三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞促凋亡作用的体外实验

目的 探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCSMC)的促凋亡作用机制及其对损伤动脉再狭窄防治的意义.方法 将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养,将细胞分为正常对照组、三氧化二砷(浓度分别为1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 μmol/L)组,通过原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL),流式细胞仪检测细胞周期观察三氧化二砷促细胞凋亡作用,WESTERN印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化,RT-PCR检测三氧化二砷对E2F-1的作用.结果 随三氧化二砷浓度的增加它能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关(观察第7天、浓度为5.0 μmol/L时活细胞数为(4.41±0.10)×105/mL与正常对照组(30.11±0.93)×105/mL相比较差异具有统计学意义(P＜0.05),TUNEL可见凋亡细胞由16.0%±3.1%增至38.7%±2.7%(P＜0.05),流式细胞仪可见4.0 μmol/L三氧化二砷作用HCSMC 48 h后代表细胞凋亡的亚二倍体峰在48 h为最多,WESTERN印迹可见三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl-2表达.RT-PCR可见E2F-1 mRNA表达于48 h最少(P＜0.05).正常对照组均不见典型上述变化.结论 三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡,降低HCASMC转录因子E2F-1 mRNA表达,从而抑制HCASMC的过度增殖、迁移和黏附.     

白血病骨髓基质细胞黏附培养对Jurkat细胞IAP家族主要成员表达的影响

目的:观察白血病骨髓基质细胞黏附培养对Jurkat细胞化疗敏感性及IAP家族主要成员表达的影响。方法:Jurkat细胞与60Co照射的基质细胞层黏附培养构建共培养模型,扫描电镜观察,0.5μmol/L DNR作用24h后FITC-Annexin V/PI标记流式细胞仪定量Jurkat细胞的凋亡率。Western blot检测黏附培养4、24及48h时Jurkat细胞总蛋白中XIAP和survivin的表达变化,流式细胞仪检测Jurkat细胞周期分布。结果:白血病基质细胞黏附培养组、正常基质细胞黏附培养组Jurkat细胞凋亡率分别为(6.05±0.54)%、(8.48±0.86)%,与悬浮对照组(25.74±6.15)%比较差异均有显著性(P<0.01),且白血病基质细胞黏附培养组与正常基质细胞黏附培养组间差异也有显著性(P<0.05)。Western blot检测结果示,与白血病基质细胞黏附培养4h即观察到XIAP表达的上调,24h和48h尤为明显,但survivin表达的变化呈现相反趋势。与Western blot结果相一致,Jurkat细胞周期阻滞于G0-G1期。结论:白血病骨髓基质细胞黏附培养能介导Jurkat细胞耐药,其机制可能与Jurkat细胞XIAP表达上调和survivin表达下调有关。     

E1A激活基因阻遏子蛋白过表达可抑制人血管平滑肌细胞的迁移

背景:成熟动脉中膜血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)分化稳态的丧失是血管老化的一个重要原因.目的:观察E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)抑制人血管平滑肌细胞迁移的分子机制.方法:应用已建立的稳定转染CREG过表达细胞hVSMCs-CREG和CREG表达沉默的hVSMCs-siCREG细胞株通过刮伤实验和Transwell小室细胞移行实验检测细胞迁移能力,通过Western blot检测转染前后细胞中CREG蛋白、基质金属蛋白酶和JNK表达及活化情况,应用JNK和基质金属蛋白酶9抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞迁移中的作用.结果与结论:Western blot结果证实,CREG蛋白表达在hVSMCs-CREG组中增加(P < 0.05),而在hVSMCs-siCREG组中减少(P < 0.05).刮伤实验和Transwell实验分析结果证实hVSMCs-CREG组细胞较正常对照组细胞迁移能力受抑.相反,hVSMCs-siCREG组细胞迁移能力显著增加(P < 0.05).Western blot和明胶酶谱分析证实hVSMCs-siCREG组细胞中MMP9活性明显增加(P < 0.05),同时JNK蛋白活化.进一步应用JNK抑制剂阻断研究证实,CREG蛋白表达抑制引起的血管平滑肌细胞迁移能力增加与细胞中基质金属蛋白酶9活性均受到剂量依赖性抑制.结果证实,CREG蛋白表达可抑制JNK-基质金属蛋白酶9信号通路的活化,以此抑制体外培养的人血管平滑肌细胞迁移.     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞系SKOV3细胞凋亡的作用和机制

目的观察三氧化二砷(ATO)诱导人卵巢癌细胞系SKOV3细胞的凋亡作用和凋亡通路分子caspase 3、PARP,凋亡相关蛋白p-AKT、AKT蛋白表达的变化。方法分别用不同剂量的三氧化二砷作用人卵巢癌细胞系SKOV3细胞,应用MTT比色法检测培养48 h的细胞存活率,应用流式细胞仪测定培养48 h细胞凋亡的变化,免疫印迹法检测凋亡蛋白caspase 3、PARP和凋亡相关蛋白p-AKT、AKT的表达情况。结果 MTT示三氧化二砷能明显抑制SKOV3细胞增殖;流式细胞术显示三氧化二砷诱导SKOV3细胞凋亡,且具有明显的剂量依赖性;Western blotting检测发现药物能显著下调caspase 3、PARP、p-AKT的表达水平。结论三氧化二砷能显著抑制人卵巢癌细胞系SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡,激活凋亡通路分子caspase 3、PARP,下调p-AKT蛋白表达水平,这可能是三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞SKOV3细胞凋亡的作用机制。     

活性氧激活内质网诱导软骨细胞凋亡的研究

目的探讨应力诱导的人软骨细胞凋亡过程中活性氧(ROS)与内质网应激(ERS)的作用关系。方法分离培养人膝关节软骨细胞,应用细胞牵张力加载系统对各组软骨细胞分别加载0 h、6 h、12 h和24 h,在各受力组中加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为抑制剂组。RT-PCR和Western blot检测各组细胞中内质网应激标志因子Caspase-12的表达;DCFH-DA法检测细胞中ROS的含量;流式细胞术检测细胞凋亡率,SPSS 17.0统计软件处理实验数据,组间比较采用t检验。结果 RT-PCR和Western blot检测Caspase-12结果显示:2 h表达量开始增加;24 h达峰值;NAC抑制剂组,与受力组相比,表达明显降低(P<0.05);DCFH-DA检测ROS结果显示:受力2 h后含量明显增加,24 h达峰值;NAC抑制剂组,相较于受力组,明显降低(P<0.05);细胞凋亡率检测结果显示:受力2 h后凋亡率开始增加,24 h达峰值,而NAC抑制剂组,与受力组相比,显著下调(P<0.01)。结论应力诱导软骨细胞凋亡过程中,ROS可能作为上级信号激活内质网应激途径参与软骨细胞凋亡。     

MTDH基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因沉默对B淋巴瘤细胞增殖及侵袭能力的影响。方法在B淋巴瘤细胞Raji中转染MTDH siRNA和siRNA对照,分别命名为MTDH siRNA组和siRNA对照组,将没有转染的细胞作为对照组。qRT-PCR和Western blot方法检测细胞中MTDH表达水平,MTT方法检测细胞增殖和黏附能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白水平。结果MTDH siRNA细胞中MTDH mRNA和蛋白水平均明显低于对照组和siRNA对照组(P<0.05)。与对照组和siRNA对照组比较,MTDH siRNA细胞增殖和黏附能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力也降低,细胞中Vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MTDH基因沉默下调B淋巴瘤细胞增殖能力,抑制B淋巴瘤细胞侵袭和迁移。     

MMP-2基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制研究

目的探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因对前列腺癌细胞恶性表型的影响及其机制。方法 Western blot和RT-PCR检测人正常前列腺上皮RWPE-1细胞和前列腺癌PC3细胞中MMP-2的表达情况;以脂质体Lipfectamine 2000将MMP-2 siRNA和MMP-2 control质粒分别转染至siRNA MMP-2组和siRNA control组细胞中,以不做处理的细胞为对照组。Western blot和RT-PCR检测其转染效果;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞的侵袭和迁移;FCM检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和Cleaved Caspase-8蛋白的表达。结果与RWPE-1细胞相比,PC3细胞中MMP-2蛋白和mRNA的表达水平显著升高(P0.05)。MMP-2在siRNA MMP-2组细胞中的蛋白和mRNA表达显著低于对照组(P0.05),而siRNA control组与对照组间MMP-2的蛋白和mRNA表达水平差异无显著性(P0.05)。siRNA MMP-2组细胞的OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数和VEGF蛋白的表达水平显著下降,而细胞凋亡率和Cleaved Caspase-8蛋白水平显著升高,差异均显著性(P0.05);对照组和siRNA control组间OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数、细胞凋亡率、VEGF和Cleaved Caspase-8蛋白表达均未见显著差异(P0.05)。结论 MMP-2在前列腺癌PC3细胞中高表达,干扰其表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调VEGF蛋白和上调Cleaved Caspase-8蛋白的表达有关。     

茶多酚对前列腺癌PC-3M细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨茶多酚对前列腺癌PC-3M细胞增殖及凋亡的影响。方法设立对照组与实验组,采用MTT比色法检测TP对PC-3M细胞增殖的影响;吖啶橙/溴化乙锭染色法观察诱导细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期;RT-PCR和Western blot检测Caspase-3基因的转录与表达。结果与对照组比较,MTT法示实验组对PC-3M细胞的增殖抑制作用增强;细胞染色法示实验组凋亡率增高;流式细胞术显示细胞阻滞于G1期,增殖指数降低;RT-PCR与Western blot示Caspase-3基因转录与翻译上调,上述结果在一定范围内呈时间、剂量依赖性(P0.05)。结论茶多酚对人前列腺癌PC-3M细胞具有增殖抑制、促进凋亡作用,与上调caspase-3基因的转录与表达有关。     

RNAi干扰HPV16 E6基因对宫颈癌Siha细胞的影响

目的:探讨E6 SiRNA对HPV16阳性Siha细胞E6基因的抑制作用,以及对细胞凋亡的影响.方法:合成两对针对HPV16 E6基因的特异性SiRNA及一对阴性对照SiRNA,脂质体介导转染Siha细胞系.RT-PCR检测各组HPV16 E6基因mRNA表达,Westem bIot检测HPV16 E6及P53蛋白变化,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率.结果:与未转染组相比,两对SiRNA分别降低E6 mRNA表达水平84.7%和82.3%(P<0.001),同时分别降低HPV16 E6蛋白表达水平61.3%及62.4%(P<0.001),另外,P53蛋白表达水平分别增加244%及272%(P<0.001),但两转染组间差异无统计学意义(P>0.05).两转染组细胞凋亡率分别为(34.38±3.14)%和(11.24±1.88)%,两转染组间细胞凋亡率差异亦有统计学意义(P<0.001).结论:RNAi明显抑制了HPV16 E6基因的转录及翻译,能够提高P53表达,促进细胞凋亡.     

β-catenin特异性抑制剂XAV939对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖抑制的实验研究

目的:通过短发夹RNA(shRNA)干扰β-catenin基因的表达及使用β-catenin特异性抑制剂XAV939作用于套细胞淋巴瘤(MCL)Jeko-1细胞株,了解特异性抑制β-catenin活性对Jeko-1细胞增殖及细胞凋亡的影响。方法:将构建β-catenin shRNA真核表达载体转染Jeko-1细胞,应用RT-PCR和Western blot的方法鉴定干扰效果,用不同浓度XAV939处理MCL细胞株Jeko-1;应用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、Cyclin D1、C-MYC、caspase-3表达水平的变化。结果:shRNA转染48 h后,RTPCR、Western blot检测发现,Jeko-1细胞的β-catenin的mRNA、蛋白表达下降;无论使用shRNA或抑制剂处理,均可抑制Jeko-1细胞增殖,促进其凋亡;Western blot检测显示,凋亡相关蛋白BCL-2、Cyclin D1、C-MYC的表达下降,而BAX、caspase-3表达上升。结论:特异性抑制β-catenin活性能有效地抑制Jeko-1细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

DLL4/Notch1配体过表达抑制K562细胞生长机制研究

本研究旨在探讨Notch1信号通路的配体delta-like ligand4（DLL4）基因过表达对K562细胞增殖的影响及其可能的作用机制.采用脂质体介导将含配体DLL4基因的质粒pBudCE4.1-DLL4转染K562细胞,通过RT-PCR和Western blot检测转染48 h后DLL4基因的mRNA及蛋白表达,同样检测转染后Notch1受体胞内区（NICD）、下游靶基因Hesl的mRNA及蛋白表达;通过Western blot检测与Notch信号通路相关的细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达水平;用CCK-8法检测转染后细胞的增殖情况;用流式细胞术检测转染质粒48 h后各组细胞的凋亡情况.结果表明,DLL4基因转染后的K562细胞中DLL4、NICD及下游靶基因Hesl的mRNA及蛋白表达量比对照组明显增多（P＜0.05）,说明DLL4的过表达激活了Notch1信号通路;Western blot方法检测显示,DLL4的转染增加了细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达,从而抑制了K562细胞的生长,诱导细胞周期停滞于G1期及细胞凋亡的增加.结论：外源性DLL4基因过表达可有效活化K562细胞内Notch1信号通路,可能通过YY1、C-MYC及Rb等Notch信号通路相关基因的高表达诱导K562细胞的生长减慢及细胞凋亡.     

三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞Hedgehog通路的影响

目的:探讨三氧化二砷对慢性髓系白血病(CML)细胞Hedgehog信号通路的影响。方法:采用MTT法及流式细胞术测定细胞的凋亡,Western blot检测Hedgehog通路中PTCH及SMO蛋白表达,real-time PCR检测PTCH及SMO基因mRNA的表达。结果:三氧化二砷可诱导K562细胞凋亡,最佳浓度为2μmol/L,最佳作用时间为24 h。在该浓度及时间点作用下Hedgehog通路中PTCH及SMO蛋白和mRNA表达下调。结论:三氧化二砷可降低Hedgehog通路中PTCH及SMO基因表达。     

DACT1在结肠癌中的表达及其作用

目的 探讨DACT1在结肠癌中的表达及其对结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭的影响.方法 Western blot检测DACT1在结肠癌组织中的表达;CCK-8进行细胞增殖实验;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;用Transwell小室法检测细胞转染前后侵袭力改变.结果 21例结肠癌组织中有14例DACT1表达增高,DACT1高表达的SW480增殖能力明显增强(P<0.05),细胞划痕后24 h,DACT1高表达的细胞划痕宽度恢复70%,而对照组划痕宽度恢复20%(P<0.05).实验组SW480细胞侵袭数量明显高于对照组(P<0.05).结论 DACT1在结肠癌中高表达并促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

去脂牛血清白蛋白超载对NRK-52E细胞葡萄糖调节蛋白78、氧调节蛋白150及细胞凋亡的影响

目的 探讨去脂牛血清白蛋白(d-BSA)超载大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)对内质网应激(ERS)经典标志物葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、氧调节蛋白150(ORP150)及细胞凋亡率的影响.方法 以不同浓度(1、5、10、20、50 mg/ml)的d-BSA超载NRK-52E细胞为实验组,以正常培养的NRK-52E细胞为对照组,观察各组细胞GRP78、ORP150和细胞凋亡率的情况;观察作用时间(6、12、24 h)对d-BSA(20 mg/ml)超载的NRK-52E细胞GRP78、ORP150和细胞凋亡率的影响情况.通过免疫细胞化学法测定NRK-52E细胞GRP78的表达量,Western blot法测定ORP150的表达量,流式细胞术检测NRK-52E细胞的凋亡率情况.结果 (1)浓度为1 mg/ml的d-BSA孵育NRK-52E细胞24 h后GRP78、ORP150的表达量及细胞凋亡率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05).(2)浓度为5 mg/ml的d-BSA孵育NRK-52E细胞24 h后,细胞内GRP78、ORP150表达量与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),且浓度为10、20、50 mg/ml的d-BSA组的表达量显著增加(P<0.01).(3)浓度为5 mg/ml的d-BSA孵育NRK-52E细胞12 h后,细胞凋亡率升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),且浓度为10、20、50 mg/ml的d-BSA组细胞凋亡率显著增加(P<0.01).(4)浓度为20 mg/ml的d-BSA孵育NRK-52E细胞6 h后,细胞内GRP78、ORP150表达量即有增加(P<0.05);12、24 h后,两者表达量与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).(5)细胞凋亡率在浓度20 mg/ml的d-BSA孵育6 h后即升高,但与对照组相比无统计学差异;12、24 h后,细胞凋亡率与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).结论 d-BSA超载NRK-52E细胞可以促进细胞内GRP78、ORP150的表达;当d-BSA浓度过大或者孵育时间过久,细胞凋亡率升高.     

HSV-TK/GCV系统在体外对胃癌MNK-45细胞株的增殖抑制作用研究

目的　探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷（HSV-TK/GCV）自杀基因系统对胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移的抑制效应。方法　分别采用MTS试验、CCK8试验、Transwell试验、Western blot试验和RT-PCR方法检测HSV-TK/GCV系统对胃癌MNK-45细胞在24，48，72和96h的增殖、侵袭和迁移的改变；对MNK-45细胞凋亡相关蛋白mRNA水平的变化。结果　HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞的增殖效应，并能够减弱胃癌MNK-45细胞的侵袭和迁移能力，诱导MNK-45细胞凋亡相关蛋白Caspase3、Bax蛋白水平和mRNA的表达增加，抑制Bcl-2蛋白表达水平的降低，促进凋亡的发生。结论　HSV-TK/GCV系统能够有效抑制胃癌MNK-45细胞增殖、侵袭和迁移，诱导MNK-45细胞凋亡的发生。     

急性肺栓塞后线粒体前凋亡蛋白的表达及其促细胞凋亡机制研究

目的 研究大鼠急性肺栓塞(APE)后肺组织中线粒体前凋亡蛋白(ARTS)的表达变化及其诱导的细胞凋亡.方法 采用自体血栓栓塞颈总动脉制备大鼠APE模型.分别在APE前(对照)和APE后1、8、24和48 h开胸取肺脏.常规提取肺组织的总RNA和总蛋白,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测ARTS mRNA表达水平,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)进一步验证ARTS以及ARTS诱导凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xL、XIAP和H2Ax的表达变化,用免疫组化法检测肺组织中ARTS在APE前后的表达变化及其组织分布情况,用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测肺组织内细胞凋亡情况.结果 APE后ARTS的mRNA及蛋白表达水平均升高,于1 h和48 h升高最明显(P相似文献   

Smac和XIAP与卵巢癌细胞耐药及凋亡关系的研究

目的探讨Smac与卵巢癌耐药及凋亡机制。方法采用RT-PCR、Western blot方法分别从基因和蛋白水平检测卵巢癌细胞系SKOV3及其耐药细胞系SKOV3/DDP中Smac与XIAP的表达水平的差异。构建Smac真核表达载体pc DNA3.1(+)/EGFP+Smac。采用脂质体转染法将pc DNA3.1(+)/EGFP+Smac真核表达载体导入卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3/DDP。运用Western blot法检测转染前后细胞内Smac与XIAP表达的变化,MTT法检测Smac表达增加后细胞生长抑制率,观察Smac基因对卵巢癌细胞凋亡的影响。结果 SKOV3、SKOV3/DDP细胞系中均表达Smac/DIABLO与XIAP,且SKOV3中Smac的相对含量高于SKOV3/DDP。SKOV3中XIAP的相对含量低于SKOV3/DDP。Western blot检测转染后耐药细胞Smac蛋白表达增加,XIAP表达无明显改变。MTT结果转染48 h与72 h后细胞生长抑制率出现明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Smac表达的上调对卵巢癌细胞XIAP表达无明显影响,但对肿瘤细胞生长有明显的抑制作用。提示Smac确实促进卵巢癌细胞凋亡,但其凋亡机制并不是促进XIAP降解,而是与XIAP相互结合抑制其与caspase结合,激活caspase进而起到促凋亡作用。     

YB-1对卵巢癌细胞EMT标志蛋白表达及黏附能力的影响研究

目的研究Y-box结合蛋白(YB-1)对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)标志蛋白表达及细胞黏附能力的影响。方法在卵巢癌细胞中转染p Genesil-1.1/YB-1 shRNA和p Genesil-1.1/shRNA control,筛选稳定转染的细胞记为YB-1 shRNA组和shRNA-NC组,把没有转染的细胞作为对照组。以Realtime PCR和Western blot方法检测细胞中YB-1表达水平。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)方法分别检测细胞增殖和黏附能力,用Western blot检测EMT标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙粘素(N-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移情况。结果 YB-1 shRNA组细胞中的YB-1表达水平明显低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞增殖率和黏附率低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞中E-cadherin蛋白水平高于对照组和shRNA-NC组,N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平低于对照组和shRNA-NC组,差异具有统计学意义(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞侵袭和迁移数目低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。结论下调YB-1促进卵巢癌细胞E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达,抑制细胞EMT,降低细胞黏附、侵袭、迁移能力。     

川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓基质细胞FAK表达的影响

目的：探讨川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓基质细胞焦点黏附激酶（FAK）表达的影响及其意义。方法：利用流式细胞仪检测骨髓基质细胞的细胞周期及凋亡率;蛋白质免疫印迹（Western blot)法检测骨髓基质细胞中FAK的表达水平。结果：放射损伤后骨髓基质细胞明显阻滞于G0－G1期,凋亡率增加,同时FAK听表达明显下降。用川芎嗪注射液治疗后骨髓基质细胞S期合成活跃,凋亡率下降,FAK的表达增加。结论：川芎嗪改善放射损伤小鼠骨髓微环境,促进骨髓基质细胞增生可能是通过增强FAK的表达实现的。     

靶向沉默Gli1基因表达对K562细胞增殖的影响及其机制探讨

目的 探讨靶向沉默Sonic hedgehog(Shh)信号通路的转录因子Gli1基因表达对K562细胞增殖的影响及其机制.方法 将针对Gli1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)通过脂质体(LipofectamineTM 2000)导入K562细胞作为实验组,并以非特异性siRNA为对照组.实时定量PCR和Western blot法检测Gli1 mRNA和蛋白表达,MTT检测细胞增殖,碘化丙锭(PI)检测细胞周期,实时定量PCR检测c-myc、p21基因的表达变化.结果 转染后24 h实验组Gli1 mRNA表达水平为对照组的(52.60±3.57)%(P<0.01),转染后48 h实验组Gli1的蛋白表达水平为对照组的 (79.31±5.58)% (P<0.01).转染后24 h实验组细胞增殖率为对照组的 (94.41±3.58)% (P<0.05),48 h为对照组的(90.22 ±3.34)% (P<0.01).转染后24、48 h 实验组细胞出现G2/M期阻滞且c-myc的表达水平下降,而p21的表达水平升高 (P值均<0.05).结论 靶向沉默Gli1基因表达抑制了K562细胞的增殖,该抑制作用是通过下调c-myc基因、上调p21基因的表达实现的.