Influence of side chains on phorbol ester binding to protein kinase C

The phorbol esters, natural products derived from plants of the family Euphorbiaceae, are potent tumor promoters and modulators of biological response. Their major site of action is protein kinase C. Three classes of derivatives were examined to better assess the influence of the ester side chains on phorbol ester binding affinity for protein kinase C. A series of phorbol diesters substituted at the 13-OH with biotin separated from the phorbol nucleus by linker arms of variable length were prepared. Although all showed good potency by themselves (half-maximally effective doses of 12–67 nM), addition of avidin greatly inhibited activity, suggesting significant steric constraints on the side chains for retention of activity. At the other extreme, very high concentrations of the unsubstituted parent alcohol phorbol were examined to determine whether phorbol was actually inactive or whether it might simply possess weak binding activity. Inhibition was in fact observed with an apparent K_i of approximately 10 mM. The inhibition was time dependent and not stereospecific, however, suggesting that the inhibition was not due to competitive binding. The third class of compounds examined were phorbol 12- and 13-monoesters. Although approximately 20-fold less potent than the 13-monoesters, the 12-monoesters showed substantial binding activity, in contrast to their reported lack of activity in vivo.     

益气健脾抗癌中药对胃癌裸鼠肝肾脏蛋白激酶C影响的实验研究

目的探讨益气健脾抗癌中药对胃癌裸鼠肝脏和肾脏蛋白激酶C活性的影响。方法在40只裸小鼠中随机选取30只腋下接种人胃癌SGC一7901细胞株,将成瘤裸鼠随机分为模型组、补脾对照组和补脾抗癌组,每组10只,剩余10只未种瘤裸鼠设为空白组。空白组和模型组予0．9％NaCl溶液灌胃,补脾对照组予益气健脾中药灌胃,补脾抗癌组予益气健脾合抗癌中药灌胃。各组给予相应的干预措施14天,观察动物的肝肾组织大体情况并称重,计算脏器系数,用WesternBlot法检测肝脏和肾脏PKC活性。结果与空白组比较,模型组瘤鼠肝系数、。肾系数降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;与模型组比较,补脾对照组和补脾抗癌组肝系数、肾系数升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。同时模型组肝脏和肾脏PKC活性较空白组明显升高,补脾对照组和补脾抗癌组裸鼠肝脏和肾脏中PKC活性较模型组均下降（P〈0．01）,其中补脾抗癌组较补脾对照组下降更为显著（P〈0．01）。结论胃癌瘤鼠存在脾虚症状,益气健脾和益气健脾抗癌中药对胃癌裸鼠体质量、肝重、肾重、肝系数、肾系数,以及肝脏和肾脏中PKC活性均具有调节作用,且益气健脾抗癌中药对PKC的调节作用优于益气健脾中药。     

葛根素对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的作用

目的 研究葛根素(Pue)对糖尿病大鼠。肾脏蛋白激酶C(PKC)活性、肾功能及肾脏结构的影响。方法 链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病组、Pue(500、250、125mg／kg)治疗组、维生素E(VitE)组，同时另设正常对照组，给药12周后，测定肾功能及。肾脏指数，ELISA法测定肾脏PKC活性，放免法测定尿蛋白排泄率，并对肾组织进行光镜及电镜观察。结果 糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率、肾脏指数(肾脏质量／体重)、肾小球细胞膜PKC活性明显升高，给予Pue治疗12周后，治疗组糖尿病大鼠尿白蛋白排泄率较糖尿病组显著降低，肾脏肥大也有明显改善，肾小球细胞膜PKC：活性显著下降，光镜及电镜下肾脏病理改变较糖尿病组有较大改善。结论 Pue可以纠正糖尿病大鼠早期肾脏高滤过、高灌注，并对糖尿病大鼠肾脏病变有一定的保护作用，其部分机制可能是通过下调。肾脏PKC活性而实现的。     

针刺对实验性视网膜脱离中蛋白激酶C的影响

目的 探讨针刺疗法对实验性视网脱离中蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓａＣ，ＰＫＣ）活性的影响。方法 ５６只实验性单眼视网膜脱离家免随机分为针刺组与对照组；每组分４个小组，每小组７只家免，每只家兔的对侧眼作为对照眼。在发生视网膜脱离并接受针刺治疗后的１周、２周、３周和４周分别取视网膜脱离部位的视网膜组织和对照眼相应部位的组织匀浆，进行视网膜ＰＫＣ活性检测。结果 视网膜部离后的不同时期内视网膜部     

蚂蟥蛋白激酶C基因的克隆和表达分析

蛋白激酶C(PKC)是一类广泛参与细胞增殖和发育的蛋白激酶,但在雌雄同体动物蚂蟥性腺中的发育机制尚不清楚.为探究蛋白激酶C在蚂蟥生殖细胞的发育过程中的作用,该研究克隆蚂蟥PKC基因,进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR技术进行雌雄性腺的表达分析.结果 表明:①克隆得到的Wp-PKC全长2 580 bp,相对分子质量7...     

银耳多糖对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响

目的观察银耳多糖(TPS)体外对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响,探讨TPS对免疫细胞信息传递系统的效应。方法应用反向离子对高效液相色谱法测定小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结果TPS能促进体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结论TPS的免疫调节作用与淋巴细胞的信号传导系统密切相关。     

菟箭合剂对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶C活性作用的研究

目的 :观察菟箭合剂对实验性糖尿病肾病大鼠肾组织蛋白激酶C(PKC)活性、肾功能及肾脏结构的影响。方法 :单肾切除加链脲佐菌素 (STZ)腹腔注射制作糖尿病肾病动物模型。中药菟箭合剂 (20g·kg^-1·d^-1)和阳性对照药缬沙坦 (2 0mg·kg^-1·d^-1)干预治疗 12周 ,用氚标记的二丁酸佛波醇酯 ([³H]PDBu)结合法测定大鼠肾组织PKC活性 ,检测 24 h尿蛋白排出量 (Upro) ,肾脏常规染色光镜观察病理变化。结果 :12周时单肾糖尿病大鼠肾组织出现肾小球硬化病理改变 ,Upro明显升高 ,细胞膜PKC活性 (mPKC)明显升高 ,细胞浆PKC活性 (cPKC)明显降低 ,mPKC和cPKC比值 (M/C)明显升高。菟箭合剂和缬沙坦干预治疗显著降低Upro ,降低mPKC和M/C ,升高cPKC(P<0.01) ,改善肾组织病理改变。结论 :菟箭合剂对单肾切除STZ糖尿病大鼠具有肾保护作用 ,推测部分地通过抑制肾组织PKC激活途径来达到的。     

参元丹药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌梗死面积、蛋白激酶C及热休克蛋白70的影响

目的:应用免疫组化法观察蛋白激酶C(PKC)及热休克蛋白70(HSP70)表达,探讨参元丹的药理性预适应作用及其机制。方法:选取Wistar大鼠60只,随机分为6组,分别造模、取血、取心肌组织。应用HE染色方法对组织切片进行染色,4倍镜下采用彩色病理图像分析系统分析心肌梗死面积。应用免疫组化试剂盒对组织切片进行处理。20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况。结果:彩色病理图像分析参元丹能够代替心绞痛的缺血、缺氧的刺激,减小心肌梗死面积,具有药理性预适应的心脏保护作用。PKC的表达情况:假性缺血预处理组的心肌组织中偶见微弱的一处表达。缺血预处理组和药物预处理+缺血预处理组的大鼠心肌组织中PKC大量的表达,药物预处理组大鼠心肌组织的PKC表达充分,提示PKC在参元丹的药理性预适应样心肌保护过程中起作用。HSP70的表达情况:对照组、再灌注组、假性缺血预处理组、缺血预处理组HSP70没有表达,药物预处理组HSP70有表达,药物预处理+缺血预处理组HSP70表达明显,提示HSP70的表达与参元丹的作用相关。结论:参元丹具有药理预适应样作用;参元丹预适应心肌保护作用的机制可能与PKC和HSP70的介导有关。     

青蒿素对实验性糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C移位活化的抑制作用

目的探讨青蒿素对实验性糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C（PKC）由细胞浆到细胞膜移位活化的抑制作用。方法将实验大鼠随机分为对照组（A组）、糖尿病非治疗组（B组）及糖尿病青蒿素治疗组（C组）,B组、C组采用腹腔单剂量注射链脲佐菌素（STZ）65mg／kg的方法建立糖尿病大鼠模型,造模后c组采用青蒿素300mg／（kg·d）腹腔注射。于实验进行到第3周、第6周时分别宰杀大鼠6只,测算肌酐清除率（Ccr）、24h尿白蛋白排泄率（UAER）及肾脏系数（肾脏质量／体质量）;采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定PKC的活性。结果B组大鼠Ccr、UAER、肾脏细胞膜PKC活性及肾脏系数均较A组明显升高（P〈0．05或0．01）;C组大鼠上述指标均较B组明显下降（P〈0．05或0．01）。结论青蒿素通过抑制糖尿病大鼠肾脏细胞PKC移位活化而对糖尿病大鼠早期肾脏病变起到保护作用。     

复方丹参对缺血预适应大鼠心肌蛋白激酶C表达的影响

目的　探讨复方丹参加强缺血预适应 ( IPC)的机制 ,是否通过促进蛋白激酶 C ( PKC)蛋白、m RNA水平表达发挥作用。方法　采用冠脉结扎大鼠 5 min缺血 ,5 min再灌反复循环 3次的缺血预适应方案 ,缺血 30 m in,再灌 2 h的缺血再灌模型 ,通过免疫组化、RT— PCR的方法观察 PKC蛋白、m RNA表达以及复方丹参对其影响。结果　 PKC在正常对照组中主要存在胞浆 ,但经过 IPC和使用复方丹参后 ,在胞膜和胞核也可见 ;不论早期 ,还是晚期 IPC组 PKC表达均高于假性预处理组 ,以早期 IPC组明显 ( P<0 .0 1) ;经复方丹参预处理后 ,PKC的表达均高于再灌组、早期、晚期 IPC组 ,以药物预处理 +缺血预处理组 ( DIPC)为优 ,显著高于早期 IPC组 ( P<0 .0 1)。PKCm RNA在正常心肌组织、再灌组、假性预处理组间无明显差异 ,但 IPC后不论早期 ,还是晚期 PKC m RNA表达均高于假性预处理组 ,晚期 IPC组表达更加明显 ;经复方丹参预处理后 ,可明显促进早、晚期 IPC及再灌组 PKC m R-NA的表达 ( P<0 .0 5 )。结论　复方丹参可激活 PKC,使其发生转位 ,促进其蛋白、m RNA表达水平增高。这可能是此方加强 IPC的主要机制之一     

植物环肽生物活性及其作用机制研究进展

环肽是植物来源的超稳定肽,是由头至尾环化骨架和形成胱氨酸结的3个二硫键组成的非常稳定的化合物.与其他类似肽相比,环肽的这种独特的拓扑化学结构使它们对化学、热和生物降解异常稳定,超强的稳定性可使它们在医药学领域方面取得很多进展.植物环肽是植物研究的一个新领域,由于其具有多种生物活性,引起了很多科学研究工作者的广泛重视与探...     

AG372对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制动力学研究

目的　观察Tyrphostin中的AG372对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。 方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP或 [γ 3 2 P]GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 + ,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG372对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 6 2 7.1nmol·L-1,抑制作用远大于已知CK2抑制剂DRB和A3。AG372对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP呈竞争性抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论　AG372是一种很强的重组人CK2抑制剂。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

六味地黄加味胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏蛋白激酶C活性及结缔组织生长因子的影响

目的观察六味地黄加味胶囊对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的保护作用,对肾脏蛋白激酶C(PKC)活性及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法ip链脲佐菌素(STZ)建立大鼠DN模型,模型成功后随机分为5组:对照组、模型组、洛汀新组、六味地黄加味胶囊组、洛汀新与六味地黄加味胶囊合用组,药物干预12周后,透射电镜观察各组大鼠肾脏超微结构,免疫组织化学法检查肾皮质CTGF表达,检测相对肾质量、血糖、尿白蛋白排泄率(UPER)、血肌酐(SCr)、尿肌酐(UCr)、内生肌酐清除率(CCr)、肾脏PKC活性等。结果DN大鼠肾脏胶原沉积明显,相对肾质量、血糖、UPER、CCr、肾脏PKC活性、肾皮质CTGF表达等显著升高,洛汀新、六味地黄加味胶囊及两药合用均可降低肾脏PKC活性和肾皮质CTGF的表达,改善DN大鼠蛋白尿、肾功能,减轻肾脏胶原沉积,两药合用能更显著降低肾脏PKC活性、肾皮质CTGF的表达,降低蛋白尿和改善肾功能作用更强。结论洛汀新、六味地黄加味胶囊及两药合用均能保护DN大鼠肾脏,且两药合用较单用洛汀新作用更强。     

Activation of protein kinase C from guinea-pig and rat ventricular muscles by musclide-A1 and its (2R, 5S)-diastereomer

The activating effects of musclide-A1, 6-methyl-2,5-heptanediol 5-(hydrogen sulphate) (la), and its (2R, 5S)- and (2R, 5R)-diastereomers on ventricular protein kinase C from guinea-pig and rat were compared with other natural compounds derived from musk and non-natural related compounds. The (2R, 5S)-diastereomer was most potent among musk-derived compounds and its related non-natural compounds. The activation by la (20 μM) was produced in the presence of low [Ca²⁺]₀ and phosphatidylserine like 1,2-dioctanoylglycerol (2 μM). The activation pattern for peaks eluted by a hydroxyapatite column demonstrated that 1a activates ventricular-specific protein kinase C peak II, suggesting one mechanism for the beta-adrenergic cardiotonic potentiation by 1a.     

脾气虚大鼠脾肝组织蛋白激酶C活性变化的实验研究

目的 :探讨脾气虚脾肝组织蛋白激酶C活性变化 ,以揭示脾气虚与脾肝组织PKC活性变化的关系。方法 :采用复合因素塑造大白鼠脾气虚证模型 ,采用底物磷酸化法检测模型脾肝组织蛋白激酶C活性。结果 :脾气虚证大鼠模型脾组织细胞膜中PKC活性明显降低 (P <0 0 0 1) ,而脾组织细胞浆中PKC活性无明显变化 (P >0 0 5 ) ;脾气虚证大鼠模型肝组织细胞膜PKC活性无明显变化 (P >0 0 5 ) ,肝组织细胞浆中PKC活性明显升高 (P<0 0 1)。健脾益气中药有提高脾组织细胞膜中PKC活性的趋势 ,但作用不显著 ,无统计学意义 ,而该中药能够降低脾组织细胞浆中PKC活性 (0 0 1

相似文献   

白桦酯酸及其衍生物的生物活性及作用机制研究进展

白桦酯酸是一种天然存在的五环戊烷型三萜类物质,通常是从白桦Betula platyphylla树皮中分离出来,在其他植物中也有发现,以游离糖苷和糖基衍生物的形式存在于不同植物中。通过对其化学结构的修饰可以得到多种多样的衍生物,研究表明白桦酯酸及其衍生物在抗肿瘤、抗病毒、消炎止痛、抑制脑神经及血管损伤和对其他常见疾病的治疗作用等方面具有积极的作用。综述了白桦酯酸及其衍生物的种类、生物活性及作用机制,以期为今后对其进一步的研究与应用提供理论参考。     

Antiproliferative effects of daucane esters from Ferula communis and F. arrigonii on human colon cancer cell lines

Certain jaesekanadiol p-hydroxy- and p-methoxybenzoates - typical of Ferula communis and Ferula arrigonii sardinian plants - show antiproliferative activity on human colon cancer less. The inhibitory doses 50%, calculated after 72 h of treatment, revealed that the antiproliferative capacity of the compounds was in the following descending order: ferutinin > 2alpha-OH-ferutidin > ferutidin > siol anisate > lapiferin > jaeskeanadiol. Evidence is presented that interaction with type II estrogen-binding sites (EBS) underlies this activity.     

茄科倍半萜类化学成分及其药理作用研究进展

茄科为被子植物门、管状花目下的植物,1992年至今从茄科植物中分离得到209个倍半萜类成分,其类型主要包括链状倍半萜、单环倍半萜、桉叶烷型倍半萜、香根螺烷型倍半萜、愈创木烷型倍半萜等,药理作用研究表明部分倍半萜类成分具有抗肿瘤、抗炎、抑菌、抗病毒和免疫抑制等活性。主要综述茄科倍半萜类化学成分及其药理作用的研究进展,为茄科植物的合理开发和综合利用提供科学依据。