兔眼玻璃体视网膜交界面酶溶解分离研究

目的 探讨玻璃体腔内注射纤维蛋白溶解酶、透明质酸酶以及两酶联合使用时的安全用药剂量,并评价其造成玻璃体后脱离的程度。方法 新西兰大耳白兔48只,随机均分为6个组,每只兔任意1只眼为实验眼,另1只眼为对照眼。每组实验眼于视乳头前玻璃体后1／3注射不同的药物及剂量：1组：透明质酸酶20IU、平衡盐溶液(BSS)0．1ml;2组：透明质酸酶30IU、BSS0．1ml;3组：纤维蛋白溶解酶1IU、BSS0．1ml;4组：纤维蛋白溶解酶2IU、BSS0．1ml;5组：纤维蛋白溶解酶3IU、BSS0．1ml;6组：透明质酸酶20Iu、BSS0．05ml,联合纤维蛋白溶解酶1IU、BSS0．05ml。所有对照眼相同部位注入BSS0．1ml。注药后进行裂隙灯、 90D前置镜、间接检眼镜、视网膜电流图(ERG)、B超及相干光断层扫描检查,观察2周后,眼球组织标本做光镜及扫描电镜观察。结果 1组、3组以及6组兔实验眼未发生眼内炎性反应及视网膜毒性反应;2组和4组兔实验眼均发生眼内轻微炎性反应,视网膜组织结构未见明显异常,但后者ERG显示有可逆性降低;5组兔实验眼发生较严重的眼内炎性反应,且ERG及视网膜组织学出现改变。1-5组均未发生完全性玻璃体后脱离,6组成功诱导出完全性玻璃体后脱离。结论 玻璃体内注射透明质酸酶20IU和(或)纤维蛋白溶解酶1IU对视网膜及其他眼内组织安全、可靠、无毒副作用。玻璃体腔内联合注射透明质酸酶20IU和纤维蛋白溶解酶1IU可诱导完全性下班体后脱离。（中华眼科杂志,2004,40：459-464）     

尿激酶联合透明质酸酶诱导兔眼玻璃体后脱离的实验研究

目的：研究尿激酶联合透明质酸酶玻璃体腔内注射诱导兔眼玻璃体后脱离（PVD）的效果，并评价其安全性。 方法：20只兔40眼随机分为A，B，C3组，分别为6，6，8只，均以右眼为实验眼，左眼对照。3组动物实验眼玻璃体腔内注射药物分别为：尿激酶1000U，透明质酸酶20U，尿激酶1000U＋透明质酸酶20U，对照眼内均注入BBS0．ImL。术后7d内行裂隙灯、检眼镜、光镜及扫描电镜等检查。 结果：术后7dA组部分性PVD发生率100％，B组为16．7％，两组均无完全性PVD发生；C组完全性PVD发生率100％，对照眼无PVD。病理学检查未发现视网膜毒性。 结论：尿激酶1000U联合透明质酸酶20U兔眼玻璃体腔内注射能诱导完全性PVD，且无眼内毒性。     

纤溶酶和透明质酸酶药物性玻璃体切割术的发生机制

目的研究纤溶酶联合透明质酸酶诱导药物性玻璃体切割术的发生机制。方法新西兰白兔24只,分为6组,采用玻璃体腔内注射药物0．1mL。A、B、c组分别注射纤溶酶4、2、1μmol／L;D组：纤溶酶1μmol／L＋透明质酸酶20μmol／L;E组：透明质酸酶20μmol／L;F组：BSS溶液0．1mL为对照组。7d后免疫胶体金电镜技术检测玻璃体视网膜界面层粘连蛋白（LN）、纤维连接蛋白（FN）抗体分布。另取7只白兔（14只眼）进行纤溶酶活性测定,组1：一侧眼玻璃体腔内注射纤溶酶1μmol／L＋透明质酸酶20μmol／L;组2：对侧眼玻璃体腔内注射纤溶酶1μmol／L。结果免疫胶体金电镜检测视网膜内界膜表面LN、FN显示,A、B、C、D组与对照组比较LN数量减少,差异均有统计学意义（P〈0．01）,E组与对照组比较LN数量减少,差异无统计学意义（P〉0．05）。FN免疫胶体金电镜结果与LN相似。纤溶酶1μmol／L组在药物注射后1h内维持最大纤溶酶活性,此后酶活性逐渐下降,12h后酶活性消失,D组纤溶酶活性曲线和C组走向基本一致。结论药物性玻璃体切割术的实质是溶解玻璃体视网膜界面的LN、FN等分子胶而发生玻璃体后脱离（PVD）,透明质酸酶联合纤溶酶可显著提高PVD的效果,提示合理诱发PVD的药物应既能解除玻璃体视网膜界面之间的粘连,又能液化玻璃体。     

实验性视网膜脱离状态家兔玻璃体内游离氨基酸谱的变化

目的 研究实验性家兔视网膜脱离(RRD)不同时程玻璃体内游离氨基酸(FAA)种类及浓度变化。方法 选择健康成年有色家兔28只，随机分为视网膜脱离1、7、14d及28d组，一眼玻璃体内注入10U／mL的透明质酸酶0．2mL．再抽吸液化的玻璃体重新注入以制备RRD模型，另一眼只注入同量的透明质酸酶作为对照眼。抽取各眼玻璃体液，应用高压液相色谱仪(HPLC)对FAA进行分析并测定浓度。结果 各组家兔实验眼及对照眼玻璃体液内均可分析出16种FAA，分别是天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸。其中甘氨酸浓度最多(432．72nmol／L)，苏氨酸浓度最少(15．69nmol／L)，且各氨基酸随着视网膜脱离时间不同与对照眼相比有不同变化。结论 RRD后玻璃体内各FAA的浓度差异较大，且随视网膜脱离时间的不同各FAA浓度变化也不相同。     

纤维蛋白溶酶联合透明质酸酶治疗玻璃体积血的实验研究

目的研究纤维蛋白溶酶联合透明质酸酶对玻璃体积血的治疗效果。设计实验性研究。研究对象40只兔（40眼）。方法将40只兔随机分为A、B、C、D组,每组10只,右眼作为实验眼。取自体耳缘静脉血0．1ml注射入玻璃体腔内形成玻璃体积血模型,24小时后A组玻璃体腔内注射纤维蛋白溶酶1u＋透明质酸酶20U（0．1m1）;B组纤维蛋白溶酶1U（0．1m1）;C组透明质酸酶20U（0．1m1）;D组BSS溶液0．1ml。术后7天内行间接检眼镜对眼底各象限透明度观察并分级,各象限分级数值总和为玻璃体积血指数,评价玻璃体积血吸收情况;行B超、扫描电镜检查玻璃体后脱离（PVD）发生情况。主要指标玻璃体积血指数、完全性玻璃体后脱离发生率。结果注射后7天各组玻璃体积血指数中位数及四分位间距分别为：A组4（2～5．25）;B组7（6～8）;C组10（10～11）;D组12（10～12）。各组玻璃体积血指数两两比较A组与B、C、D组的差异均有统计学意义（P均〈0.01）。B超显示各组完全性PVD发生率：A组10例（100％）,B组8例（80％）,C组及D组均未发生。结论1U纤维蛋白溶酶联合20U透明质酸酶玻璃体内联合注射可有效促进玻璃体内积血团块的分解,并可有效地液化玻璃体诱导PVD,加速血液的播散和吸收。     

超微结构研究玻璃体后脱离

目的：通过纤维蛋白溶解酶(以下简称纤溶酶)和透明质酸酶兔玻璃体腔内注射，研究玻璃体视网膜超微结构改变，阐明玻璃体后脱离的发生机制。方法：16只新西兰白兔随机分为A、B、C三组各8、4、4只兔，均以右眼为实验眼，左眼为对照。A组实验眼玻璃体腔内注射0．1ml纤溶酶1U联合透明质酸酶20U，B组注射纤溶酶1U，C组注射透明质酸酶20U，所有对照眼注射0．1mlBSS液。术后7天摘除眼球做扫描电镜检查。结果：扫描电镜发现A组赤道后内界膜(ILM)表面较光滑，残留玻璃体皮质大部分位于直径2～15μm的小凹陷上方，其下为Mueller细胞足板。完全性PVDl00％。B组后极部ILM表面较光滑，残留玻璃体皮质较A组多，部分性PVD75％。C组直径l0～30nm的玻璃体胶原纤维网状支架塌陷，在赤道后平行排列于ILM表面，无PVD。所有对照眼无PVD。结论：药物诱发PVD的实质是解除后界膜与内界膜之间分子胶的粘附。诱发PVD的药物应既能解除玻璃体视网膜界面之间的粘连，又能液化玻璃体。纤溶酶1U联合透明质酸酶20U能诱发出完全性PVD。     

环孢素A壳聚糖纳米微粒防治增生性玻璃体视网膜病变

目的评价环孢素A（CsA）壳聚糖纳米微粒抑制增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的有效性和安全性。方法20只健康中华大耳白兔制作的PVR动物模型随机分为4组：A组玻璃体腔内注入0．1mL平衡液，B组玻璃体腔内注入0．1mL壳聚糖溶液（含壳聚糖2mg），C组玻璃体腔内注入0．1mL CsA溶液（含CsA0．1mg），D组玻璃体腔内注入0．1mLCsA壳聚糖纳米粒（含CsA0．1mg）。以检眼镜、电生理、光镜和电镜观察视网膜变化情况。结果玻璃体腔注药2周及4周后D组PVR等级均明显较A、B、C三组轻，组间差异具有统计学意义（P〈0．05）；而A组与B组、B组与C组之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。D组注药前与注药后4周暗适应闪光ERGb波振幅的差异无统计学意义（P〉0．05）；D组注药后视网膜组织病理及超微结构未发现明显异常。结论一次性兔眼玻璃体腔注入CsA壳聚糖纳米微粒（含CsA0．1mg）能明显抑制或延缓PVR的发生，并具有生物相容性及安全性。     

玻璃体后脱离临床和超微结构诊断

目的：通过临床、B超和扫描电镜检查玻璃体后脱离（posterior vitreous detachment,PVD)情况，评价各种检查手段诊断PVD的价值。方法：16只新西兰白兔随机分为A、B、C三组各6、6、4只兔，均以右眼 为实验眼，左眼为对照。A组实验眼玻璃体腔内注射纤溶酶0．1ml 1U联合透明质酸酶20U，B组注射0.1ml纤溶酶1U，C组注射透明质酸酶20U， 所有对照眼玻璃体腔内注射0．1mlBSS液。术后7天内裂隙灯前置镜、直接检眼镜、B超观察PVD，术后7天摘除眼球扫描电镜检查PVD。结果：A组实验眼临床诊断完全性PVD66.7%（4／6），B超诊断完全性PVD87．5％（5／6），扫描电镜确诊完全性PVD100％（6／6）。临床和B超诊断之间及它们分别与扫描电镜诊断PVD的非参数Z检验无明显差异（分别P＝0．180，P＝0．317，P＝0．157）。B组实验眼临床检查无PVD（0／6）。B超仅发现一例部分性PVD（1／6），扫描电镜确诊部分性PVD87．5％（5／6），一例完全性PVD。临床和B超诊断的非参数Z检验无明显差异（P＝0．317）， 它们分别与扫描电镜诊断部分性PVD的非参数Z检验差异显著（分别P＝0．020，P＝0．034）。C组临床、B超及扫描电镜诊断均无PVD。结论：临床结合B超检查对于诊断伴有玻璃体液化的PVD是一种安全、方便、经济及可靠性较好的手段。扫描电镜由于能精确分辨玻璃体后界膜及视网膜内界膜组成结构及粘连情况，是证实PVD最可靠的手段。     

药物性玻璃体后脱离对增生性玻璃体视网膜病变影响的实验研究

目的 观察药物性玻璃体后脱离（PVD）对增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的影响。方法 24只有色成年家兔,左眼为实验眼。兔自体富含血小板血浆玻璃体腔注射建立兔眼PVR模型,同时随机将实验兔分为A、B组及对照组,每组各8只眼。建模后3 h A组玻璃体腔内注入1 U纤溶酶（0.05 ml）+20 U透明质酸酶（0.05 ml）共0.1 ml、B组玻璃体腔内注入纤溶酶0.1 ml、对照组玻璃体腔内注入等量的平衡盐溶液。给药后1、7、28 d记录实验眼PVR级别,进行各组PVR等级评分,并行闪光视网膜电图（F-ERG）、眼部B型超声检查及视网膜组织病理学检查。结果 PVR模型成功建立,并在注药后7 d,A组发生完全性PVD 5只眼,不完全性PVD3只眼;B组不完全性PVD 5只眼,未见完全性PVD,另3只及对照组无PVD发生。A、B组在注药后28 d PVR等级评分均低于对照组,差异有统计学意义（D=75.6, 98.9;P=0.003,P=0.011）;注药后7、28 d,A、B 两组F-ERG b 波波幅均高于对照组;产生PVD的眼中PVR级别均较无PVD的眼级别低,其中完全性PVD眼中PVR级别仅为0～1级。结论 在兔眼PVR建模后3 h,纤溶酶与透明质酸酶联合玻璃体腔注射诱导的完全性PVD在一定程度上可以阻止兔眼PVR的发生和发展,纤溶酶单独或联合透明质酸酶玻璃体腔注射诱导的不完全 性PVD对PVR的发展有减缓作用。     

纤维蛋白溶解酶联合透明质酸酶诱发玻璃体后脱离实验研究

目的研究纤维蛋白溶解酶(简称纤溶酶)联合透明质酸酶诱发玻璃体后脱离(PVD).方法 16只兔随机分为A、B、C三组各8、4、4只,均右眼为实验眼,左眼对照.A组实验眼玻璃体腔内注射纤溶酶1 U和透明质酸酶20 U,B组纤溶酶1 U,C组透明质酸酶20 U,对照眼均注射BSS液.术后7天内行B超、ERG、扫描及透射电镜等检查.结果扫描电镜确诊A组实验眼完全性PVD 100%,B组实验眼部分性PVD 75%,C组实验眼及对照眼无PVD.实验及对照眼ERG振幅无明显下降(P＞0.05),透射电镜等检查无眼内毒性.结论纤溶酶1 U联合透明质酸酶20 U兔玻璃体腔内注射能诱导出完全性PVD,且无眼内毒性.     

酶学诱发PVD对视网膜细胞安全性的研究

目的 了解纤溶酶和透明质酸酶诱发玻璃体后脱离（PVD）对视网膜细胞的安全性.方法 新西兰白兔16只分4组,采用玻璃体腔内注药.A组：纤溶酶1 U＋透明质酸酶20 U;B组：纤溶酶2 U＋透明质酸酶20 U;C组：纤溶酶4 U＋透明质酸酶20 U;D组：BSS正常对照组.术后7 d摘除眼球,TUNEL法检测细胞凋亡、RT-PCR检测视网膜内c-fos基因.结果 TUNEL法检测A组视网膜标本内未发现凋亡细胞,B、C组及正常对照组视网膜内各发现1个凋亡细胞.RT-PCR检测A、B、C组及对照组视网膜内均未见c-fos基因mRNA的表达.结论 兔眼内注射纤溶酶1～4 U＋透明质酸酶20 U,在细胞和分子水平上没有加速视网膜细胞凋亡,进一步证实了该联合酶制剂眼内注射的安全性.     

Intravitreal injection of hyaluronidase cannot induce posterior vitreous detachment in the rabbit

PURPOSE: To investigate whether intravitreal injection of hyaluronidase can induce posterior vitreous detachment (PVD) in the rabbit. METHODS: One eye each of 12 New Zealand white rabbits received intravitreal injection via the pars plana of 20 IU of hyaluronidase (0.1 mL reconstituted in sterile balanced salt solution [BSS]) into the midvitreous cavity. The fellow eye of each rabbit received a vitreous injection of 0.1 mL of BSS. At 3 and 6 months after intravitreal injection, four and eight rabbits were killed, respectively, and the eyes were enucleated. After fixation, scanning electron microscopy was performed to study the vitreoretinal interface. RESULTS: At 3 and 6 months after injection, scanning electron microscopy showed that the retinal surfaces in eyes that received either hyaluronidase or BSS were covered with vitreous collagen fibers. No eyes, even those that received hyaluronidase over a period of 6 months, had the smooth retinal surface consistent with a bare internal limiting lamina that suggests the development of PVD. CONCLUSION: Hyaluronidase cannot induce PVD in the rabbit over a 6-month period after vitreous injection.     

周边视网膜冷冻联合tPA和C3F8玻璃体腔注射诱导玻璃体后脱离的动物实验研究

目的探讨周边视网膜冷冻后玻璃体腔注射酶或/和膨胀气体诱导玻璃体后脱离（Posterior vitreous detachment,PVD）的效果、机制并观察其对视网膜的毒性作用。方法选用新西兰白兔48只,随机分为实验组和对照组。实验组I行周边视网膜冷冻及玻璃体腔内注射纤维蛋白溶解酶原激活剂（tissue plasminogen activator,tPA）,实验组Ⅱ玻璃体腔单纯注射C3F80.3ml,实验组Ⅲ行周边视网膜冷冻,24小时后注射tPA25μg和C3F80.3ml。记录各实验组产生玻璃体后脱离的时间并观察眼内的反应性变化,最后行光镜和扫描电镜检查,观察各实验组用药后的组织形态学变化。结果三组均有效诱导PVD,组间两两比较差异有显著性（〈0.05）,实验组Ⅰ和Ⅱ眼内反应较轻,实验组Ⅲ反应最重,并有视网膜结构及功能损害。结论周边视网膜冷冻后tPA注射是诱导玻璃体后脱离安全有效的方法。单纯膨胀气体注射并非真正意义的玻璃体后脱离。酶与气体联合用药可缩短玻璃体后脱离产生时间,但容易造成视网膜药物毒性变化。     

PVD following plasmin but not hyaluronidase: implications for combination pharmacologic vitreolysis therapy

PURPOSE: To study whether intravitreal injection of plasmin + hyaluronidase safely induces posterior vitreous detachment (PVD). METHODS: Rabbits were randomized into three groups: (A) 20 rabbits, intravitreal injection of plasmin 1 U + hyaluronidase 20 U in balanced salt solution (BSS) 0.1 mL into one eye; (B) 12 rabbits, plasmin alone; (C) 12 rabbits, hyaluronidase alone. The fellow eye of each rabbit was injected BSS 0.1 mL. In Group A, scanning electron microscopy (SEM) was done in four rabbits at 0.5 hour and in four rabbits at 1 hour. After 7 days, all the remaining 36 rabbits received electroretinography, SEM was examined in eight of each group, and immunohistochemistry was done in four of each group. RESULTS: SEM disclosed the eyes of Group A had complete PVD (8/8), Group B partial PVD (7/8), and Group C (8/8) and all the control eyes (24/24) no PVD after 7 days. Partial PVD was found in 4/4 at 0.5 hour and complete PVD was seen in 3/4 at 1 hour in Group A. Immunohistochemistry showed that the amounts of laminin and fibronectin in the vitreoretinal interface were decreased in Group A and B versus the control eyes (P <0.001), but not in Group C versus the control eyes (P >0.05). Electroretinography showed no changes in any group (P >0.05). CONCLUSION: Vitreous injection of plasmin + hyaluronidase induced complete PVD with no obvious toxicity. Plasmin induced partial PVD, but hyaluronidase had no effects.     

The role of recombinant lysine-plasminogen and recombinant urokinase and sulfur hexafluoride combination in inducing posterior vitreous detachment

PURPOSE: To determine the optimal method of generating plasmin in vitreous using recombinant lysine-plasminogen and recombinant urokinase and to determine its efficacy in inducing posterior vitreous detachment when combined with sulfur hexafluoride. METHODS: Plasmin concentration of the rabbit vitreous after separate and combined intravitreal administrations of recombinant lysine-plasminogen and recombinant urokinase was tested in 78 rabbits to determine the optimal method of administration. The safety and efficacy of these agents and sulfur hexafluoride in inducing complete posterior vitreous detachment (total separation of the vitreous apart from vitreous base) were also evaluated. RESULTS: The highest plasmin concentration in vitreous was measured 10 minutes after injection. Intravitreal administration of recombinant lysine-plasminogen and recombinant urokinase did not cause any toxicity findings up to concentrations of 100 microg and 200 IU, respectively, on funduscopy, electroretinography, and histopathologic studies. When combined with sulfur hexafluoride injection, separate intravitreal administrations of 75 microg/0.1 mL of recombinant lysine-plasminogen and 15 IU/0.1 mL of recombinant urokinase induced complete posterior vitreous detachment in 75% of the eyes compared with 13% in eyes that received sulfur hexafluoride injection combined with balanced salt solution, recombinant lysine-plasminogen, or recombinant urokinase. CONCLUSIONS: Plasmin was effectively generated in the vitreous after separate intravitreal administrations of recombinant lysine-plasminogen and recombinant urokinase. When combined with intravitreal gas injection, this method of plasmin production induced complete posterior vitreous detachment in 75% of the eyes.     

The role of streptokinase in induction of posterior vitreous detachment: a scanning and transmission electron microscopic study of the retina in rabbits

PURPOSE: To evaluate the possibility of inducing a posterior vitreous detachment (PVD) by intravitreal injection of streptokinase using electron microscopy and electrophysiological study. METHODS: The current study was performed on 30 eyes of 15 male white rabbits. The rabbits were divided into three equal groups. The right eye of the three groups received an intravitreal injection of streptokinase at three different concentrations (150, 1,500 and 15,000 IU in 0.1 mL balanced salt solution) in the mid vitreous cavity. The left eye in all animals received an intravitreal injection of balanced salt solution and was considered the control group. Electroretinography was performed 1 day and 1 week after injection. The rabbits were killed after 10 days, and the enucleated eyes were processed for transmission and scanning electron microscopic examination. RESULTS: In Group 1, scanning electron microscopy showed the retinal surface covered with thin collagen fibers, whereas in Group 2, a complete PVD with bare retinal surface was seen. Group 3 showed a bare retinal surface with hemorrhagic reaction and toxic effects on the retina by transmission electron microscopy. CONCLUSION: An intravitreal injection of 1,500 IU of streptokinase can lead to a PVD without major toxic effects on the retina.     

纤维蛋白溶解酶诱导兔眼玻璃体后脱离

目的 研究纤维蛋白溶解酶分别联合透明质酸酶和气体六氟化硫(SF-6)诱导兔眼玻璃体后脱离（PVD）的效果。 方法 18只健康成年青紫兰兔随机分为A、B、C 3组，每组6只兔。右眼均为实验眼，左眼为对照眼。A、B、C 组实验眼玻璃体腔内分别注射纤溶酶1 U(浓度10 U/ml)、纤溶酶1 U和透明质酸酶20 U(浓度200 U/ml)、纤溶酶1 U和SF6 0.5 ml；对照眼玻璃体腔内注射眼用平衡盐溶液（BSS）0.1ml。注药前后行间接检眼镜、裂隙灯和VOLK+90D前置镜及B型超声和视网膜电图(ERG)检查。最后取所有兔眼行光学显微镜、扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察。 结果 扫描电子显微镜观察结果：A组实验眼中有2只眼后极部发生不完全性PVD，发生率为33.3%；B、C两组实验眼中分别各有4只眼发生完全性PVD，发生率为66.7%；B、C两组实验眼出现PVD的阳性发生率与A组比较，差异有统计学意义 (P<0.05)。3组实验眼注药后ERG振幅与手术前及对照眼比较差异均无统计学意义（P>0.05）。光学显微镜和透射电子显微镜观察结果显示，视网膜组织结构无明显异常改变。 结论 纤溶酶联合透明质酸酶或SF6较单独采用纤溶酶更能迅速有效的诱发完全性PVD且对视网膜无明显的毒性作用。 (中华眼底病杂志, 2005, 21: 388-390)