siRNA抑制卵巢癌细胞株SKOV3 HPA基因表达的研究

目的: 〖HT5"SS〗研究siRNA对卵巢癌细胞株SKOV3中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)基因表达的抑制作用。〖HT5W〗方法: 〖HT5"SS〗设计合成两对HPA编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,通过定向克隆至载体PGenesil1,构建siRNA真核表达载体,经稳定转染SKOV3细胞后应用RTPCR、realtime PCR及免疫组化技术检测卵巢癌细胞中HPA基因mRNA及蛋白表达水平的抑制情况。〖HT5W〗结果: 〖HT5"SS〗测序证实成功地构建了编码2条shRNA的siRNA真核表达载体。通过RTPCR、realtime PCR及免疫组化技术检测转染siRNA的SKOV3细胞,与对照组相比,HPA mRNA表达水平和蛋白表达水平明显降低。〖HT5W〗结论:〖HT5"SS〗构建的PGenesil1(+)HPA重组质粒能有效的抑制HPA基因在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达,为研究HPA基因在肿瘤细胞中的调节途径和肿瘤的基因治疗提供了新的方法。     

靶向转录因子STAT3的Decoy核苷酸对膀胱癌细胞体外增殖的抑制作用

目的： 〖HT5"SS〗研究核转录因子STAT3的诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)对人膀胱癌细胞系增殖的抑制作用,并探讨其作用机制。〖HT5W〗方法： 〖HT5”SS〗采用阳离子聚合物Sofast为转染试剂将STAT3 decoy ODNs转染入膀胱癌T24及5637细胞;用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测ODNs的转染效率;荧光显微镜检测ODNs入核情况;RTPCR及Western blot检测转染ODNs前后bclxl、cyclinD1和cmyc表达水平的变化。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗ODNs可有效地转染至细胞内,部分可进入核内,转染效率呈剂量依赖关系;STAT3 decoy ODNs可抑制膀胱癌细胞的增殖,100 nmol/L组抑制率最明显,达40%～48%;100 nmol/L decoy ODNs明显抑制bclxl、cyclinD1和cmyc mRNA及蛋白的表达水平。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗STAT3 decoy ODNs可显著抑制膀胱癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调癌基因cmyc、细胞周期基因cyclinD1及凋亡相关基因bclxl的基因转录及蛋白表达而实现的。     

PTEN基因转染联合奥沙利对胆管癌细胞生长的影响

目的: 〖HT5"SS〗观察脂质体介导PTEN基因转染人胆管癌细胞（QBC939）,联合化疗药物奥沙利铂（LOHP）对胆管癌细胞生长的影响,探索人类胆管癌的生物治疗方法。〖HT5W〗方法: 〖HT5"SS〗将携带PTEN基因的真核表达载体pBPPTEN和不含该基因的空载体转染胆管癌QBC939细胞,嘌呤霉素抗性筛选克隆、扩增培养,SP免疫组化法检测转染前后PTEN阳性表达率。实验分组为QBC939、QBC+LOHP、PTENQBC和PTEN+LOHP 4组,以MTT法检测癌细胞生长活性,透射电镜扫描观察转染前后及联合奥沙利铂后细胞的超微结构变化,流式细胞仪分析转染前后细胞周期变化和凋亡情况,体外细胞侵袭力抑制试验观察转染及用药前后细胞侵袭力的变化。〖HT5W〗结果: 〖HT5"SS〗PTEN基因转染后QBC939细胞稳定表达、PTEN阳性表达率升高(P<0.05);基因转染后肿瘤细胞活性下降(P<0.05);细胞周期G1～S期抑制、细胞凋亡率增加(P<0.01);透射电镜下显示细胞较成熟、分化好、线粒体增多;细胞侵袭力明显抑制(P<0.05),其中以PTEN+LOHP抑制作用最强,LOHP抑制作用次之。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗PTEN基因转染生物治疗联合奥沙利铂化疗对人胆管癌细胞生长具有显著的抑制作用。     

RNA干扰对Aurora-A在人卵巢癌细胞中表达及细胞增殖的影响

目的： 〖HT5"SS〗探讨应用RNA干扰技术沉默AuroraA基因表达,研究其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 设计合成两对特异性针对AuroraA基因的Oligo siRNA,转染至SKOV3细胞中,采用RTPCR和Western blot检测AuroraA mRNA和蛋白表达情况,同时利用MTT试验和流式细胞仪观察转染后细胞增殖抑制和凋亡情况。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗转染Oligo siRNA后,SKOV3细胞AuroraA mRNA表达受抑制(P<0.01),蛋白表达水平降低;细胞增殖的抑制率和细胞凋亡率明显增高(P<005, P<0.01)。〖HT5W〗结论： 〖HT5"SS〗体外合成的特异性针对AuroraA基因的Oligo siRNA对卵巢癌细胞株SKOV3中AuroraA基因表达和细胞增殖均有明显抑制作用,为进一步研究Auroraa基因的功能提供了实验基础。     

腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞的体外生物学特性

目的： 〖HT5"SS〗探讨腺病毒介导乙型肝炎病毒表面抗原（AdVHBsAg）基因修饰树突状细胞（dendritic cell,DC）瘤苗体外生物学活性。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗：将腺病毒表达载体AdVHBsAg转染人单个核细胞来源的DC,构建AdVHBsAgDC肝癌瘤苗,采用Western blotting法鉴定转染基因表达,FACS检测表面分子和内吞功能,3HTdR法检测T细胞增殖反应的能力,MTT法检测CTL活性。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗：HBsAg基因转染后,Western blotting法检测结果示HBsAg基因表达于转染的DC,表明腺病毒介导的HBsAg基因转染的有效性。AdVHBsAgDC可高表达CD1a、CD11c、 CD83、CD86和HLADR,但内吞功能较DC组降低(P<0.05)。AdVHBsAg DC刺激自体T细胞增殖功能均明显高于DC对照组和AdVLacZDC组(P<0.05)。AdVHBsAg DC体外诱导CTL对HepG2215肿瘤细胞的杀伤作用具有特异性。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗：肝癌相关基因HBsAg可作为乙型肝炎病毒相关性肝癌的切入点,该研究为HBV相关肝癌DC体内免疫治疗提供了实验依据。     

突变减毒志贺样毒素Ⅰ真核表达载体的构建及其抗卵巢癌的活性

目的： 〖HT5"SS〗构建表达突变减毒的志贺样毒素Ⅰ(Shigalike toxin 1, Stx1) 的真核表达载体,并考察其抗人卵巢癌细胞SKOV3的活性。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 重叠PCR法构建毒性为原毒素毒性1/10和1/100的突变减毒Stx1编码序列,TA克隆并测序后分别连入真核表达载体pcDNA3.1。转染SKOV3细胞,RTPCR法检测Stx1 mRNA在SKOV3细胞中的表达,观察突变减毒Stx1对SKOV3细胞周期的影响和致SKOV3细胞死亡的方式。使用SKOV3荷瘤裸鼠模型,不同毒性突变减毒Stx1真核表达载体经脂质体包裹后肿瘤局部注射给药,评价其体内抑瘤能力。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗: 突变减毒Stx1真核表达载体经酶切和测序鉴定与预期突变序列一致;RTPCR证实转染后的SKOV3细胞中存在目的mRNA;体外实验观察到该载体转染可以使人卵巢癌SKOV3细胞的细胞周期阻滞于G2/M期,转染后SKOV3细胞死亡的主要途径是坏死;体内实验显示突变减毒Stx1真核表达载体可以抑制裸鼠体内SKOV3移植瘤的生长。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗: 通过重叠PCR方法获得2种突变减毒Stx1编码序列,成功构建了相应的真核表达载体,并证实该载体具有明显的抗卵巢癌活性。     

siRNA封闭BRCAA1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响

目的：〖HT5"SS〗 研究siRNA封闭乳腺癌抗原相关基因1(BRCAA1)对乳腺癌细胞MCF7增殖和Rb基因表达的影响。〖HT5W〗方法： 〖HT5"SS〗采用RNAi技术对乳腺癌细胞MCF7细胞BRCAA1基因进行特异性抑制,用阳离子脂质体与化学合成的Predesigned antiBRCAA1 siRNA构建转染复合体,反转染MCF7细胞株48h后提取总RNA,分为未处理(NT)组、阴性对照组、阳性对照组和BRCAA1组,经反转录荧光实时PCR检测BRCAA1和Rb基因mRNA表达情况;检测细胞增殖抑制率。〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗与阴性对照组相比,siRNA转染MCF7细胞后实验组BRCAA1基因mRNA水平降低了42.3％;Rb基因表达较之阴性对照组上升了11.1％;实验组MCF7细胞增殖抑制率为（81.9±6.1）％,抑制作用明显强于对照组(P<0.05)。〖HT5W〗结论： 〖HT5"SS〗BRCAA1基因的封闭明显抑制了MCF7细胞的增殖,BRCAA1基因与Rb基因可能存在有某种相互拮抗的作用。     

shRNA逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞株（MCF-7/AdrR）的多药耐药性

目的〖HT5"SS〗： 利用短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）表达载体逆转耐阿霉素人乳腺癌细胞株(MCF7/AdrR)的多药耐药性（multidrug resistance,MDR）。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 构建2个MDR1基因shRNA表达质粒,稳定转染MCF7/AdrR细胞。RTPCR分析MDR1基因mRNA的表达,Western blotting检测P糖蛋白(Pgp)的表达,流式细胞术和MTT法分别检测乳腺癌细胞的凋亡和对阿霉素的敏感     

含MMP-9信号肽、人MMP-2 PEX片段腺病毒载体的构建及其生物学活性

目的： 〖HT5"SS〗构建含MMP9信号肽、人MMP2 PEX片段融合蛋白的重组腺病毒（ETM9PEX）,通过基因治疗策略建立患者体内药物生物反应器,以期利用抗血管因子的体内表达实现肿瘤的有效治疗。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 利用PCR、基因重组等技术,构建含M9PEX融合蛋白的腺病毒载体,经L293细胞包装、扩增后得到有感染力的ETM9PEX重组腺病毒。用Western blotting和免疫荧光检测其感染细胞后PEX的表达和分泌,通过生长曲线观察其感染内皮细胞（endothelial cell, EC）的培养上清对EC增殖的影响,利用鸡胚绒毛尿囊膜（chicken chorioallantoic membrane, CAM）实验检测其对血管发生和种植瘤生长的影响。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： ETM9PEX构建成功,感染细胞后有PEX的表达和分泌。体外实验表明,ETM9PEX感染细胞的培养上清能抑制EC增殖。体内实验证实,ETM9PEX感染后的PG细胞接种于CAM,与ET相比,对瘤重的抑制率为57.57%（ P<0.01）,对一级血管的抑制率为33.52%（P<0.01）;而ET和PBS组之间瘤重和一级血管数均无显著性差异。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗： 构建的ETM9PEX重组腺病毒能显著抑制EC细胞增殖,抑制CAM种植瘤生长和血管发生,ETM9PEX有望成为肿瘤基因治疗的有效药物。     

CpG-ODN持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的〖HT5"SS〗：研究CpGODN持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞（DC）成熟的影响。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗： 小鼠骨髓细胞用GMCSF培养7 d,持续刺激组全程加入CpGODN,短期刺激组在培养的最后36 h加入CpGODN,对照组不加CpGODN。流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力,ELISA检测细胞产生的细胞因子,混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力。〖HT5W〗结果〖HT5"SS〗： 用CpGODN持续刺激的小鼠骨髓DC表达MHCⅡ、CD86和CD40等分子和分泌IL12 p70的能力并未增加,吞噬FITCOVA的能力显著升高,刺激同种异基因T细胞和刺激同种同基因T细胞增殖的能力显著低于CpGODN短期刺激组。〖HT5W〗结论〖HT5"SS〗：CpGODN持续刺激可抑制DC的发育成熟,可能是持续严重感染时免疫功能低下的原因。     

Pharmacogénétique des fluoropyrimidines. La méthylènetétrahydrofolate réductase

Résumé: Lefficacité optimale des fluoropyrimidines nécessite des concentrations élevées en 5-10 méthylènetétrahydrofolate (CH₂FH₄), contrôlées par la méthylènetétrahydrofolate réductase (MTHFR) qui convertit irréversiblement le CH₂FH₄ en 5-méthyltétrahydrofolate (CH₃FH₄). Les polymorphismes 677CT et 1298AC du gène MTHFR sont associés à une baisse dactivité de lenzyme. Les tumeurs «MTHFR mutées» devraient donc être plus sensibles aux fluoropyrimidines que les tumeurs «MTHFR sauvages». Les études expérimentales et cliniques publiées à ce jour tendent à montrer une plus grande sensibilité au 5-FU (associé ou non à lacide folinique) dans les tumeurs MTHFR mutées par rapport aux tumeurs sauvages. Ces résultats montrent la nécessité de poursuivre ces recherches afin de confirmer limpact de ces polymorphismes sur lefficacité des fluoropyrimidines.     

Oncogénétique et psycho-oncologie, une collaboration recommandée...

Résumé: La possibilité depuis 1994, de connaître la probabilité individuelle de développer certains cancers a permis de proposer de nouvelles modalités de prévention, de traitements et contribué au développement actuel de loncogénétique. Une meilleure connaissance des répercussions psychologiques tant pour les patients que pour les apparentés est désormais possible et limplication des psycho-oncologues dans ce cadre de la réalisation des tests prédictifs, recommandée. La mission de «messager» qui incombe au «cas-index» doit faire lobjet dune attention particulière. La complexité de linformation et la dimension paradoxale que peut avoir parfois la communication à propos des choix, rend difficile lévaluation de la qualité du consentement. La situation particulièrement délicate dune aide à la décision à légard de la chirurgie prophylactique, exige une collaboration étroite des généticiens et des psycho-oncologues.Les soins de support en oncologie     

The role of papillomaviruses in human cancers

This review comprehensively evaluates the influence of gene-gene, gene-environment and multiple interactions on the risk of colorectal cancer (CRC). Methods of studying these interactions and their limitations have been discussed herein. There is a need to develop biomarkers of exposure and of risk that are sensitive, specific, present in the pathway of the disease, and that have been clinically tested for routine use. The influence of inherited variation (polymorphism) in several genes has been discussed in this review; however, due to study limitations and confounders, it is difficult to conclude which ones are associated with the highest risk (either individually or in combination with environmental factors) to CRC. The majority of the sporadic cancer is believed to be due to modification of mutation risk by other genetic and/or environmental factors. Micronutrient deficiency may explain the association between low consumption of fruit/vegetables and CRC in human studies. Mitochondrial modulation by dietary factors influences the balance between cell renewal and death critical in colon mucosal homeostasis. Both genetic and epigenetic interactions are intricately dependent on each other, and collectively influence the process of colorectal tumorigenesis. The genetic and environmental interactions present a good prospect and a challenge for prevention strategies for CRC because they support the view that this highly prevalent cancer is preventable.     

Antifungal combination therapy in localized candidosis

A mouse model of localized candidosis in air-filled subcutaneous cysts imitating thrush has been developed. We have now tested various antifungal combinations in this animal model. Flucytosine (5-FC) + amphotericin B (Amph B) showed the highest efficacy, a clear additive or even synergistic effect was seen. The combination of 5-FC + imidazole or triazole derivative was less efficacious, an additive effect was rare. The combination of 5-FC + Amph B was also tested against Candida albicans strains showing various degrees of 5-FC-resistance. A significant reduction in 5-FC-resistant mutants was seen after the treatment with the combination.     

Les génériques en cancérologie: à molécule identique, médicaments identiques? Les biosimilaires, des super-génériques?

Résumé: Les biosimilaires vont bientôt voir leur apparition en Europe. Comment un laboratoire peut-il aborder le développement de son dossier dAMM? Quelles sont les bases légales et les recommandations officielles? Comment la similarité et/ou le caractère générique peuvent-ils être démontrés? Les règles sont-elles identiques à celles des produits chimiques conventionnels pour lesquels, notamment en cancérologie, il existe des médicaments génériques? Comment faire pour que la sécurité et lefficacité des médicaments biosimilaires soient assurées pour les patients?     

PSA-Test zur Früherkennung des Prostatakarzinoms

Zusammenfassung Prostatakrebs ist hierzulande seit einigen Jahren die häufigste Krebserkrankung bei Männern. Da über die Ätiologie wenig gesichertes Wissen vorliegt und daher kaum Möglichkeiten zur primären Prävention bestehen, konzentrieren sich die Anstrengungen auf die Suche nach wirksamen Verfahren zur sekundären Prävention. Hierbei gilt die Verwendung des PSA-Tests zur Früherkennung des Prostatakarzinoms als derzeit aussichtsreichstes Verfahren. Bevor ein neues Früherkennungsverfahren zur breiten Anwendung empfohlen oder in das gesetzliche Früherkennungsprogramm aufgenommen wird, muss jedoch seine Wirksamkeit in hierfür geeigneten wissenschaftlichen Untersuchungen nachgewiesen werden. Bis jetzt gibt es bereits eine ganze Reihe epidemiologischer Studien zur Effektivität des PSA-Screenings, doch konnte ein Wirksamkeitsnachweis bisher nicht erbracht werden. Zwei große randomisierte Studien in Europa und den USA lassen für die Jahre 2005–08 erste Ergebnisse erwarten. Da epidemiologische Arbeiten belegen, dass durch PSA-Screening eine nicht unerhebliche Überdiagnostik und Übertherapie eintritt, d. h. Schaden angerichtet werden kann, ist das Ergebnis der genannten randomisierten Studien vor weitergehenden Entscheidungen unbedingt abzuwarten. Bis dahin sollte von der Anwendung des PSA-Tests zur Prostatakrebsfrüherkennung unmissverständlich abgeraten werden. Da für den Test bereits ausgiebig Werbung betrieben wurde, kommt einer gründlichen ärztlichen Aufklärung von an dem Test interessierten Personen eine Schlüsselrolle zu.     

Cancer immunotherapy

Unprecedented progress has seen made in the last decade in the field of cancer immunotherapy. The recent approval of nivolumab （Opdivo）, the first anti-programmed cell death-1 （PD-1） antibody, for metastatic melanoma in Japan, marked a milestone in the rapidly advancing field of cancer immunotherapy. Nivolumab together with ipilimumab （Yervoy）, the anti-cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen-4 （CTLA-4） antibody, are the first 2 drugs in the class of ＂immune checkpoint inhibitors＂ that have delivered impressive responses in patients with metastatic melanoma and renal cell cancer （RCC） as well as a variety of solid tumors.     

异基因造血干细胞移植后患者肝损害病因与临床特征分析

 【摘要】　目的　总结异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者肝损害的发生率、发生原因、诊断方法与治疗选择。方法　回顾性分析郑州大学附属肿瘤医院2006～2010年接受allo-HSCT的83例良、恶性血液病患者中Ⅱ～Ⅳ级肝损害的发生率、各种病因的构成比、临床表现以及诊断方法,分析移植后不同时期肝损害病因的差异、治疗方法、疗效。结果　83例allo-HSCT患者中,发生Ⅱ～Ⅳ级肝损害45例（54.2 %）。按肝损害致病病因分类,预处理化疗所致7例,环孢素所致9例,肝静脉闭塞病（HVOD）所致2例,肝脏移植物抗宿主病（GVHD）所致24例,乙型肝炎病毒再激活所致2例,多器官衰竭所致1例。发生于移植后1个月内者20例（44.4 %）,以药物性肝损害为主,1个月～100 d者13例（28.9 %）,101 d～1年者12例（26.7 %）,均以肝脏GVHD为主。经减停肝损害药物、抗排异、保肝等治疗后,27例治愈,10例好转,2例未愈,6例死于原发病复发或移植相关并发症。结论　肝损害是allo-HSCT后常见的并发症,药物及肝脏GVHD是其最主要的致病原因,肝损害与其发生时间的相关性可作为肝损害病因学诊断的参考依据。根据肝损害的病因选择针对性的治疗方法,可取得较好的疗效。     

Pharmacokinetics and dosage of fluconazole in continuous hemofiltration (CAVH, CVVH) and hemodialysis (CAVHD, CVVHD)

Continuous haemofiltration (CAVH, CVVH) and haemodialysis (CAVHD, CVVHD) are increasingly used in patients with acute renal failure (ARF). The elimination rates of fluconazole vary considerably among the different procedures. In CVVHD, the elimination rate is, depending on the combined dialysate/ultrafiltrate flow rate, the most marked compared to CVVH and intermittent dialysis with a fluconazole clearance exceeding the values of healthy persons in CVVHD 2 L/h. To achieve therapeutic plasma levels during continuous renal replacement therapy, the same loading dose as in patients without renal failure should be applied, followed by the adjusted maintenance dose for anuric patients multiplied by a factor taking the extracorporeal elimination of the absorbed dose into account (CAVH, CVVH: x 2.2, ultrafiltrate flow 0.5 L/h; CAVHD, CVVHD: x 3.8, combined dialysate/ultrafiltrate flow 1.5 L/h). Despite the broad therapeutic margin of fluconazole, drug monitoring is recommended with respect to the very limited number of investigations with relatively low dosages up to 200 mg/day and--which is of paramount importance--to achieve therapeutic drug levels in vital indications.