阿托伐他汀调控PERK/eIF2α/CHOP通路减轻造影剂诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡

目的研究造影剂肾病大鼠肾脏中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网调节激酶(PERK)、真核起始因子2α(eIF2α)及C/EBP同源蛋白质(CHOP)的表达情况,探讨内质网应激在造影剂肾病发病中的作用及阿托伐他汀的干预作用。 方法60只大鼠随机分为4组：对照组、模型组和高、低剂量阿托伐他汀组(80 mg,40 mg),每组15只。分别于注射造影剂后24、48、72 h留取血清;检测各组大鼠的血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr);TUNEL法及Western印迹法测casepase-3的表达检测肾小管上皮细胞凋亡;免疫组化和Western印迹法检测各组大鼠肾组织GRP78、p-eIF2α、p-PERK及CHOP的表达。 结果与对照组相比,模型组大鼠BUN、Scr显著升高,细胞凋亡严重,GRP78、p-eIF2α、p-PERK及CHOP的表达均显著升高(P< 0.05);与模型组相比,高、低剂量阿托伐他汀组,BUN、Scr显著下降,凋亡指数降低,GRP78、p-eIF2α、p-PERK及CHOP的表达显著下调,但仍高于对照组,差异均达到统计学意义(P<0.05);高、低剂量阿托伐他汀组之间上述各指标差异均不显著。 结论PERK/eIF2α/CHOP通路介导的内质网应激可能参与大鼠造影剂肾病的发生发展;阿托伐他汀在造影剂诱导的肾脏损伤中发挥保护作用,这可能与其调节PERK/eIF2α/CHOP通路,从而减轻内质网应激有关。     

丙泊酚对胃癌细胞凋亡时GRP78-ATF4-CHOP信号通路的影响

目的评价丙泊酚对胃癌细胞凋亡时葡萄糖调节蛋白78(GRP78)-活化转录因子4(ATF4)-C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路的影响。方法传代培养至对数期的MGC-803细胞,采用随机数字表法分为2组(n=15):对照组(C组)和丙泊酚组(P组)。C组细胞在37 ℃、5%CO2条件下正常培养;P组细胞待贴壁生长至70%～90%时,加入丙泊酚,终浓度为5 μg/ml,24 h时采用流式细胞术检测细胞凋亡率,qPCR法检测GRP78、ATF4和CHOP的mRNA表达,Western blot法检测GRP78、ATF4和CHOP的表达。结果与C组比较,P组细胞凋亡率升高,GRP78、ATF4、CHOP及其mRNA表达上调(P<0.05)。结论丙泊酚促进胃癌细胞凋亡的机制与激活GRP78-ATF4-CHOP信号通路有关。     

乳化异氟醚对大鼠肺缺血-再灌注内质网应激的影响

目的探索乳化异氟醚预处理对大鼠肺缺血-再灌注损伤诱导内质网应激的影响。方法雄性SD大鼠32只随机分成四组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、乳化异氟醚预处理(EI组)、脂肪乳组(IL组)。S组腹腔注射生理盐水10.5ml/kg,24h后仅开胸游离左肺门,不进行阻断左肺门;IR组、EI组和IL组分别腹腔注射生理盐水、8%乳化异氟醚10.5 ml/kg、30%脂肪乳10.5ml/kg,24h后通过阻断左肺门1h后再灌注2h建立大鼠原位肺缺血-再灌注损伤模型。于再灌注2h即刻经左心室采集血样检测PaO2、PaCO2值;取左肺组织测湿重/干重比(W/D),通过HE染色评估肺组织病理损伤程度;通过RT-PCR和Western blot检测肺组织中GRP78和CHOP的表达水平。结果与S组比较,IR组、EI组和IL组PaCO2、肺组织GRP78、CHOP mRNA和CHOP蛋白表达明显升高,PaO2明显降低(P0.05),GRP78蛋白表达水平差异无统计学意义;与IR组比较,EI组、IL组PaCO2、肺组织GRP78mRNA、CHOP mRNA和CHOP蛋白表达明显降低、PaO2明显升高(P0.05),GRP78蛋白表达水平差异无统计学意义。与IL组比较,EI组PaCO2、肺组织W/D、GRP78、CHOP mRNA和CHOP蛋白表达明显降低、PaO2明显升高(P0.05),GRP78蛋白表达水平差异无统计学意义。病理显示EI组和IL组肺损伤轻于IR组,EI组肺损伤轻于IL组。结论乳化异氟醚和脂肪乳预处理均可减轻大鼠术后肺缺血-再灌注损伤引起的过度内质网应激,并且乳化异氟醚的保护效果更显著。     

肾小管上皮细胞内质网应激时NGAL表达改变的调控机制研究

目的:探讨人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)发生内质网应激时,NGAL表达增加的上游调控机制。方法:将HK-2细胞分为对照组(正常HK-2细胞),TG(毒胡萝卜素,thapsigargin)组(5μmol/L TG处理8 h),单纯转染组(siRNAATF4试剂转染24 h),转染+TG组(siRNA-ATF4试剂转染24 h后,5μmol/L TG处理8 h),阴性对照组(siRNA-阴性对照物转染24 h),DMSO组(5μmol/L DMSO处理8 h)。采用Western blot检测各组细胞内质网源性转录因子(CHOP)、内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、中性粒细胞明胶酶相关性载脂蛋白(NGAL)、激活转录因子4(ATF4)的表达,采用Real-time PCR方法测得ATF4mRNA、NGALmRNA表达量。结果:与对照组相比,TG组细胞NGAL、ATF4、ATF4mRNA、NGALmRNA表达量显著提高(P <0. 05),而转染+TG组、单纯转染组、阴性对照组、DMSO组中ATF4及NGAL差异无统计学意义(P> 0. 05)。与TG组相比,转染+TG组ATF4、NGAL、ATF4mRNA及NGALmRNA表达量呈显著降低趋势(P <0. 05)。在TG组与转染+TG组细胞中,CHOP和GRP78呈过表达状态(P <0. 05),而转染+TG组细胞CHOP和GRP78提升趋势明显低于TG组细胞(P <0. 05)。结论:(1) TG可诱导人肾小管上皮HK-2细胞发生内质网应激反应。(2) HK-2细胞发生内质网应激反应时,抑制ATF4表达会引起NGAL降低,提示ATF4是NGAL表达的上游调控因子。(3) HK-2细胞发生内质网应激反应时,抑制ATF4不能阻止CHOP和GRP78发生过表达,但可降低其升高程度,提示ATF4及NGAL降低可能对内质网应激反应介导HK-2细胞损伤起到一定的缓解作用。     

祛痰通络汤对糖尿病大鼠肾组织内质网应激相关分子GRP78和CHOP表达的影响

目的:观察祛痰通络汤对糖尿病大鼠肾组织中内质网应激相关分子GRP78和CHOP表达的影响。方法:高糖高脂饲料联合腹腔注射STZ制备糖尿病模型,随机分为4组,分别为正常对照组、模型组、祛痰通络汤组、四苯基丁酸组,治疗8周。观察各组24 h尿蛋白定量、肾脏病理学变化;免疫组化和western-blot检测肾组织内质网应激相关蛋白GRP78,CHOP的表达。结果:祛痰通络汤降低尿蛋白,减轻病理改变;模型组肾组织的GRP78、CHOP表达明显升高(P0.05),祛痰通络汤组GRP78、CHOP表达明显低于模型组(P0.05)。结论:糖尿病大鼠肾脏中GRP78、CHOP表达明显增强,祛痰通络汤降低内质网应激,可能是其肾脏保护作用的重要机制。     

通络益肾方对高糖诱导肾小球系膜细胞GRP78、Caspase-12表达的影响

目的:观察通络益肾方含药血清对高糖培养下大鼠系膜细胞(MC)增殖及GRP78、Caspase-12 mRNA表达的影响,从内质网应激角度探讨该方的肾保护机制。方法:肾小球MC随机分为6组:正常组、模型组、通络益肾方大、中、小剂量组及西药组,分别培养12 h、24 h、48 h和72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MC增殖情况,RT-PCR检测各组MC、GRP78、Caspase-12 mRNA的表达水平。结果:(1)模型组MC在各时间点均明显增殖(P0.05或P0.01);与模型组比较,中药大、中、小剂量组在24 h、48 h、72 h均能抑制MC增殖(均P0.01),其中以大剂量组效果最佳(P0.01);西药组MC增殖在12 h、24 h低于中药大剂量组(均P0.05),而在48 h、72 h两组之间差异无统计学意义(P0.05)。(2)与正常组比较,模型组GRP78 mRNA在24 h、48 h持续升高,而72 h明显下降(P0.05,P0.01)。四个给药组之间GRP78 mRNA比较,48 h时呈西药组中药小剂量组中剂量组大剂量组,72 h时呈西药组中药小剂量组大剂量组(均P0.05,P0.01)。同时各给药组GRP78 mRNA表达呈现出从24 h、48 h到72 h持续缓慢增加的趋势,表明药物可延缓GRP78增幅、延缓ERS而持续发挥其保护细胞的作用。(3)Caspase-12 mRNA结果显示:与正常组比较,模型组48 h、72 h时Caspase-12mRNA明显增加(P0.01),而各给药组Caspase-12 mRNA均较模型组明显下降(P0.05或P0.01),48 h时三个中药组Caspase-12 mRNA表达明显低于西药组(P0.05);72 h时三个中药组呈小剂量组中剂量组大剂量组(P0.01或P0.05),提示casspase-12 mRNA表达与给药剂量呈负相关。结论:高糖条件下大鼠肾小球MC内质网应激明显,通络益肾方可明显抑制MC的增殖,推测其作用机制与延缓GRP78增幅、下调Caspase-12 mRNA的表达有关。     

内质网应激在白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的 探讨内质网应激在白蛋白超负荷诱导肾小管上皮细胞凋亡中的作用和分子机制。 方法 Western印迹法检测肾小管上皮细胞（HKC）内质网伴侣蛋白糖调节蛋白78（GRP78）和内质网应激蛋白CHOP（CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白,也称为GADD153）表达与人血清白蛋白（HSA）作用时间和浓度的关系。实时荧光定量PCR法检测CHOP siRNA对CHOP基因转录的抑制情况。Western印迹法检测CHOP siRNA转染后CHOP蛋白水平的变化。膜联蛋白V和碘化丙锭（Annexin V-FITC和PI）双染的流式细胞术检测白蛋白诱导HKC凋亡的变化以及CHOP siRNA对HKC凋亡的影响。 结果 （1）分别以0、5、10、20 g/L白蛋白作用于HKC 24 h,GRP78、CHOP蛋白表达及细胞凋亡均随白蛋白浓度的增加而上调,各组间差异有统计学意义（P ＜ 0.01）;以20 g/L白蛋白分别作用于HKC 0、6、12、24、36 h,GRP78蛋白表达在6 h即显著增加,CHOP蛋白表达及HKC凋亡则在12 h显著增加,各组间差异有统计学意义（P ＜ 0.01）。（2）CHOP siRNA显著抑制白蛋白诱导的CHOP 基因转录及蛋白表达（P ＜ 0.01）,对白蛋白诱导的HKC凋亡有显著抑制作用（P ＜ 0.01）。 结论 白蛋白超负荷可诱导肾小管上皮细胞发生内质网应激,并通过上调促凋亡因子CHOP表达引起肾小管上皮细胞内质网相关的细胞凋亡,这可能是蛋白尿引起肾小管间质病变的重要机制。     

对比剂肾病大鼠肾脏GRP78与caspase-12表达及胰激肽原酶干预研究

目的:研究对比剂肾病大鼠肾脏中葡萄糖调节蛋白(glucose-regulated protein 78,GRP78)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(caspase-12)的表达情况,探讨内质网应激在对比剂肾病发生发展中的作用,及胰激肽原酶的干预效果。方法:将84只大鼠随机分为3组:假手术组(D组),模型组(Z组),胰激肽原酶干预组(Y组)。自造模前3 d至处死日当天,Y组每天给予胰激肽原酶(15 U/kg)灌胃,D组及Z组每天给予等量生理盐水灌胃。分别于造模后12 h,24 h,48 h,72 h处死部分大鼠,观察各组大鼠血清尿素氮、肌酐水平变化;HE染色观察肾脏病理改变;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测肾脏细胞凋亡情况;RT-PCR检测肾脏GRP78 mRNA及caspase-12 mRNA的表达情况;免疫组化和Western-blot观察各组大鼠肾脏GRP78及caspase-12蛋白表达情况。结果:D组GRP78 mRNA、caspase-12 mRNA及GRP78、caspase-12几乎无表达,且肾组织无明显病理损伤及细胞凋亡;Z组病理变化明显,细胞凋亡较重,且以上指标均明显升高;Y组病理变化、细胞凋亡及GRP78 mRNA、caspase-12 mRNA、GRP78、caspase-12升高均较Z组明显减轻(P0.05),但仍高于D组(P0.05)。结论:内质网应激参与大鼠对比剂肾病的发生发展,胰激肽原酶可能通过减少caspase-12表达减轻内质网应激,发挥肾脏保护作用。     

内质网应激在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激途径在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞损伤中的作用。方法:42只雄性Wistar大鼠于鼠龄4周末随机化分为两组:对照组(12只)和高脂组(30只),分别给予普通饲料和高脂高热量饲料喂养建立高脂血症大鼠模型。第10周末(即鼠龄14周)全自动生化分析仪检测外周血甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,TUNEL法检测睾丸组织中凋亡生殖细胞,免疫组化法检测睾丸组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及caspase-12蛋白表达,RT-PCR法检测睾丸组织GRP78及caspase-12 mRNA的表达。结果:高脂组大鼠血清TG、TC[(3.00±0.92)mmol/L、(3.04±0.39)mmol/L]较对照组[(1.43±0.41)mmol/L、(1.55±0.23)mmol/L]显著升高(P0.01),睾丸生殖细胞凋亡指数[(37.17±2.74)%]较对照组[(5.16±0.81)%]显著升高(P0.01);以精原细胞和精母细胞凋亡为主。高脂组睾丸组织中GRP78蛋白(0.32±0.03)及caspase-12蛋白(0.34±0.02)表达较对照组(0.19±0.01、0.12±0.01)明显升高(P0.01),GRP78 mRNA及caspase-12 mRNA(0.86±0.05、0.87±0.01)较对照组(0.37±0.03、0.34±0.03)明显增加(P0.01)。结论:高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡增多;内质网应激可能是高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡的主要途径之一。     

内质网应激反应在严重烧伤大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress,ERS)介导的凋亡是真核细胞重要凋亡途径之一,通过观察严重烧伤大鼠心肌ERS不同通路蛋白表达变化,探讨其在心肌细胞凋亡中的可能作用。方法雄性7周龄Wistar大鼠64只,体重200～220 g;随机分为两组,每组32只。实验组大鼠背部制备30%体表面积Ⅲ度烫伤;对照组制备假伤模型。伤后1、4、7、14 d两组各处死8只大鼠取心肌组织,透射电镜观察心肌超微结构变化,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot检测ERS相关蛋白,如葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP 78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12(Caspase 12)剪切体表达变化。结果大鼠均存活至实验结束。透射电镜观察示实验组大鼠心肌细胞呈凋亡改变。伤后各时间点实验组心肌细胞凋亡指数均明显高于对照组(P<0.05),伤后1、4、7 d凋亡指数逐渐升高,14 d时下降,各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组心肌细胞GRP78、CHOP及Caspase 12剪切体蛋白表达持续升高,其中各时间点GRP 78及Caspase 12剪切体表达均较对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);除伤后1 d外,其余各时间点实验组CHOP蛋白表达均较对照组升高(P<0.05)。结论严重烧伤后大鼠心肌发生ERS,其中CHOP、Caspase 12介导的凋亡通路活化,ERS可能是心肌细胞凋亡的途径之一。     

姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注诱导内质网应激的影响

目的 探讨姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注诱导内质网应激的影响.方法 雄性SD大鼠144只,体重200～250 g,月龄2～3月,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=36):假手术组(S组)仅分离双侧颈总动脉;缺血再灌注组(I/R组)采用四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型;姜黄素组(Cur组)于缺血前1 h腹腔注射姜黄素200 mg/kg;溶媒对照组(VC组)给予等容量姜黄素溶媒--0.5%羧甲基纤维素钠.于再灌注12 h、1、3.7 d时取9只大鼠,取脑,分离海马,采用TUNEL法标记凋亡神经元,计算凋亡指数;采用Western blot法检测海马神经元葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长停止和DNA损伤诱导基因153(GADDl53)和半胱氨酸天冬氨酸酶-12(caspase-12)的表达水平.结果 与S组比较,I/R组和VC组凋亡指数升高,GRP78和caspase-12表达上调(P<0.05);与I/R组比较,Cur组凋亡指数降低,GRP78表达上调,caspase-12表达下调(P<0.05).I/R组、VC组和Cur组间GADD153表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 姜黄素预先给药可通过抑制内质网应激途径介导的细胞凋亡减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤,其机制与海马GRP78表达上调和caspase-12表达下调有关.     

姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注诱导内质网应激的影响

目的 探讨姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注诱导内质网应激的影响.方法 雄性SD大鼠144只,体重200～250 g,月龄2～3月,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=36):假手术组(S组)仅分离双侧颈总动脉;缺血再灌注组(I/R组)采用四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型;姜黄素组(Cur组)于缺血前1 h腹腔注射姜黄素200 mg/kg;溶媒对照组(VC组)给予等容量姜黄素溶媒--0.5%羧甲基纤维素钠.于再灌注12 h、1、3.7 d时取9只大鼠,取脑,分离海马,采用TUNEL法标记凋亡神经元,计算凋亡指数;采用Western blot法检测海马神经元葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长停止和DNA损伤诱导基因153(GADDl53)和半胱氨酸天冬氨酸酶-12(caspase-12)的表达水平.结果 与S组比较,I/R组和VC组凋亡指数升高,GRP78和caspase-12表达上调(P<0.05);与I/R组比较,Cur组凋亡指数降低,GRP78表达上调,caspase-12表达下调(P<0.05).I/R组、VC组和Cur组间GADD153表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 姜黄素预先给药可通过抑制内质网应激途径介导的细胞凋亡减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤,其机制与海马GRP78表达上调和caspase-12表达下调有关.     

内质网应激在高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤中的作用

目的研究内质网应激在高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤中的作用。方法在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中培养小鼠神经瘤母细胞N2a,按照接种密度每毫升105个将细胞接种于培养板中。采用随机数字分组法将细胞分为四组:正常糖对照组(NC组)、正常糖缺氧-复氧组(NH组)、高糖对照组(HC组)、高糖缺氧-复氧组(HH组)。待细胞贴壁后,将DMEM/F12培养基更换为高糖培养基,孵育48h,造高糖孵育模型。在缺氧小室中缺氧3h后,再转入正常氧孵育箱中复氧2h,造缺氧-复氧损伤模型。NC组未作处理;NH组行缺氧-复氧处理;HC组行高糖孵育处理;HH组先行高糖孵育48h后,再作缺氧-复氧处理。采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞GRP78、CHOP蛋白含量。结果与NC组和HC组比较,NH组和HH组细胞活力明显减弱,凋亡率明显升高,GRP78、CHOP蛋白含量明显增多(P0.01);与NH组比较,HH组细胞活力明显减弱,凋亡率明显升高,GRP78、CHOP蛋白含量明显增多(P0.05)。结论高糖培养加重神经细胞缺氧-复氧损伤,可能与内质网应激标志性蛋白GRP78蛋白含量增多和促凋亡转录因子CHOP介导的细胞凋亡相关。     

MicroRNA-148b influences high glucose-induced endoplasmic reticulum stress in rat mesangial cell by targeting AMPKα1

Objective To observe the expression of microRNA-148b (miR-148b) induced by high glucose in rat mesangial cells, and to explore its effect on its target gene AMP-activated protein kinase α1 (AMPKα1) and extracellular matrix excretion. Methods Rat mesangial cells were divided into 3 groups: normal glucose (NG, 5.5 mmol/L glucose) group, hypertonic (MA, 5.5 mmol/L glucose+ 19.5 mmol/L mannitol) group and high-glucose (HG, 25.0 mmol/L glucose) group. MiR-148b expression was detected by real time PCR. Then miR-148b inhibitor was transfected to rat mesangial cells. Their protein expressions of AMPKα1, glucose regulated protein 78 (GRP78), C/EBP homologous protein (CHOP), fibronectin (FN) and collagen Ⅳ were detected by Western blotting. The expression of AMPKα1 mRNA was detected by real time PCR. The expression of collagen Ⅳ was also detected by immunofluorescence. Results Compared with NG group, HG group showed up-regulated miR-148b expression, down-regulated AMPKα1 mRNA and protein expressions, and up-regulated CHOP, GRP78, collagen Ⅳ and FN expressions (all P＜0.05). HG-induced mesangial cells with miR-148b inhibitor had up-regulated AMPKα1 mRNA and protein expressions, and down-regulated CHOP, GRP78, collagen Ⅳ, FN expressions as compared with HG-induced cells without miR-148b inhibitor (all P＜0.05). Conclusions HG can up-regulate miR-148b expression and down-regulate AMPKα1 expression in rat mesangial cells, then activate endoplasmic reticulum stress to induce extracellular matrix excretion. MiR-148b inhibitor up-regulates AMPKα1 expression, inhibits endoplasmic reticulum stress and reduces extracellular matrix excretion.     

Lisinopril suppresses the endoplasmic reticulum stress associated tubular cell apoptosis induced by proteinuria in adriamycin nephropathy

Objective To investigate the role of endoplasmic reticulum stress in tubular epithelial cell apoptosis in chronic proteinuria rat model and the effect of lisinopril intervention. Methods Adriamycin nephropathy was induced in male Wistar rats (n=12) by a single injection of adriamycin at 2 mg/kg body weight. Rats were then randomly assigned to model group or treatment group, to which distilled water or lisinopril were administered respectively for 12 weeks. Six normal rats serving as controls were administered distilled water. 24 h urine samples were collected at week 4, 8, 12 and the urine protein was measured. At the end of study, serum was obtained and physiological parameters (serum creatinine, urea, total protein and albumin) were measured. Renal tubular epithelial cell apoptosis was assessed by TUNEL. GRP78, CHOP protein expression in kidney was quantified by immunohistochemistry and Western blotting. Results Compared to control group rats, increased proteinuria was observed in model group rats at week 4, 8, 12 (P＜0.05). Lisinopril treatment attenuated urine protein excretion significantly (P＜0.05). At week 12, hypoalbuminemia was detected in model group rats (P＜0.05), whereas the condition was alleviated by lisinopril (P＜0.05). There were no significant differences of serum creatinine, urea and total protein in each group (P＞0.05). Compared to control group rats, increased TUNEL positive tubular epithelial cells and tubular GRP78 and CHOP expression were also observed in model group rats (P＜0.05); however, these conditions in the kidney were significantly decreased in treatment group (P＜0.05). Conclusions Endoplasmic reticulum stress may be involved in the process of tubular epithelial cell apoptosis induced by proteinuria. Lisinopril may attenuate tubular epithelial cell apoptosis through regulating this signal pathway.     

姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注诱导内质网应激的影响

目的 探讨姜黄素预先给药对大鼠全脑缺血再灌注诱导内质网应激的影响.方法 雄性SD大鼠144只,体重200～250 g,月龄2～3月,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=36):假手术组(S组)仅分离双侧颈总动脉;缺血再灌注组(I/R组)采用四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型;姜黄素组(Cur组)于缺血前1 h腹腔注射姜黄素200 mg/kg;溶媒对照组(VC组)给予等容量姜黄素溶媒--0.5%羧甲基纤维素钠.于再灌注12 h、1、3.7 d时取9只大鼠,取脑,分离海马,采用TUNEL法标记凋亡神经元,计算凋亡指数;采用Western blot法检测海马神经元葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长停止和DNA损伤诱导基因153(GADDl53)和半胱氨酸天冬氨酸酶-12(caspase-12)的表达水平.结果 与S组比较,I/R组和VC组凋亡指数升高,GRP78和caspase-12表达上调(P<0.05);与I/R组比较,Cur组凋亡指数降低,GRP78表达上调,caspase-12表达下调(P<0.05).I/R组、VC组和Cur组间GADD153表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 姜黄素预先给药可通过抑制内质网应激途径介导的细胞凋亡减轻大鼠全脑缺血再灌注损伤,其机制与海马GRP78表达上调和caspase-12表达下调有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of curcumin pretreatment on endoplasmic reticulum stress induced by global cerebral ischemia-reperfusion (I/R) in rats. Methods One hundred forty-four male SD rats weighing 200-250 g were randomly divided into 4 groups (n = 36 each): sham operation group (group S) ; I/Rgroup; curcumin group (group Cur) and vehicle control group (group VC). Global cerebral I/R was produced by four-vessel occlusion technique in S, I/R, Cur, VC groups. Bilateral vertebral arteries were cauterized. Bilateral common carotid arteries were occluded by clipping for 15 min. Curcumin 200 mg/kg was injected intraperitoneally (IP) at 1 h before cerebral ischemia. Global cerebral ischemia was confirmed by unconsciousness and disappearance of papillary and righting reflex. Animals were sacrificed at 12 h, 1,3 and 7 d of reperfusion. Neuronal apoptosis in hippocampal CA1 region was detected by TUNEL assay. Apoptosis index (AI) was calculated. The expression of glucose regulated protein 78 (GRP78) ,growth arrest and DNA damage inducible gene 153 (GADD153) and caspase-12 protein in hippocampal region was assessed by Western blot analysis. Results Cerebral I/R significantly increased AI and GRP78 and caspase-12 protein expression in hippocampus as compared with group S( P <0.05) . Curcumin pretreatment significantly decreased AI, increased GRP78 protein expression and decreased caspase-12 protein expression as compared with group I/R ( P < 0.05) . There was no significant difference in the GADD153 protein expression among Cur, VC and I/R groups ( P > 0.05) . Conclusion Curcumin pretreatment can significantly reduce global cerebral I/R-induced neuronal apoptosis in hippocampus by increasing GRP78 expression and decreasing easpase-12 expression in hippocampus.