扶阳宣痹汤对大鼠椎间盘退变及基质金属蛋白酶表达的影响

目的:观察扶阳宣痹汤对退变椎间盘组织病理及相关因子MMP9和MMP13表达的影响,探讨改善椎间盘退变的作用机制.方法:选择大鼠尾椎间盘穿刺Co5/6/7建立椎间盘退变模型,随机分为空白组、模型组、腰痹通组(腰痹通0.34 g/(kg·d))、扶阳宣痹汤低剂量组(8.19 g/(kg·d))、中剂量组(16.38 g/(...     

MMP3、MMP7在腰椎间盘突出组织中的表达及其临床意义

目的：检测腰椎间盘突出症患者突出椎间盘组织中基质金属蛋白酶3（MMP-3）、基质金属蛋白酶7（MMP-7）的表达,为研究椎间盘突出重吸收提供生化依据,以便进一步了解腰椎间盘突出组织重吸收的发生机制。方法：运用免疫组织化学法,通过兔抗人MMP-3、MMP-7的单克隆抗体,对30例突出腰症椎间盘标本进行染色。结果：在突出椎间盘组织中,破裂型比非破裂型MMP-3、MMP-7的阳性表达率更高,其差异有统计学意义。结论：MMP-3、MMP-7与椎间盘突出重吸收可能有关,破裂型比非破裂型更易于重吸收。     

中医药干预基质金属蛋白酶表达治疗椎间盘退变研究进展

椎间盘退变是导致发生慢性腰痛的常见原因之一,作为脊柱疾患的常见病,其临床症状主要以腰背部疼痛及功能受限为主,严重影响着人类的身心与健康。因其发病机制复杂,目前尚未充分阐明,对于椎间盘退变的治疗一直是科学研究者及临床工作者关注的焦点。目前关于椎间盘退变的治疗方式主要包括非手术疗法及手术疗法,这些治疗方式可在一定程度上减轻患者的临床症状,但易诱发新的并发症,难以将椎间盘恢复至正常生理功能。近年来,随着基质金属蛋白酶在椎间盘退变组织中的研究不断深入,发现基质金属蛋白酶可作为椎间盘分子治疗靶标,通过降解椎间盘细胞外基质的含量及成分,调节其在椎间盘组织中的表达水平,以此来达到减缓椎间盘退变的进程甚至逆转椎间盘退变的发生。此治疗方式有望延缓因细胞外基质成分或含量改变而造成的椎间盘退变发生。近年来随着网络药理学及生物信息学研究的不断发展,大量研究者对中医药治疗椎间盘退变进行探究,发现中医药可通过抑制基质金属蛋白酶的表达,以此来减少细胞外基质的降解,从而减轻椎间盘退变的症状及减缓椎间盘退变发病进程。笔者就中医药干预基质金属蛋白酶表达治疗椎间盘退变的研究进展作一综述,以期为中医药应用于防治椎间盘退变提供...     

椎间盘退变防治国外研究近况

椎间盘退变可引起一系列脊柱退行性变及继发病变 ,如椎间隙变窄、脊柱节段不稳、骨赘形成、腰痛、椎间盘突出等。治疗上目前主要采用卧床休息、药物疗法、脊柱手法、牵引、椎间盘切除术及椎体融合术等方法。但这些疗法主要解决的是临床症状 ,并没有延缓或阻止椎间盘退变 ;手术治疗虽然取得了较好的短期疗效 ,但复发率高 ,且术后椎间盘退变加速 ,增加脊柱不稳 ,导致脊柱生物力学功能异常 ;椎体融合术的应用虽然增加了脊柱的力学稳定 ,但同时导致了椎间盘生物力学功能的丢失 ,继发邻近椎间盘退变〔1〕。因此 ,研究延缓或逆转椎间盘退变的疗法…     

腰椎间盘退变动物模型的研究概况

腰椎间盘突出症是临床常见病和多发病，其基本病理变化是椎间盘退变，病因尚不十分清楚。因此，对椎闾盘退变动物模型的研究不仅能够为椎间盘退变的病因学提供参考资料，亦可为此病的药物治疗提供实验对象。为了更好地了解各种动物模型的优缺点，本文对椎间盘退变及突出动物模型进行了比较，分析其与人类可能的相关性。     

葛根提取物对大鼠退变颈椎间盘基质代谢的影响

目的:探讨以葛根素为主要有效成分的葛根提取物对大鼠退变颈椎间盘中基质金属蛋白酶-3(matrixmetalloproteinase-3,MMP-3)和转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)的影响。方法:首先对葛根中葛根素的提取方法进行优化,确定最佳提取工艺。将大鼠随机分为假手术组,模型组,葛根提取物高、中、低剂量(5.6,2.8,1.4 g·kg-1.d-1)组,颈复康颗粒(0.7 g·kg-1.d-1)组,每组各28只。建立动静力失衡大鼠颈椎间盘退变模型,分别在ig 4,8周后,每组取6只标本采用HE染色观察退变椎间盘的特征,其余8只取标本检测退变椎间盘中MMP-3、TGF-β1的含量。结果:形态学观察可见,与模型组相比各药物干预组椎间盘形态结构较完整,纤维环排列比较规则,髓核比较饱满,终板内血管充血情况改善,血管芽多于模型组,并且8周组较4周组变化明显。模型组MMP-3含量明显升高,TGF-β1的含量显著降低,葛根提取物各剂量组与模型组比能显著降低MMP-3含量,增加TGF-β1的含量。并且随着治疗时间的延长,这一效应有增加的趋势。葛根提取物2.8,5.6 g·kg-1.d-1相比差异没有显著性。结论:葛根提取物可能从增加TGF-β1和降低MMP-3的角度,影响椎间盘细胞外基质合成和降解,进而延缓椎间盘退变。     

补肾活血汤对腰椎间盘退变大鼠TNF-α表达的影响

目的:探讨补肾活血汤对腰椎间盘退变大鼠TNF-α表达的影响,为延缓或阻止椎间盘退变提供客观评价指标。方法:将72只大鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组24只,采用皮下注射D-半乳糖法建立衰老大鼠椎间盘退变模型,造模成功后中药组予补肾活血汤灌胃,空白组与模型组予蒸馏水灌胃。连续给药4周后以Elisa法检测大鼠椎间盘组织中TNF-α的含量,以光密度OD值表示。结果:与空白组比较,模型组TNF-α含量明显升高,差异有统计学意义(P0.05);中药组TNF-α含量低于模型组,两组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:补肾活血汤可能是通过抑制大鼠退变腰椎间盘组织中TNF-α的表达来减缓椎间盘的退变过程。     

“夹脊”电针对兔退变腰椎间盘组织中基质金属蛋白酶13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1表达的影响

目的:研究"夹脊"电针对兔退变的腰椎间盘中基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响,探讨夹脊电针治疗腰椎间盘退行性病变的作用机制。方法:36只清洁级成年新西兰大白兔随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组,每组9只。采用克氏针横穿椎体后椎体间加压法复制椎间盘退变模型。电针组针刺L 4、L 5"夹脊"穴28d。各组于第1、28、56天应用Western blot方法检测椎间盘组织中MMP-13蛋白的表达,免疫荧光技术检测椎间盘组织中TIMP-1蛋白的表达。结果:建立模型后,MMP-13蛋白表达增强(P0.01);电针进行干预后可降低MMP-13的表达(P0.01)。TIMP-1在荧光激发下,胞质清晰,可见红色荧光,其中各组第1天和正常组、假手术组的第28、56天均呈现强阳性,模型组第56天阳性细胞最少、红色荧光最弱(P0.01),而电针组在第56天阳性细胞升高(P0.01)。结论:电针"夹脊"穴可以通过降低椎间盘组织中MMP-13和增强TIMP-1的表达,纠正基质合成与分解代谢失衡,达到防治椎间盘退变的效果。     

回医烙灸疗法对大鼠脊髓损伤后神经功能的影响

目的:探讨回医烙灸疗法对脊髓损伤后大鼠神经功能修复的影响。方法:采用Allen's法制备急性脊髓损伤模型。分为假手术组(A组)、模型组(B组)、激素组(C组)、造模2 h烙灸组(D组)、造模6 h烙灸组(E组),其中50只于第7、14、28、42、56天采用改良Ravlin斜板实验及皮层体感诱发电位CSEP检测。另外25只取损伤脊髓组织,电镜观察脊髓超微结构及TUNEL染色细胞凋亡评分。结果:Ravlin、CSEP、电镜观察及TUNEL染色细胞凋亡评分表明D、E组效果明显优于B、C组(P<0.05),且D组疗效最显著。结论:回医烙灸疗法对脊髓损伤大鼠神经功能的恢复有促进作用,且前期烙灸干预的效果好于后期干预。     

回医烙灸疗法对大鼠脊髓损伤中期基因表达谱的影响

目的:探讨回医烙灸疗法对大鼠脊髓损伤中期基因表达谱的影响。方法:采用Allen's法制备急性脊髓损伤模型。分为假手术组(A组)、损伤组(B组)、烙灸组(C组)。应用表达谱基因芯片对各组大鼠脊髓损伤后14天的基因表达谱分析,并用RT-PCR对其中8条基因表达水平验证。结果烙灸组基因表达差异显著,上调基因主要包括多种蛋白、转录因子、趋化因子及信号通路等。下调基因包括离子通道,多种蛋白、转录因子、核苷酸、多种酶等。结论:回医烙灸疗法能显著调节脊髓损伤中期大鼠基因表达的变化,其中一些基因与神经组织保护、修复、生长和再生密切相关,而达到减少脊髓继发性损伤的目的。     

腰椎间盘退变相关因素的研究进展

腰椎间盘退变是导致腰椎疾患发生的重要原因之一,笔者认为年龄、负重、遗传等相关因素可影响腰椎间盘退变进程,并加速其退变。本文对年龄、负重、遗传等相关因素进行分析,可帮助进一步认识腰椎间盘退变。     

蒙古族药忠伦阿汤对CIA大鼠MMP-3,MMP-9表达的影响

目的:观察忠伦阿汤的有效成分对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的基质金属蛋白酶-3(MMP-3),MMP-9的影响,探讨其治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法:采用Ⅱ型胶原诱导建立关节炎大鼠模型,并设正常组,模型组,雷公藤多苷片组(9.45 mg·kg-1),忠伦阿汤高、中、低剂量组(5.4,2.7,1.35 g·kg-1),连续给药4周,苏木素-伊红(HE)观察滑膜组织的组织病理形态,酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠血清MMP-3与MMP-9的含量;免疫组化与蛋白质免疫印迹(Western blot)检测滑膜组织MMP-3与MMP-9的表达。结果:模型组血清MMP-3及MMP-9的含量显著高于正常组(P0.01);各用药组MMP-3和MMP-9表达较模型组均有不同程度的降低(P0.01),忠伦阿汤高剂量组与雷公藤多苷片组比较无显著差异;免疫组化结果显示MMP-3,MMP-9阳性表达模型组较正常组明显升高(P0.01),雷公藤多苷片组及忠伦阿汤高剂量组较模型组MMP-3,MMP-9蛋白表达明显降低,有统计学意义(P0.05),Western blot分析结果表明用药组MMP-3,MMP-9的蛋白表达明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:忠伦阿汤能明显减少CIA大鼠血清中MMP-3及MMP-9水平,降低滑膜组织的表达,可能是其治疗RA的作用机制。     

痹胶囊对实验性骨关节炎大鼠MMP-3和TIMP-1的影响

[目的]观察痹褀胶囊对实验性骨关节炎(OA)大鼠软骨、关节液及血清基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白抑制酶-1(TIMP-1)的影响,探讨痹褀胶囊保护关节软骨的作用机制。[方法]选Wistar大鼠,木瓜蛋白酶膝关节注射造模,痹祺胶囊灌胃治疗8周,酶联免疫吸附(ELISA)法检测软骨、关节液及血清MMP-3、TIMP-1的活性。[结果]痹祺胶囊能提高模鼠软骨TIMP-1的活性(P<0.01),降低关节液MMP-3的活性,使软骨、关节液MMP-3/TIMP-1的比值均降低(P<0.01);对血清MMP-3、TIMP-1及MMP-3/TIMP-1比值无明显影响(P>0.05)。[结论]痹褀胶囊保护关节软骨的作用可能是通过提高软骨TIMP-1的活性,降低关节液MMP-3的活性,使软骨、关节液MMP-3/TIMP-1的比值减小,从而抑制MMP-3对关节软骨基质蛋白多糖的裂解活性而起保护作用的。     

淫羊藿苷对家兔腰椎间盘退变的影响

目的:观察淫羊藿苷对退变家兔腰椎间盘中基质金属蛋白酶13(MMP-13)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)以及细胞凋亡因子Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:30只新西兰大白兔随机分为空白组、模型组和实验组,每组各10只。用髓核穿刺抽吸法复制腰椎间盘退变模型。术后4周,实验组用淫羊藿苷(3 mg/kg·d)灌胃,空白组和模型组用等量0. 9%氯化钠注射液灌胃,连续4周。分别于术后4周和术后8周采用免疫组化法检测椎间盘中MMP-13、TIMP-1水平,Western blot检测椎间盘中Bax、Bcl-2水平。结果:MMP-13、TIMP-1、Bax、Bcl-2表达水平实验组术后4周及模型组术后4、8周与同时期空白组相比,实验组术后8周Bax、Bcl-2表达水平与模型组同时期比较,模型组、实验组术后8周Bax、Bcl-2表达水平与术后4周组内比较,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论:淫羊藿苷可通过下调退变椎间盘中MMP-13、Bax的表达,上调TIMP-1、Bcl-2的表达,而起到防治腰椎间盘退变的作用。     

穴位埋线对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

目的 探讨穴位埋线治疗类风湿性关节炎(RA)的可能机制,为穴位埋线治疗RA在临床上的运用提供新的理论和实验依据.方法 采用弗氏完全佐剂(FCA)复制出佐剂性关节炎(AA)大鼠模型,将SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、穴位埋线组.选用足三里、肾俞穴采用穴位埋线的方法进行治疗.应用免疫组织化学的方法,检测MMP-2、MMP-9在局部关节滑膜组织中的表达.结果 治疗后,与模型组比较,埋线组AA大鼠滑膜细胞MMP-2、MMP-9的平均光密度值显著增高(P＜0.05),免疫阳性细胞数显著减少(P＜0.01).结论 穴位埋线通过下调MMP-2、MMP-9的表达,减轻其参与或介导的对滑膜组织造成的损害,从而控制关节滑膜炎,阻止关节软骨和骨损害的发生.     

优化活血利水方对大鼠自体髓核移植后移植髓核MMP-3、TIMP-1表达的影响

目的:建立自体髓核移植致大鼠非压迫腰椎间盘髓核突出神经根性疼痛模型,探讨优化活血利水方对移植髓核MMP-3、TIMP-1表达的影响。方法:40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、阿斯匹林组,建立大鼠自体髓核移植致腰5神经根性痛模型,造模后1周起各组分别予生理盐水1.82mL、生理盐水1.82mL、中药汤剂1.82mL、阿斯匹林1.82mL(0.1g.kg-1.d-1),每日1次,连续用药4周。第31天取移植髓核检测MMP-3、TIMP-1mRNA及蛋白的表达。结果:正常髓核中MMP-3、TIMP-1mRNA及蛋白表达量很少,各实验组移植髓核中MMP-3、TIMP-1mRNA及蛋白表达量与对照组比较均显著增多(P<0.0l)。与模型组比较,中药组、西药组MMP-3mRNA及蛋白表达量显著减少(P<0.01),TIMP-1mRNA及蛋白相对表达量显著增多(P<0.01)。中、西药组比较,两组间存在显著性差异,中药组MMP-3mRNA及蛋白显著减少,TIMP-1mRNA及蛋白显著增多。结论:优化活血利水方可以显著下调移植髓核MMP-3mRNA及其蛋白表达,上调TIMP-1mRNA及其蛋白表达,减轻椎间盘的退变,促进椎间盘的修复。     

丹参及其相关制剂对退变腰椎间盘突出症作用概况

腰椎间盘突出症（Lumbar Disc Herniation,LDH）是腰椎间盘发生退行性病变以后,在外力的作用下,纤维环破裂、髓核突出刺激或压迫神经根、血管等组织所引起的腰痛,并且伴有坐骨神经放射性疼痛等症状为特征的一种疾病。临床研究表明,神经根的机械压迫并非是发病的唯一原因,     

补骨脂素对大鼠腰椎间盘软骨细胞炎性退变的影响

目的探讨补骨脂素延缓椎间盘退变的内在机制。方法体外分离1月龄雌性SD大鼠腰椎间盘软骨板,采用组织块法培养,通过HE染色、甲苯胺蓝染色和免疫荧光进行细胞辨别、鉴定。通过细胞增殖实验和RT-PCR法进行补骨脂素最佳浓度筛选。取第3代生长状况良好的椎间盘软骨细胞,以每孔1×105的浓度将细胞置于6孔板内,分为空白对照组、白细胞介素-1β(IL-1β)诱导组(10ng/ml)、补骨脂素组(IL-1β10ng/ml+补骨脂素最佳浓度),每组3孔,检测各组Ⅱ型胶原基因(Col2a1)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS-5)、IL-1β和环氧化酶-2(COX-2)mRNA的表达。结果补骨脂素浓度在100、150、200、400μM时,细胞活性较浓度为0时明显减弱(P0.01)。补骨脂素在12.5、25μM时较浓度为0时能上调Col2a1 mRNA表达(P0.05或P0.01)。补骨脂素组Aggrecan mRNA高于空白对照组(P0.01);与IL-1β诱导组比较,补骨脂素组Col2a1 mRNA升高,ADAMTS-5 mRNA降低(P0.01)。结论补骨脂素可以一定程度缓解IL-1β诱导的椎间盘软骨细胞的退变进程,并对IL-1β炎性信号通路的相关因子产生影响。     

不同针灸方法对KOA模型大鼠软骨损伤生物标志物MMP-1、MMP-3、TIMP-1的影响

摘要：目的：观察比较不同针灸方法对KOA模型大鼠MMP-1、MMP-3、TIMP-1的影响。方法：将体重180-200g的SPF级雄性SD大鼠50只,适应性饲养7天后随机分为正常组（N）、模型组（M）、温针组（W）、电针组（D）、手针组（S）五组,每组10只。N组不作任何处理,其余四组腹腔注射戊巴比妥钠（1%,0.04ml/g）麻醉后,1mg单碘乙酸盐（MIA）溶于50μL 9%的无菌生理盐水,右膝关节注射造模,周期14天,造模前后进行行为学Lequesne MG评分检测。N、M组不作任何干预,其余三组对鹤顶、阳陵泉穴分别进行针刺、电针、温针干预,手针组0.25*25mm针灸针,刺入约5mm平补平泻手法,200 r/min,1min,留针20 min,10 min行针1次;电针组平补平泻后接电针,疏波,1mA,2Hz,20min/次;温针组平补平泻后,将直径5mm艾柱置于针柄,20min/次;三组均隔天干预,共28天。干预前后进行行为学机械刺激回缩阈值检测,28天后戊巴比妥钠麻醉,生理盐水心脏灌注取关节软骨和关节进行Western blot、免疫组化检测。结果：行为学Lequesne MG评分检测显示,造模前各组大鼠膝关节评分差异无统计学意义（P>0.05）,造模后除N组外,其余四组评分显著高于造模前,差异有统计学意义（P<0.05）。机械刺激回缩阈值检测显示,干预前M、W、D、S组与N组相比回缩阈值均降低,其结果有统计学意义（P<0.05）。干预后D组较M组升高,差异有统计学意义（P<0.05）。免疫组化检测关节软骨显示,MMP-1阳性表达M组较N组升高（P<0.05）,D、W、S组较M组降低（P<0.05）;D组较W组降低（P<0.05）,MMP-3阳性表达M组较N组升高（P<0.05）,D、W、S组较M组降低（P<0.05）,D组较S、W组降低（P<0.05）;T1MP-1阳性表达N、M、W、S组较D组降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,S组较M组升高（P<0.05）。Western blot检测软骨显示,MMP-1蛋白表达M组较N组升高（P<0.05）,D、W、S组较M组降低（P<0.05）,W组较D组升高（P<0.05）;MMP-3蛋白表达M组较N组升高（P<0.05）,D、S组较M组降低（P<0.05）;T1MP-1蛋白表达D、S、W组较M组升高（P<0.05）。其余结果无统计学意义（P>0.05）。结论：电针、温针、手针三种方法可有效改善KOA模型大鼠关节软骨损伤,可能通过升高TIMP-1的表达从而降低MMP-1、MMP-3的表达,相比之下电针更有利于调节上升TIMP-1且抑制MMP-1、MMP-3的表达,手针方法次之,温针效果则略逊于前两者。     

补肾活血法对退变腰椎间盘动物模型NO、PG表达的影响

目的：建立一种新的椎间盘退变模型并在其形成过程中观察蛋白多糖（PG）、一氧化氮（NO）含量的变化,探讨补肾活血法对腰椎间盘退变动物模型PG、NO表达的影响及作用机理。方法：40只SD大鼠随机分为4组,正常对照组（A组）、模型对照组（B组）、中药治疗组（C组）和西药治疗组（D组）,每组各10只动物。将B、C、D三组动物通过手术制作腰椎间盘退变动物模型,造模后3天分别给予生理盐水、补肾活血中药和芬必得灌胃治疗6周。处死全部动物,取出椎间盘组织,分别测定PG和NO的含量。结果：B组与A组比较,椎间盘中PG含量明显降低,而NO含量明显升高,有非常显著性差异（P〈0．01）;且NO与PG含量的变化存在较强的直线相关关系（P〈0．01）;C组和D组对PG含量有明显升高的作用（P〈0．01）,对No含量却有明显降低的作用（P〈0．01）;C组和D组比较,PG和No含量变化不大,无显著性差异（P〉0．05）。结论：一氧化氮参与了椎间盘的退变过程。补肾活血中药对腰椎间盘退变有明显的预防和治疗作用,补肾活血法防治腰椎间盘退变的机制可能与减缓椎间盘基质中的蛋白多糖降解、减轻退变炎症反应程度和改善局部微循环、防止自由基过量产生等有关。