雌二醇对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察雌二醇对去卵巢骨质疏松大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法将80只雌性SD大鼠随机分为对照组、假手术组、去势组、药物组,构建绝经后骨质疏松大鼠模型,检测骨组织骨密度(bone mineral density,BMD)和生物力学指标,运用qRT-PCR和免疫组化分别检测骨组织Wnt、β-catenin、BMP-2的mRNA和蛋白表达,通过HE染色观察骨组织形态学。结果去势组股骨BMD、生物力学指标较对照组和假手术组均显著降低(P0.05),药物组股骨BMD、生物力学指标较去势组均显著升高(P0.05)。去势组骨组织Wnt、β-catenin、BMP-2的mRNA和蛋白表达较对照组和假手术组均显著降低(P0.05),药物组骨组织Wnt、β-catenin、BMP-2的mRNA和蛋白表达较去势组均显著升高(P0.05)。去势组骨小梁明显减少,排列稀疏不规则,连接不完整,骨髓腔变大,有大量纤维组织。药物组骨小梁数量减少不明显,粗细均匀稍致密,排列尚规则,连续性完整性较好。结论雌二醇通过Wnt/β-catenin信号通路作用于BMP-2,增加了去卵巢骨质疏松大鼠骨密度,提高了骨生物力学性能,能够改善骨组织结构,发挥了抗骨质疏松作用。     

蒙药那仁满都拉调控Wnt/β-catenin信号通路抗骨质疏松的作用及机制

目的 观察蒙药那仁满都拉对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨微结构与骨形成的影响,初步探讨其防治骨质疏松的作用及机制。方法 将30只雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、蒙药那仁满都拉低、中、高剂量组,每组6只,利用去卵巢大鼠构建骨质疏松模型大鼠,模型制备成功后用蒙药灌胃,假手术组用相同体积的生理盐水灌胃。连续12周后,通过对股骨组织进行Micro-CT、骨骼力学检测、HE染色,分别观察大鼠骨密度、骨骼力度、骨组织病理形态,检测Wnt、β-catenin蛋白表达情况;从1日龄大鼠颅骨中提取成骨细胞用低、中、高浓度的含药血清干预后检测ALP染色、矿化染色,观察其ALP分泌、矿化结节大小,检测Wnt、β-catenin蛋白表达情况。结果 在模型大鼠股骨组织中Micro-CT显示,蒙药组均能增加骨小梁密度;骨骼力学分析显示,蒙药组均能提高骨骼力学的载荷与刚度,其中中、高剂量组具有显著统计学意义(P<0.01,P<0.05)。HE染色结果显示蒙药组均可明显改善骨小梁病理变化;Western blot结果提示蒙药组中Wnt、β-catenin蛋白表达明显升高(P<0.000 1);蒙药含药血...     

葛根素联合阿仑膦酸钠对绝经后骨质疏松大鼠氧化应激、炎症反应及骨代谢的影响

目的观察研究葛根素联合阿仑膦酸钠对绝经后骨质疏松大鼠氧化应激、炎症因子和骨代谢的影响。方法实验分为假手术组、去卵巢组、A药组、B药组和AB药组,构建绝经后骨质疏松大鼠动物模型,分别给予不同药物干预。分别检测血清氧化应激、炎性因子、骨代谢指标及骨密度,观察骨组织形态结构。结果去卵巢组大鼠血清SOD和GSH-Px水平较假手术组均显著降低(P<0.05),AB药组较去卵巢组均显著升高(P<0.05);去卵巢组大鼠血清H2O2和MDA水平较假手术组均显著升高(P<0.05),AB药组较去卵巢组均显著降低(P<0.05)。去卵巢组大鼠血清炎性因子和骨代谢指标较假手术组均显著升高(P<0.05),AB药组较去卵巢组均显著下降(P<0.05)。去卵巢组大鼠骨组织BMD较假手术组显著降低(P<0.05),AB药组较去卵巢组显著升高(P<0.05)。去卵巢组骨皮质明显变薄,骨小梁明显稀疏,排列紊乱,髓腔扩大。AB药组骨皮质轻微改变,骨小梁明显增多,排列规则,髓腔明显变小。结论葛根素联合阿仑膦酸钠具有协同抑制绝经后骨质疏松大鼠氧化应激和炎症反应,降低氧化应激和炎性因子分泌,调节骨代谢,改善骨组织形态学结构,发挥抗骨质疏松作用。     

左归丸、右归丸对去卵巢骨质疏松大鼠神经肽CGRP、SP、VIP、NPY的影响

目的观察补肾药左归丸、右归丸对去卵巢骨质疏松大鼠神经肽的影响,阐明补肾法治疗骨质疏松症的神经调节机制。方法建立去卵巢骨质疏松模型,分别采用ELISA、免疫组化以及PCR观察补肾药干预后骨组织及骨髓间充质干细胞中神经肽CGRP、SP、VIP、NPY的变化。结果切除卵巢后大鼠骨组织及骨髓间充质干细胞中神经肽CGRP、SP、VIP、NPY的水平明显下降,补肾药干预后CGRP、SP、VIP、NPY的水平明显上升,但仍低于假手术组。结论补肾药可以提高骨质疏松大鼠神经肽CGRP、SP、VIP、NPY,这可能是补肾药治疗骨质疏松症的机制之一。     

滋阴补肾方对糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠的作用及对Wnt/β-catenin信号的影响

目的探索滋阴补肾方对糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠治疗及信号通路的影响,为骨质疏松的治疗奠定基础。方法50只SPF级雌性SD大鼠被分为正常对照组(10只),模型组(8只),骨化三醇组(8只),滋阴补肾方低剂量组(8只),滋阴补肾方中剂量组(8只),滋阴补肾方高剂量组(8只)。投喂高糖高脂饲料并注射链脲佐菌素建立糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠模型。造模成功后,滋阴补肾方低剂量组,滋阴补肾方中剂量组,滋阴补肾方高剂量组分别灌胃滋阴补肾方5、10、20 g/(kg. d),骨化三醇组大鼠每天灌胃0. 1μg/(kg. d)骨化三醇,灌胃给药8周,每日1次。给药结束后,以HE染色的方法观察胫骨结构变化;以Western blot的方法检测p-NF-κB、NF-κB、Ik B、MyD88的蛋白表达水平;以RT-PCR的方法检测Wnt-3α、LRP-5、β-catenin的表达。结果和模型组比较,滋阴补肾方高剂量组胫骨骨小梁排列较密集,骨小梁之间连接增多;中剂量组和高剂量组的p-NF-κB、NF-κB、Ik B、MyD88表达水平均降低,TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10水平显著降低,Wnt-3α、LRP-5、β-catenin表达水平均显著升高(P0. 05)。结论滋阴补肾方治疗糖尿病合并去卵巢骨质疏松大鼠可显著增加其成骨细胞的数量,增加骨量,可能上调Wnt/β-catenin信号通路来实现的。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨太白楤木抗去卵巢大鼠骨质疏松症的作用和机制

目的 探索太白楤木对去卵巢大鼠骨质疏松症以及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 40 只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆胶囊组（0.3 g/kg）、太白楤木低剂量组（0.4 g/kg）和太白楤木高剂量组（0.8 g/kg）,每组8 只,除假手术组外其余组进行去卵巢手术。术后灌胃给药12周,三点弯曲试验测定骨生物力学性能,Micro-CT检测骨密度和微结构,ELISA法检测血清骨代谢指标,HE染色观察胫骨病理改变,Western blot法测定骨组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达情况。结果 经过12周治疗,与模型组相比,太白楤木高剂量组显著增大最大载荷、刚度和最大应力(P＜0.01),提高去卵巢大鼠骨密度(P＜0.01),保护骨小梁微结构不被破坏,骨吸收标志物NTX-Ⅰ和TRAP水平降低(P＜0.01),骨形成标志物BALP水平升高(P＜0.01),Wnt3a、β-catenin和RUNX2蛋白表达量升高(P＜0.01),p-β-catenin蛋白水平降低(P＜0.01)。结论 太白楤木对去卵巢大鼠生物力学性能、骨密度和骨微结构具有保护作用,太白楤木调节骨代谢可能和激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Wnt/β-catenin信号通路探讨羌活鱼超微粉抗去卵巢大鼠骨质疏松的作用机制

目的 探讨羌活鱼超微粉对去卵巢大鼠骨代谢、骨微观结构及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 选取75只4月龄SPF级雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、羌活鱼超微粉组、羌活鱼普通粉组、仙灵骨葆组,除假手术组外均采用去势法建立骨质疏松症动物模型。药物干预12周后通过ELISA检测各组血清骨代谢指标、通过Micro-CT扫描测定各组大鼠的股骨骨微结构变化、运用Western Blot法测定骨组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 药物干预12周后,与模型组相比,羌活鱼组、仙灵骨葆组的ALP、OPG、PINP及BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N显著升高,SMI、Tb.Sp、TRACP显著降低,Wnt2、β-catenin、Runx2的蛋白表达增加,但仍较假手术组低,差异有统计学意义（P<0.05）;羌活鱼超微粉组在改善大鼠骨代谢、骨微观结构及蛋白表达方面均优于羌活鱼普通粉组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 羌活鱼能够延缓去卵巢大鼠骨质疏松的发生、发展,且超微粉剂优于普通粉剂,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

电针对去卵巢大鼠Wnt3a和β-catenin的基因及蛋白表达的影响

目的研究电针对去卵巢骨质疏松模型大鼠Wnt3a和β-catenin的蛋白及基因表达的影响。方法选取60只雌性SD大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型组、药物组、针刺组,每组12只。空白组不做任何处理,常规饲养;假手术组只暴露双侧卵巢但不切除;其余3组行双侧切卵巢法建立骨质疏松模型大鼠。造模13周后开始治疗,针刺组取"肾俞"、"脾俞"、"三阴交"、"足三里",每次电针刺激15 min(断续波,2 Hz,1.0 mA)并灌服与药物组相同体积的蒸馏水,每日1次,连续治疗5 d,间隔2 d,20 d为1个疗程,共治疗3个疗程;药物组以戊酸雌二醇水溶液(0.02 mg/mL,1 mL/100 g体质量)灌胃,疗程同针刺组;假手术组、模型组灌服与药物组相同体积的蒸馏水,疗程同针刺组;各组大鼠每周称重1次,以此调整给药剂量。治疗结束后麻醉处死大鼠,分离股骨和胫骨,分别用RT-PCR分析法和免疫组化法检测各组大鼠股骨和胫骨Wnt3a,β-catenin蛋白及基因的表达。结果模型组Wnt3a和β-catenin蛋白表达量最低,与空白组和假手术组比较差异有统计学意义(P0.05);经针刺或药物干预后,Wnt3a和β-catenin蛋白表达显著升高,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05);模型组Wnt3a和β-catenin mRNA表达量最低,与空白组和假手术组比较差异有统计学意义(P0.05);经针刺或药物干预后,Wnt3a和β-catenin mRNA表达显著升高,与模型组比较具有统计学意义(P0.05)。结论针刺防治绝经后骨质疏松症的分子机制可能是通过调控Wnt3a和β-catenin的基因和蛋白表达水平,从而激活Wnt/β-catenin信号通路,以此调节骨重建系统的平衡。     

UPLC-Q-TOF-MS代谢组学探讨金天格胶囊防治骨质疏松症的机制

目的 采用代谢组学方法探究金天格胶囊防治骨质疏松症的机制。方法 采用双侧卵巢摘除法构建骨质疏松症大鼠模型,分为假手术组（Sham）、去卵巢模型组（OVX）、金天格低剂量组（JTG-180 mg/kg）和金天格高剂量组（JTG-360 mg/kg）。大鼠灌胃给药12周,应用Micro-CT检测骨微结构、LC-MS方法检测血清代谢物的变化、多元统计分析和单变量统计分析筛选鉴定血清样品中骨质疏松的潜在生物标志物。结果 Micro-CT分析显示金天格胶囊可显著改善去卵巢大鼠骨组织微结构,增加骨密度和骨矿含量。代谢组学分析表明去卵巢大鼠血清代谢物轨迹变化明显,可鉴定出17个骨质疏松潜在生物标志物,涉及色氨酸代谢、维生素B6代谢、视黄醇代谢、甘油磷脂代谢、原发性胆汁酸生物合成、氨基酰基-tRNA生物合成。金天格胶囊参与色氨酸代谢、维生素B6代谢、甘油磷脂代谢和氨基酰基-tRNA生物合成的调控。结论 金天格胶囊通过调控维生素B6代谢和色氨酸代谢发挥抗骨质疏松作用。     

电针联合延胡索水提物对绝经后骨质疏松大鼠的改善作用

目的 探究电针联合延胡索水提物对骨质疏松症大鼠的保护作用,并初步探讨其可能的潜在机制。方法 采用双侧卵巢切除法制备骨质疏松症大鼠模型,根据处理方式分为Sham组(假手术组)、模型组、雌二醇组、电针组、延胡索组和针药组。采用苏木精-伊红染色检测骨组织形态并测量骨小梁结构参数;采用酶联免疫吸附测定检测血清骨代谢标志物、骨保护素（OPG）和核因子-κB配体的受体激活剂（RANKL）的含量;采用蛋白免疫印迹检测骨组织中Runx2、Wnt3a和β-catenin蛋白的表达。结果 治疗后,与Sham组相比,模型组大鼠的骨密度值明显降低,而骨代谢标志物水平明显上升（P＜0.05）;电针、延胡索提取物及二者联合治疗能够减轻模型组大鼠的骨小梁结构和骨组织形态损伤,并降低骨代谢标志物含量（P＜0.05）;电针、延胡索水提物及二者联合治疗能够降低OPG含量、抑制Runx2、Wnt3a和β-catenin的蛋白表达,且增加RANKL含量以及GSK-3β和DVL1蛋白表达（P＜0.05）;电针与延胡索水提物联合干预的效果明显优于电针和延胡索水提物单独使用的效果（P＜0.05）。结论 电针刺激与延胡索水提物联合使用能够起到协同增效作用,通过调控OPG/RANKL和Wnt/β-catenin途径来减少骨量损失、增加骨密度、改善骨组织的微观结构和骨代谢,从而改善卵巢切除术诱导的骨质疏松症。     

冬凌草甲素对卵巢切除大鼠骨量丢失的作用及机制

目的探讨冬凌草甲素(ORI)对卵巢切除(OVX)大鼠骨质疏松模型骨组织病理学改变、骨微结构影响及其作用机制。方法选取由徐州医科大学动物实验室提供的8周龄雌性SD大鼠30只, 参照随机化数字表分假手术(Sham)组、卵巢切除+溶剂(Veh)(OVX+Veh)组、卵巢切除+冬凌草甲素(OVX+ORI)组。OVX+ORI组予0.1%冬凌草甲素2 mg/kg腹腔注射, OVX+Veh组予相同体积的灭菌注射用水, 均为每周2次, 持续12周。获取各组大鼠血浆、骨组织标本。骨组织染色切片观察病理改变。微型计算机断层扫描成像行骨微结构扫描和骨密度测定。聚合酶链反应法检测骨组织中骨保护素-核因子-κB受体活化因子-核因子-κB受体活化因子配体(OPG-RANKL-RANK)信号通路和Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-Catenin)信号通路相关蛋白信使RNA相对水平。蛋白质印迹法检测获得信号通路相关蛋白表达情况。酶联免疫吸附试验方法检测血浆中骨代谢指标。两组间均数比较采用独立样本t检验。结果与OVX+Veh组比较, OVX+ORI组骨小梁断裂明显减少, 完整性改善。RANKL表达量、骨硬化蛋白表达量、...     

红景天预防高原去势大鼠骨质疏松症的实验研究

目的探讨红景天预防高原去势大鼠骨质疏松症的作用。方法在海拔3100m高原建立去势大鼠骨质疏松模型,分为A组正常组(假手术组),B组模型组(去除卵巢组),C组阳性组(去除卵巢 尼尔雌醇组),D组红景天组(去除卵巢 红景天混合饲料组)。术后3个月,测血清IL-6、TNF-α和尿DPD含量指标,观察骨组织切片变化,观察红景天对高原去势大鼠骨质疏松的预防作用。结果A组、C组和D组IL-6、TNF-α和尿DPD含量均显著低于B组。A组、C组和D组被测3项内容之间比较,差异无显著性。骨组织切片显示:B组骨小梁变细,变稀,并见断裂现象。C、D组组织结构基本与正常组一样,骨小梁分布均匀,结构粗细一致。结论红景天能有效降低高原去势大鼠血清IL-6、TNF-α含量和尿DPD排泄浓度,提高骨密度,具有抗高原组织缺氧抑制骨吸收和促进骨形成的作用。     

β-TCP修复骨质疏松性骨缺损的实验研究

目的 探索β-TCP修复骨质疏松性大鼠骨缺损的效果。方法 取SD大鼠20只,先去卵巢建立骨质疏松模型,等饲养3个月保证骨质疏松模型成功后再建立双侧大鼠股骨干骺端缺损模型,将手术成功的骨质疏松性骨缺损模型随机均分为两组,β-TCP植入组于骨缺损处植入β-TCP,空白对照组不作任何处理。术后4,8周进行大体观察、X射线摄片、组织病理学观察,Micro-CT观察。结果 术后4周、8周,β-TCP 植入组：缺损区X射线影像有明显的骨组织生成,HE染色可见大量骨小梁和较多核深染的长梭形骨细胞,Micro-CT显示骨微观结构修复效果较好,且能明显增加股骨骨密度;空白对照组X射线骨组织生成较少,骨小梁或骨板结构较少,排列较紊乱,Micro-CT显示骨微观结构修复效果不够理想,股骨骨密度增加不明显。结论 β-TCP可较好地修复骨质疏松性大鼠股骨干骺端缺损。     

泛素-蛋白酶体抑制剂MG132上调Wnt/β-catenin信号通路改善骨质疏松的实验研究

目的:探讨泛素-蛋白酶体抑制剂MG132改善骨质疏松的机制。方法:32只雌性SD大鼠,体质量220~250 g,8周龄,分为4组(n=8)。A组和B组大鼠采用去卵巢法制备骨质疏松症模型,造模成功后分别给予蛋白酶体抑制剂MG132和二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)干预;C组为假手术对照组,D组为正常组,C组及D组均给予MG132干预。分别于给药后6、12周分批处死动物,于股骨颈组织取材,行病理形态学观察,Micro-CT分析,检测组织中20S蛋白酶体活性,Wnt和β-catenin的表达。结果:形态学观察显示:A组,骨小梁轻度变细,呈网状,偶有中断;B组,骨小梁明显变细、变薄,不连续;C组与D组相似,骨小梁形态结构完整,排列呈网状。骨密度(bone mineral density,BMD),骨表面积(bone surface,BS),骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV)及骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)的分析结果显示:不同时间点,B组的参数比较均差于其他各组(P<0.05),A组的BS差于C组和D组(P<0.05),C组和D组所有参数差异无统计学意义。20S蛋白酶体的RFU值检测结果显示:B组显著高于其他各组(P<0.05);Western blot检测结果显示,A组Wnt蛋白和β-catenin蛋白的灰度值显著高于其他各组(P<0.05)。结论:泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132可抑制β-catenin蛋白的降解,从而调控Wnt/β-catenin信号通路,延缓骨质疏松的发生和发展。     

骨髓间充质干细胞移植对去卵巢骨质疏松骨量影响的实验研究

目的 探索骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对去卵巢骨质疏松大鼠骨密度的影响。方法 雌性SD大鼠随机分为空白对照组（A组）、模型组（B组）、细胞治疗组（C组）、雷诺昔芬药物治疗组（D组）。通过去卵巢建模成功后，C组通过尾静脉移植BMSCs，D组口服雷诺昔芬抗骨质疏松药物。结果 与A组相比，B组腰椎和股骨骨密度均明显降低（P＜0.01）。MSCs治疗后，C 组中的骨密度得到明显改善，并与B组比较具有统计学差异（P＜0.01），亦优于D组。结论 BMSCs可以有效改善去卵巢大鼠骨质，这为绝经后骨质疏松的治疗提供了一种新的方法，为进一步临床应用提供了实验支持。     

乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨密度和骨形态学的影响

目的 观察乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨密度、骨组织形态学的影响.方法 50只SD健康雌性大鼠分为假手术组(Sham)10只与去卵巢模型(ovariectomy,OVX)40只,去卵巢大鼠随机分为模型组、雌激素治疗组(0.1 mg*kg-1*周-1)、小剂量乳铁蛋白治疗组、大剂量乳铁蛋白治疗组,每组10只.假手术组和模型组不做治疗.12周后观察大鼠雌激素水平、左侧股骨、脊柱密度及骨组织形态学的改变.结果 小剂量乳铁蛋白治疗组、大剂量乳铁蛋白治疗组大鼠股骨近端、脊柱骨密度值高于模型组(P<0.05),与假手术组及雌激素治疗组接近(P>0.05);骨小梁数目、骨小梁厚度、骨皮质厚度均较模型组明显改善(P<0.05),破骨细胞数较模型组减少(P=0.06).结论 适量乳铁蛋白可减少去卵巢大鼠骨丢失,预防骨质疏松的作用.     

ACEI对去卵巢骨质疏松大鼠激肽释放酶-激肽系统及骨丢失的影响

目的探究血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin-converting enzyme inhibitor,ACEI)卡托普利对去卵巢(OVX)骨质疏松大鼠骨丢失及激肽释放酶-激肽(kallikrein-kinin system,KKS)系统的影响。方法去卵巢法制备绝经骨质疏松大鼠模型,分为OVX组、ACEI组[6 mg/(kg·d)卡托普利]、阳性对照雌激素组[0.05 mg/(kg·d)己烯雌酚],另不去卵巢为Sham组。给药8周后,全自动生化分析仪检测血清钙(Ca)、Ⅰ型前胶原N-端肽(PINP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及Ⅰ型胶原交联C端肽β序列(β-CTX)水平,微型计算机断层摄影术(micro CT)法检测骨密度及微结构,TRAP法观察骨组织破骨细胞数量,Western blot法检测骨组织中骨形态发生蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(Runx2)、组织激肽释放酶(KLK)、缓激肽受体1(B1R)及缓激肽(BK)蛋白表达。结果相较于Sham组,OVX组大鼠骨密度、骨小梁数量及厚度、骨体积分数、SMI、PINP、ALP、OCN水平、BMP2、Runx2蛋白表达均降低(P均0.05),骨小梁分离度、TRAP、β-CTX水平、破骨细胞数量、KLK、B1R及BK蛋白水平均增加(P均0.05)。相较于OVX组,ACEI组、阳性组大鼠骨密度、骨小梁数量及厚度、骨体积分数、SMI、PINP、ALP、OCN水平、BMP2、Runx2蛋白表达均增加,骨小梁分离度、TRAP、β-CTX水平、破骨细胞数量、KLK、B1R及BK蛋白水平降低(P0.05)。结论 ACEI可抑制KKS系统,降低破骨细胞活性减少骨吸收,增强成骨细胞活性增加骨形成,提高骨密度,改善骨微结构,进而改善OVX大鼠骨质疏松症状。     

狭鳕鱼皮胶原多肽对去势大鼠骨微结构影响的研究

目的通过观察狭鳕鱼皮胶原多肽对去势大鼠骨质疏松模型骨微结构的影响,探讨其防治骨质疏松的可行性。方法成年Wistar雌性大鼠60只,体质量(250±10)g,随机分为5组(n=12),分别为正常对照组(A组)、骨质疏松模型组(B组)、骨质疏松模型+狭鳕鱼皮胶原多肽预防组(C组)、骨质疏松模型+狭鳕鱼皮胶原多肽低剂量治疗组(D组)、骨质疏松模型+狭鳕鱼皮胶原多肽高剂量治疗组(E组),每组12只。B、C、D、E组采用摘除双侧卵巢法制备大鼠骨质疏松模型。C组从术前4周开始、D、E组从术后6周开始,每天按照1.0、0.5、1.0 g/kg行狭鳕鱼皮胶原多肽灌胃,连续6周;A、B组于术后同时间点给予等体积生理盐水灌胃。末次给药24 h后,A、B组大鼠摄股骨X线片并测定灰度值;然后颈椎脱臼法处死各组大鼠,取左侧胫骨近端骨组织行HE染色,观察骨组织病理学改变,测量骨小梁数量(trabecular number,TN)、平均骨小梁厚度(mean trabecular plate thickness,MTPT)、平均骨小梁间距(mean trabecular plate spacing,MTPS)、骨小梁体积百分比(trabecular bone volume,TBV)、平均骨皮质厚度(mean bone cortical thickness,MBCT);免疫组织化学染色观测降钙素受体(caltitonin receptor,CTR)及IL-1表达水平。结果 B组大鼠股骨灰度值显著低于A组(t=45.130,P=0.000),表明去势大鼠骨质疏松模型制备成功。组织学观察示,A、C、E组TN、MTPS、TBV、MBCT与B组比较,差异有统计学意义(P0.05);C组各骨组织形态计量学参数与D、E组比较,差异均有统计学意义(P0.05);D组TN、MTPS、TBV、MBCT与A组比较差异有统计学意义(P0.05);E组仅MTPS与A组比较差异有统计学意义(P0.05);E组MTPS、TBV、MBCT与D组比较,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组织化学染色观察示,A、C、D、E组CTR、IL-1表达水平较B组降低,C、E组低于D组,差异有统计学意义(P0.05);其余组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论狭鳕鱼皮胶原多肽能够改善骨质疏松大鼠的骨微结构,其机制可能与抑制骨组织中CTR、IL-1表达有关,但尚未发现其对骨质疏松症有预防作用。     

TGF-β1/Smad4信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓微环境的影响及针刺干预机制

目的研究TGF-β1/Smad4信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠的影响,并分析针刺疗法对大鼠骨髓微环境的干预机制。方法选取SPF级雌性Wistar大鼠共60只,按照随机数字法分为空白组(A组)、模型组(B组)、针刺组(C组)和雌二醇组(D组),每组大鼠各15只。除A组外,其他大鼠均以去卵巢法建立骨质疏松症动物模型。造模成功后,C组交替给予电针刺激"肾俞穴""三阴交穴""关元穴"及"足三里穴",每次电针15 min,1次/d。D组按照人鼠等效剂量给予戊酸雌二醇治疗,总计干预治疗12周。对比分析各组大鼠血清中骨代谢相关标志物、股骨远端骨密度水平及骨小梁微结构变化;对比各组大鼠股骨远端骨组织中Runx 2、PPARγ、TGF-β1、Smad 4蛋白和mRNA表达水平。结果造模后,与空白组比较,各组大鼠骨密度均明显降低(P0.05),血清中骨代谢标志物CBF-α1、BALP、PINP、OC、CTX-I含量均明显减少(P0.05);相对骨体积分数(BV/TV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、连接密度(Conn.D)、结构模型指数(SMI)明显升高(P0.05);股骨远端骨组织中Runx 2、PPARγ、TGF-β1、Smad 4蛋白和mRNA表达下降(P0.05)。干预12周后,与模型组比较,雌二醇组和针刺组大鼠骨小梁微结构明显改善,骨密度、骨代谢标志物及股骨远端骨组织中Runx 2、PPARγ、TGF-β1、Smad 4蛋白和mRNA表达上升(P0.05),其中针刺组明显优于雌二醇组(P0.01)。结论针刺"肾俞穴""三阴交穴""关元穴"及"足三里穴"能够改善去卵巢大鼠骨髓微环境,改善骨小梁微结构,增加骨量,其机制可能与针刺疗法调控TGF-β1/Smad 4信号通路有关。     

去卵巢对大鼠颌骨成骨细胞增殖与成骨分化能力的影响

目的探讨去卵巢对大鼠颌骨成骨细胞增殖与成骨分化能力的影响。方法建立去卵巢大鼠骨质疏松模型,分离培养假手术组和去卵巢组颌骨成骨细胞并进行形态学观察。采用CCK-8法检测假手术组和去卵巢组大鼠颌骨成骨细胞的增殖能力差异。通过碱性磷酸酶染色与活性测定、矿化结节茜素红染色与定量、成骨相关基因及蛋白表达检测,探讨去卵巢对大鼠颌骨成骨细胞增殖及成骨分化能力的影响。结果假手术组和去卵巢组大鼠均可成功分离培养颌骨成骨细胞,两组细胞均可贴壁生长,细胞形态未见显著差异。与假手术组相比,去卵巢大鼠颌骨成骨细胞的增殖能力,碱性磷酸酶染色与活性均显著增高;但去卵巢大鼠颌骨成骨细胞的Runx2和OC在mRNA与蛋白水平的表达上及体外矿化结节形成能力方面皆显著低于假手术组。结论去卵巢可影响大鼠颌骨成骨细胞的增殖与成骨分化能力,研究结果将为探讨颌面部骨组织骨质疏松的发病机制与防治提供实验依据。