HBV感染胎盘滋养细胞的体外研究

目的：对早孕绒毛的滋养细胞进行原代培养,利用HBV感染血清对滋养细胞进行体外感染,探讨细胞在体外培养条件下对HBV的感染率及HBV在细胞中的复制状态．方法：利用胰蛋白酶和胶原酶联合消化培养法原代培养早孕胎盘中的滋养细胞,并进行免疫组化鉴定,获得纯度较高的滋养细胞后进行体外的HBV感染,通过细胞免疫化学染色、ELISA及PCR法分别检测细胞上清中的HBsAg,细胞中的HBVDNA及cccDNA．结果：原代培养的滋养细胞,细胞生长良好,特异性角蛋白一7阳性,纯度高．原代滋养细胞在与HBV阳性血清共同孵育后均未出现明显的细胞病变,感染后24h和48h在滋养层细胞细胞浆中可见HBsAg的阳性表达,被感染细胞呈散在分布．感染后48h起可检测到弱阳性的HBsAg及HBVDNA,感染后细胞内未检测出cccDNA．结论：利用联合酶消化法建立了胎盘中滋养细胞的体外培养系统．HBV能够在体外感染原代培养的滋养细胞,对被感染细胞的生长无明显影响．HBV可能不在滋养细胞中复制．     

HBV阳性血清体外感染HepG2细胞的实验研究

目的 :建立HBV阳性血清体外感染HepG2细胞的实验方法 .方法 :培养HepG2细胞传至 6孔板中 1 2h后 ,加2 0mL·L-1 DMSO继续孵育 1 2h .而后进行HBV阳性血清体外感染HepG2的实验 .感染组用HBV阳性血清 ,阴性对照组用HBV阴性血清 ,空白对照组用DMEM培养基 .实验开始后HepG2细胞在 2 0mL·L-1 DMSO的浓度下继续孵育 2 4h ,而后用PBS清洗 ,洗 8次 ,PBS洗后每隔 1 2h收集一次细胞培养上清 .ELISA检测细胞培养上清中的HBsAg.PCR检测细胞培养上清和HepG2细胞中的HBVDNA .结果 :HBV阳性血清感染组 ,在PBS洗后 1 2h的细胞培养上清中ELISA检测到HBsAg阳性 (A =0 .8) .PCR检测显示HBV阳性血清感染组细胞培养上清和HepG2细胞中HBVDNA阳性 ,阴性对照组和空白对照组HBVDNA阴性 .结论 :在一定条件下用HBV阳性血清进行HBV感染体外培养的HepG2细胞是可行的     

乙型肝炎病毒体外感染人绒毛膜癌JEG3细胞的实验研究

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人绒毛膜癌滋养层细胞(JEG3)模型,探讨HBV宫内感染机制。方法应用HBV阳性且高载量的血清,感染JEG3细胞。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测感染后细胞上清液和细胞内的HBV载量;应用ELISA方法检测感染后不同时间、不同代次上清液的HBsAg、HBeAg浓度;应用SP免疫组化检测感染细胞内HBsAg、HBeAg的表达。结果感染初代的JEG3细胞,随着时间增加病毒载量亦增加。传代后细胞及上清中的HBV载量随传代次数增加逐渐降低,5代后检测均为阴性;感染初代上清液HBsAg含量随时间增加,120h含量最高。传代细胞的上清液HBsAg检测1～4代为阳性,但浓度逐渐降低,5代后均为阴性。上清液的HBeAg检测,各时间点、各代均为阴性;1、2、3、4代细胞HBsAg、HBcAg染色可见阳性细胞。结论HBV可以在体外感染滋养层细胞,且能在传代细胞中有持续的表达。感染过程中参与调控的相关细胞因子及HBV复制的持续与否有待进一步探讨。     

乙肝病毒宫内传播与胎盘感染的关系

目的：母亲乙肝病毒（ＨＢＶ）感染在宫内即可造成其胎儿感染，但其机理尚不清楚，作者试图了解胎盘细胞中ＨＢＶ的感染情况，宫内传播的危险因素和母胎传播的可能途径。     

早孕胎盘滋养层细胞的免疫组化研究

目的：研究早孕胎盘绒毛和子宫蜕膜中合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞和中间滋养层细胞的免疫组化特征。方法：对２０例妊娠头３个月的刮宫标本进行Ｋｅｒａｆｉｎ、ｈＣＧ、ＨＰＬ、ＰＬＡＰ、ＥＭＡ和Ｐｒｏｌｅｃｔｉｎ等免疫组化染色。结果：角蛋白是各种滋养层细胞最可靠和最敏感的标记物，但其特异性差。合体滋养层细胞的ｈＣＧ和ＰＬＡＰ染色强于中间滋养层细胞，而中间滋养层细胞的ＨＰＬ和ＥＭＡ染色强于合体滋养层细胞。除角蛋白外，细胞滋养层细胞免疫组化染色均阴性。结论；早孕时三种滋养层细胞在免疫组化方面有其共性，也有各自不同的特点。     

人胎盘滋养层细胞超微结构的动态研究

国外对胎盘滋养层细胞的超微结构,已有一些研究。国内仅见研究胎盘病变对照组中地零星报道。将胎盘滋养层细胞超微结构分作胚眙早期和足月期,并认为两者区别不大。虽然国外有人注意到胎盘滋养细胞的成熟和老化现象,但观察材料仅限于8～12周,缺少妊娠全程地研究。本文对妊娠周期中胎盘滋养层细胞,作了较系统地动态观察。发现了滋养层细胞动态发展中的亚型、融合形态及动态变化的形态特征,报道如下。     

Adr亚型HBV转染人胎盘滋养层细胞株的体外研究

目的通过转染adr亚型HBV-DNA,建立可复制HBV的人胎盘滋养层细胞(HPT-8)。方法采用脂质体介导的方法将重组真核表达质粒pcDNA3-3HBV转染人胎盘滋养层细胞,经G418筛选,通过ELISA、免疫组化、PCR等方法对转染细胞和培养上清分别进行检测。结果HPT-8细胞稳定转染质粒pcDNA3-3HBV后,第1、2代转染细胞的培养上清ELISA检测显示HBsAg、HBeAg阳性,免疫组化检测显示转染细胞胞浆中HBsAg、HBcAg呈阳性信号,PCR检测培养上清中HBV-DNA呈阳性,荧光定量PCR检测其滴度达9×106拷贝/L,并且转染滋养细胞中有HBV-rcDNA和HBV-cccDNA存在。结论重组质粒pcDNA3-3HBV能在人滋养层细胞中表达、转录、复制。     

人胎盘滋养层细胞的分离培养及HCV体外感染试验

目的：体外分离培养较高纯度的胎盘滋养层细胞，观察其生物学特性，探讨丙型肝炎病毒（HCV）经胎盘母婴传播的具体途径。方法：采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织，以35％，45％两个Percoll密度梯度进行分离纯化。并用免疫组化及透射电镜等技术对其生物学特性进行观察。HCV阳性血清感染体外分离培养的胎盘滋养层细胞，通过逆转录聚合酶链反应及扩增敏感试验对培养上清进行定性、定量检测，以观察HCV的感染及复制情况。结果：胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性，血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性，经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者（滋养层细胞）占90％以上，电镜下滋养层细胞可观察到成熟型、中间型、未成熟型三种形态。HCV感染细胞培养16d内培养上清中可间断检测出HCV RNA.结论：改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞，HCV感染胎盘滋养层细胞可能是HCV宫内母婴传播的途径之一。     

早孕胎盘滋养层细胞的免疫组化研究

目的：研究早孕胎盘绒毛和子宫蜕膜中合体滋养层细胞、细胞滋养层细胞和中间滋养层细胞的免疫组化特征。方法：对２０例妊娠头３个月的刮宫标本进行Ｋｅｒａｆｉｎ、ｈＣＧ、ＨＰＬ、ＰＬＡＰ、ＥＭＡ和Ｐｒｏｌｅｃｔｉｎ等免疫组化染色。结果：角蛋白是各种滋养层细胞最可靠和最敏感的标记物，但其特异性差。合体滋养层细胞的ｈＣＧ和ＰＬＡＰ染色强于中间滋养层细胞，而中间滋养层细胞的ＨＰＬ和ＥＭＡ染色强于合体滋养层细胞。除     

胎盘滋养层细胞的功能

胎盘滋养层细胞对妊娠与胚胎发育具有非常重要的作用,侵袭功能和内分泌功能是滋养层细胞的两大主要功能。侵袭性迁移行为是胎盘形成、胚胎发育、妊娠顺利完成的基本要素,滋养层细胞在侵袭血管方面上与癌细胞非常相似。同时滋养层细胞也发挥着极其复杂的内分泌功能,能分泌甾体类激素、神经肽类激素、生长因子、细胞因子等多种生物活性物质,构成了复杂的脐血造血微环境。滋养层细胞所分泌的激素、神经肽等活性物质对母婴之间能量代谢转运、维持早孕、营养黄体等方面起到重要的作用。同时,滋养层细胞是胎盘屏障的重要组成部分和母血进入胎儿的第一道屏障,所分泌的各种细胞因子发挥了极其重要的免疫功能。在本文中作者旨在微环境的层面上阐述胎盘滋养层细胞的功能。     

B1细胞与乙型肝炎病毒及丙型肝炎病毒的感染

病毒性肝炎的发病机制迄今为止尚未完全明确,乙型肝炎病毒(HBV)及丙型肝炎病毒(HCV)所致肝炎可能是肝脏细胞免疫防御反应病毒入侵的结果。B1细胞是新近认识的一种B细胞亚群,CD5分子是其特征性分子标志。CD5+B1细胞是机体防御肝炎病毒入侵的重要天然免疫细胞。CD5+B1细胞与机体内HBV感染的慢性化密切相关。CD81与CD5间通过分子串话机制直接参与HCV对宿主细胞的感染。     

乙型肝炎病毒感染者B淋巴母细胞系的建立

目的 在体外建立HBV感染者永生化的B淋巴母细胞系(LCL),并鉴定其HLA-A基因亚型.方法 利用EB病毒转化外周血B淋巴细胞使之永生化,用环胞菌素A(Cys A)抑制血液中T淋巴细胞的活性;用PCR-SSP法检测血样本的HLA-A基因亚型.结果 成功建立了HBV感染者的永生细胞株16株,其中急性乙肝4例,慢性乙肝10例,携带者2例.所有的细胞株冻存后复苏的成功率为100%.细胞株的HLA-A基因亚型包括1101、0201、0101、2403等.结论 转化后的LCL保持了良好的稳定性,既可能作为人源单抗的来源,也可作为体外研究HBV特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.永生化细胞HLA-A基因亚型的鉴定有可能使其成为异体相应亚型体外特异性免疫应答的刺激细胞和靶细胞.     

河北唐山地区乙肝患者血清标志物七项与乙型肝炎病毒DNA定量的对比研究

目的探讨唐山地区人群血清中的乙型肝炎病毒(HBV)标志物七项与HBV DNA定量之间的对应关系。方法选择2007年7月至2008年1月唐山市传染病医院收治的门诊和住院的乙型肝炎患者758例,对758例血清标本同时进行HBV血清学标志物(HBVm)七项测定和HBV DNA实时荧光定量测定(FQ-PCR),并对结果进行统计学分析。结果在6例HBVm七项(1,3)阳性的标本中,检测出HBV DNA阳性6例,检出率为100%,载量均数为1.63×108拷贝/mL;在162例HBVm七项(1,3,5,7)阳性的标本中,检测出HBV DNA阳性144例,检出率为88.89%,载量均数为3.10×107拷贝/mL;在91例HBVm七项(1,3,5)阳性的标本中,检测出HBV DNA阳性85例,检出率为93.41%,载量均数为7.61×107拷贝/mL;在6例HBVm七项(1,3,7)阳性的标本中,检测出HBV DNA阳性7例,检出率为100%,平均载量为7.96×107拷贝/mL;在8例HBVm七项(2,4,5)阳性的标本中,检测出HBV DNA阳性1例,检出率为12.5%;在6例HBVm七项全阴性的标本中,仍有1例HBV DNA阳性;在10例HBVm七项(2)阳性的标本中,还检出了HBV DNA阳性2例。结论在HBV多种血清学标志物类型中,以HBVm七项(1,3)阳性的HBV复制水平最高;在HBVm七项(4,5)和HBVm七项(5)阳性的血清中仍然存在HBV DNA阳性标本,复制水平中等;而HBVm七项全阴性和HBVm七项(2)阳性的血清并不能排除HBV感染。     

社区居民乙肝病毒感染情况分析

目的 掌握成人乙型肝炎病毒(HBV)感染情况,为制定成人乙肝疫苗免疫策略提供依据.方法 在绍兴市某城区随机抽取18～50岁的职工1309名,抽取静脉血进行乙肝表面抗原(HBsAg)、表面抗体(抗-HBs)、核心抗体(抗-HBc)检测.结果 检测人群1236名,检测率94.42%,HBsAg阳性率7.61%,男女各为9.92%、4.53%,不同性别、年龄人群的HBsAg阳性率有显著差异(χ2=12.49,P＜0.01).抗-HBs阳性率为48.38%,男女阳性率分别为46.60%、50.75%;抗-HBc阳性率53.12%%,不同年龄、性别的抗-HBs、抗-HBc水平经统计学处理基本一致.人群HBV3项指标感染率72.01%,不同年龄组间的感染率有显著差异(χ2=8.05,P＜0.05).结论 我市人群HBV感染率处于较高水平,提示成人是乙肝防治的重点人群,应尽快制定成人乙肝疫苗免疫方案,以建立有效的全人群防御乙肝的免疫屏障,达到加速控制乙肝进程的目的.     

乙型肝炎病毒动物模型的研究现状

讨论了目前乙肝病毒动物模型建立的基本原理和方法,同时比较了各种模型的用途与优缺点,为研究者选择合适的动物模型提供了依据。     

慢性乙型肝炎重叠戊型肝炎病毒感染的临床研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者重叠戊型肝炎病毒（HEV）感染的临床特点及病情转归。方法采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测甲、乙、丙、戊型肝炎病毒及乙肝病毒E抗原系统，同时检测肝功能（ALT、TBIL、ALB）和凝血功能（PT），筛选出慢性乙型肝炎重叠HEV感染患者127例与单纯戊型肝炎患者82例进行对比分析。结果慢性HBV重叠HEV感染（简称重叠组）127例（60．76％），单纯戊型肝炎患者82例（39．24％）。重叠组总胆红素（TBIL）、凝血酶厨时间（PT）、重型肝炎的发生率、住院时间和死亡率均明显高于单纯戊型肝炎组（P〈0．05或P〈0．01）。结论与单纯HEV感染者相比，慢性乙型肝炎重叠HEV感染者的肝脏损害更严重，死亡率更高，且预后更差，     

乙肝病毒感染与原发性肝细胞癌的队列研究

目的：探讨HBV感染与原发性肝细胞癌（PHCC）的关系。方法：1992年在PHCC高发地区江苏省海门市建立了90236例的前瞻性研究队列。其中HBsAg（＋）14338例，HBsAg（-）75898例，对每一研究对象进行一项流行病学调查。采集外周静脉血10ml，检测HBsAg及其它相关研究指标，每年随访1次队列成员的生命状况至2003年终止。比较两组人群PHCC死亡密度和PHCC发病年龄的差别。计算相对危险度（RR）、归因危险度（AR）、归因危险度百分比（AR％），应用COX风险比例模型计算HBsAg（＋）在PHCC发生中的风险率比（HR）。结果：研究组与对照组PHCC死亡密度比较RR=15，63，AR：725．32（1／10万人年），AR％=93．60％，男性HR：22，3，95％CI为18．7～26．6，女性HR：37．2，95％CI为19．1～72．5。PHCC年龄组死亡密度的分析结果表明感染HBV可促使PHCC发病年龄提前。     

乙型肝炎病毒感染与原发性肝癌的关系

本文观察了30例原发性肝癌(PHC)患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)感染的五种指标的显示情况及既往罹患史.结果显示:PHC患者中HBsAg阳性率为70%.显著高于阴性率及对照组.而抗HBs的缺乏,说明体内未产生足够的免疫力.抗HBc-IgG的阳性率为73.33%,也显著高于阴性率,表明:HBV感染是PHC发病的主要危险因素,而IgG型核心抗体在慢性感染过程可能存在的时间更长,与PHC的关系更具特异性.所以对有过乙型肝炎病史,而HBsAg、抗HBc—IgG长期阳性,缺乏抗HBs的患者,应予以重视,以期能早期诊断PHC,提高治愈率.     

恶性淋巴瘤与HBV感染的相关性分析

目的探讨乙型肝炎病毒感染与恶性淋巴瘤发病的关系。方法检测69例淋巴瘤患者的肝功能和乙肝5项,随机抽取了69例其他恶性肿瘤患者（原发肝细胞肝癌及伴有肝转移患者除外）和69例初次健康体检者作为对照分析。结果淋巴瘤患者的HBsAg阳性率为26．09％,明显高于其他恶性肿瘤患者（11．59％,P=0．029）和健康对照者（8．70％,P=0．007）。HBsAg阳性的淋巴瘤患者化疗诱发的肝功能异常率33．33％（6／18）,明显高于HBsAg阴性的淋巴瘤患者26．83％（11／41）,本组差异无统计学意义。结论淋巴瘤患者的HBsAg阳性率明显高于其他恶性肿瘤和普通对照人群,有关淋巴瘤HBV携带者的化疗相关肝功能损害需要更大样本量的进一步研究来探讨。