蛇舌草方剂联合放疗),观察两组患者治疗后的临床疗效、生活质量、不良反应发生情况,以及治疗后肿瘤坏死因子-β(TNF-β)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,以及血清肿瘤标志物CA125,CEA变化情况。结果:与对照组相比,观察组治疗的总有效率明显升高(60.0%vs 42.5%),治疗后生活质量明显改善(80.0%vs 62.5%),P<0.05。治疗期间,两组不良反应比较,差异没有统计学意义。与对照组相比,观察组治疗后TNF-β,hs-CRP水平均明显降低,P<0.05;而两组CA125,CEA水平比较没有统计学意义。结论:以白花蛇舌草为主方剂配合放疗治疗食道癌效果显著,能有效改善患者的生活质量,延长患者的两年生存率,且不良反应少,值得临床推广使用。     

荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨荔枝核含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用血清药理学方法制备荔枝核、环磷酰胺含药血清以及对照血清,作用于HepG2细胞,MTT法检测各种血清对HepG2细胞增殖的影响,Hochest33258荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:荔枝核含药血清处理HepG2细胞后,呈剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖活性;并出现细胞核浓染与核碎裂;流式细胞仪检测HepG2细胞凋亡率明显高于对照组。结论:荔枝核含药血清能抑制人肝癌HepG2细胞增殖,其机制可能与诱导HepG2细胞凋亡有关。     

吴茱萸碱对结肠炎大鼠炎性树突状细胞的调控作用

目的探讨吴茱萸碱(Evodiamine,Evo)对溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠炎性树突状细胞(Inflammatory dendritic cells,infDCs)的调控作用。方法将SD大鼠随机分为6组,即正常组、模型组、Evo高剂量组(40 mg·kg^-1)、Evo中剂量组(20 mg·kg^-1)、Evo低剂量组(10 mg·kg^-1)及美沙拉嗪组(150 mg·kg^-1),每组8只。除正常组外其余各组采用三硝基苯磺酸(TNBS)-乙醇复合法进行造模。造模24 h后按照相应剂量灌胃给药,连续给药7 d。给药结束后,称定大鼠体质量,处死并分离结肠组织,测量长度,称定质量,计算结肠质量指数;采用HE染色进行结肠组织病理学观察;分离派氏淋巴结和肠系膜淋巴结,采用流式细胞术检测CD11c^+CD103^+E-cadherin+T细胞数量;ELISA法测定大鼠结肠组织匀浆中干扰素-γ(IFN-γ)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)及白细胞介素-2(IL-2)水平。结果与正常组比较,模型组大鼠的体质量及结肠长度均明显降低或缩短(P<0.01),结肠质量、结肠质量指数明显升高(P<0.05,P<0.01);结肠组织CD11c^+CD103^+E-cadherin+T细胞数量显著增加(P<0.01);IL-6、ICAM-1水平明显升高(P<0.05),IFN-γ水平明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组的结肠质量、结肠质量指数均明显降低(P<0.05),Evo高剂量组的大鼠体质量明显升高(P<0.05),Evo高、低剂量组的大鼠结肠长度明显增加(P<0.05);各给药组的大鼠结肠组织CD11c^+CD103^+E-cadherin+T细胞数量显著降低(P<0.05,P<0.01),IL-10水平明显升高(P<0.05,P<0.01),ICAM-1、IL-2明显降低(P<0.05,P<0.01);Evo高、中剂量组的IL-6明显降低(P<0.05,P<0.01);Evo中、低剂量组的IFN-γ水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论吴茱萸碱可能通过降低infDCs细胞数量,下调IL-2、ICAM-1、IL-6表达,上调IL-10、IFN-γ表达,从而发挥治疗UC的作用。     

黄芪含药血清对幽门螺杆菌空泡毒素活性的影响

目的：观察黄芪含药血清能否有效抑制体外幽门螺杆菌（hel i cobact er pyl ori,Hp）空泡毒素（VacA）的活性,从而探讨其抗菌机制。方法：将HP菌株培养上清液制成粗制VacA蛋白,经倍比稀释后（1∶32～1∶1）,选择1∶2滴度与不同浓度黄芪含药血清共同作用于胃癌SGC-7901细胞,观察胃癌细胞形态变化,采用中性红摄入法（NRU）评价空泡活性。结果：黄芪含药血清对VacA活性有显著抑制作用,含药血清小剂量组NRU检测其空泡活性A550=0.228±0.029,显微镜下计数空泡形成率为78.75%±8.539%,与阴性对照组比较差异有显著性（P〈0.05）,随血清含药浓度的增加A550和空泡形成率逐渐降低;含药血清大剂量组A550=0.127±0.047,空泡形成率为32.25%±10.21%,与阴性对照组比较差异有极显著性（P〈0.01）,与阳性对照奥美拉唑组比较差异无显著性（P〉0.05）;含药血清大剂量组与中剂量组A550比较,差异无显著性（P〉0.05）,与小剂量组比较差异有显著性（P〈0.05）,可见黄芪含药血清对空泡毒素的抑制作用具有浓度依赖性。结论：黄芪对HP VacA活性具有明显的抑制作用,且该抑制作用具有一定的浓度依赖性。