氧化应激对鱼藤酮PC12细胞中的毒性作用

目的探讨氧化应激在鱼藤酮多巴胺能神经元PC12细胞中的毒性作用。方法用高分化的PC12细胞作为多巴胺能神经元的细胞模型,经不同浓度的鱼藤酮处理,观察细胞形态及其超微结构,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性和增殖抑制及细胞代谢状态,生化分析法检测SOD活力、MDA含量,特异性DCF-DA荧光探针检测细胞内ROS水平。结果经鱼藤酮处理24 h后PC12细胞突起样结构消失,细胞体积变小、形态变圆,部分细胞呈悬浮状态;细胞线粒体代谢和超微结构发生改变;PC12细胞增殖抑制,细胞活性降低;细胞内的SOD活力下降,MDA含量增高;荧光探针标记显示PC12细胞荧光强度增加,细胞内ROS含量增加。结论鱼藤酮在体外对多巴胺能神经元有毒性作用,可抑制细胞增殖,影响线粒体代谢,氧化应激可能在鱼藤酮的多巴胺神经元毒性机制中起作用。     

锰对多巴胺能神经细胞PC12的毒性及其机制研究

为探讨锰 (Mn)抑制神经细胞增殖的机制 ,体外培养神经细胞株PC12 ,培养基分别含有 10 0、2 0 0及5 0 0mmol LMnCl2 ,作用 2 4、48、72h后 ,用四唑盐比色实验 (MTT)和平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长 ;台盼蓝拒染法绘制生长曲线 ;DTNB法测定谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)的活性、丙二醛比色法测定丙二醛 (MDA)的含量 ;DNA凝胶电泳检测神经细胞凋亡。结果显示 ,MTT和平板克隆形成实验检测结果显示10 0～ 5 0 0mmol L的Mn均对PC12细胞株有显著的抑制作用 ,且呈剂量 效应关系。GSH Px活性降低 ;MDA的活性升高。DNA凝胶电泳结果显示锰能够诱导PC12细胞凋亡。提示锰对神经细胞PC12的增殖具有显著的抑制作用 ,其机制是通过降低过氧化物酶的活性、干扰神经细胞的DNA代谢和诱导神经细胞凋亡     

MnSOD 9Ala/Val基因多态性与冠心病的关系

目的探讨锰超氧化物歧化酶9 Ala/Val(MnSOD9 Ala/Val)基因多态性与冠心病、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)活性以及丙二醛(MDA)浓度的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测262例冠心病患者和100例对照组的MnSOD9 Ala/Val基因多态性的基因型,采用比色法测定血浆T-SOD、MnSOD活性以及MDA浓度。结果与对照组比较,冠心病患者的血浆T-SOD和MnSOD活性[(23.61±16.51)U/ml与(44.01±22.68)U/ml,P<0.001和(21.56±13.11)U/ml与(28.79±8.65)U/ml,P<0.001]明显降低,MDA浓度显著增高[(2.47±0.73),(2.15±0.55)nmol/ml,P<0.01];冠心病患者的MnSOD 9 AA基因型和A等位基因频率较对照组明显增多(64.2%与43.0%,P=0.001和80.0%与67.0%,P=0.014);MnSODAA基因型的MnSOD活牲较VV基因型明显降低[(22.87±13.47)与(32.04±9.19)U/ml,P<0.01)];MnSOD与MDA负相关(r=-0.15,P<0.01)。结论冠心病患者的血浆T-SOD和MnSOD活性明显降低,MDA浓度显著增高;MnSOD 9 Ala/Val基因多态性AA基因型的血浆MnSOD活性降低。     

丙烯酰胺对PC12细胞损伤及机制研究

目的探讨丙烯酰胺（AA）对PC12细胞的细胞毒性及可能机制。方法分别以0、62.5、125、250、500、1 000μmol/L AA为染毒剂量,染毒12 h后,采用MTT比色法检测丙烯酰胺对体外培养PC12细胞的增殖抑制作用,并用碱性单细胞凝胶电泳技术（single cell gel electrophoresis,SCGE）检测PC12细胞DNA的损伤作用、用MDA和T-AOC试剂盒检测细胞MDA和T-AOC改变。结果染毒12 h后,细胞生长受到明显的抑制,且染毒剂量越高,抑制作用越明显（P〈0.01）;单细胞凝胶电泳实验表明,AA对体外培养PC12细胞的DNA有明显的损伤作用,细胞上清液中MDA含量随着染毒量的上升而升高,T-AOC含量随染毒量的上升而降低。结论 AA能够显著抑制PC12细胞活性,损伤细胞DNA,并诱导细胞氧化损伤。     

锰对PC12细胞增殖及蛋白酶体活性的抑制作用

目的：探讨锰对PC12细胞蛋白酶体20s复合物活性的影响.方法：以MTT以及平板克隆形成实验筛选作用浓度,不同时间以及不同浓度作用之后,提取细胞总蛋白,分别检测总蛋白提取液中20s复合物3种酶的活性.结果：含有MnCl2 300μmol/L的培养基对蛋白酶体3种酶活性的抑制率随着作用时间的延长而增高.作用3 d后,对3种酶活性的抑制率均超过20%.在作用时间相同的条件下,随着作用浓度的增高,锰对PC12细胞蛋白酶体活性的抑制作用逐渐增强.同样作用3 d后,当MnCl2浓度达到500μmol/L时,锰对3种酶活性的抑制率均超过40%.结论：蛋白酶体20s活性的抑制可能在锰所诱导的神经毒性过程中发挥着一定的作用.     

对氧磷酶1 55 Met/Leu、对氧磷酶2 148 Ala/Gly和锰超氧化物歧化酶9 Ala/Val基因多态性与冠心病

目的 探讨对氧磷酶155 Met/Leu(PON1 55 Met/Leu)、对氧磷酶2148 Ala/Gly(PON2148 Ala/Gly)和锰超氧化物歧化酶9 Ala/Val(MnSOD 9 Ala/Val)基因多态性与冠心病(CHD)、血浆对氧磷酶(PON)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和锰超氧化物歧化酶(MnSOD)活性以及丙二醛(MDA)浓度的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测262例CHD患者和100名对照组的PON1 55 Met/Leu、PON2 148 Ala/Gly和MnSOD 9 Ala/Val基因多态性的基因型,采用比色法测定血浆PON、T-SOD和MnSOD活性以及MDA浓度.结果 与对照组比较,CHD患者的血浆PON[(349.27±138.36 vs 454.75±166.00)nmol·min-1·ml-1,P＜0.001]、T-SOD[(23.61±16.51 vs.44.01±22.68)U/ml,P＜0.001]和MnSOD活性[(21.56±13.11 vs.28.79±8.65)U/ml,P＜0.001]明显降低,MDA浓度显著增高[(2.47±0.73 vs.2.15±0.55)nmol/ml,P＜0.01];CHD患者的PON1 55 LM杂合子基因型、M等位基因频率,PON2 148 GG纯合子基因型和AG杂合子基因型、G等位基因频率和MnSOD 9 AA基因型、A等位基因频率较对照组明显增多;PON1 55 LM杂合子基因型的PON和T-SOD活性较LL纯合子基因型明显降低;PON2 148GG基因型和AG基因型的PON活性较AA基因型明显降低;MnSOD AA基因型的PON和MnSOD活性较VV基因型明显降低;logistic回归分析显示PON1 55 LM杂合子基因型、M等位基因、PON2148 GG/AG基因型、G等位基因是CHD的危险因子.结论 CHD患者的抗氧化能力明显降低,脂质过氧化物显著增高;PON1 55 Met/Leu、PON2 148 Ala/Gly和MnSOD 9 Ala/Val基因多态性通过影响血浆PON和MnSOD活性而参与CHD的发病.     

营养素防护同型半胱氨酸致ECV304细胞损伤和凋亡

目的: 探讨叶酸、维生素E(VE)和硒(Se)对同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)诱导ECV304细胞损伤和凋亡的防护作用及其机制。方法: 采用倒置显微镜观察和MTT实验检测各种营养素对Hcy细胞损伤作用的防护,采用琼脂糖凝胶DNA电泳和流式细胞仪检测各种营养素对Hcy诱导细胞凋亡作用的防护。并通过测定细胞内脂质过氧化水平、细胞内抗氧化酶活力及对细胞内活性氧产生的改变研究其保护机制。结果: 叶酸、VE和Se都可防护Hcy的细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,并都可明显减少细胞内MDA含量。叶酸可以明显增加细胞内SOD活力,叶酸和Se可以明显增加细胞内GSH-Px活力。VE对Hcy诱导的细胞内活性氧产生具有明显抑制作用,而Se和叶酸抑制作用不明显。结论: 叶酸、VE和Se都可以防护Hcy导致的细胞增殖抑制,并可以抑制Hcy诱导的细胞凋亡,但其作用机制不同。     

JNK通路在MPP~+诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的研究1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)对PC12细胞的毒性作用及其机制。方法 PC12细胞体外培养,以100、300、500μmol/L MPP+进行染毒。Western blot法检测JNK1/2磷酸化水平;使用JNK通路阻断剂SP60012预处理细胞,TUNEL法观察其对MPP+诱导的细胞凋亡的影响。结果 MPP+染毒可以引起细胞JNK1/2的磷酸化水平增高,使用JNK通路阻断剂SP600125可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡。结论激活JNK通路可能是MPP+诱导PC12细胞凋亡、产生多巴胺能神经毒性的重要分子机制。     

川芎嗪对二甲酰胺引起的PC12细胞损伤的保护作用

目的分析川芎嗪对二甲酰胺引起大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化细胞株PC12细胞损伤的保护作用,探讨川芎嗪治疗脑缺血再灌注损伤的机制。方法采用川芎嗪预处理PC12细胞后,制备二甲酰胺细胞损伤模型,CCK-8法检测细胞毒性、流式细胞术分析Caspase-3、8、9、Western blot检测HMGB1、ELISA检测氧化应激指标观察二甲酰胺的毒性及川芎嗪的保护作用。结果川芎嗪预处理后,PC12细胞的存活数显著提高,Caspase-3和Caspase-9活性降低,未见HMGB1表达降低,SOD上调,LDH和MDA下调,GSH升高。结论川芎嗪对二甲酰胺引起的PC12细胞损伤有显著的保护作用,但其保护作用可能与川芎嗪抑制细胞凋亡、调节氧化应激反应相关。     

锰诱导PC12细胞凋亡与P53、MDM2蛋白表达

目的 探讨锰对嗜铬细胞瘤细胞(PC12 cells)凋亡的诱导作用及与抑癌基因P53、原癌基因MDM2蛋白表达的关系.方法 以PC12细胞作为多巴胺能神经元的模型细胞,取对数生长期的PC12细胞,用含200,400,800μmol/L MnCI2的培养液分别染毒培养24,36,48 h.四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生长情况,流式细胞仪(FMC)和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡状况;用免疫细胞化学法检测细胞P53、MDM2蛋白表达强度.结果 氯化锰可呈时间和剂量依赖性抑制PC12细胞的增殖和诱导细胞凋亡,抑制率为11.8%～73.6%,凋亡率为8.72%～53.60%.免疫化学法检测结果显示,随锰浓度的增高,P53蛋白的表达增加(P<0.01),而MDM2蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),且呈剂量依赖关系.结论 锰可诱导PC12细胞凋亡,上调P53基因的表达和下调MDM2基因的表达可能在其诱导PC12细胞凋亡中起着重要的作用.     

Regulation of manganese superoxide dismutase (MnSOD) in chronic experimental alcoholism: effects of vitamin E-supplemented and -deficient diets

In order to investigate the pathogenic mechanism responsible for liver injury associated with chronic alcoholism, we studied the effects of different dietary vitamin E levels in chronically ethanol (EtOH)-fed rats on the activity and mRNA regulation of the manganese superoxide dismutase (MnSOD) enzyme. Evidence is accumulating that intermediates of oxygen reduction may in fact be associated with the development of alcoholic liver disease. Since low vitamin E liver content seems to potentiate EtOH-linked oxidative stress, we studied the effect of EtOH treatment in livers from rats fed a diet deficient or supplemented with vitamin E. Chronic EtOH feeding enhanced hepatic consumption of vitamin E in both groups of EtOH-treated animals, irrespectively of the vitamin E level of the basal diet and the effect was observed in both the microsomal and mitochondrial fractions. Both EtOH-fed groups exhibited increased MnSOD gene expression, while the enzyme activity was enhanced only in the vitamin E-deprived group of EtOH-treated animals. The significant increase in manganese liver content found only in this last group could explain the rise of enzyme activity. In fact, in the absence of a parallel increase of the prosthetic ion manganese, MnSOD mRNA induction was not accompanied by a higher enzymatic activity. These findings support the role of oxidative alteration in the EtOH-induced chronic hepatotoxicity in which MnSOD response might represent a primary defence mechanism against the damaging effect of oxygen radical species.     

锰的神经毒性机制探讨

目的通过染毒人神经母细胞瘤细胞(SH—SY5Y)探讨锰致细胞的氧化损伤，为进一步研究锰的神经毒性机制提供科学依据。方法分别用0．00，0．25，0．50，0．75mmol／L的锰化合物染毒细胞24h，检测锰染毒的细胞中的抗氧化酶活力，包括超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH—Px)、过氧化氢酶(CAT)活力和抗氧化剂谷胱苷肽(GSH)；用荧光分光光度计检测染锰细胞膜微粘度；用单细胞电泳检测细胞DNA链断裂情况；用0．50mmol／L锰染毒细胞24，48h，采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果锰染毒各组细胞抗氧化酶活力和抗氧化剂含量均有不同程度的降低，脂质过氧化产物丙二醛(MDA)有所升高；染锰细胞膜微粘度升高；锰染毒细胞各级彗星细胞数不同损伤程度增多，并与染锰浓度呈正相关；锰染毒24，48h的细胞，均出现明显的凋亡峰，细胞周期的分布也发生改变，S期细胞增多。结论锰可导致细胞处于氧化应激态和细胞损伤，这可能是锰的神经毒作用机制之一。     

Vitamin Supplementation Protects against Nanomaterial-Induced Oxidative Stress and Inflammation Damages: A Meta-Analysis of In Vitro and In Vivo Studies

The extensive applications of nanomaterials have increased their toxicities to human health. As a commonly recommended health care product, vitamins have been reported to exert protective roles against nanomaterial-induced oxidative stress and inflammatory responses. However, there have been some controversial conclusions in regards to this field of research. This meta-analysis aimed to comprehensively evaluate the roles and mechanisms of vitamins for cells and animals exposed to nanomaterials. Nineteen studies (seven in vitro, eleven in vivo and one in both) were enrolled by searching PubMed, EMBASE, and Cochrane Library databases. STATA 15.0 software analysis showed vitamin E treatment could significantly decrease the levels of oxidants [reactive oxygen species (ROS), total oxidant status (TOS), malondialdehyde (MDA)], increase anti-oxidant glutathione peroxidase (GPx), suppress inflammatory mediators (tumor necrosis factor-α, interleukin-6, C-reactive protein, IgE), improve cytotoxicity (manifested by an increase in cell viability and a decrease in pro-apoptotic caspase-3 activity), and genotoxicity (represented by a reduction in the tail length). These results were less changed after subgroup analyses. Pooled analysis of in vitro studies indicated vitamin C increased cell viability and decreased ROS levels, but its anti-oxidant potential was not observed in the meta-analysis of in vivo studies. Vitamin A could decrease MDA, TOS and increase GPx, but its effects on these indicators were weaker than vitamin E. Also, the combination of vitamin A with vitamin E did not provide greater anti-oxidant effects than vitamin E alone. In summary, we suggest vitamin E alone supplementation may be a cost-effective option to prevent nanomaterial-induced injuries.     

玉米幼芽提取物对小鼠脑组织氧化损伤的保护作用

目的:探讨玉米幼芽提取物(extracts of maize plumule,EMP)对小鼠脑组织氧化损伤的保护作用。方法:采用D-半乳糖(D-galactose,D-gal)复制小鼠脑组织氧化损伤模型。EMP组在造模同时分别灌胃给予10、20、40mg/(kgbw·d)EMP,连续6w,观察其对氧化损伤小鼠脑组织超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量的影响;同步观察普通光学显微镜下小鼠海马CA1区组织形态变化和透射电子显微镜下小鼠大脑皮质超微结构变化。结果:EMP对D-gal致小鼠脑组织T-SOD、GSH-Px活性降低和MDA含量升高有抑制作用,并改善了D-gal导致的海马CA1区组织形态变化和大脑皮质的超微结构变化。结论:EMP对D-gal致小鼠脑组织氧化损伤具有保护作用。     

谷胱甘肽拮抗锰致雄性大鼠生殖损伤的研究

目的:研究谷胱甘肽(GSH)对锰致雄性大鼠睾丸氧化损伤的拮抗作用。方法:将48只健康雄性SD大鼠随机分为3组进行急性和亚急性染毒。染锰组腹腔注射30mg/kgMnCl2.4H2O染毒1周(急性染毒)和4周(亚急性染毒),GSH拮抗组染毒后再给予2周1mmol/kgGSH,对照组染毒后给予生理盐水。TUNEL法检测生精细胞凋亡;化学比色法检测睾丸丙二醛和谷胱甘肽过氧化物酶活性。结果:急性锰染毒时,染锰组生精细胞凋亡指数和睾丸丙二醛含量高于对照组和GSH拮抗组(P<0.01);各组间谷胱甘肽过氧化物酶活性无差异。亚急性锰染毒时,染锰组生精细胞凋亡指数和睾丸丙二醛含量高于对照组和GSH拮抗组(P<0.01),GSH拮抗组高于对照组(P<0.01);染锰组睾丸谷胱甘肽过氧化物酶活性低于对照组和GSH拮抗组(P<0.01)。结论:及时补充谷胱甘肽可通过抑制脂质过氧化作用而拮抗锰引起的雄性大鼠生精细胞凋亡。     

补充抗氧化剂对急性肝损伤大鼠肝星型细胞zf-9mRNA表达的影响

目的:探讨经膳食补充抗氧化剂维生素E(VE)、硒及槲皮素对大鼠急性肝损伤早期肝脏星型细胞激活相关性基因zf-9mRNA表达的影响。方法:90只SD大鼠随机分为正常对照组、病理对照组、VE和硒补充组及槲皮素补充组。通过灌胃分别补充VE、Se(VE20mg/kg bw·d,硒16μg/kgbw﹒d)和槲皮素(50mg/kg bw·d)2w后,腹腔内注射CCl4造成急性肝损伤,分别于注射后的3、6、12和24h检测抗氧化状态及肝功能;用胶原酶和链霉蛋白酶灌注肝脏并分离急性肝损伤期各时间点的肝星型细胞,应用半定量聚合酶链反应(RT-PCR)研究zf-9mRNA的表达。结果:膳食补充VE、硒和槲皮素可显著减少急性肝损伤大鼠血清MDA水平,增强SOD活性,保护肝功能;下向调控肝星型细胞激活早期zf-9mRNA的表达。结论:膳食补充抗氧化剂VE、硒及槲皮素可有效地调控HSC激活相关性基因zf-9mRNA的表达。     

火麻油、山茶油和维生素E混合物对大小鼠抗氧化作用的研究

目的 研究火麻油、山茶油和维生素E混合物的抗氧化作用。 方法 采用老龄大小鼠模型、乙醇氧化损伤大鼠模型,观察实验动物丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原性谷胱甘肽(glutathione,GSH)、蛋白质羰基含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力水平。 结果 火麻油、山茶油和维生素E混合物可提高老龄大鼠GSH含量、SOD和GSH-Px活力,降低蛋白质羰基含量;火麻油、山茶油和维生素E混合物可提高老龄小鼠及乙醇氧化损伤模型大鼠GSH含量、SOD活力,并降低MDA含量。 结论 火麻油、山茶油和维生素E混合物具有较强的抗氧化作用。