拉曼被孢霉γ-亚麻酸高产突变株的选育

目的诱变、筛选γ 亚麻酸 (GLA)高产菌株。方法采用 5 氟尿嘧啶、紫外线、氯化锂复合诱变及自然分离的方法 ,对拉曼被孢霉AS 3.34 13进行诱变筛选。结果获得一株GLA高产突变株F5。该菌株GLA产量较原始菌株提高了 30 0 %。传代实验证明该菌株遗传性质稳定。经对其发酵培养基及发酵条件的优化 ,该菌株GLA生产能力可达 115 3.6 3mg/L ,较原始菌株提高 335 .87%。结论拉曼被孢霉GLA高产突变株F5已达工业生产菌株要求。     

重组人Shiga-EGF工程菌发酵工艺研究

目的研究表达重组人Shiga EGF(rhShiga EGF)融合蛋白工程菌的发酵条件。方法通过摇瓶试验优选适合工程菌生长、表达的培养基配方、pH及以乳糖替代IPTG作诱导剂等 ,并在 5L发酵罐上进行试验。 结果采用A3配方的培养基 ,在pH 6 .8条件下 ,以乳糖诱导表达 5h ,5L罐发酵工程菌菌密度 (A60 0nm)达到 15 ,菌体湿重 2 7g/L ,目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的 15 %～ 2 0 %。结论确立以乳糖为诱导剂的发酵条件能降低目的蛋白制备成本     

利用产气肠杆菌EAM-Z1转化合成5-氟尿苷的转化率影响因素的研究

利用产气肠杆菌EAM Z1转化合成5 氟尿苷,从筛选中间体稳定剂、底物流加、底物诱导、菌体冻融和石英砂研磨等方面研究转化率的影响因素,结果:(1)转化过程中加入40 mmol/L的硼砂可以将转化率达到75.56%,提高30.28%;加入10 mmol/L的甘氨酸可以使转化率达到61.92%,提高6.76%;(2)流加5 氟尿嘧啶可以将转化率提高到87.78%;(3)培养过程中加入尿苷诱导效果并不明显,尿苷浓度为 0.001 g/L时效果最佳,提高3.63%;(4)菌体冻融和石英砂研磨使转化率下降26%。     

重组蛹虫草超氧化物歧化酶对氧化压力下E.coli细胞的保护作用

为考察外源蛹虫草超氧化物歧化酶(cm-SOD)基因或蛋白对强氧化剂环境中E.coli的保护作用,分别在含强氧化剂和不含强氧化剂的培养基中培养重组蛹虫草超氧化物歧化酶菌株和对照菌株并诱导表达,测定菌体的生长速率及菌体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和活性氧(ROS)的变化.结果表明重组菌株对百草枯引起的生长抑制作用具有抗性,当百草枯的浓度在(0.02～1.5)mmol/L范围内,重组菌株的生长速率明显高于对照菌株;重组菌株的SOD酶活力明显高于同一环境中的对照菌株.CAT酶活力略高于对照菌株,而细胞内ROS含量明显低于对照菌株.说明外源cm-SOD基因在E.coli中的高效表达提高了菌体抵抗自由基引起的损伤的能力.     

刚果红高效降解菌分离鉴定及降解条件优化

目的:本研究以从长期受到印染废水污染的土样中分离到的一株在厌氧条件下可以高效降解偶氮染料刚果红的细菌为样本,通过形态学观察、生理生化鉴定及16SrDNA序列分析鉴定,该菌为克雷伯氏属菌株,并定名为Klebsiellasp.Y12。通过对菌株Y12菌体浓度和刚果红降解率连续24h的测定。发现:菌株在生长到18h时菌体浓度达到最大值;在第16h时刚果红的降解率达到最大,为78%。这表明降解率与菌体生长基本同步。本研究优化了降解培养基的碳源及氮源。结果:最适于刚果红降解的碳源为葡萄糖,最适投加量为8.0g/L;最适氮源为硫酸铵,最适硫酸铵投加量为5.0g/L。且优化后的降解率达93%,比未优化前提高19%。本研究以刚果红为模式染料,筛选出刚果红降解菌株,这对探讨偶氮染料的有效降解,寻找一种有效的偶氮染料降解方法具有实际意义。     

合成的类脂A亚单位类似物及其与胞壁酰二肽衍生物结合物的佐剂活性

脂多糖(LPS)是革兰阴性菌的内毒素,位于菌体表面,类脂是LPS的有效成份,它的化学结构已经确定.Shiba等化学方法合成了类脂A.合成的大肠杆菌类脂A(化合物506)的内毒素活性基本与LPS相同,但它的亚单位类似物(即GLA化合物)的致病毒性和热原性很低,大约只有天然类脂A或合成类脂A的1/50～1/10000,却具有有效的免疫学活性.在GLA化合物中(GLA-27、GLA-59和GLA-60),与GLA-27和GLA-     

抗菌肽Cecropin B-肿瘤血管生长抑制因子 Kringle5融合蛋白表达载体的构建及其表达

通过重叠区扩增法人工合成抗菌肽Cecropin B(CB)基因,从ThioA/L15-7上卸下肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)基因,将两者按正确的阅读框架融合并定向克隆至大肠杆菌高效表达载体pET32a上,构建成pET32a/CB-K5重组载体。重组载体转化BL21(DE3)细胞后,提取质粒进行PCR鉴定和序列分析,证明重组质粒pET32a/CB-K5阅读框架和融合基因序列均与预期相符。实验结果显示,成功地构建了抗菌肽CecropinB(CB)和肿瘤血管生长抑制因子Kringle5(K5)融合蛋白的表达载体pET32a/CB-K5。转化E.coliBL21(DE3),SDS-PAGE分析显示,在IPTG诱导下,融合蛋白以包涵体的形式在重组转化菌株中获得高效表达,表达量达到菌体总蛋白的50%。     

产腺苷甲硫氨酸酿酒酵母半胱氨酸补料工艺的研究

对酿酒酵母生物合成腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)发酵过程进行工艺优化,研究了半胱氨酸添加量、半胱氨酸添加时间、碳源对菌体浓度和SAM产量的影响。结果表明,在10 L发酵罐中,发酵16 h时,补加半胱氨酸至浓度2 mmol/L,发酵36 h时菌体(DCW)和SAM浓度分别达到15.40 g/L和4.11 g/L;在此基础上,更换糖蜜为碳源,并在还原糖浓度低于5 g/L时,流加糖蜜,相当于还原糖的流加速率为0.8 g/L.h,发酵36 h时菌体浓度和SAM产量分别为15.50 g/L和5.02 g/L;经过发酵工艺优化,发酵液中SAM浓度提高了43.8%。     

红海榄根际土壤中短小芽孢杆菌菌株DH-11的鉴定及其抗菌活性的分析

根据菌体的形态、生理生化特征以及16s rDNA序列分析结果,将一株分离自中国海南东寨港红树林保护区红海榄根际土壤的细菌菌株DH-11鉴定为芽孢杆菌属的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus strain DH-11)。菌株DH-11是一种革兰阳性短杆菌,大小约为(0.5～0.6)μm×(0.7～1.5)μm,卵圆形芽孢侧端生。其细胞中的主要脂肪酸为Iso-C15∶0和Anteiso-C15∶0,它们的含量占菌体总脂肪酸含量的47.49%和26.21%,其它脂肪酸还包括Iso-C17∶1(7.27%)、Anteiso-C17∶0(6.92%)、C16∶1 N Alcohol(3.45%)以及C16∶0(2.33%)等。与已报道的短小芽孢杆菌菌株B.pumilus ATCC 7061的不同之处在于:菌株DH-11不能利用木糖和甘露醇产酸,且硝酸盐还原呈阳性。进一步的研究显示:菌株DH-11在改良马铃薯培养基中培养时,获得的培养液及其提取浸膏不能抑制革兰阴性细菌Escherichia coli和Pseudomonas aeruginosus的生长,但对革兰阳性菌Staphylococcus epidermidis、Staphy-lococcus aureus、Bacillus subtilis和Sarcina lutea的生长具有一定的抑制作用:其中发酵液浸膏1和浸膏2对上述菌株的最低抑菌浓度(MIC)分别为500.0和250μg/mL,浸膏2还可抑制真菌Candida albicans的生长,其MIC为500μg/mL。     

响应面法优化林可霉素产量与组分

以林可霉素A(Lin A)产量提高以及林可霉素B组分(Lin B)含量降低为目标，在单因素实验基础上，利用响应面法对林可链霉菌18-8菌株的含硫前体物质(硫酸钠、甲硫氨酸、半胱氨酸)与戊糖磷酸途径(HMP)的关键前体(葡萄糖酸钙、葡萄糖酸钠)以及相关醇类、离子(肌醇、氯化钴)等物质进行组合优化。首先对7个因素进行Plackett-Burman实验，筛选得到3个显著性因子：葡萄糖酸钙、肌醇和氯化钴。再通过Box-Behnken设计3因素3水平实验，利用Design-Expert 8.5软件进行回归分析，得到最佳优化条件为：氯化钴7.97mg/L、葡萄糖酸钙6.0g/L、肌醇0.42g/L。摇瓶验证Lin A液相效价为5210mg/L，比优化前提高21%，Lin B含量为4.3%，比出发菌株的Lin B含量(6.0%)降低39.5%；在15L发酵罐中进行发酵实验，Lin A液相效价可达8980mg/L，比对照(6630mg/L)提高35%，Lin B含量在90h达到最低含量2.4%，相比对照Lin B含量(4.8%)降低50%，效果显著。     

复合诱变法选育普那霉素高产菌株

以始旋链霉菌(Streptomyces pristinaespiralis)ZP2为出发菌株,经紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)复合诱变,并结合普那霉素抗性突变株的理化筛选,选育到一株高产突变菌株UN2056,其普那霉素产量达到1490 mg/L,比出发菌株提高了45.7%.传代试验表明该高产突变菌株的高产性能遗传特性稳定.高产突变株UN2056在5 L发酵罐中进行发酵试验,其平均发酵产量达到1645 mg/L,比出发菌株提高了60.8%.     

表达GST-NK4工程菌的发酵工艺研究

目的建立重组GST NK4融合基因工程菌的发酵工艺。方法采用摇瓶、发酵罐发酵,对影响工程菌生长和表达的条件如pH值、诱导时间及诱导剂浓度等进行优化。结果根据优化的条件,15L发酵罐发酵11h ,菌体收获量可达到湿重(2 4 .6±0 .98)g/L ,目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的5 0 %左右。结论确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺     

伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的L型蛋白图谱

蛋白质是细菌细胞的主要有机构成,同细菌的生理活动、抗原性、致病性等特性密切相关。我们前文报道伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定 L 型丧失了其亲代经典细菌具有的多种特性,认为同 L 型细胞壁缺失或基因结构的改变有关。本文用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳法分析了伤寒杆菌和甲型副伤寒杆菌的稳定 L 型及其亲代经典细菌的菌体蛋白构成,研究其分子生物学方面的表现型特征。材料和方法一、菌株:营养琼脂培养基传代保存的伤寒杆菌 H_(?)(ST)和甲型副伤寒杆菌(SP)的稳定 L 型及其亲代经典细菌。二、菌体蛋白的制备:各菌株营养琼脂24小时培养物用灭菌蒸馏水洗三次,离心9000     

被孢霉高产γ-亚麻酸菌株的选育

目的：选育高产γ-亚麻酸被孢霉菌株。方法：以被孢霉（Mortierellasp．）为出发菌株经过UV诱变处理和甘草酸筛选,获得一株γ-亚麻酸（GLA）高产菌株A02变株。结果：变株摇瓶培养生物量达20．12g／L,较出发菌株提高25．50％,γ-亚麻酸的产量为0．96g／L,较出发菌株提高了81％。传代实验显示,变株A02具有良好的遗传稳定性。结论：甘草酸筛选法是多不饱和脂肪酸产生前育种工作的一个有效方法。     

超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球的体外抗结核分枝杆菌药敏实验

目的:检验制备的超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球(spSPM)的体外抗结核分枝杆菌活性,为靶向治疗儿童骨关节结核提供实验基础。方法:用制备的spSPM溶出液制成药敏培养基,与硫酸链霉素标准品制备的药敏培养基进行对照,采用绝对浓度法接种,观察比较其抑菌效果。结果:4周后,15株菌在空白培养基上均生长旺盛(+++~++++),在TCH培养基均为阳性(+),在PNB培养基均为阴性(-)。spSPM组高浓度(100 mg/L)培养基7株阴性,低浓度(10 mg/L)仅1株阴性。硫酸链霉素标准品溶液组培养基高浓度(100 mg/L)7株阴性,低浓度(10 mg/L)2株阴性。spSPM组与溶液组在分枝杆菌生长情况上差异均无统计学意义(高、低浓度培养,χ2分别为0.1408、0.0997,P均>0.05)。spSPM组耐药菌株为11株(73.33%),溶液组耐药菌株为12株(80.00%),两组耐药率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本实验制备的spSPM溶出液与硫酸链霉素标准品抑菌效果无明显差异,因此可应用于进一步的研究中。     

左氧氟沙星联合头孢哌酮/舒巴坦对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌防耐药突变浓度的影响

目的探讨左氧氟沙星(levofloxacin,LVX)、头孢哌酮/舒巴坦(cefoperazone/sulbactam,CFS)单用及联合使用对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii,CRAB)防耐药突变浓度(mutant prevention concentration,MPC)的影响,为防止细菌耐药的产生提供理论依据。方法采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定抗菌药物对鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC19606和60株临床分离CRAB的最低抑菌浓度(MIC),计算部分抑菌浓度(FIC)指数。用肉汤富集浓度为1013CFU/L CRAB,采用琼脂平板稀释法测定LVX和CFS单用及联合使用鲍曼不动杆菌对标准菌株ATCC19606和60株临床分离CRAB的MPC,并计算相应的选择指数(SI)。结果LVX联合CFS后,主要表现为协同和相加作用,无拮抗作用。对鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC19606:LVX和CFS联用前后,MPC分别由8.0 mg/L、16.0 mg/L降为1.0 mg/L、2.0 mg/L;SI均下降了7/8,且均有统计学意义。对60株临床分离菌株:LVX和CFS联用前后,MPC分别由64～256 mg/L、128～256 mg/L降为8～64 mg/L、64～128 mg/L;SI均明显下降。结论 LVX与CFS联用后,可降低其单用对CRAB的MPC,缩小耐药突变选择窗,防止耐药突变菌株的产生。     

一株青藏高原来源的链霉菌菌株鉴定及其抑菌活性的初步分析

根据菌株的形态和生理生化特征,结合16srRNA序列分析,将一株分离自中国青藏高原土壤的菌株167-2-28鉴定为链霉菌属放线菌。菌株167-2-28为革兰氏阳性菌,在高氏合成琼脂培养基上,基内菌丝呈红褐色,气生菌丝为灰粉色,产生浅褐色可溶性色素,孢子链为螺旋形,孢子呈椭圆形,大小约为(0.7~0.8)μm×(1.0~1.4)μm。菌株167-2-28的DNA G+C含量为68.3 mol%,以MK-9(H6)为主要呼吸醌,其细胞中主要的脂肪酸为iso-C16:0(18.6%)、anteiso-C15:0(16.6%)、anteiso-C17:0(11.5%)和summed feature 3(C16:1ω7c/isoC15:0-2OH)(14.2%)。对16s rRNA序列的分析结果显示,该菌株与S.novaecaesareae NBRC 13368T(99.57%)、S.phaeoluteigriseus ISP 5182T(99.28%)和S.pseudovenezuelae NBRC 12904T(99.21%)等菌株亲缘关系较近,与菌株S.novaecaesareae ATCC 27452T的主要区别在于:菌株167-2-28在ISP3、ISP4、ISP5和ISP7培养基上可产生气生菌丝,并能产生H2S和利用柠檬酸。初步的活性分析结果表明:菌株167-2-28在高氏合成培养基中培养时,获得的乙酸乙酯提取浸膏对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和藤黄微球菌)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林表皮葡萄球菌(MRSE)的生长具有明显的抑制作用,并对黑曲霉有较弱的拮抗活性,其最低抑菌浓度(MIC)分别为32,32,16,50,100μg/m L和>500μg/m L;而对革兰氏阴性菌(大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、克雷伯氏菌)和真菌(白色念珠菌和禾谷丝核菌)的生长无抑制作用。     

蓝萼甲素通过Bcl-2/Beclin1靶点调节人肝癌HCCLM3细胞自噬与凋亡的机制研究

目的 研究蓝萼甲素(GLA)对人肝癌HCCLM3细胞自噬与凋亡的调节作用机制.方法 HCCLM3细胞按不同实验目的主要设对照组、GLA 2.5μg/mL组、GLA 5μg/mL组、GLA 10μg/mL组.对照组仅加入完全培养基,各给药组分别加入含GLA相应终质量浓度的完全培养基.采用流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡情...     

重组雪花莲外源凝集素(GNA)表达条件的优化

研究了含有GNA基因的重组大肠杆菌菌株G2和G3在不同诱导培养温度、起始诱导菌体密度(OD600值)、诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度及诱导培养时间等重要因子对重组GNA表达的影响,以期获得重组GNA表达的最佳条件。实验结果表明,不含信号肽的G2菌株和含有信号肽的G3菌株的最佳培养条件分别为:起始诱导菌体密度为OD600≈0.6;诱导剂IPTG浓度为0.1 mmol/L;诱导培养时间为6 h;G2和G3的诱导培养温度分别为37℃,28~30℃。该研究结果将为发酵生产重组GNA的工艺提供依据,也为重组GNA开发成为生物农药、试剂和免疫增强剂提供支持。     

重组人肝细胞生长因子α高效表达工程菌筛选及发酵工艺研究

将人肝细胞生长因子α重组质粒转化至不同E.coli菌株，在相同培养条件下比较其表达量，筛选高表达工程菌株；在15L的发酵罐内，采用分批补料培养的方法，研究表达菌株的发酵培养条件，检测改变发酵培养基成分、种子液接种量、诱导时间等参数对菌液密度以及蛋白表达的影响，同时检测质粒传代的稳定性。实验结果表明筛选出的高表达工程菌在优化的发酵培养条件下，菌体收获量可达52g/L，目的蛋白表达量约占菌体可溶性总蛋白的25％，且质粒和蛋白表达均具有良好的稳定性。高效表达工程菌和优化发酵工艺可以较好地提高菌体收率，为规模化生产奠定了基础。