VEGF165核酶对裸鼠人肺腺癌的治疗作用

本研究设计合成针对血管内皮生长因子 165 (ＶＥＧＦ16 5)2 12位点的锤头状核酶及其突变体 ,构建其腺病毒真核表达载体 ,并转染人肺腺癌细胞Ａ5 49,观察核酶对肿瘤细胞生物学特性和ＶＥＧＦ16 5表达的影响及其对肿瘤生长的抑制作用。材料与方法　主要试剂和动物 :胎牛血清、脂质体和ＤＭＥＭ及ＴＲＩｚｏｌＲＮＡ提取试剂 (美国Ｇｉｂｃｏ公司 ) ,各种工具酶和试剂盒 (美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司 ) ,ＶＥＧＦ16 5单抗和ＣＤ34 单抗(瑞典Ｄａｋｏ公司 ) ,[α 32 Ｐ]ＵＴＰ购自北京亚辉公司 ,裸鼠购自第四军医大学动物中心。质粒 :ｐＧＥＭ3Ｚｆ(…     

银杏叶提取物快速抑制合氨酸诱导大鼠海马神经元内游离钙浓度升高的作用及特征

1　材料和方法新生ＳＤ大鼠 ,取其双侧海马 ,用 0 .12 5 %的胰蛋白酶消化 ,加入培养基 :ＤＭＥＭ 78% ,10 %的胎牛血清 ,1%的双抗 ,10 %的马血清。放入 37℃、ｐＨ =7.2～ 7.3、ＣＯ2 浓度为 10 %的二氧化碳培养箱内。Ｆｕｒａ 2 /Ａｍ和Ｐｌｕｒｏｎｉｃ 12 7为英国ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅ公司产品 ,谷氨酸 ,ｔｈａｐｓｇａｒｇｉｎ为Ｓｉｇｍａ公司产品 ,银杏叶提取物 (ｅｘｔｒａｃｔｏｆＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ ,ＥＧｂ)由德国Ｗｉｌｌ ｍａｒＳｃｈｗａｂｅ药厂提供 (ｌｏｔＸ940 2 6 1,3.5ｇ/Ｌ)。各刺激物和抑制剂均由胞外液…     

抗白细胞介素5单克隆抗体对嗜酸粒细胞存活力的影响

我们利用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色分析法［１］观察抗人白细胞介素５单克隆抗体（ｈＩＬ５ｍＡｂ）对外周血嗜酸粒细胞（ＥＯＳ）存活力的影响。材料与方法试剂：胎牛血清（ＦＣＳ）美国Ｇｉｂｃｏ公司生产；ＲＰＭＩ１６４０（美国Ｓｉｇｍａ公司生产），四甲基偶...     

辛伐他汀对大鼠肝贮脂细胞血小板衍生生长因子效应的影响

血小板衍生生长因子 (ＰＤＧＦ)在肝贮脂细胞 (ＦＳＣ)激活和增殖中起重要作用[1] 。研究显示 ,3 羟基 3 甲基戊二烯辅酶Ａ(ＨＭＧ ＣｏＡ)还原酶抑制剂能抑制多种细胞增殖 ,阻断生长因子对细胞的促进作用[2 ] 。因此 ,我们选用一种脂溶性ＨＭＧ ＣｏＡ还原酶抑制剂辛伐他汀 ,观察其对ＰＤＧＦ诱导培养大鼠肝ＦＳＣ增殖、胶原合成和细胞内Ｃａ2 + 变化的影响。一、材料和方法1.药物和试剂 :辛伐他汀 (默沙东公司 ) ;链酶蛋白酶Ｎｙｃｏｄｅｎｚ、甲羟戊酸 (ＭＶＡ)、碘化丙啶 (ＰＩ)、ＰＤＧＦ ＢＢ和Ｆｕ ｒａ 2 /ＡＭ (Ｓｉｇｍａ公司 ) …     

上皮钙粘蛋白与癌细胞粘附性质的研究

我们应用一种活体荧光标记对Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达被Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ单抗阻断后肝癌７７２１细胞粘附力的变化进行研究。对深入研究肿瘤细胞的侵袭转移机制和防治具有重大意义。 一、材料与方法 １．细胞系：ＳＭＭＣ－７７２１细胞引自上海细胞生物学研究所。 ２．材料：ＰＲＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ），钙黄绿素ＡＭ（Ｃａｌｃｅｉｎ ＡＭ， ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅ Ｉｎｃ．），Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ ｍＡｂ（ Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍ　Ｉｎｃ．ｃｌｏｎｅ： ＳＨＥ７８－７），９６孔酶标板和其余试剂为国产分析纯…     

人胃腺癌分化相关基因的克隆与鉴定

差异显示技术可用于研究多种组织中ｍＲＮＡ的表达差异。荧光差异显示技术 (ＦＤＤ)是在放射性差异显示技术基础上发展起来的一种新的识别基因差异表达的方法 ,我们使用此方法用来筛选与胃癌分化过程中相关表达的基因。材料与方法一、细胞系人胃腺癌ＭＫＮ 2 8(高分化 )细胞 ,ＭＫＮ 45 (低分化 )细胞 ,购自日本ＲｉｋｅｎＣｅｌｌＢａｎｋ (ＲＣＢ) ,ＲＰＭＩ 16 40 ,10 %ＦＢＳ常规培养。二、ＲＮＡ提取ＭＫＮ 2 8和ＭＫＮ 45细胞按常规培养至对数生长期 ,待细胞融合约 6 0 %～ 70 %时 ,用Ｔｒｉｚｏｌ试剂 (ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司 )处理 ,…     

绝经后骨质疏松与胰岛素生长因子—Ⅰ,表皮生长因子的关系

原发性骨质疏松症 (ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ,ＯＰ)是以骨量减少 ,骨组织显微结构退化为特征 ,以致骨的脆性增高而骨折危险性增加的一种全身性骨病。原发性骨质疏松包括绝经后骨质疏松 (ＰＭＯＰ)和老年退行性骨质疏松。本研究采用放射免疫法测定绝经前、后中老年妇女血清胰岛素样生长因子 Ⅰ(ＩＧＦ Ⅰ ) ,尿表皮生长因子 (ＥＧＦ)含量 ,探讨ＩＧＦ Ⅰ ,ＥＧＦ与ＰＭＯＰ发病的关系。一、材料与方法据山东省流行病学调查结果 :采用麦孚公司研制的ＳＤ 10 0 0型单光子骨密度仪 ,测定受试者非优势臂桡尺骨中远端 1/ 3交界处桡骨骨密度 (ＢＭ…     

奥曲肽对肝星状细胞钙离子浓度的影响及其意义

奥曲肽 (善宁 ,诺华公司生产 )能降低门静脉压力及门脉血流量 ,其机制仍不完全清楚[1] 。目前的研究表明 ,活化的肝星状细胞 (ＨＳＣ)的收缩和舒张在调节肝内阻力及血流量中具有重要作用[2 ,3 ] 。我们研究奥曲肽对活化的肝星状细胞(ＨＳＣ Ｔ6)Ｃａ2 + 的影响 ,旨在探讨奥曲肽防治肝硬化门脉高压并发症可能的机制。一、材料与方法1.ＨＳＣ Ｔ6细胞系的复苏与培养 :ＨＳＣ Ｔ6(美国旧金山总医院肝病研究中心Ｆｒｉｅｄｍａｎ教授惠赠 )为ＳＶ4 0转染ＳＤ大鼠肝星状细胞 (ＨＳＣ)。细胞于常温下复苏 ,以含 10 %小牛血清的ＤＭＥＭ (Ｇｉｂｃ…     

逆转录病毒载体介导β-gal基因在原代大鼠肝细胞的表达

逆转录病毒载体被广泛用于移植肝细胞的基因标记和肝病的体外基因治疗。但重组逆转录病毒的感染需要靶细胞处于分裂增殖状态 ,而原代大鼠肝细胞增殖能力弱 ,逆转录病毒感染效率低 ,近年来采用生长因子刺激肝细胞增殖 ,取得了较好效果[1] 。本实验观察了含表皮生长因子 (ＥＧＦ)的培养条件下 ,双顺反子逆转录病毒载体介导 β ｇａｌ基因表达于肝细胞的效率。材料与方法一、材料Ｓｐｒａｇｅ Ｄａｗｌｅｙ雄性大鼠 (15 0～ 2 0 0ｇ)由上海第二医科大学动物房提供。培养基Ｍ199和ＭＥＭ :ＧＩＢＣＯ。小牛血清 (ＦＣＳ) :杭州四季青公司。其余…     

IGF-Ⅰ,胰岛素和雌二醇对雌性大鼠垂体细胞分泌LH的

ＬＨ分泌受到性激素正、负反馈调节的控制。胰岛素样生长因子 Ⅰ (ＩＧＦ Ⅰ )可能也参与ＬＨ分泌的调节〔1〕。本实验观察在有或无血清的培养条件下 ,ＩＧＦ Ⅰ和Ｅ2 对雌性大鼠垂体细胞ＬＨ分泌的影响。一、材料和方法1.材料 :人重组ＩＧＦ Ⅰ、胰岛素、Ｅ2 和ＧｎＲＨ购于Ｓｉｇｍａ公司。无酚红的Ｍ199培养液购于德国柏林生物化学公司。2 .方法 :(1)垂体细胞的制备 :从成年 (2 0 0～ 30 0ｇ)发情期的雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 (ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒ,ＢｏｒｃｈｅｎＫｉｒｃｈｂ)获取垂体。胰酶消化法制备垂体细胞悬液〔2〕。将垂体细…     

中药阿魏酸钠对人EBL_7404肝癌细胞生存性及凋亡的影响

很多的实验已经证明,中医药对肝癌的发展具有一定的抑制作用．阿魏酸钠（ｓｏｄｉｕｍｆｅｒｕｌａｔｅ,ＳＦ）是从当归或川芎中提取的水溶性有效成分,为探讨ＳＦ抑制肝癌发展的作用机制,我们观察了ＳＦ对人ＥＢＬ７４０４肝癌细胞生存性和凋亡的影响．１　材料和方法１．１　材料　ＳＦ（批号：９８０６０１）：成都亨达制药厂提供．人ＥＢＬ７４０４肝癌细胞株：中科院上海细胞生物学研究所提供．１６４０培养基（ＲＰＭＩＭｅｄｉｕｍ）,Ｇｉｂｃｏ公司产品．润湿剂Ｐ４０（ｎｏｎｉｄｅｔＰ４０,ＮＰ４０）,Ｆｌｕｋａ…     

XTT-PMS法检测肝癌细胞的生长与药物敏感性

一、材料与方法 １主要试剂：ＭＴＴ、ＸＴＴ、ＰＭＳ、ＤＭＳＯ（Ｓｉｇｕａ公司产品）, ＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ公司）,氟尿嘧啶（上海旭东海普药业有限公司）,注射用盐酸阿霉素（深圳万乐药业有限公司）,注射用丝裂霉素Ｃ（协和发酵工业株式会社）,新生小牛血清（杭州四季青公司提供）。 ２．细胞与细胞培养：人肝癌细胞系ＢＥＬ－７４０２置合１０％新生小牛血清的ＲＰＭＩ １６４０培养液中,于３７Ｃ、５％ ＣＯ２的培养箱中培养。每两天换液一次,细胞汇合后,胰酶消化,传代。 ３．ＭＴＴ比色分析法：ＭＴＴ的配制：以…     

瘦素对培养肝细胞的糖原合成及糖原合成酶mRNA表达的影响

瘦素是近年发现的肥胖基因 (ｏｂ基因 )的表达产物 ,由脂肪细胞分泌 ,具有促进产热及抑制食欲的功能 ,是机体维持正常体重不可缺少的激素。肥胖者表现高瘦素血症 ,且易发生糖代谢异常 ,是糖尿病发病的独立危险因素。本研究观察不同剂量的瘦素对肝细胞基础状态和胰岛素刺激下对糖原合成和糖原合成酶 (ＧＳ)的影响。一、材料和方法1.材料与试剂 :正常大鼠肝细胞株ＢＲＬ(上海细胞生物研究所 ) ,ＲＰＭＩ16 40培养基和ＭＥＭ培养基 (ＧｉｂｃｏＢＲＬ) ,瘦素 (Ｒ＆Ｄ) ,小牛血清和Ｗｈａｔｍａｎ滤纸 (天象人 ) ,Ｄ 〔Ｕ 14 Ｃ〕葡萄糖 (中国科…     

谷氨酸脱氢酶液态试剂盒的制备与临床应用

谷氨酸脱氢酶 (ＧＬＤ)属肝线粒体酶[1] 。在国外已有测定血清中ＧＬＤ的商品试剂盒 ,是冻干剂型 ,在我国没有该试剂盒 ,依靠进口 ,试剂价格昂贵 ,影响了该项试验的常规开展。鉴于此 ,我们经过实验并参考文献研制了试剂盒 ,为液态剂型 ,并应用于临床 ,现报告如下。1　材料与方法1 1　材料血红蛋白标准液 :12 2 ｇ/Ｌ ,由北京中生生物工程高技术公司提供。质控血清 :德国ＭＥＲＣＫ公司 ,ＱｕａｌｉｔｒｏｌＨＳＮ、ＳＨＰ。德国ＭＥＲＣＫ公司谷氨酸脱氢酶试剂盒。仪器 :ＭＥＲＣＫＭＥＣＡ、ＴＢＡ 4 0ＦＲ全自动生化分析仪 ,岛津ＣＬ72 0…     

维生素E乳剂对肝脏星状细胞Ⅲ型前胶原和MMP1 mRNA表达的影响

肝纤维化的病理特征是细胞外基质（ＥＣＭ）在窦周间隙的大量沉积，特别是Ⅰ，Ⅲ型胶原更明显．肝纤维化动物模型研究表明，维生素Ｅ有抗肝纤维化作用［１］．我们观察维生素Ｅ对肝脏星状细胞的影响，以期从分子水平阐述维生素Ｅ抗纤维化作用机制，为临床用于慢性肝病的治疗提供更多的依据．１　材料和方法１．１　材料　肝脏星状细胞系（ＣＦＳＣ）由美国Ｇｒｅｅｎｗｅｌ教授建立；１０ｇ／Ｌ维生素Ｅ乳剂由重庆制药厂制备；ＲＰＭＩ１６４０培养基为Ｇｉｂｃｏ公司产品；Ⅲ型前胶原放免测定试剂盒为重庆肿瘤研究所产品；Ⅲ型前胶原探针、…     

CD95抑制大肠癌细胞生长的实验研究

诱导肿瘤细胞凋亡治疗肿瘤 ,是肿瘤治疗上的一个突破。将凋亡基因ＣＤ95ｃＤＮＡ导入大肠癌细胞 ,观察ＣＤ95基因在转导株的表达及在ＣＤ95抗体作用下的体外抑瘤效应 ,可望为大肠癌的ＣＤ95核酸免疫治疗提供理论依据。材料与方法一、材料大肠癌细胞ＨＴ 2 9及ＤＨ5α菌株、ｐＢＫ ＣＭＶ真核表达载体为本所保存。ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ等内切酶及Ｔ4ＤＮＡ连接酶、探针标记试剂盒与异硫氰酸胍等试剂均购于华运生物技术公司。脂质体购于ＧｉｂｃｏＢＲＬ公司。蛋白酶Ｋ及硝酸纤维膜购于Ｓｉｇｍａ产品。 [α 3 2 Ｐ]ｄＡＴＰ购于北京亚辉公司…     

依钠普利抗肝纤维化作用的实验研究

本研究旨在阐述依钠普利 (ｅｎａｌａｐｒｉｌ,Ｅｎａ)对ＣＣｌ4 诱导大鼠肝纤维化的作用 ,并对其机制作初步的探讨。材料与方法一、材料雄性ＳＤ大鼠 5 0只 ,体重 (180± 2 0 )ｇ(购于上海医科大学实验动物中心 )。 40 %ＣＣｌ4 用精制橄榄油配制。Ｅｎａ由常州制药厂提供。兔抗鼠 β 转化生长因子 (ＴＧＦβ)和血小板源性生长因子受体ＰＤＧＦＲ多克隆抗体购于武汉博士德生物工程公司。血清Ⅳ型胶原和层黏连蛋白 (ＬＮ)试剂盒购于海军上海医学研究所。二、方法随机分为对照组、模型组及Ｅｎａ高、中、低剂量治疗组(剂量分别为 10ｍｇ/ｋｇ…     

高表达垂体瘤转化基因通过p21抑制A549肺癌细胞的生长

垂体瘤转化基因 (ＰＴＴＧ)是从大鼠垂体瘤ＧＨ4细胞克隆出的一种肿瘤基因。ＰＴＴＧ在垂体泌乳素瘤的表达受雌激素的调控 ,其致肿瘤作用可能与刺激成纤维细胞生长因子(ＦＧＦ)和激活Ｃ Ｍｙｃ有关[1 ] 。此外 ,ＰＴＴＧ与抑制姐妹染色单体分离的ｓｅｃｕｒｉｎ序列一致[2 ] 。ＰＴＴＧｍＲＮＡ和蛋白质的表达水平呈细胞周期依赖性[3] 。因此 ,我们推测高表达ＰＴＴＧ有可能抑制某些肿瘤细胞的生长。材料与方法　材料 :肺癌Ａ549和子宫颈癌ＨｅＬａ细胞购自美国ＡＴＣＣ公司。ｐｌＲＥＳｎｅｏ表达质粒购自美国Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司。抗ｐ2 …     

急性心肌梗死病人动态检测高频心电图的意义

对 48例急性心肌梗死 (ＡＭＩ)病人进行了高频心电图 (ＨＦＥＣＧ)动态检测。结果显示 :ＡＭＩ早期 ( 1Ｗ内 )ＨＦＥＣＧ总切迹数 (Ｎ总)和总扭挫数 (Ｓ总)明显高于正常对照 (Ｐ分别〈0 0 1,0 0 5 )。治疗半月后病情稳定者Ｎ总 和Ｓ总 均明显降低 (Ｐ分别〈0 0 1,0 0 5 ) ,且与对照无差异 (Ｐ =ＮＳ) ;而半月后仍有心绞痛发作或有心功能不全者较早期无变化。表明ＨＦＥＣＧ能反映ＡＭＩ后病情的严重程度。对ＡＭＩ病人ＨＦＥＣＧ的研究有令人困惑的结果。一方面 ,ＡＭＩ患者高频成分 (Ｎ或Ｓ)是增多的 ;另一方面 ,梗死相应导联Ｎ或Ｓ并…     

肝干细胞的分离培养

分离鼠胎肝细胞 ,观察人肝细胞生长肽 (ＨＧＰ)和小鼠白血病抑制因子 (ｍＬＩＦ)对鼠胎肝细胞生长和肝干细胞集落形成的影响。从大鼠胚胎 ( 12日龄 )肝中分离肝细胞 ,采用ＭＴＴ比色法、3Ｈ ＴｄＲ掺入法和碱性磷酸酶 (ＡＫＰ)检测法。结果表明 ,人ＨＧＰ能剂量依赖性地促进胎肝细胞的ＤＮＡ合成和增殖 ,50 0～ 2 0 0 0Ｕ/ｍｌ的ｍＬＩＦ能明显促进肝干细胞集落的生长和维持未分化状态。肝干细胞培养基的组成为 :5%ＦＢＳ(国产或进口 ) ,10 %国产ＮＣＳ ,0 .14ｍＭ的β ＭＥ ,4 0ｎｇ/ｍｌ伴白蛋白 ,10ｎｇ/ｍｌ的人ｂＦＧＦ ,0 .5～ 1.0 μ…