The intraspecific difference of the triose phosphate isomerase (tim) gene from Giardia lamblia

目的：探讨蓝氏贾第鞭毛虫（Giardia lamblia）磷酸丙糖异构酶基因种内差异。方法：提取虫体总DNA,对所有虫株磷酸丙糖异构酶（tim）基因部分片段进行PCR扩增。测定序列后,用简约法和NJ法构建系统树进行系统发育分析。结果：共有124个位点存在变异（占所有测定序列中的23％）,且大多数为发生在密码子的同义突变。两种构树方法所得二树的分枝结构相似,均将受试的16株蓝氏贾第虫分为明显的两组。结论：宿主及地理因素对蓝氏贾第虫群体的遗传多样性影响不大。在DNA分子进货水平上,自然选择的影响十分显。可将tim基因作为蓝氏贾第虫群体遗传结构一个十分有效的遗传标记。     

蓝氏贾第鞭毛虫诊断

目的：蓝氏贾第鞭毛虫作为一种重要的人兽共患寄生虫病贾第虫病的病原,其对SPF实验动物质量造成的潜在威胁不容忽视。本研究的目的是建立蓝氏贾第鞭毛虫快速诊断方法,并对17个生产厂家516批2562只SPF实验动物检查结果进行分析。方法用直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法,对蓝氏贾第鞭毛虫进行检测。结果在SPF实验动物中检出数量众多的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊,鉴定出蓝氏贾第鞭毛虫18S rDNA、β－giardin、TPI和GDH基因。直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法均能检出蓝氏贾第鞭毛虫。17个生产厂家516批2562只SPF实验动物蓝氏贾第鞭毛虫阳性检出率22．9％（586／2562）。结论直接镜检法、快速姬姆萨染色法和多重PCR方法具有高度的敏感性和特异性,可用于蓝氏贾第鞭毛虫的快速诊断。17个生产厂家516批SPF实验动物蓝氏贾第鞭毛虫检查结果未能全部符合规定。     

犬贾第虫核糖体16sRNA部分序列克隆及测定

目的：获取犬贾第虫核糖体16sRNA基因序列。方法：从犬贾第虫包囊中，快速提取DNA，并以DNA为模板，利用热启动PCR技术扩增出一611bp的预计大小的基因片段，纯化回收后，与PMD18－T载体连接转化到DH5a大肠杆菌中，筛选到阳性克隆经PCR、EcoR I和HindⅢ双酶切鉴定，并用双脱氧链末端终止法测定DNA序列，登陆BLAST进行同源性比较和分析。结果：获得了长度为611bp的基因序列，并发现与犬贾第虫核糖体的同源性最高达99％。结论：获得了犬贾第虫核糖体16sRNA的部分基因序列，为研究其在核酸进化领域中的地位和PCR法快速诊断贾第虫病提供了理想的基因材料。     

人源性蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因的克隆及序列分析

目的克隆蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法根据蓝氏贾第鞭毛虫Elp3已知基因序列的特点设计引物,利用PCR技术扩增获得Elp3的核苷酸序列,连接到pET28a载体并测定序列。应用生物信息学方法分析Elp3基因的序列同源性与结构特征。结果扩增片段长度为1767bp,测序结果与蓝氏贾第鞭毛虫WB株(GL50830)同源性100%。可构建生物进化树,进行同源结构建模发现,71-362aa具有一个保守的S-腺甙基蛋氨酸区域,458-584aa具有组蛋白乙酰基转移酶区域。结论成功克隆了蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,生物信息学分析发现,其在进化上与其它物种不属同一起源,具有SAM和HAT的结构和功能,这些发现为进一步研究其生物学功能提供了依据和线索。     

DNA sequence analysis of the triose phosphate isomerase gene from isolates of Giardia lamblia

目的：为了探讨来源于中国和其它国家不同地理位置贾第虫分离株之间的遗传学关系。方法：从贾第虫滋养体和包囊提取总DNA。对磷酸丙糖异构酶基因进行PCR扩增。PCR产物经限制性内切酶消化、序列测定及分析。对所得DNA序列数据用DNAstar软件处理并与登录基因库虫株的序列比较。结果：在来自我国（C1、C2、CH2、CH3）,柬埔寨（CAM）、澳大利亚（A1、A2）和美国（BP、CDC）的9株蓝氏贾第虫中,A1、A2和CAM属于第1型（WB）;CH2和CH3属于第2型（JH）;C1、C2、BP和CDC属于第3型（GS）。结论：贾第虫分离株基因型的确定可分为本虫分子系统进货和分子流行病学研究提供重要资料。     

蓝氏贾第鞭毛虫病治疗的研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫病呈全球性分布,在发达国家和发展中国家均有感染,威胁着人类的健康和生命。目前治疗蓝氏贾第鞭毛虫病的药物主要是硝基咪唑类,如甲硝唑,随着长时间的临床应用,耐药虫株不断出现,但是新药的研究周期很长。近年来,如何更好地开发现有药物的新药理作用和研发新药,成为研究蓝氏贾第鞭毛虫病治疗的热点之一。本文就这些药物及其新近研究进展作一综述。     

蓝氏贾第鞭毛虫甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因的克隆、表达与纯化

目的 蓝氏贾第鞭毛虫（简称为贾第虫）甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因（GlMSR）,进行原核表达获得其重组蛋白。方法 依据GenBank中GlMSR序列设计引物,以贾第虫中国C2 克隆株基因组DNA 为模板,通过PCR扩增编码序列,将所得片段连接至质粒pET28a以构建原核表达载体pET28a-GlMSR,将pET28a-GlMSR导入大肠杆菌E.coli JM109并挑取阳性克隆进行基因测序和鉴定。用化学方法将经测序验证的重组质粒pET28a-GlMSR转化至E.coli BL21（DE3）。经异丙基硫代半乳糖苷（Isopropyl β-D-Thiogalactoside, IPTG）诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白表达结果。收集沉淀中的重组表达产物,镍柱亲和层析纯化带组氨酸标签的重组蛋白,并通过免疫印迹鉴定纯化结果。结果 电泳结果显示在约624 bp处出现目的DNA条带,表明成功得到GlMSR编码序列;PCR 鉴定、酶切鉴定以及基因测序结果表明成功构建重组表达载体pET28a-GlMSR,经IPTG诱导后在沉淀中获得目的蛋白,目的蛋白分子量（Mr）约为25 000,与预期分子量（Mr）22 800基本相符。经Western blot分析显示该重组蛋白含有His6标签。结论 本研究克隆、表达了蓝氏贾第虫GlMSR基因,并纯化获得重组蛋白,为进一步探索该酶的功能奠定了基础。     

承德市郊小学生蓝氏贾第鞭毛虫感染青况调查分析

蓝氏贾第鞭毛虫简称贾第虫,寄生于人体小肠、胆囊（主要在十二指肠）。由于感染者临床症状不明显,基层医疗工作者容易忽视,但人体肠道内长期寄生大量蓝氏贾第鞭毛虫,会引起腹泻、腹痛、胃肠功能紊乱。特别是儿童感染严重者容易导致营养不良、吸收障碍、发育迟缓。     

新疆医学院附中小学部小学生蓝氏贾第鞭毛虫感染调查

新疆医学院附中小学部小学生蓝氏贾第鞭毛虫感染调查地丽拜杨莉（基础医学部寄生虫学教研室）（新疆医学院附中卫生室）蓝氏贾第鞭毛虫是寄生于人体肠道的致病原虫，可引起腹泻、消化不良、腹痛等症状。在我国，蓝氏贾第鞭毛虫病的流行情况各地不同，感染率为０．０２８％...     

蓝氏贾第鞭毛虫承德株分子生物学研究

目的：探讨蓝氏贾第鞭毛虫大、小型包囊存在的原因。方法：用分子生物学技术对３株贾第虫（ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）进行ｔｉｍ基因扩增和序列测定。结果：经与ＧｅｎＢａｎｋ登记虫株比较和用ＤＮＡｓｔａｒ软件处理的结果表明,此３株贾第虫的基因型属２型（ＪＨ型）。结论：大、小型包裹在形态学上经过统计学处理显示有显著差异,但与基因型无关。     

人子宫颈癌基因HCCR-2真核表达载体的构建及鉴定

目的:克隆人子宫癌基因HCCR-2并构建其真核表达载体,为研究其在人胃癌细胞中与P53的相互作用关系奠定基础. 方法:从人肝癌细胞株HepG2提取RNA,利用RT-PCR方法,先克隆出一包括HCCR-2编码区的长约1 kb的片段,并将其与T载体连接并转化,测序证实无误后,以HCCR-2/T载体为模板,再通过PCR克隆出HCCR-2的编码区序列,将其连接到pIRES2-EGFP真核表达载体,并通过测序获得证实. 结果:RT-PCR扩增出一长约1 kb的HCCR-2片段,PCR扩增出约0.9 kb大小的目的片段,HCCR-2/T,pIRES2-EGFP/HCCR-2( ) DNA测序均表明编码序列及读框完全正确. 结论:成功构建HCCR-2真核表达载体pIRES2-EGFP/HCCR-2( ),为进一步研究其致癌机制打下基础.     

蓝氏贾第鞭毛虫中国株组蛋白H2A基因的克隆与重组表达

目的 获取蓝氏贾第鞭毛虫中国株GlH2A基因及重组蛋白.方法 PCR扩增获取G1H2A基因,连接至pMD-19T并进行测序分析.连接至pET28a构建表达载体,并转化宿主菌E.coli BL21 (DE3),然后进行异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达.表达产物进行亲和层析纯化,再用Western blotting...     

RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM （RFLP） ANALYSIS OF GENOMIC DNA OF 5 STRAINS OF TRICHINELLA SPIRALIS IN CHINA

Five restriction endonucleases were used to digest genomic DNA from 5 isolates of Trichinella spiralis obtained from Changchun,Tianjin,Xian,Henan and Yunnan.All the isolates were secured from pigs ex-cept the Changchun strain which came from dog.The DNA fragments digested by endonuclease were sepa-mted by agarose gel electrophoesis.The DNA fragments digested by endonuclease were sepa-rated by agarose gel electrophoresis.The Changchun is olate had a EcoRI band at 1.12kb and a Dral band at 1.97kb which were unique to this isolate.A cloned specific repetitive DNA sequence(1.12kb) from the Changchun strain was selected to prepare a probe for the Southern blotting of EcoRI restriction DNA frag-ments for the 5 isolates.The 1.12kb hybridizing band did not appear except in the Changchun isolate.These results seem to indicate that there are differences between the isolates obtained from hosts in differ-ent geographical regions.     

一株鹭山病毒的分子生物学鉴定

目的采用分子生物学方法鉴定一株甲病毒M1。方法M1病毒在C6/36细胞中增殖,用TRIZOL法提取总RNA。采用RT-PCR方法扩增目的片段,并将其克隆到T载体中,筛选重组子并测定其核苷酸序列。用NCBI/BLAST程序进行同源性收索。结果M1病毒扩增出469bp的特异片段,且包含SAG特有的100nt片段。同源性分析表明,该片段与SAG、GET相对应片段同源性为95%,91%。结论M1病毒属于鹭山病毒。     

应用氯化锶对小鼠卵母细胞孤雌活化的研究

根据弓形虫P30基因序列设计二对引物分别进行了PCR一次扩增和套式扩增，结果这两对引物在一次扩增和套式扩增中分别出现预期的扩增片段914bp,522bp和522bp；套式扩增出现的条带比一产供销扩增出现的条带亮度明显增强，提示套式扩增比一次扩增具有更高的敏感性，用外引物进行扩增后，最低可以检测到1pg的弓形虫DNA，说明所建立的反应体系具有高度的敏感性。用内引物对人工感染弓形虫的ICR小鼠血液，组织进行弓形虫DNA的检测，结果均扩增出522bp的扩增带。根据B1基因序列设计的弓物进行PCR一次扩增和半套式扩增。结果均出现预期的扩增片段619bp,362bp和362bp；用半套式扩增检测感染弓形虫形虫的ICR小鼠血液，组织时可扩增出522bp的619bp,362bp和362bp；用半套式扩增检测感染弓形虫的ICR小鼠血液，组织时可扩增出522bp的扩增带，半套式扩增比一次扩增更敏感。     

人同源盒基因Nkx3.1启动子的克隆及活性测定

目的：克隆Nkx3．1基因5’上游1．06kb片段，构建pGL3-1．06kb载体，测定其启动子活性。方法：采用PCR方法从人基因组DNA中扩增Nkx3．1基因5’上游1．06kb片段并构建到荧光素酶报道基因pGL3-basic载体中，与内参照质粒pRL-Tk共转染前列腺癌LNCaP细胞，通过双荧光素酶活性检验测定其启动子活性。结果：PCR扩增的1．06kb片段经测序正确无误；pGL3-1．06kb转染LNCaP细胞48h后，双荧光素酶活性测定M1／M2=2．7，为pGL3-control活性的1．5倍，为pGL3-basic活性的50倍。结论：克隆的人Nkx3．1基因5’上游1．06kb片段具有较强的启动子活性。