足细胞TRPC6的过度表达与诱导细胞骨架重建的关系

瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)是足细胞实现滤过屏障功能的关键分子之一。在一些获得性和遗传性的肾脏疾病中常发现其足细胞上TRPC6呈过度表达,在动物模型中TRPC6的过表达能导致蛋白尿。本文探讨了TRPC6的过表     

耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADM钙稳态失调及其机制研究

目的探讨耐阿霉素人乳腺癌细胞MCF-7/ADM钙稳态失调及其机制。方法转染指示钙离子质粒GECO1.2,检测野生型和耐药型细胞中的[Ca2+]含量;通过Westernblot检测瞬时受体电位离子通道(transient receptor potentialchannel)蛋白TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC5和TRPC6在两种细胞中的表达情况;运用钙离子通道抑制剂2-APB(100μmol.L-1)抑制耐药细胞中高表达的TRPC5活性后,检测耐药细胞中的[Ca2+]含量。结果耐药细胞中的[Ca2+]含量明显上调,并检测到TRPC5蛋白在耐药细胞中发生高表达,其活性被抑制后,耐药细胞中的[Ca2+]浓度发生下调。结论与野生型细胞相比,耐药细胞中钙稳态失调,其原因可能是由于耐药细胞中TRPC5表达上调引起耐药细胞中[Ca2+]内流所致。提示钙稳态失调与肿瘤细胞的耐药发生有着密切关系。     

瞬时受体电位通道C3/6与大电导钙激活钾通道在肾小球足细胞表面转运中的作用

由Slo1基因编码的大电导钙激活钾通道(BKCa)与各种瞬时受体电位通道C(TRPCs)在许多细胞系上共表达,其中包括肾小球的足细胞(脏层上皮细胞)。在本实验中,通过免疫共沉淀和谷胱甘肽S-转移酶(GST)pull-down方法证实在分化的足细胞系上的BKCa通道与内源性的TRPC3/6通道相联系。2种TRPC通道在足细胞上与Slo1共定位,并且在人胚肾(HEK)293T细胞上TRPC通道蛋白与Slo1瞬时共表达。在     

在非刺激条件下TRPC6的814位点丝氨酸磷酸化

TRPC（瞬时受体电位阳离子通道）是与钙离子内流有关的非选择性阳离子通道。其通过磷酸化实现对通路和活性的调节。其中，TRPC6在肾脏中主要定位于足细胞上，对足细胞内钙离子浓度的调节发挥重要作用。TRPC6可以由Fyn激酶（Src家族中的一种酪氨酸激酶）磷酸化。实验证实Fyn激酶磷酸化TRPC6后可以使TRPC6活性增加，这一现象可以被TRPC6的Thr69位的蛋白激酶G和Ser448位的蛋白激酶C抑制。已有研究指出，TRPC6在非刺激条件下的人胚胎肾细胞系（HEK293）中可以发生基本磷酸化，但其磷酸化的位点还未确定。为了研究这一磷酸化的机制，本实验运用了MS（质量光谱法）/MS结合代谢标记的方法，证实了在未受刺激细胞中TRPC6的814位点丝氨酸(Ser 814)发生磷酸化。实验发现，当Ser 814突变为丙氨酸时会造成未受刺激细胞TRPC6的32P基本磷酸化减少50%，证实Ser 814是未受刺激细胞磷酸化的主要位点。但与野生型的TRPC6相比，Ser 814的突变体的TRPC6的活性、表达水平以及通道运输均无明显变化。TRPC6的序列分析显示Ser814与酪氨酸激酶Ⅱ（CK2）有共同的磷酸化位点，并且CK2识别的序列往往是酸性氨基酸密集的区域，可以催化-2到+7位点的酸性残基发生磷酸化，而TRPC6中Ser814与谷氨酸以及天冬氨酸构成酸性环境，适合CK2识别。另外，CK2可以抑制结构活性，因此推测，在本研究中CK2可能是Ser 814磷酸化潜在的激酶。然而实验结果表明CK2与TRPC6的磷酸化无关，不能改变TRPC6的活性，即CK2不是参与其磷酸化作用的激酶。总之，本次研究鉴定了在TRPC6上的一种新的基础磷酸化位点（Ser814），并证实CK2与这一位点的磷酸化无关。     

TRPC6在结节性硬化症癫痫患者皮层脑组织中的表达

目的 研究瞬时受体电位通道蛋白C6 (TRPC6)在结节性硬化症(TSC)癫痫患者皮层脑组织的表达与分布,探讨TRPC6通道参与结节性硬化致痫的可能机制.方法 收集手术切除并经病理检测证实是TSC癫痫患者的皮层脑组织标本18例,与7例正常对照皮层脑组织比较,通过采用Western blot、免疫组化、免疫荧光双标,检测TRPC6在正常脑组织与TSC病理标本中的表达分布情况.结果 Western blot蛋白检测结果显示,在TSC和对照大脑皮质(CTX) TRPC6均在相应的分子量94KDa处有特异性蛋白条带,与CTX比较,TSC组TRPC6条带与内参GAPDH条带灰度值之比显著增高(P＜0.05);免疫组化及免疫荧光双标结果显示,TRPC6在TSC病灶中免疫强度明显增高,且特异性高表达于皮层损伤区致痫灶中的异构神经元.包括特征性的巨形细胞(GCs)、异形神经元(DNs).结论 TRPC6在结节性硬化症患者致痫皮层脑组织中表达异常增高,特异性的细胞分布模式可能与癫痫发病密切相关.     

基于PI3K/PTEN/VEGF的菟丝子总黄酮抗肝癌作用机制研究

目的：基于PI3K/PTEN/VEGF通路探讨菟丝子总黄酮（TF）体外抗肿瘤作用机制,考察合适的给药浓度,为菟丝子药材的临床合理应用提供参考。方法：以人肝癌细胞HepG2为实验对象,CCK-8法检测TF给药后的细胞活性,计算其IC 50值;Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡坏死比例;实时荧光定量PCR （qPCR）法检测胞内磷脂酰肌醇激酶（PI3K）、人类第十号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）、血管内皮细胞生长因子（VEGF） mRNA的相对表达;酶联免疫吸附法（ELISA）检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮细胞生长因子受体2、3（VEGFR-2、VEGFR-3）表达变化趋势。结果：相对阴性对照组,给药组细胞抑制率和凋亡率均具有良好的量-效正相关;qPCR结果显示TF给药可以显著的上调PTEN mRNA,下调PI3K、VEGF mRNA;ELISA结果显示HIF-1α、VEGFR-2、VEGFR-3蛋白的表达在给药后均有下降（P<0.01）。结论：菟丝子总黄酮有较好的体外抗肝癌药效,其作用可能与上调PTEN的表达对PI3K-Akt通路进行负调控诱导细胞发生凋亡、下调HIF-1α以及VEGF相关基因和受体蛋白的表达等作用机制共同发挥抗肿瘤作用。     

活性氧簇介导的血管平滑肌细胞内TRPC6激活为血管收缩调节血管张力的机制

典型的瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)是一个非选择性阳离子通道,其通过调节细胞内Ca2+信号参与多种多样的细胞功能。许多机制参与了TRPC6通道的激活和调节,包括膜受体激活、Ca2+储存释放、细胞膜脂质和运输。笔者最近通过研究证实TRPC6也是一个对氧化还原敏感的通道,在表达TRPC6的细胞系中TRPC6可以被H2O2激活。     

盐酸贝那普利对2型糖尿病大鼠肾脏VEGF表达的影响

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）——盐酸贝那普利对糖尿病大鼠肾脏VEGF表达的影响。方法采用长期高脂饮食加小剂量链脲菌素（STZ）一次性腹腔注射制作2型糖尿病大鼠模型,光镜及电镜行肾脏形态学检查;RT-PCR测定VEGF mRNA表达,VEGF免疫组化染色观察VEGF蛋白水平变化。结果2型糖尿病大鼠肾脏VEGF mRNA及其蛋白质表达明显高于正常对照组（P〈0.01）,同时大鼠肾脏出现糖尿病肾病的病理变化;ACEI盐酸贝那普利干预后,对照组肾组织VEGF mRNA及其蛋白质表达较模型组降低（P〈0.01）,同时肾脏病理变化也得到明显改善。结论盐酸贝那普利可能通过抑制肾脏VEGF表达,延缓糖尿病肾病的发生。     

血管内皮细胞生长因子与糖尿病肾病

血管内皮细胞生长因子（VEGF），义称血管通透因子（VPF），是一种二聚体糖蛋白。内源性的VEGF是由血管内皮细胞、白细胞、血小板、各种组织细胞分泌的。编码VEGF的基因位于6p染色体（6p21．3）。其蛋白产物有4种变异体，VEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206。人体内多种细胞均有VEGF受体，包括内皮细胞、单核细胞、成纤维细胞、造血细胞、成骨细胞等。受体类型主要包括VEGFR—1（flt—1）和VEGFR-2（KDR／flk—1），其次还有新近发现的neuropilin-1和neuropilin-2两种具体作用不明确的受体。     

瞬时受体电位通道蛋白TRPC6表达与前列腺癌临床特征的相关性研究

目的:探讨前列腺癌中瞬时受体电位通道蛋白TRPC6的表达与其临床病理特征之间的相关性。方法:收集22例良性前列腺增生石蜡组织标本和118例前列腺癌石蜡组织标本,采用免疫组织化学染色技术检测TRPC6蛋白的表达,运用SPSS 17.0软件分析TRPC6蛋白表达水平与前列腺癌病人的临床病理特征的相关性。结果:TRPC6蛋白在前列腺癌组织样本中的表达相比前列腺良性增生组织样本明显上调(P0.05);TRPC6蛋白的高表达与前列腺癌病人高的T、N分期及Gleason评分呈正相关(P0.05)。结论:TRPC6蛋白的高表达与前列腺癌发生和恶性演进显著相关。     

TRPC6与疾病研究进展

TRPC6为瞬时受体电位超家族的成员之一，其在肾脏、脾脏、肺脏等多个组织均有表达，并且参与细胞转移、细胞周期、细胞凋亡等各个重要的细胞生理过程，其突变和表达异常会引起人类的各种疾病。本文就TRPC6与各个疾病的研究进展进行简要综述。     

阿司匹林对人主动脉血管内皮细胞炎性损伤的保护作用

目的：研究阿司匹林（aspirin,Asp）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导人主动脉内皮细胞（human aortic endothelial cells,HAECs）损伤的保护作用,并进一步阐明其对一氧化氮合酶（NOS）及血管内皮生长因子（VEGF）及其相关受体信号的调控。方法：LPS建立HAECs损伤模型。苏木精-伊红（HE）染色观察细胞形态;MTT法、划痕实验分析HAECs损伤修复能力;ELISA测定一氧化氮（NO）含量;Western blot检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、VEGF和血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）蛋白表达。结果：给药12 h后Asp明显改善LPS（5 mg·L^-1）导致的细胞损伤、提高修复能力（P<0.05）,并上调NO分泌量及VEGF、VEGFR-2的蛋白表达（P<0.01）;升高eNOS蛋白的表达（P<0.01）。而给药24 h后阿司匹林显著下调LPS导致的NO分泌量及iNOS、VEGF、VEGFR-2的蛋白表达升高,同时升高eNOS蛋白的表达（P<0.01）。结论：阿司匹林对LPS诱导的血管内皮细胞炎性损伤的保护作用与调节NOS/NO和VEGF及其受体的动态平衡密切相关。     

反义寡脱氧核苷酸抑制人胶质瘤细胞的血管内皮生长因子(英文)

目的:了解反义VEGF寡脱氧核苷酸(ODN)对人胶质细胞瘤系(A172细胞)VEGF表达的抑制作用。方法:应用半定量PCR、免疫组化方法分别了解细胞内VEGF mRNA和蛋白的变化,并利用ELISA检测培养上清液中VEGF蛋白的含量。结果:A172细胞经反义VEGF ODN作用后VEGF mRNA的表达量明显减少,且随其浓度的增加而明显减少,但其表达量不受正义和错义VEGF ODN的影响。当A172细胞经50μmol·L~(-1)反义VEGF ODN作用后,细胞内及上清液内VEGF蛋白水平较对照显著减少。结论:反义VEGF ODN特异地抑制A172细胞VEGF mRNA和蛋白的表达。     

复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾组织VEGF蛋白和mRNA表达的影响研究

目的:探讨复方黄连胶囊(CRCC)对早期糖尿病肾病大鼠肾组织VEGF蛋白和mRNA表达的影响。方法:腹腔一次性注射链脲佐菌素复制早期糖尿病肾病大鼠模型,分为正常对照、模型、消渴丸(0.8g·kg-1)及CRCC低、高剂量(生药含量分别为2.18、4.36g·kg-1)组,灌胃给药每日1次,8周后检测大鼠空腹血糖(FBG)、肌酐、尿素氮;放免分析检测血清胰岛素(Ins)、α1微球蛋白(α1-MG)、β2微球蛋白(β2-MG)水平;免疫组化技术和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织VEGF蛋白和mR-NA表达。结果:与模型组比较,CRCC给药组大鼠FBG、α1-MG、β2-MG显著降低(P<0.01),Ins显著升高(P<0.01),VEGF蛋白和mRNA的表达减弱(P<0.05)。结论:CRCC可显著降低早期糖尿病肾病大鼠肾组织VEGF蛋白和mRNA的过度表达,改善肾功能,延缓糖尿病肾病发展。     

血管内皮生长因子反义cDNA抗血管生成作用的体外实验研究

目的：研究血管内皮生长因子(VEGF)反义cDNA对血管内皮细胞VEGF mRNA和蛋白表达的影响，并探讨其对内皮细胞生长及增殖过程的作用。方法：以脂质体介导vEGF反义cDNA转染血管内皮细胞，通过原位杂交法检测细胞VEGF mRNA、免疫组化法检测细胞VEGF蛋白和PCNA增殖活性、ELISA法检测分泌型VEGF蛋白、MTT法测定细胞生长率，研究VEGF反义cDNA对内皮细胞的作用。结果：转染后血管内皮细胞内源性VEGF mRNA和蛋白的表达、细胞生长及增殖受抑。结论：VEGF反义cDNA转染可降调节血管内皮细胞的VEGF生成并抑制其生长与增殖。     

何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对内皮细胞表达VEGF的影响

目的研究何首乌水溶性成分2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷(ST I)对溶血磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法在ECV304细胞培养基中加入LPC(2.5 mg·L^-1)或LPC与ST I共孵24 h，收集各组条件培养基，用基础酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组条件培养基中VEGF蛋白含量；用原位杂交法、RT-PCR及Realtime RT-PCR法检测LPC对内皮细胞VEGF mRNA的表达及ST I的影响。结果ECV304细胞暴露于LPC后，VEGF蛋白分泌明显增加；加入ST I后VEGF蛋白含量明显降低; LPC可以使ECV304中VEGF mRNA的表达明显升高, 并使VEGF165 mRNA的表达升高；ST I可剂量依赖性地抑制VEGF165 mRNA的高表达。结论LPC能诱导ECV304细胞表达高水平的VEGF蛋白及VEGF mRNA，1×10^-5 mol·L^-1 ST I可抑制LPC的作用，降低VEGF的高表达。     

慢性缺氧时足细胞上调β4-亚基而抑制BK_Ca通道的活性

越来越多的证据表明,足细胞缺氧是肾脏疾病的发病机制之一。在足细胞表达的功能性大电导钙离子激活钾(BKCa)通道是机械敏感通道;但是BKCa通道是否涉及足细胞对慢性缺氧的反应,以及其中可能的反应机制,目前尚不清楚。本文通过膜片钳技术检测到足细胞暴露于2%的O224h后,可以引起明显的BKCa通道电流的降低。分子生物学实验表明,慢性缺氧提高了BKCa通道β4-亚基mRNA和蛋白的表达,但是未提高与孔道形成有关的α-亚基或β3-亚基     

血管内皮生长因子C受体3mRNA在喉鳞状细胞癌中的表达

目的探讨喉鳞状细胞癌组织与细胞中血管内皮生长因子(VEGF)-C、受体3(R-3)mRNA的表达与颈淋巴转移的关系,以期有助于喉鳞癌生长和转移机制的进一步阐明。方法用原位杂交方法检测24例喉鳞癌组织和5例癌旁正常黏膜VEGF-C、VEGFR-3 mRNA的表达,进行比较,并按年龄、T分期、病理分级、淋巴转移进行分组,分别探讨三者与各临床病理参数及淋巴转移的关系。结果原位杂交方法显示:VEGF-C、VEGFR-3 mRNA在喉鳞状细胞癌组织的阳性表达明显高于癌旁正常黏膜;VEGF-C、VEGFR-3 mRNA与患者年龄、T分期、病理分级均无关。同时显示VEGF-C、VEGFR-3 mRNA在淋巴转移组中的阳性表达明显高于未转移组。结论VEGF-C、VEGFR-3 mRNA在喉鳞状细胞癌组织及细胞中的表达增高,可能是喉癌发生发展的原因之一。     

经典瞬时受体电位通道 1在胃癌组织中的表达及其生物学意义

目的 研究胃癌组织中经典瞬时受体电位通道1(transient receptor potential canonical,TRPC1)的表达及TRPC1沉默对胃癌细胞的生物学效应.方法 收集咸宁市中心医院2015年1月至2018年4月93例手术切除的胃癌和癌旁组织标本,免疫组化检测上述标本中TRPC1的表达,分析其与病人临床病理特征的关系.利用TRPC1小分子干扰RNA(siRNA-TRPC1)转染胃癌MGC-803细胞,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证转染效率.MTT法评估siRNA-TRPC1对MGC-803细胞增殖能力的影响.相关试剂盒检测丙二醛、活性氧和超氧化物歧化酶(SOD)水平.流式细胞术检测细胞凋亡水平.结果 与癌旁组织比较,TRPC1在胃癌组织中的表达显著上调(阳性表达率分别为79.6％比20.4％),且TRPC1的高表达与肿瘤的TNM分期(P=0.007)、分化程度(P=0.022)和淋巴结转移(P=0.010)相关;与对照组比较,转染组TRPC1 mRNA和蛋白质水平均显著下降(P<0.05);与对照组比较,siRNA-TRPC1转染组细胞的增殖活性显著下降(P<0.05);与对照组比较,siRNA-TRPC1转染组细胞丙二醛和活性氧水平升高,SOD活性降低(P<0.05);与对照组比较,siRNA-TRPC1转染组细胞凋亡水平明显升高(P<0.05).结论 TRPC1在胃癌中高表达,siRNA沉默TRPC1可抑制胃癌肿瘤细胞的增殖,上调细胞的氧化应激水平,促进肿瘤细胞的凋亡.     

高盐对血管内皮生长因子受体-3+巨噬细胞表型及功能的影响

目的 观察高盐对血管内皮生长因子受体（VEGFR）-3+巨噬细胞表型、淋巴管内皮细胞特性及功能的影响。方法 利用流式分选将小鼠RAW264.7巨噬细胞中VEGFR-3+亚群分选出来，分为Control组、低盐组（LS组，20mmol/L NaCl）和高盐组（HS组，40 mmol/L NaCl）。利用CCK-8法观察不同组VEGFR-3+细胞活性；Real-time PCR检测NaCl干预后VEGFR-3+巨噬细胞表型变化及淋巴管内皮细胞标志物mRNA表达水平；Transwell实验检测各组细胞的迁移功能，流式细胞术检测不同组细胞的吞噬能力。结果 与Control组相比，高盐干预可以使VEGFR-3+巨噬细 胞的白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、CC类趋化因子配体（CCL）2、血管内皮生长因子（VEGF）-C及张力应答性增强子结合蛋白（TonEBP）mRNA表达水平上调（P＜0.05）；HS组在高盐干预24、48 h后细胞活性均显著低于LS组（P＜0.05）；同时，HS组细胞迁移能力及细胞的吞噬能力与Control组相比显著增强，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 高盐可使VEGFR-3+巨噬细胞向M1型巨噬细胞偏移并表现出促淋巴管生成的特性，其迁移及吞噬能力显著增强，为进一步研究该亚群与淋巴管生成及心血管疾病的关系提供了依据。